4] 配料1组分共计570g，加水溶解至30L，12rC，灭菌20min。
[0235] 配料2组分共计810g，加水溶解至化单独灭菌，接种时添加。
[0236] 配料3组分共计1350g，加水溶解至化单独灭菌，接种时添加。
[0237] 其中ZTl培养基组成包括(g/L):憐酸氨二锭0-25,憐酸二氨钟0-5,憐酸氨二钢，0-25,氯化钢〇-5，MgS〇4 0-0.5，FeS〇4 O-IiFeCb 0-1 ,CoCb 0-1 ,CuCb 0-1 ,ZnCb 0-1， Na2Mo〇4 0-1，出B03 0-l，MnCl2 0-1，巧樣酸0-25,硫胺素0-1，木糖0-50,甘油0-50,葡萄糖0-50,硫酸0-5,抑 6.0-7.5。
[023引（3)发酵
[0239] 将上述二级扩培的种子液50L转入IOm3发酵罐，工作初始体积为5m3,发酵培养基基 础为:ZT2培养基。33-37 °C低强度通气培养8-化，起始通风比1:0.3 (料:风），培养过程中提 高转速和通气量控制溶氧不低于20%。加 Ca(0H)2维持pH 7.0。转入非通风发酵产酸阶段， 发酵溫度为40-45 °C，Ca(OH)2维持抑7.0。补加葡萄糖至终浓度50g/L(按照起始发酵体积 计算），分四批补加，间隔时间化。发酵20-2化，测定残余葡萄糖低于0.1%，即可放罐。发酵 结束按照上述流程重复进行五批次发酵生产。发酵结果见表3。
[0240] 表3:五批次10吨罐发酵生产极高光学纯D-乳酸结果
[0241]
[0242] 实施例43--菌种10吨发酵罐中5批次发酵生产极高光学纯k乳酸
[0243] 按照实施例42中的发酵操作流程，将生产菌株替换为实施例39所获得的最优菌种 在10吨发酵罐中进行5批次的连续生产。发酵结果见表4。
[0244] 表4:五批次10吨罐连续转化生产极高光学纯心乳酸结果
[0245]
[0246] 实施例44--极高光学纯D-乳酸和心乳酸的产品制备
[0247] 发酵结束直接在发酵液中缓慢加入浓度为1%-50%的硫酸进行酸化。边揽拌边慢 慢流加硫酸，先按体积的加入；WBaCls和草酸锭试剂分别检测，偏酸性时，停止加 酸揽拌反应6小时，揽拌时间全程;反应终点WBaCls和草酸锭试剂分别校验。
[0248] 板框过滤:酸化液经板框过滤机压滤。压滤后W85 °C热水洗涂滤饼，清洗至洗液中 乳酸浓度低于0.1%。清洗结束用压缩空气压干，洗液并入清液中。菌体和固体巧盐用作水 泥或混凝±配料。
[0249] 超滤滤:经超滤去除色素、蛋白质、氨基酸和残留的菌体等。为了提高超滤效率，超 滤前对滤过液进行蒸发浓缩，浓缩比为4:1，浓缩液进行超滤。
[0250] 离子交换:超滤后获得的滤清液进行离子交换。
[0巧1]阳离子交换：732交联为7%的苯乙締?二乙締共聚体上带有横酸基(-S0抽)的阳 离子交换树脂（? 001 X7(732)强酸性苯乙締系阳离子交换树脂）；离交前料液要冷却到室 溫。再生处理5%W/v的HCl溶液；中间检查:Fe2+不超过Ippm，交换流速为300ml/min(视检测 结果定）。
[0252] 阴离子交换:330(701)弱碱性阴离子交换树脂(弱碱性环氧系阴离子交换树脂，主 要用于水处理中除去cr、s〇42^等离子，除去无机酸，提取有机酸和脱色，并可回收铜、银离 子。）；再生处理：5%胖八化0扣容液;交换流速为30〇1111/111111(视检测结果定）。中间检查:(：1-不超过化9111; 5〇42^不超过5口口111.
[0253] 产品浓缩:浓缩至产品要求的乳酸浓度。该产品为聚合级D-乳酸A-乳酸。
[0254] 综上所述，本发明通过基因工程技术对D-乳酸和心乳酸高产重组菌染色体上的乳 酸脱氨酶编码基因的表达进行简易条件下的动态调控，从而实现了重组菌从葡萄糖高效单 一生产D-乳酸和高效单一生产k乳酸的简洁发酵工艺。本发明技术经过简单修改后，同样 可W用于其它工业上重要的微生物代谢产物，但不限于，如巧樣酸、甲酸、乙酸、丙酬酸、下 二酸、苹果酸、Q-酬戊二酸、下二酸、己二酸、戊二胺、己二胺、甲基丙締酸、异戊二締、衣康酸 等多种有机酸和有机胺;或脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、精氨酸等多种氨基酸； 硫胺素、维生素 Bi2等多种微生物;或乙醇、丙醇等短链醇;或低聚异麦芽糖、低聚果糖、低聚 半乳糖等多种功能糖的菌种构建、发酵生产和新工艺技术的建立与应用。
[0巧日]上述实施例中，1化Al核巧酸序列为序列表<400〉1所示序列，1化A2核巧酸序列为 序列表<400〉2所示序列，P化1核巧酸序列为序列表<400〉3所示序列，P化2核巧酸序列为序 列表<400〉4所示序列，P化3核巧酸序列为序列表<400巧所示序列，P化4核巧酸序列为序列 表<400〉6所示序列，Ec-RlAl核巧酸序列为序列表<400〉7所示序列，EC-R1A2核巧酸序列为 序列表<400〉8所示序列，TMElp核巧酸序列为序列表<400〉9所示序列，TME2P核巧酸序列 为序列表<400〉10所示序列，Dldl核巧酸序列为序列表<400〉11所示序列，01(12核巧酸序列 为序列表<400〉12所示序列，AckA-Ptal核巧酸序列为序列表<400〉13所示序列，AckA-Pta2 核巧酸序列为序列表<400〉14所示序列，Ppsl核巧酸序列为序列表<400〉15所示序列，Pps2 核巧酸序列为序列表<400〉16所示序列，R化Si核巧酸序列为序列表<400〉17所示序列， R化s2核巧酸序列为序列表<400〉18所示序列，PflBl核巧酸序列为序列表<400〉19所示序 列，Pf 1B2核巧酸序列为序列表<400〉20所示序列，PoxBl核巧酸序列为序列表<400〉21所示 序列，PoxB2核巧酸序列为序列表<400〉22所示序列，FrdAl核巧酸序列为序列表<400〉23所 示序列，FrdA2核巧酸序列为序列表<400〉24所示序列，A化El核巧酸序列为序列表<400〉25 所示序列，A化E2核巧酸序列为序列表<400〉26所示序列，1化A3核巧酸序列为序列表<400〉 27所示序列，1化A4核巧酸序列为序列表<400〉28所示序列，1化A5核巧酸序列为序列表<400 〉29所示序列，1化A6核巧酸序列为序列表<400〉30所示序列，RldhAl核巧酸序列为序列表< 400〉31所示序列，Rl化A2核巧酸序列为序列表<400〉32所示序列，BcoaLDHl核巧酸序列为序 列表<400〉33所示序列，BcoaLDM核巧酸序列为序列表<400〉34所示序列，LldDl核巧酸序列 为序列表<400〉35所示序列，LldD2核巧酸序列为序列表<400〉36所示序列，LcaLD化核巧酸 序列为序列表<400〉37所示序列，LcaLDH4核巧酸序列为序列表<400〉38所示序列，StrbL的11 核巧酸序列为序列表<400〉39所示序列，StrbLDH2核巧酸序列为序列表<400〉40所示序列。 具体信息如下：
[0巧6] 沈Q ID No. 1的信息：
[0巧7] (i)序列特征：
[0巧引 （A)长度：27bp
[0259] (B)类型：核酸
[0260] (C)链性:单链
[0261] (D)拓扑结构:线性
[0262] (ii)分子类型:寡核巧酸 [0%3] (iii)序列描述:SEQ ID No. 1
[0264] IdhAl：TCCGGTACCCAGCCCGAGCGTCATCAG；KpnI [02化]沈Q ID No. 2的信息：
[0%6] (i)序列特征：
[0%7] (A)长度:2 化P
[026引（B)类型：核酸
[0269] (C)链性:单链
[0270] (D)拓扑结构:线性
[0271] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0272] (iii)序列描述:SEQ ID No.2
[0273] ldhA2：GTCAAGGTCGACGTTATTGAAACCG；
[0274] 沈Q ID No. 3的信息：
[02巧](i)序列特征：
[0276] (A)长度:28bp
[0277] (B)类型：核酸 [027引（C)链性:单链
[0279] (D)拓扑结构:线性
[0280] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0281] (iii)序列描述:SEQ ID No.3
[0282] P化1:AGCTTGGCTGCAGGTGATGATTATCAGC;
[0283] 沈Q ID No.4的信息：
[0284] (i)序列特征：
[0285] (A)长度：24bp
[0286] (B)类型：核酸
[0287] (C)链性:单链 [028引（D)拓扑结构:线性
[0289] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0290] (iii)序列描述:SEQ ID No.4
[0巧 1 ] P化2:ATCGCCGGCAATTCGTAATCATGG;EcoRI [0巧2] 沈Q ID No. 5的信息：
[0293] (i)序列特征：
[0 巧 4] (A)长度：30bp
[02对 （B)类型：核酸
[0296] (C)链性:单链
[0297] (D)拓扑结构:线性
[0298] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0299] (iii)序列描述:SEQ ID No.5
[0300] P化3:TAAGATATCCCATGATTACGAATTGCCGGC；EcoRV
[0301] 沈Q ID No.6的信息：
[0302] (i)序列特征：
[0303] (A)长度:37bp
[0304] (B)类型：核酸
[0305] (C)链性:单链
[0306] (D)拓扑结构:线性
[0307] (ii)分子类型:寡核巧酸 [030引（iii)序列描述:SEQ ID No.6
[0309] P化4: TAAGAATTCAGTTMCCTCCTTAGGATCCCAATGCTT EcoRI
[0310] 沈Q ID No.7的信息：
[031。 （i)序列特征：
[0312] (A)长度:39bp
[0313] (B)类型:核酸
[0314] (C)链性:单链
[0315] (D)拓扑结构:线性
[0316] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0317] (iii)序列描述：SEQ ID No.7
[0318] Ec-RlAl：TAAGAATTCATGAAACTCGCCGTTTATAGCACAAAACAG；EcoRI
[0319] 沈Q ID No.8的信息：
[0320] (i)序列特征：
[0321] (A)长度:30bp
[0322] (B)类型：核酸
[0323] (C)链性:单链
[0324] (D)拓扑结构:线性
[0325] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0326] (iii)序列描述:SEQ ID No.8
[0327] EC-R1A2:AAGACTTTCTCCAGTGATGTTGAATCACAT；
[032引沈Q ID No.9的信息：
[0329] (i)序列特征：
[0330] (A)长度:29bp
[0331] (B)类型：核酸
[0332] (C)链性:单链
[0333] (D)拓扑结构:线性
[0334] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0335] (iii)序列描述:SEQ ID No.9
[0336] Th i EIP：AGAGAATTCATTCATCGCCAACTCCTGCA
[0337] 沈Q ID No. 10的信息：
[033引 （i)序列特征：
[0339] (A)长度:32bp
[0340] (B)类型：核酸
[0341] (C)链性:单链
[0342] (D)拓扑结构:线性
[0343] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0344] (iii)序列描述：SEQ ID No. 10
[0345] ThiE2p：AGAGAATTCGGTGGACAGCGTACAGTGGATCG； [0；346]沈Q ID No. 11 的信息：
[0；347] (i)序列特征：
[0：34引 （A)长度：2化P
[0349] (B)类型:核酸
[0350] (C)链性:单链
[0351] (D)拓扑结构:线性
[0352] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0；353] (iii)序列描述：SEQ ID No. 11
[0354] Dldl：AGTACGTCTTGATACCTTCGAAGCGG；
[0；355]沈Q ID No. 12的信息：
[0；356] (i)序列特征：
[0巧7] (A)长度：23bp
[035引（B)类型：核酸
[0359] (C)链性:单链
[0360] (D)拓扑结构:线性
[0361] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0362] (iii)序列描述:SEQ ID No. 12
[0363] Dld2：GGATTCATGCTGTTGGTCGGATC；
[0364] 沈Q ID No. 13的信息：
[03化](i)序列特征：
[0366] (A)长度:23bp
[0367] (B)类型：核酸 [036引（C)链性:单链
[0369] (D)拓扑结构:线性
[0370] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0371] (iii)序列描述:SEQ ID No.13
[0372] AckA-P化1:TGAACATCATCACCTGCCACCTG;
[0373] 沈Q ID No. 14的信息：
[0374] (i)序列特征：
[0375] (A)长度：19bp
[0376] (B)类型：核酸
[0377] (C)链性:单链 [037引（D)拓扑结构:线性
[0379] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0380] (iii)序列描述：SEQ ID No. 14
[0381] AckA-P化2:CAGCGCAAAGCTGCGGATG
[0382] 沈Q ID No. 15的信息：
[0383] (i)序列特征：
[0384] (A)长度：2 化P
[0385] (B)类型：核酸
[0386] (C)链性:单链
[0387] (D)拓扑结构:线性
[0388] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0389] (iii)序列描述：SEQ ID No. 15
[0390] Pps1:CGGCATGAATGATGTAGACAGGGTT
[0391] 沈Q ID No. 16的信息：
[0392] (i)序列特征：
[0393] (A)长度:23bp
[0394] (B)类型：核酸
[0395] (C)链性:单链
[0396] (D)拓扑结构:线性
[0397] (ii)分子类型:寡核巧酸
[039引（iii)序列描述:SEQ ID No. 16
[0399] Pps2：TAACCAGGTTTGCACCACGGTGT
[0400] 沈Q ID No. 17的信息：
[0401 ] (i)序列特征：
[0402] (A)长度:2 化P
[040；3] (B)类型:核酸
[0404] (C)链性:单链
[0405] (D)拓扑结构:线性
[0406] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0407] (iii)序列描述:SEQ ID No. 17
[0408] RPps1:TGTGGCGAAACCATTCGGAAC
[0409] 沈Q ID No. 18的信息：
[0410] (i)序列特征：
[041U (A)长度:22bp
[0412] (B)类型:核酸
[0413] (C)链性:单链
[0414] (D)拓扑结构:线性
[0415] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0416] (iii)序列描述:SEQ ID No. 18
[0417] RPps2:GTCCGACCACGAAGACTTTGCC [041引沈Q ID No. 19的信息：
[0419] (i)序列特征；
[0420] (A)长度:23bp
[042。 （B)类型:核酸
[0422] (C)链性:单链
[0423] (D)拓扑结构:线性
[0424] (ii)分子类型:寡核巧酸
[04巧](iii)序列描述：SEQ ID No. 19 [04%] PfIBl:TTCAGACTTCGGACCAACCTGCA
[0427] 沈Q ID No. 20的信息：
[0428] (i)序列特征：
[04 巧](A)长度：20bp [0430] (B)类型:核酸
[043。 （C)链性:单链
[0432] (D)拓扑结构:线性
[0433] (ii)分子类型:寡核巧酸
[0434] (iii)序列描述:SEQ ID No.20
[0435] Pf1B2：C