J = 8.6Hz，2H)，7.65(d，J = 8.6Hz，2H)，7.56(d，J=1.8Hz，lH)，7.39(d，J = 8.7Hz， lH)，7.30-7.19(m，2H)，6.48(s，2H)，5.7h5.63(m，lH)，3.85-3.66(m，4H)，3.23-3.12(m， 1H) ；MS(ESI) ： 474.0[M+H] + ； Anal. Calcd for Ci9Hi6Br2N4O ： C ,47.93 ； H, 3.39 ；N,11.77 ； Found:C，47.94;H，3.38;N，11.76.
[0083] 实施例二十三:5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-IH-吡 唑-卜甲酰胺(e23)的制备
[0085]制备方法参考实施例一。Yield 42.3% !πι.ρ.ΖδθΙδδΙ;1!! NMR(400MHZ，DMS0)S 7.73(dJ = 8.1Hz,2H),7.56(d,J=1.7HZaH),7.39(dJ = 8.7HzaH),7.31-7.20(m,2H), 6.40(s，2H)，5.70-5.58(m，lH)，3.86-3.69(m，4H)，3·21-3·10(m，lH)，2.35(s，3H);MS (ESI) ：412.1 [M+H] + ；Anal.Calcd for C20Hi9BrN4OiC,58.40；H,4.66；N,13.62；Found：C, 58·39 ;Η，4·65;Ν，13·63·
[0086] 实施例二十四：5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-4,5-二 氢-1H-吡唑-1 -甲酰胺(e24)的制备
[0088]制备方法参考实施例一。Yield 30.0% !HKpJSOjSSt3Ci1H NMR(400MHz，DMS0)S 8.05(d，J = 8.1HZ，2H)，7.82(d，J = 8.4Hz，2H)，7.57(d，J=1.5Hz，lH)，7.40(d，J = 8.7Hz， lH)，7.3h7.20(m，2H)，6.58(s，2H)，5.75-5.67(m，lH)，3.88-3.78(m，lH)，3.73(s，3H)， 3.28-3.18(m,lH) ；MS(ESI )： 466.0 [M+H] +； Anal. Calcd for C20Hi6BrF3N4O: C, 51.63 ；H, 3.47;N，12.04;Found:C，51.64;H，3.46 ;N，12.05.
[0089] 实施例二十五:5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3-(3-氯苯基)-4,5-二氢-IH-吡 唑-1-甲酰胺(e25)的制备
[0091]制备方法参考实施例一。Yield 46.3% !HKpJOSHOaCi1H NMR(400MHz，DMS0)S 8.14(s，lH)，7.77(d，J = 7.8Hz，lH)，7.65-7.54(m，2H)，7.40(t，J = 8.4Hz，2H)，7.30-7.21 (m，2H)，6.56(s，2H)，5·71-5.63(m，lH)，3·83-3.66(m，4H)，3.26-3.14(m，lH);MS(ESI): 430·0[M+H] +;Anal.Calcd for Ci9Hi6BrClN4〇:C，52.86;H，3.74;N，12.98;Found :C，52.87; Η，3·75;Ν，12·97·
[0092] 实施例二十六:5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)-4,5-二 氢-IH-吡唑-1-甲酰胺(e26)的制备
[0094] 制备方法参考实施例一。Yield 34.3% ;m.p· IgT-IgfCi1H NMR(400MHz，DMS0)S 8.28(s，lH)，8.06(d，J = 7.8Hz，lH)，7.78(d，J = 7.8HZ，lH)，7.69(t，J = 7.8Hz，lH)，7.60 (d，J=1.7Hz，lH)，7.40(d，J = 8.7Hz，1H)，7 ·32-7·20(ι?，2H)，6.63(s，2H)，5 ·75-5·67(ι?， 1H)，3.88-3.78(m，lH)，3.73(s，3H)，3.32-3.22(m，lH);MS(ESI) :466.0[M+H] +;Anal .Calcd for C2〇Hi6BrF3N4〇：C,51.63；H,3.47；Na2.04；Found：C,51.64；H,3.48；Na2.05.
[0095] 实施例二十七:5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-IH-吡唑-1-甲酰胺(e27)的制备
[0097] 制备方法参考实施例一。Yield 16.2% !HKpJSSjSOaCi1H NMR(400MHz，DMS0)S 7·86-7.78(m，lH)，7.61-7.48(m，2H)，7.39(d，J=8.7HZ，lH)，7.31-7.17(m，3H)，6.46(s， 2H)，5.70-5.58(m，lH)，3.89(s，3H)，3.82-3.66(m，4H)，3.21-3.11(m，lH);MS(ESI):446.1 [M+H] + ； Anal. Calcd for C20HieBrF3N4O ： C, 53.95 ； H, 4.07 ；N,12.58 ；Found ： C, 53.94 ；H, 4·08;Ν，12·59·
[0098] 实施例二十八:5-(5-溴-卜甲基-1H-吲哚-3-基)- 3-(2-氟-4-甲氧基苯基)-4,5_ 二氢-IH-吡唑-1-甲酰胺(e28)的制备
[0100]制备方法参考实施例一。Yield 72.9% NMR(400MHz，DMS0)S 7.99(t，J = 8.8Hz，lH)，7.59(d，J=1.7Hz，lH)，7.40(d，J = 8.7Hz，lH)，7.30-7.18(m，2H)， 7.00-6.82(m，2H)，6.39(s，2H)，5.66-5.57(m，lH)，3.94-3.79(m，4H)，3.73(s，3H)，3.19-3.08(m,1Η) ；MS(ESI) ：446.1[M+H]+ ；Anal.Calcd for C20HieBrF3N4O：C,53.95；H,4.07；N, 12.58;Found :C，53.96;H，4.06;N，12.59.
[0101 ]实施例二十九:一类吲哚甲酰胺基吡唑衍生物的体外抗癌活性研究进展
[0102] 采用MTT[3-(4,5)_双甲基-2-噻唑_(2,5)_苯基溴化四氮唑蓝]法来测定含甲硝唑 骨架的吡唑硝基咪唑衍生物对人肝癌细胞(HEPG2)，人乳腺癌细胞(MCF-7)，人宫颈癌细胞 系（HeLa细胞）以及人肺腺癌细胞(A549)的抑制率达到50%时的药物浓度(halfmaximal inhibitory concentration,IC50) 〇
[0103] (1)培养液的配制：DMEM(基础培养基）89%，胎牛血清10%，青霉素链霉素溶液 (10000IU/mL，10000yg/mL)1 %。
[0104] (2)四种贴壁癌细胞的培养：利用上述培养液(培养液体积约为培养瓶容量的1/ 10 )，在37°C，5 % CO2培养箱中培养，根据癌细胞的生长状态判断传代时间。
[0105] (3)不同浓度药物的配制:利用三蒸水(少量DMSO助溶)配制储备液，加药后的每孔 细胞悬液中DMSO的终浓度一般不超过0.05 %-0.1 % ;用三蒸水把储备液稀释至六个浓度 梯度（l〇yg/mL，2yg/mL，0·4yg/mL，0·08yg/mL，0 ·016yg/mL，0 ·003yg/mL);保存于_20°C冰箱 中备用。
[0106] (4)细胞孵育:取对数生长期肿瘤细胞，调细胞悬液浓度为1-1.5X105/mL，混匀后 加入96孔培养板中（IOOyL/孔），在37°C，5 % CO2培养箱中培养24h。
[0107] (5)加药:将稀释好的不同浓度梯度的药物分别加入到96孔培养板中，每个浓度梯 度设3个平孔，继续培养48h。实验分为实验组(培养液、细胞、药物）、对照组(培养液和细胞） 和空白组（只有培养液）。
[0108] (6)存活细胞检测:在培养了48h后的96孔板中，加 MTT(5mg/mL)10yL/孔;在37°C放 置4h后，移除上清液，加 DMSO 150yL/孔，振荡至formazan结晶全部溶解;利用自动酶标仪在 570nm波长处检测各孔的光密度(OD值）。
[0109] 抑制率的计算：
[0110] 生长抑制率=(1_存活率）X100% = [1_(0D实验-OD空白）/(0D对照-OD空白）]X 100% (0D实验表示实验组的平均光密度，OD对照表示对照组的平均光密度，OD空白表示空 白组的平均光密度）。
[0111] 根据药物浓度_细胞生长抑制率的标准曲线，求其IC50。
[0112] 本发明所列一类吲哚甲酰胺基吡唑衍生物对肿瘤细胞以及微管蛋白聚合的抑制 IC50 值(ymol/mL)见下表
[0115] 从上述实验可知:本发明对人肝癌细胞(HEPG2)，人乳腺癌细胞(MCF-7)，人宫颈癌 细胞系(HeLa细胞）以及人肺腺癌细胞(A549)有明显的抑制作用，与对照组相比，活性明显 提尚。
[0116] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种等同变换，这 些等同变换均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述【具体实施方式】中所描述 的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不 必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施 方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公 开的内容。
【主权项】
1. 一类吗I噪甲酯胺基化挫衍生物，其结构如式所示，2. -种制备吗I噪甲酯胺基化挫衍生物的方法，其特征在于，所述一类吗I噪甲酯胺基化 挫衍生物的结构如式所示，制备方法步骤如下： 步骤1.冰浴条件下，向反应容器中依次加入结构如式A所示的化合物，P0C13于DMF中反 应，充分反应后，得到结构如式B所示的化合物。 步骤2.依次向反应容器中加入THF，N址W及结构如式B所示的化合物，冰浴反应，再加 入CH3I室溫反应，TLC跟踪，充分反应后，得到结构如式C所示的化合物。 步骤3.室溫下，依次向反应容器中加入无水乙醇溶液，结构如式C所示的化合物，不同 取代的乙酷苯，KOH，充分反应，得到结构如式D所示的化合物。 步骤4.依次向反应容器中加入无水乙醇溶液，结构如式D所示的化合物，氨基脈盐酸 盐，揽拌溶解后加入氨氧化钢溶液，充分反应后得到结构如式E所示的化合物。其中，Ri，R2选自下列：3. -类吗I噪甲酯胺基化挫衍生物在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，其结构如式 所示4. 一种抗癌药物，其特征在于，包括结构如式所示的化合物及医学上可接受的载体，
【专利摘要】本发明公开了一类吲哚甲酰胺基吡唑衍生物的制备方法与应用，所述合成的化合物的结构如式所示，本发明对人肝癌细胞(HepG2)，人乳腺癌细胞(MCF-7)，人宫颈癌细胞系(HeLa细胞)以及人肺腺癌细胞(A549)有明显的抑制作用，因此本发明的一类吲哚甲酰胺基吡唑衍生物可以应用于制备抗肿瘤药物。
【IPC分类】A61K31/4155, C07D403/04, A61P35/00
【公开号】CN105541804
【申请号】CN201610127039
【发明人】朱海亮, 晏天龙, 杨梦如, 秦亚娟, 张雅亮, 李波燕
【申请人】南京大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年3月4日