终止发 酵得发酵产品。
[0034] 实施例2提高凝结芽孢杆菌出芽率及L-乳酸产量的发酵方法
[0035] (1)以凝结芽孢杆菌为发酵菌种，经三级种子活化后接种到发酵培养基中培养。
[0036] (2)活化培养基的组分包括:蛋白胨1 %、酵母粉0.5%、葡萄糖0.6%、磷酸氢二钾 0.1%〇
[0037] (3)活化培养条件均为：摇床培养、PH值7.0、温度为43°C、培养时间24h。三级种子 活化培养的接种量均为5v/v%。
[0038] (4)将活化好的凝结芽孢杆菌以ΙΟv/v%的接种量接种到发酵培养基中培养，发酵 体积为300L。
[0039] (5)发酵培养基的组分包括：豆柏粉5%、麸皮1%、酵母粉2%、糖蜜2%、MgS04 · 7H20 0.2%、MnS〇4*H20 0.01%、CaC〇3〇.4%、K2HP〇4〇.2%。
[0040] (6)在菌种培养至对数生长期，即在菌种培养至20h，在上述发酵培养液添加能促 进L-乳酸生成的益生元，所述益生元的添加量为:葡萄糖6%、低聚木糖0.5%、低聚异麦芽 糖0.5%、低聚果糖0.5%。
[0041 ] (7)在发酵培养过程中，搅拌转速设定为200rpm，培养温度50°C，发酵至36h终止发 酵得发酵产品。
[0042]实施例3提高凝结芽孢杆菌出芽率及L-乳酸产量的发酵方法 [0043] (1)以凝结芽孢杆菌为发酵菌种，经三级种子活化后接种到发酵培养基中培养。
[0044] (2)活化培养基的组分包括:蛋白胨1 %、酵母粉0.5%、葡萄糖0.6%、磷酸氢二钾 0.1%〇
[0045] (3)活化培养条件均为：摇床培养、PH值7.0、温度为43°C、培养时间24h。三级种子 活化培养的接种量均为5v/v%。
[0046] (4)将活化好的凝结芽孢杆菌以ΙΟv/v%的接种量接种到发酵培养基中培养，发酵 体积为300L。
[0047] (5)发酵培养基的组分包括：豆柏粉1 %、麸皮1 . 5 %、酵母粉0.5 %、糖蜜3 %、 MgS〇4*7H20 0.1%、MnS〇4*H20 0.01%、CaC〇3〇.4%、K2HP〇4〇.2%。
[0048] (6)在菌种培养至对数生长期，即在菌种培养至20h，在上述发酵培养液添加能促 进L-乳酸生成的益生元，所述益生元的添加量为:葡萄糖8%、低聚木糖0.3%、低聚异麦芽 糖0.3%、低聚果糖0.3%。
[0049] (7)在发酵培养过程中，搅拌转速设定为200rpm，培养温度50°C，发酵至36h终止发 酵得发酵产品。
[0050] 对比例1
[0051] 将凝结芽孢杆菌按照实施例1所述发酵条件和步骤进行发酵，唯一不同的就是在 发酵过程中不加入实施例1所述的益生元和无机盐。
[0052]凝结芽孢杆菌发酵效果对比：
[0053]采用本发明实施例1、2、3和对比例1所述方法进行发酵处理，发酵后的产品采用稀 释平板计数方法测定产品活菌含量，结晶紫染色后油镜观察芽孢率，HPLC测定乳酸含量，测 定结果见表1所示。
[0054]表1发酵产物中活菌数、芽孢率及乳酸含量比较
[0056]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种提高凝结芽孢杆菌出芽率及L-乳酸产量的发酵方法，其特征在于，通过向培养 至对数期的发酵液中添加益生元的方式实现凝结芽孢杆菌发酵。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述益生元包括葡萄糖、低聚木糖、低聚异 麦芽糖和低聚果糖，各种益生元的添加量为葡萄糖5-8%、低聚木糖0.5-1 %、低聚异麦芽糖 0.5-1%、低聚果糖 0.5-1 %。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，凝结芽孢杆菌发酵时所用发酵培养基组成 为:豆柏粉 1-5%、麸皮 1-3%、酵母粉0.5-2%、糖蜜2-5%、MgS〇4 · 7H20 0.1-0.2%、MnS〇4 · H2O 0 · 01-0 · 05 %、CaC030 · 2-0 · 4%、K2HP〇4〇 · 2-0 · 4% ;优选地，发酵培养基组成为:豆柏粉 1%、麸皮1.5%、酵母粉0.5%、糖蜜3%、MgS〇4 · 7H20 0.1 %、MnS〇4 · H200.01 %、 CaC〇3〇.4%、K2HP〇4〇.2%。4. 根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 菌种活化； 2) 将活化菌种接种到发酵培养基中培养； 3) 待菌种生长至对数期，添加益生元，继续发酵12-30小时。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)进行三级种子活化培养，活化培养 基组成为:蛋白胨1 %、酵母粉0.5%、葡萄糖0.6%、K2HP〇4〇. 1 % ;活化培养条件为:40-50°C、 pH值7.0，180-220rpm摇床培养24h;三级种子活化培养的接种量均为5v/v%。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)具体为:将活化菌种按ΙΟv/v%的接 种量接种到发酵培养基中，40-50°C180-220rpm发酵培养36-48小时。7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤3)具体为:待菌种发酵至18-24小时， 添加益生元，继续在40-50°C180-220rpm的条件下培养至发酵结束。8. 根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 进行三级种子活化培养，活化培养基组成为：蛋白胨1 %、酵母粉0.5%、葡萄糖 0.6%、K2HP〇4〇. 1 % ;活化培养条件为:43°C、pH值7.0，200rpm摇床培养24h;三级种子活化培 养的接种量均为5v/v% ; 2) 将活化菌种按ΙΟv/v%的接种量接种到发酵培养基中，50°C200rpm发酵培养36-48小 时； 3) 待菌种发酵至18-20小时，添加益生元，继续在50°C200rpm的条件下发酵至36小时。9. 根据权利要求1-8任一项所述方法制备获得的饲用活菌制剂。10. 根据权利要求9所述的饲用活菌制剂，其特征在于，饲用活菌制剂中凝结芽孢杆菌 的活菌数在4.8 X 109cfu/mL以上，芽孢率在90 %以上，且乳酸含量不低于30.5g/L。
【专利摘要】本发明提供一种提高凝结芽孢杆菌出芽率及L-乳酸产量的发酵方法，其是通过向培养至对数期的发酵液中添加益生元的方式实现凝结芽孢杆菌发酵。本方法最显著的优点是通过调整培养基成分及添加方式，实现凝结芽孢杆菌的良好生长，提高凝结芽孢杆菌出芽率并且显著的提高了L-乳酸含量，提高了产品的质量和稳定性，同时在培养基中添加了益生元成分，使用该培养基培养的凝结芽孢杆菌制剂可增强动物机体免疫力。使用本发明方法制备获得的饲用活菌制剂，凝结芽孢杆菌的活菌数可达到4.8×109cfu/mL以上，芽孢率达90％以上，乳酸含量不低于30.5g/L，出芽率提高了10％左右，乳酸含量提高了2倍以上。
【IPC分类】A23K10/18, C12R1/07, C12P7/56, C12N1/20
【公开号】CN105524866
【申请号】CN201610005130
【发明人】谭薇, 晨光, 张荣飞, 韩冰, 张宇婷, 姚真
【申请人】中牧实业股份有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月5日