专利名称：快速检测微生物的方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测微生物的方法，特别是免疫磁珠分离加ATP生物发光技术快速检测微生物的方法，属于微生物检测领域。
背景技术：
近年来，由致病性微生物引起的食源性疾病时有发生，严重危害了人类健康。这些由食品中致病性微生物引起的食源性疾病，对病原菌的鉴定要求越来越高。针对目标微生物的有效检测需要快速、敏感和特异的方法。传统培养方法虽然具有较高的敏感性和特异性，但通常需要数天甚至一周以上的时间才能报告检测结果。因此微生物、尤其是食品中微生物快速检测技术的建立和完善对保障食品安全具有越来越重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测微生物的方法，本发明针对现有技术的不足，采用免疫磁珠分离加三磷酸腺苷(ATP)生物发光技术进行检测，所提供的方法快速、敏感，检测时间不超过8小时。
本发明是这样实现的通过特异性免疫磁珠来富集或捕获菌悬液或样品中的细菌等微生物，然后在免疫磁珠富集或捕获后的菌悬液或样品中加入裂解剂释放细菌等微生物细胞内的三磷酸腺苷(ATP)，最后通过荧光素-荧光素酶生物发光系统检测ATP量来判定样品中有无特定微生物及其数量。
其中，所述的特异性免疫磁珠是指将针对要检测的特定微生物的单克隆或多克隆抗体直接或间接包被在磁珠上所构成。
所用的裂解剂是破坏细菌等微生物细胞壁的试剂，含有三氯醋酸TCA。
所述的荧光素-荧光素酶生物发光系统检测ATP的具体过程为生物发光反应需要ATP、荧光素和荧光素酶，反应过程中荧光素被氧化并发出荧光，该光的强度与被测样品中的ATP含量成正比，通过高灵敏度检测仪测定光的强度进行定量分析即可。
与现有技术相比，本发明将抗原抗体的特异性反应与快速、敏感的ATP生物发光技术结合在一起，使其同时具有快速、灵敏度高和特异性强等特点，全部检测过程可以在8小时内完成，可用于临床、食品等多种样品中的微生物检测。
具体实施例方式本发明的具体实施例免疫磁珠分离加ATP生物发光技术快速检测食品中大肠杆菌O157:H71.样品采集、增菌和免疫磁珠富集将所采集的食品样品如牛肉25克等按常规国标方法处理后进行增菌培养，而后将包被有抗大肠杆菌O157:H7单克隆或多克隆抗体的免疫磁珠15μl加入到含有0.9ml增菌培养物的试管中，经样品混合器混合后放置在磁浓缩器中去除悬浮液；最后将收集的结合有大肠杆菌O157:H7的免疫磁珠在缓冲液中重新悬浮以进行ATP检测。
2.ATP检测将有三氯醋酸(TCA)的裂解剂按等体积加入到重新悬浮后的结合有大肠杆菌O157:H7的免疫磁珠的悬浮液中，反应后加入虫荧光素-荧光素酶溶液，之后立即采用高灵敏度发光检测仪测定光的强度进行分析测定，测定出的数值可以相对光单位(RLU)表示。不同发光检测仪测定出的数值可能不完全相同，因此最终检测数值应根据所采用的仪器和标准品、对照品来确定正常和异常值范围。
权利要求
1.一种快速检测微生物的方法，其特征在于通过特异性免疫磁珠来富集或捕获菌悬液或样品中的微生物，然后在免疫磁珠富集或捕获后的菌悬液或样品中加入裂解剂以释放微生物细胞内的三磷酸腺苷，最后通过荧光素-荧光素酶生物发光系统检测三磷酸腺苷量来判定样品中有无特定微生物及其数量。
2.按照权利要求1所述的快速检测微生物的方法，其特征在于所述的特异性免疫磁珠是指将针对要检测的特定微生物的单克隆或多克隆抗体直接或间接包被在磁珠上所构成。
3.按照权利要求1所述的快速检测微生物的方法，其特征在于所用的裂解剂是破坏微生物细胞壁的试剂，含有三氯醋酸TCA。
4.按照权利要求1所述的快速检测微生物的方法，其特征在于所述的荧光素-荧光素酶生物发光系统检测三磷酸腺苷的具体过程为反应中荧光素被氧化并发出荧光，该光的强度与被测样品中的三磷酸腺苷含量成正比，通过高灵敏度检测仪测定光的强度进行定量分析即可。
全文摘要
本发明提供了一种快速检测微生物的方法，通过特异性免疫磁珠来捕获样品中的特定微生物，而后采用裂解剂释放细菌等微生物细胞内的三磷酸腺苷(ATP)，最后通过荧光素－荧光素酶生物发光系统检测ATP量来判定样品中有无特定微生物及其数量；与现有技术相比，本发明将抗原抗体的特异性反应与快速、敏感的ATP生物发光技术结合在一起，使其同时具有快速、灵敏度高和特异性强等特点，全部检测过程可以在8小时内完成。
文档编号G01N21/76GK1828303SQ20061002550
公开日2006年9月6日 申请日期2006年4月7日 优先权日2006年4月7日
发明者彭志刚, 陈国治 申请人:益思美诠生物科技(上海)有限公司