8份的低聚果糖和7份的海藻糖溶解后，在110°C灭菌15min，冷却后得溶液1 ;
[0043]2)向另一份蒸馏水中加入20份的脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，在107°C灭菌15min，得溶液2 ;
[0044]3)将5.5份的脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中，配成溶液采用0.22微米过滤膜过滤除菌得溶液3 ;其中，过滤膜先经过121°C灭菌15min ;
[0045]4)将所制备的溶液1、2、3无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂。
[0046]本实施例的大豆多糖的制备如下:将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋6次脱脂，得到脱脂大豆粉；然后把脱脂大豆粉用无菌水溶解、浓缩得浓缩液，向浓缩液中加入浓缩液3倍体积的质量浓度为85%的乙醇溶液，在4°C静置后离心沉淀，把沉淀配成质量浓度为5%水溶液，离心除去不溶物，取上清液加入同体积的4:1的氯仿-正丁醇的混合液，振摇，分层，取上清液，反复两次至三次，然后再用无水乙醇沉淀离心得到大豆多糖。
[0047]本发明的植物乳杆菌复合冻干保护剂的使用方法为，用MRS培养基活化3代后于高速冷冻离心机中6000r/min离心收集的植物乳杆菌菌泥，后与所述的保护剂按1: 2的体积比混合均匀，即lg菌粉加2mL复合冻干保护剂，于-80°C预冻8h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥24h，得植物乳杆菌菌粉。
[0048]本发明提供的植物乳杆菌冻干保护剂，在制备菌粉的过程中加入冻干保护剂，可提高菌体的抗冷冻能力，从而提高菌粉的冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低。所制备的植物乳杆菌菌粉中冻干存活率达到88.65%，菌粉活菌数为1.75X 10ncfu/g。
[0049]实施例4:
[0050]植物乳杆菌冻干保护剂的组成:按质量份数包括9份的大豆多糖、9份的半乳糖、10份的低聚果糖、6份的海藻糖、24份的脱脂乳、5.1份的脯氨酸和100份蒸馏水。
[0051]保护剂的制备方法为:
[0052]1)按质量份数取100份蒸馈水分为三份，向其中一份加入9份的大豆多糖、9份的半乳糖、10份的低聚果糖和6份的海藻糖溶解后，在110°C灭菌15min，冷却后得溶液1 ;
[0053]2)向另一份蒸馏水中加入24份的脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，在107°C灭菌15min，得溶液2 ;
[0054]3)将5.1份的脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中，配成溶液采用0.22微米过滤膜过滤除菌得溶液3 ;其中，过滤膜先经过121°C灭菌15min ;
[0055]4)将所制备的溶液1、2、3无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂。
[0056]本实施例的大豆多糖的制备如下:将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋6次脱脂，得到脱脂大豆粉；然后把脱脂大豆粉用无菌水溶解、浓缩得浓缩液，向浓缩液中加入浓缩液3倍体积的质量浓度为90%的乙醇溶液，在4°C静置后离心沉淀，把沉淀配成质量浓度为7%水溶液，离心除去不溶物，取上清液加入同体积的4.5:1的氯仿-正丁醇的混合液，振摇，分层，取上清液，反复两次至三次，然后再用无水乙醇沉淀离心得到大豆多糖。
[0057]本发明的植物乳杆菌复合冻干保护剂的使用方法为，用MRS培养基活化3代后于高速冷冻离心机中6000r/min离心收集的植物乳杆菌菌泥，后与所述的保护剂按1: 2的体积比混合均匀，即lg菌粉加2mL复合冻干保护剂，于-80°C预冻8h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥24h，得植物乳杆菌菌粉。
[0058]本发明提供的植物乳杆菌冻干保护剂，在制备菌粉的过程中加入冻干保护剂，可提高菌体的抗冷冻能力，从而提高菌粉的冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低。所制备的植物乳杆菌菌粉中冻干存活率达到93.26%，菌粉活菌数为1.98X 10ncfu/g。
[0059]实施例5:
[0060]植物乳杆菌冻干保护剂的组成:按质量份数包括10份的大豆多糖、6份的半乳糖、12份的低聚果糖、8份的海藻糖、22份的脱脂乳、3份的脯氨酸和100份蒸馏水。
[0061 ] 保护剂的制备方法为:
[0062]1)按质量份数取100份蒸馈水分为三份，向其中一份加入10份的大豆多糖、6份的半乳糖、12份的低聚果糖和8份的海藻糖溶解后，在110°C灭菌15min，冷却后得溶液1 ;
[0063]2)向另一份蒸馏水中加入22份的脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，在107°C灭菌15min，得溶液2 ;
[0064]3)将3份的脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中，配成溶液采用0.22微米过滤膜过滤除菌得溶液3 ;其中，过滤膜先经过121°C灭菌15min ;
[0065]4)将所制备的溶液1、2、3无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂。
[0066]本实施例的大豆多糖的制备如下:将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋6次脱脂，得到脱脂大豆粉；然后把脱脂大豆粉用无菌水溶解、浓缩得浓缩液，向浓缩液中加入浓缩液1倍体积的质量浓度为83%的乙醇溶液，在4°C静置后离心沉淀，把沉淀配成质量浓度为8%水溶液，离心除去不溶物，取上清液加入同体积的5:1的氯仿-正丁醇的混合液，振摇，分层，取上清液，反复两次至三次，然后再用无水乙醇沉淀离心得到大豆多糖。
[0067]实施例6:
[0068]植物乳杆菌冻干保护剂的组成:按质量份数包括12份的大豆多糖、10份的半乳糖、9份的低聚果糖、5份的海藻糖、20份的脱脂乳、6份的脯氨酸和100份蒸馏水。
[0069]保护剂的制备方法为:
[0070]1)按质量份数取100份蒸馈水分为三份，向其中一份加入12份的大豆多糖、10份的半乳糖、9份的低聚果糖和5份的海藻糖溶解后，在110°C灭菌15min，冷却后得溶液1 ;
[0071]2)向另一份蒸馏水中加入20份的脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，在107°C灭菌15min，得溶液2 ;
[0072]3)将6份的脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中，配成溶液采用0.22微米过滤膜过滤除菌得溶液3 ;其中，过滤膜先经过121°C灭菌15min ;
[0073]4)将所制备的溶液1、2、3无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂。
[0074]本实施例的大豆多糖的制备如下:将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋5次脱脂，得到脱脂大豆粉；然后把脱脂大豆粉用无菌水溶解、浓缩得浓缩液，向浓缩液中加入浓缩液4倍体积的质量浓度为88%的乙醇溶液，在4°C静置后离心沉淀，把沉淀配成质量浓度为10%水溶液，离心除去不溶物，取上清液加入同体积的5:1的氯仿-正丁醇的混合液，振摇，分层，取上清液，反复两次至三次，然后再用无水乙醇沉淀离心得到大豆多糖。
【主权项】
1.一种提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂，其特征在于:按质量份数包括5-12份的大豆多糖、6-10份的半乳糖、8-12份的低聚果糖、5-8份的海藻糖、18-24份的脱脂乳、3-6份的脯氨酸和100份蒸馏水。2.一种提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于: 1)按质量份数取100份蒸馏水分为三份，向其中一份加入5-12份的大豆多糖、6-10份的半乳糖、8-12份的低聚果糖和5-8份的海藻糖溶解后，灭菌，冷却后得溶液1 ; 2)向另一份蒸馏水中加入18-24份的脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，灭菌，得溶液2; 3)将3-6份的脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中，配成溶液进行膜过滤除菌得溶液3; 4)将所制备的溶液1、2、3无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂。3.根据权利要求2所述的提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于:所述步骤1)的灭菌是在110°C灭菌15min。4.根据权利要求2所述的提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于:所述步骤2)的灭菌是在107°C灭菌15min。5.根据权利要求2所述的提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于:所述步骤3)的过滤膜为0.22微米过滤膜。6.根据权利要求2或5所述的提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于:所述步骤3)的过滤膜经121°C灭菌15min。7.根据权利要求2所述的提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂的制备方法，其特征在于:所述的大豆多糖的制备如下:将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉；然后把脱脂大豆粉用无菌水溶解、浓缩得浓缩液，向浓缩液中加入浓缩液1 一 4倍体积的质量浓度为80% -90%的乙醇溶液，在4°C静置后离心沉淀，把沉淀配成质量浓度为5-10%水溶液，离心除去不溶物，取上清液加入同体积的4-5:1的氯仿-正丁醇的混合液，振摇，分层，取上清液，反复两次至三次，然后再用无水乙醇沉淀离心得到大豆多糖。
【专利摘要】一种提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂及其制备方法，该保护剂包括大豆多糖、半乳糖、低聚果糖、海藻糖、脱脂乳、脯氨酸和蒸馏水；其制备过程是将蒸馏水分为三份，向其中一份加入大豆多糖、半乳糖、低聚果糖和海藻糖溶解，灭菌；向另一份蒸馏水中加入脱脂乳溶解得脱脂乳溶液，灭菌；将脯氨酸溶解于剩余的蒸馏水中并进行膜过滤除菌；将所制备的三份溶液无菌条件下均匀混合，即得复合冻干保护剂；本发明提供的植物乳杆菌冻干保护剂，在制备菌粉的过程中加入冻干保护剂，可提高菌体的抗冷冻能力，从而提高菌粉的冻干存活率，且保藏期较长，存活率不易降低；所制备的植物乳杆菌菌粉中冻干存活率达到82.73％～93.26％，菌粉活菌数为1.14×1011cfu/g～1.98×1011cfu/g。
【IPC分类】C12R1/25, C12N1/04
【公开号】CN105420111
【申请号】CN201511024058
【发明人】陈合, 王帅, 舒国伟, 陈立
【申请人】陕西科技大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月30日...