专利名称：3,5－取代噁唑烷酮类化合物的含量检测方法
技术领域：
本发明提供一种3，5-取代噁唑烷酮类化合物的利用高效液相方法进行含量检测的方法。此外，本发明还提供了3，5-取代噁唑烷酮类化合物作为有效成分的抗菌药物的含量检测。
背景技术：
近年来各类抗生素的不断被开发和问世，使细菌感染疾病的治疗有了很多针对性药物，在肯定其积极效果的同时还可以看到了大量针对抗菌剂的耐药菌也是发展迅速，由于细菌接触抗菌药物后，通过质粒或染色体介导发生变异，获得耐药性，给临床治疗带来了新的困难。早在1978年，杜邦公司在US4128654专利中公开了5-卤甲基-3-芳基噁唑烷酮对某些植物病菌有抗菌活性。北京协和医科大学生物技术研究所在借鉴此基础上进行了结构修饰，合成了3，5-取代噁唑烷酮类化合物。并申请专利，专利号CN1355165A。很显然，如何进行3，5-取代噁唑烷酮类化合物的含量检测问题在研发中也日益突出。一般而言，色谱分析因其具有快速、灵敏、分离度高的特点，常应用于药物分离和定量分析研究工作中，是药物分析的重要方法之一，是药典所要求的检测必不可少的方法。相对于薄层色谱检测方法或者其他方法，高效液相色谱仪(HPLC)法具有快速准确的优点，所以其应用也日益广泛，但是对于特定化合物的含量测定而言，筛选合适的HPLC进行含量检测存在相当大的难度。经过大量的文献检索，发现一般公开的文献中记载的方法，例如，与本发明检测的化合物结构相似的利萘唑酮等类似物的液相检测条件，流动相多采用正己烷∶乙醇∶TFA(65∶35∶1)。尽管结构相似，但是采用以上公知方法测定3，5-取代噁唑烷酮类化合物，流动相的溶解性不好，不能有效分离各个组分，而主成份无法被检出，花费时间也较长。由于该3，5-取代噁唑烷酮类化合物为一类全新的化合物，所以目前还没有检索到该化合物的检测方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种3，5-取代噁唑烷酮类化合物的含量的检测方法。该方法应该具有如下特点样品溶解速度快，时效高；流动相的配制操作简单，分析方法稳定，适应性强。
本发明提供的3，5-取代噁唑烷酮类化合物的含量的检测方法，其特征在于，用包含有紫外检测器的高效液相色谱进行检测，检测波长为200-400nm。所述高效液相色谱的固定相为反相柱，流动相为水与极性有机溶剂的混合液，其中有机相的比例为30％-90％。
所述的极性有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃、氯仿、异丙醇或其混合物，优选乙腈和/或甲醇；本发明的检测方法中流动相为水与乙腈、水与甲醇、水与乙醇、水与四氢呋喃、水与氯仿、水与异丙醇或水与乙腈+甲醇的任何比例的混合液，以流动相重量为100％计，水在流动相中所占的重量比例可以选为10-70％，优选20-60％，更优选20-50％，如果有机溶剂是乙腈和甲醇的混合物，则该混合物优选占流动相重量的50-80％，其中乙腈和甲醇的比例为0.1～3∶1，优选0.12～2∶1。
本发明上述反相柱(固定相)优选C4、C8、C18色谱柱，柱温优选20-50℃；所述流动相为水与极性有机溶剂的混合液。
本发明所述的3，5-取代噁唑烷酮类化合物可以是含有该有效效成分的最终产品，或者含有3，5-取代噁唑烷酮类化合物作为有效成分的抗菌药物。
本发明的关键点是在此流动相和波长条件下可以很好地将3，5-取代噁唑烷酮类化合物与其他非活性物质分离，可以准确地测定该物质的含量。采用本发明的检测方法，用乙腈∶水(75∶25)做流动相可以迅速溶解样品，分离过程所用时间更短，一般15分钟即可完成检测，非常适合3，5-取代噁唑烷酮类化合物含量的检测。本发明所建立的高效液相色谱法具有操作简单，准确度高，专一性强，等特点。
本发明的3，5-取代噁唑烷酮类化合物含量测定分方法与该化合物的纯度采用的是同样的流动相和固定相，这样的优点在于可以避免操作麻烦，采用一个色谱条件既可以测定含量也可以测定有关物质(杂质)，给工业化生产和检测操作带来了极大的方便，同时也比较节省试剂。
本发明所述的3，5-取代噁唑烷酮类化合物包括如下化合物化合物1(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物2(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物3(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物4(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇对甲苯磺酸酯；化合物5(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇乙酸酯；化合物6(S)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基咪唑；化合物75-甲基-2-[(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基]巯基-1，3，4-噻二唑；化合物8(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物9(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1H-四氮唑；化合物10(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物111-甲基-5-[(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基巯基四氮唑；化合物12(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物13(S)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物14(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基硫酚；化合物15(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物16(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基苯并三氮唑；化合物17(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物18(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物19(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物20(S)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物21(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物22(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物23(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物24(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物25(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物26(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物27(S)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物28(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物29(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物30(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物31(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物32(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物33化合物39(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物34(S)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物35(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物36(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物37(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物38(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲醇；化合物39(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲醇甲磺酸酯；化合物40(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基邻苯二酰亚胺；化合物41(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物42(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基丁二酰亚胺；化合物43(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物44(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物45(R)-[N-3-(3′-氟-4′(4 ″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物46(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物47(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物48(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物49(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物50(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；化合物51(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；化合物52(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物53(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物54(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；化合物55(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；化合物56(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物57(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二甲酰亚胺；化合物58(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；化合物59(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；化合物60(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺。
上述化合物优选(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑。
在优选实施例中，本发明的上述化合物的含量检测方法具体为色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(75∶25)为流动相；检测波长为257nm，理论板数按3，5-取代噁唑烷酮类化合物峰计应不低于2500。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含3，5-取代噁唑烷酮类化合物100μg的溶液，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，另取3，5-取代噁唑烷酮类化合物对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
具体实施例方式
下面通过实施例进一步说明本发明的实施。
实施例1检测波长的确定将样品(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺用流动相配置成5ug/ml的浓度，用紫外进行扫描，从紫外扫面图谱可以看出，该化合物的最大吸收波长为257nm，故含量测定选择257nm为检测波长。
实施例2(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺在不同反相填料柱中的保留行为。
以乙腈-水(70∶30)为流动相，流速为1.0ml/ml.进样量为20ul，在257nm处记录色谱图，考察在不同反相C18填料柱中的色谱行为，结果见表1。
表1在不同ODS色谱柱中的保留行为
由表1可以看出，现有的C18品牌均可以用于(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺和制剂的含量测定。选择Diamonsil ODS(200×4.6mm，5um)为色谱柱，分别考察柱温20、30、40、50℃，结果表明均能将(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺或其盐和含有该化合物的制剂的含量测定。实际应用中，可在20-50℃范围内或低于或高于此范围的某一合适的柱温。
实施例3色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(75∶25)为流动相；检测波长为257nm，理论板数按(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺峰计应不低于2500。
对照品溶液的配制取经105℃干燥至恒重的(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品，精密称定，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液。摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺适量，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，摇匀，即得。
测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。按照干燥品计含(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺不得低于98.0％。制剂中(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺应为95.0％～105.0％。
实施例4色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(80∶20)为流动相；检测波长为257nm，理论板数按(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺峰计应不低于2500。
对照品溶液的配制取经105℃干燥至恒重的(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品，精密称定，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液。摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺适量，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，摇匀，即得。
测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。按照干燥品计含(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺不得低于98.0％。制剂中(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺应为95.0％～105.0％。
实施例5色谱条件与系统适用性试验用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(80∶20)为流动相；检测波长为257nm，理论板数按(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺峰计应不低于2500。
对照品溶液的配制取经105℃干燥至恒重的(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品，精密称定，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液。摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺适量，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，摇匀，即得。
测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。按照干燥品计含(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺不得低于98.0％。制剂中(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺应为95.0％～105.0％。
实施例6标准曲线标准曲线以流动相为溶剂，称取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品配制成2.5ug/ml、12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、500ug/ml的系列溶液，分别进样20ul，以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标。
回归方程C＝31.37A(10-4)+0.3779 R＝0.9996线性范围2.5～500ug/ml。
定量限取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品适量，用流动相稀释成不同浓度，取20ul，注入液相色谱仪，使信躁比为10∶1，此时溶液浓度为1.5ug/ml。定量限为30ng。
实施例7溶液稳定性试验取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺样品及对照品适量，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，取20ul进样，结果见表2。供试品溶液在流动相中放置8小时基本稳定。
表2在流动相溶液中的稳定性
实施例8重复性试验取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺样品五份，用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，再精密称取对照品适量用流动相溶解并稀释成100ug/ml的溶液，取20ul进样，计算，结果见表3。
表3重复性试验
实施例9制剂辅料干扰试验(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺片剂或者胶囊制剂中的辅料包括淀粉、微晶纤维素和乳糖这三种白色粉末。按照胶囊配方制得不含(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺的空白辅料，取空白辅料100mg置10ml的容量瓶中，按供试品溶液溶解过程溶解的白色浑浊液，过滤，取滤液20ul注入色谱仪，按照上述分析方法测定。结果表明，辅料在整个分析过程中均不出峰，制剂辅料不干扰供试品分析。
实施例10制剂加样回收试验精密称取(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺对照品适量，分别为处方量的80％、100％、120％，按照处方比例加入空白辅料，按照含量测定方法测定回收率，结果见表4。
表4胶囊样品回收率试验
试验结果表明该方法可行，回收率较好。
实施例11日内误差采用纯度99.5％(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺原料药，按胶囊配方配成(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺胶囊(简称胶囊样品)，取10mg精密称定置100ml容量瓶中用流动相溶解并定容，分别配制成浓度100.12ug/ml、100、31ug/ml、100.28ug/ml样品溶液。分上午、中午、下午取样分析，结果见表5。
表5样品胶囊日内测定误差
实施例12日间误差采用纯度99.5％3，5-取代噁唑烷酮衍生物原料药，按胶囊配方配成3，5-取代唑烷酮衍生物胶囊，取10mg精密称定置100ml容量瓶中用流动相溶解并定容，分别配制成浓度100.04ug/ml、99.48ug/ml、98.43ug/ml样品溶液。间隔一天取样分析，结果见表6。
表6样品胶囊日间测定误差
从试验结果可以看出本发明不仅仅适合于原料药含量的测定，同时该测定方法也适用于其胶囊、片剂或者注射剂的测定。
实施例13采用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈二水(75∶25)、甲醇水(80∶20)、乙腈∶甲醇∶水(10∶70∶20)分别为流动相，检测波长257nm；柱温35℃。
检测化合物1至化合物60的含量，结果见表7。
表7 3，5-取代噁唑烷酮类化合物含量检测结果
实施例13采用辛基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈∶水(75∶25)、甲醇∶水(80∶20)、乙腈∶甲醇∶水(10∶70∶20)分别为流动相，检测波长257nm；柱温35℃检测化合物1至化合物60的含量，结果见表8。
表8 3，5-取代噁唑烷酮类化合物含量检测结果
从表7、8可以看出采用乙腈-水(75∶25)、甲醇-水(80∶20)、乙腈-甲醇-水(10∶70∶20)为流动相C8或者C18色谱柱采用外标法用对照品进行计算，含量均在95％-105％之间。理论板数均不低于2500。说明采用乙腈-水(75∶25)、甲醇-水(80∶20)、乙腈-甲醇-水(10∶70∶20)可以测定3，5-取代噁唑烷酮类化合物的含量。
权利要求
1.一种3，5-取代噁唑烷酮类化合物的含量检测方法，该方法包括用包含有紫外检测器的高效液相色谱进行检测，所述紫外检测器的检测波长为200-400nm，所述高效液相色谱的固定相为反相柱，流动相为水与极性有机溶剂的混合液，其中有机相的比例为30％-90％。
2.如权利要求1所述的含量检测方法，其中检测波长为220-300nm。
3.如权利要求1所述的含量检测方法，其中，所述的3，5-取代噁唑烷酮类化合物包括下列化合物(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇对甲苯磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇乙酸酯；(S)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基咪唑；5-甲基-2-[(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基]巯基-1，3，4-噻二唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1H-四氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；1-甲基-5-[(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基巯基四氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；(S)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基硫酚；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基苯并三氮唑；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基甲基邻苯二酰亚胺；(S)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；(R)-[N-3-(4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；(S)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氯-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；化合物39(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；(S)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-三氟甲基-4′-吗啉基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲醇；(R)-[N-3-(3′-氟4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基邻苯二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苯基哌嗪基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基)甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-(4-甲氧基)苯基哌嗪基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二酰亚胺；(S)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基乙酰胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-(4″-苄基哌啶基))苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲醇甲磺酸酯；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基邻苯二甲酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基-1，2，4-1H-三氮唑；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基樟脑酰亚胺；(R)-[N-3-(3′-氟-4′-哌啶基)苯基-2-氧代-5-噁唑烷基]甲基丁二酰亚胺。
4.如权利要求1所述的含量检测方法，其中所述的检测波长为257nm。
5.如权利要求1所述的含量检测方法中，流动相为水与极性有机溶剂的混合液，其中有机相的比例为40％-80％。
6.如权利要求1所述的含量检测方法，其中，所述的极性有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃、氯仿或异丙醇，或其混合物。
7.如权利要求6所述的含量检测方法，其中，所述的极性有机溶剂为乙腈和/或甲醇。
8.如权利要求1所述的含量检测方法，其中，所述的反相柱的柱温为20-50℃。
9.如权利要求7所述的含量检测方法，其中，所述的流动相为水与乙腈，以流动相重量为100％计，乙腈在流动相中所占的重量比例为40-80％。
10.如权利要求7所述的含量检测方法，其中，所述的流动相为水与乙腈和甲醇，以流动相重量为100％计，水在流动相中所占的重量比例为20-60％，乙腈和甲醇的比例为0.1～3∶1。
全文摘要
本发明提供一种3，5－取代噁唑烷酮类化合物的含量检测方法，包括用包含有紫外检测器的高效液相色谱进行检测，所述紫外检测器的检测波长为200－400nm，所述高效液相色谱的固定相为反相柱，流动相为水与极性有机溶剂的混合液；该方法具有如下特点样品溶解速度快，时效高；被分析物中各成分间分离彻底；相应试剂的配制操作简单，分析方法稳定，适应性强。
文档编号G01N33/15GK101021512SQ20071008839
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月19日 优先权日2007年3月19日
发明者王莹, 朱锦, 刘劲松, 鲁韬 申请人:四川贝力克生物技术有限责任公司