专利名称：：烟用香精香料液相指纹图谱分析方法
技术领域：
：本发明涉及香精香料领域，特别是涉及一种烟用香精香料液相指纹图谱分析方法，它是采用指纹图谱测试方法，表征出烟用香精香料的组成特征，达到对烟用香精香料的质量整体予以控制。
背景技术：
：香精香料与人们的日常生活息息相关，一般所说的香精香料，包括天然香料、合成香料及两者调和而成的香精。日用香精主要用于化妆品食用香精则专用于食品、饮料、烟草和医药。据统计，1970年世界香精香料消费总额为13亿美元，1980年则达到40亿美元，目前已达数百亿美元。在生活中，人们往往是未尝巻烟之味，已闻巻烟之香。无论是烟盒打开时散发出的芬芳烟香，还是抽吸时产生的馥郁香气，烟用香精香料都功不可没。而且烟叶是一个复杂的有机体，种植范围广，不同地区之间的土壤、气候、品种等客观因素的差异，都会影响烟叶香味的组成，或多或少会产生不良的吸味与气息，通过加香加料的技术加以改善与修饰，就有化腐朽为神奇之效。用香精香料的相关技术一向被生产企业视为核心秘密，只有极少数人才得窥全豹，因而常常带有一定的神秘色彩。烟用香料主要来源于自然界和人工化学合成，通常分为天然香料和合成香料。从香料植物的花、果、叶、茎、根或皮及动物的分泌物中提取出的致香物质称为天然香料，如精油、浸膏、净油、酊剂等；合成香料则是指通过人工化学合成而得到的香料化合物，可分为醇类、醚类、醛类、酮类、酯类、酸类、杂环类等。烟用香精香料是由两种或两种以上香料按一定的比例调配出来的混合体。早期的调香师多根据嗅香等感官评价和经验进行香精香料调配，现在的巻烟加香加料技术已有长足发展发展，先应用分析仪器对烟气致香成分进行剖析研究，从中寻找出与香气吸味有关的化学成分或组份，然后再通过化学合成的方法，制备出适合于巻烟制品使用的合成香料，再经调香师进行调配，制备成烟用香精香料添加到巻烟中。巻烟企业香精香料品控技术相对落后，以往巻烟企业对香精香料产品的品质监控，主要是酸值、澄清度、挥发性成份总量、色度、密度、折光率、溶混度等少数指标的检测，而这些指标受溶剂的影响较大，对香精香料产品的内在质量缺乏直观、全面的表征，不能准确客观地反映香精香料产品的内在质量，其品质的稳定性更是难以得到有效控制。烟用香精香料除个别外其组成都非常复杂，针对其中某一两个化学成分进行指标成分分析，难以真正有效监控烟用香精香料的品质。因此能否提供一种更为可靠、稳定的检测新方法，已经引起有关业内研究人员的关注。
发明内容本发明的目的正是针对上述现有技术中所存在的问题而专门提供的一种可直观、全面反映出香精香料产品之内在质量的烟用香精香料液相指纹图谱分析方法，进而有效监控烟用香精香料的品质，本发明的方法为烟用香精香料质量控制提供了一种可靠、稳定、全新的方法，可使烟用香精香料的质量更加稳定，检测更为科学。本发明的主要特点是采用指纹图谱表征出烟用香精香料的组成特征，进而对烟用香精香料的质量整体予以控制。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的本发明的烟用香精香料的质量控制方法包括以下步骤(1)配制样品稀释溶液量取等体积的超纯水、无水乙醇、丙二醇，混合后即为样品稀释溶液；(2)将待测香精香料用样品稀释溶液溶解，定容后取适量溶液过0.45或0.20微米滤膜，进液相色谱分析，记录色谱图；(3)色谱分析条件为高效液相色谱仪，紫外或二极管阵列检测器高纯硅胶为填料的反相C18液相色谱柱，进样量1-50微升流速0.2-2.0ml/min流动相A:0.05%-2%的甲酸或乙酸溶液流动相B:乙腈(色谱纯)温度20°C-60°C梯度0%_30%流动相B(0min)30%-100%流动相B(60min)检测波长275nm或253nm或230nm(4)采用外标法定量配制外标标准溶液将2-甲基萘先加适量乙腈溶解，再用样品稀释溶液溶解，定容，取适量上述配好的2-甲基萘溶液稀释，分别配制浓度为2yg/mL、10ng/mL、50ug/mL、100yg/mL、200ug/mL、500ug/mL的2-甲基萘溶液标准溶液，进液相色谱分析，记录色谱图，制作标准曲线；依据公式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>m组分样品中组分的含量(Ug/g)c组分样品中组分的浓度(ug/mL)v:样品体积m:样品称量质量(g)制作外标标准曲线时，要求强制通过原点；(5)分析比较通过所获得的烟用香精香料液相色谱图指纹谱图，其中包含了样品色谱峰的含量、保留时间等详细信息，能表征出烟用香精香料的组成特征，根据样品特征组分的含量，运用夹角余弦等统计学分析方法比较待测香精香料样品与2_甲基萘溶液标准样品之间的相似度，根据相似度的高低程度来判断样品质量的稳定性，对于与标准样品无明显差异的样品认为其质量合格。本发明的方法适用于不同浓度的香精香料(包含香精、料液、酊剂、浸膏及各种香原料)。本发明的主要特点是采用指纹图谱表征出烟用香精香料的组成特征，进而对烟用香精香料的质量整体予以控制。本发明相比现有技术的优点在于:可对香精香料产品的内在质量进行直观、全面的表征，能准确客观地反应烟用香精香料产品的内在质量，进而有效监控烟用香精香料的品质，本发明的方法为烟用香精香料质量控制提供了一种可靠、稳定、全新的方法，可使烟用香精香料的质量更加稳定，检测更为科学。图l为本发明中标准曲线图。图2为香精香料样品1#的液相色谱图。图3为香精香料样品2#的液相色谱图。图4为标准样品的液相色谱图。具体实施方式本发明以下结合具体实例做进一步描述，但并不限制本发明。选取烟用香精样品ltt，2tt，为控制其质量进行按如下步骤分析-首先准备如下仪器设备及试剂配有自动进样器和柱温箱的高效液相色谱仪，二级管阵列检测器或紫外检测器，万分之一电子天平，超纯水(R〉18MQ)，乙腈(色谱纯)，无水乙醇(色谱纯)，丙二醇(分析纯)，2-甲基萘(分析纯)，甲酸(色谱纯)按如下方法进行操作先配制样品稀释溶液用量筒量取等体积的超纯水、无水乙醇、丙二醇,混合后即为样品稀释溶液。然后配制外标标准溶液用万分之一电子天平准确称取2-甲基萘(1.9)0.lg于100mL容量瓶中，先加适量乙腈溶解，再用样品稀释溶液溶解，定容。取适量上述配好的2-甲基萘溶液稀释，分别配制浓度为2iig/mL、10pg/mL、50ixg/mL、100ug/mL、200ug/mL、500ug/mL的2-甲基萘溶液标准溶液，进液相色谱分析，制作标准曲线。再称取0.5g烟用香精香料样品于10mL容量瓶中，用样品稀释溶液溶解，定容后取适量溶液(如3毫升)用有机相针式过滤器过滤，取过滤后的溶液进液相色谱仪分析。数据分析首先制作外标法标准曲线(制作标准曲线是定量分析的依据之一，Y代表色谱峰面积，X代表样品中化合物的浓度；R2接近1，表示相关性很好。该曲线是通过2-甲基萘溶液的各浓度X值套入Y=29.646X计算得出的Y值而做出的曲线)图l是制作好的典型的外标法曲线，竖轴为y，横轴为x。y样品中待测组分色谱峰面积，x样品中待测组分浓度利用液相色谱仪分析记录两个烟用香精样品和标准样品液相色谱图(见图2、3、4)通过对上述样品中的主要色谱峰积分计算得到下表两个烟用香精样品和标准样品特征色谱峰面积表保留时间(分钟)1#2#标准样品13.9297.35110.85107.3917.36181.92190.75188.8119.0860.0461.0260.5821.9053.1456.2855.9722.7484.1087.3986.9724.5163.2164.6665.8925.082385.832440.032466.7832.61335.25341.33346.2833.39439.14448.28456.6035.04103.16lll.卯110.3842.2153.5454.8955.03<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根据标准曲线的计算公式Y39.646X计算各组分含量(y:样品中待测组分色谱峰面积，x:样品中待测组分浓度)。如下表所示两个烟用香精样品和标准样品特征组分含量表(pig/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>测试样品若质量稳定，其主要色谱峰的含量应与标准样品接近，其指纹谱图与标准样品也应相似。按化学计量学的方法，经夹角余弦等统计学方法计算，样品itt，2#与标准样品相似度，计算结果显示相似度大于0.9999，表明样品1#与2#质量稳定，质量合格。权利要求1.一种烟用香精香料液相指纹图谱分析方法，其特征在于它包括以下步骤(1)配制样品稀释溶液量取等体积的超纯水、无水乙醇、丙二醇，混合后即为样品稀释溶液；(2)将待测香精香料用样品稀释溶液溶解，定容后取适量溶液过0.45或0.20微米滤膜，进液相色谱仪分析，记录色谱图；(3)色谱分析条件为高效液相色谱仪，紫外或二极管阵列检测器高纯硅胶为填料的反相C18液相色谱柱，进样量1-50微升流速0.2-2.0ml/min流动相A0.05％-2％的甲酸或乙酸溶液流动相B乙腈(色谱纯)温度20℃-60℃梯度0％-30％流动相B(0min)30％-100％流动相B(60min)检测波长275nm或254nm或230nm(4)采用外标法定量配制外标标准溶液将2-甲基萘先加适量乙腈溶解，再用样品稀释溶液溶解，定容，取适量上述配好的2-甲基萘溶液稀释，分别配制浓度为2μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL的2-甲基萘溶液标准溶液，进液相色谱分析，记录色谱图，制作标准曲线；计算样品特征组分的含量；(5)分析比较通过所获得的烟用香精香料液相色谱图指纹谱图，其中包含了样品色谱峰的含量、保留时间等详细信息，能表征出烟用香精香料的组成特征，根据样品特征组分的含量，运用夹角余弦等统计学分析方法比较待测香精香料样品与2-甲基萘溶液标准样品之间的相似度，根据相似度的高低程度来判断样品质量的稳定性，对于与标准样品无明显差异的样品认为其质量合格。全文摘要一种烟用香精香料(包含香精、料液、酊剂、浸膏及各种香原料)液相指纹图谱分析方法，其特征在于它包括以下步骤(1)配制样品稀释溶液，(2)将待测香精香料用样品稀释溶液溶解，(3)设定色谱条件，(4)采用外标法定量，(5)分析比较。本发明的主要特点是采用指纹图谱表征出烟用香精香料的组成特征，进而对烟用香精香料的质量整体予以控制。本发明相比现有技术的优点在于可对香精香料产品的内在质量进行直观、全面的表征，能准确客观地反应烟用香精香料产品的内在质量，进而有效监控烟用香精香料的品质，本发明的方法为烟用香精香料质量控制提供了一种可靠、稳定、全新的方法，可使烟用香精香料的质量更加稳定，检测更为科学。文档编号G01N30/88GK101226178SQ20081004911公开日2008年7月23日申请日期2008年1月21日优先权日2008年1月21日发明者刘克建,刘惠民,冰王,昇王,谢复炜申请人:中国烟草总公司郑州烟草研究院