专利名称：烟用料液中糖的分析方法
技术领域：
本发明属于一种烟用料液中糖的分析方法，该方法利用超声萃取烟用料液中的糖，采用超高效液相色谱仪测定烟用料液中糖含量。
背景技术：
糖是烟草料液中最重要的成分，它对调整卷烟化学成分协调，增加卷烟的香味、吃味及调整烟气焦油生成均起到重要作用。因此准确测定烟草料液中的糖量对料液品质的评价和指导准确加料均起到重要作用。目前，糖的测定方法主要有比色法、红外分光光度法、连续流动分析法、毛细管电泳法、离子色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法等。最近，烟草行业发布了一项烟用料液中糖的测定标准-《YC/T 252-2008烟用料液葡萄糖、果糖、蔗糖的测定离子色谱法》。随着色谱技术不断发展，气相色谱法和高效液相色谱法已经成为测定糖类化合物的主要方法，由于气相色谱需要糖类化合物衍生化后才能分析，高效液相色谱的示差折光检测和蒸发光散射检测不需衍生化，样品经前处理即可直接进样，高效液相色谱法更适合于糖类化合物的分析检测。高效液相色谱-示差折光检测法(RID)基于色谱流出物光折射率的变化来连续检测样品浓度，要求恒温、恒流速，对工作环境要求较苛刻，无法进行梯度洗脱，且检测灵敏度不高。王岚等利用该高效液相色谱-示差折光检测法测定了烟用料液中的糖，取得了一定的分析效果(烟草科技，2006，(8) :25-28).高效液相色谱-蒸发光散射检测器(ELSD)是一种质量检测器，基于不挥发的样品颗粒对光的散射程度与其质量成正比而进行检测，对没有紫外吸收、荧光或电活性的物质以及产生末端紫外吸收的物质均能产生响应。ELSD稳定性好、灵敏度高，适宜于低含量糖类物质分析。周元清等利用该高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定了烟用料液中的糖，取得了较好的分析效果(分析实验室，2006，25 (9) :71-73)。超高效液相色谱是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC的理论及原理， 涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、 3倍及1. 7倍。由于超高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析测定是一项近年出现的全新技术， 如何利用其分析测定特定领域——烟用料液中多种水溶性糖，目前人们还未进行广泛研究，所以迄今现有技术中还没有相关的分析方法的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用超高效液相色谱仪来测定烟用料液中糖含量的方法，该方法具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、准确性和稳定性好的特点，适用于大批量烟用料液中糖的分析。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的在超声频率30KHz 40KHz、超声声强0. 4 50W/cm2下，以水为萃取溶液，在20°C 50°C下，经5min 30min萃取烟用料液中的水溶性糖；以Amide色谱柱为分析柱，以乙腈和水混合液作为流动相，采用配备了蒸发光散射检测器的超高效液相色谱仪测定烟用料液中糖含量。本发明的技术方案还包括在测定烟用料液中水溶性糖含量过程中，分析色谱条件为色谱柱用ACQUITY UPLC BEH Amide柱，流动相中加入了质量分数0.2%的三乙胺，流动相流速0. 1 0. 2mL/min，柱温10°C 60°C ；蒸发光散射检测器条件为漂移管温度25°C 75°C，载气为氮气，气体压力20 60psi，喷雾器模式为冷却，数据率10bps，采用与标样对比保留时间定性，外标法定量。本发明的具体技术参数为①超声萃取烟用料液中的水溶性糖过程中，超声频率 40KHz、超声声强0. 5W/cm2下，萃取温度35°C，时间IOmin ；②测定烟用料液中的水溶性糖含量过程中，色谱柱为Waters公司生产的ACQUITYUPLC BEHAmide柱，规格为2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m，流动相采用梯度洗脱，流速0. 15mL/min，柱温45°C ；漂移管温度55°C，载气气体压力 40psi。在所述的测定烟用料液中水溶性糖含量过程中，流动相采用梯度洗脱，洗脱程序为，
时间(min)流动相A (%)流动相 B(%)曲线08926. 5118966. 51227861322786其中的百分比为质量百分比，A为水；B为0. 2%的三乙胺与乙腈混合溶液。本发明所测定的水溶性为果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、鼠李糖、木糖、甘露糖；超高效液相色谱仪采用Waters ACQUITY超高效液相色谱仪，并配备有真空脱气机、二元梯度泵、 自动进样器、恒温柱箱、蒸发光散射检测器和色谱工作站。本发明的有益效果是利用BEH Amide分析柱来改善水溶性糖的分离效果，利用超高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器提高分析速度，提供了一种操作简便、分析速度快、 灵敏度高、准确性和稳定性好的分析测定烟用料液中多种水溶性糖的方法，特别适用于大批量样品的分析测定。
图1为本发明的测定水溶性糖含量标准样品和样品色谱图。图中1-鼠李糖，2-木糖，3-果糖，4-甘露糖，5-葡萄糖，6-蔗糖，7-麦芽糖。
具体实施例方式本发明通过以下具体实施例作进一步描述，但并不限制本发明。前处理方法取料液样品0. 2g，准确至0. OOOlg,加入IOmL水溶解，在35°C下，以超声频率40KHz、超声声强0. 5ff/cm2超声lOmin，取3mL溶液以5mL/min的流速通过预活化好的固相萃取小柱，弃去最初的lmL，收集后面的2mL，过0. 22 μ m有机滤膜用于UPLC分析。UPLC分析条件色谱柱ACQUITYUPLC BEH Amide 柱(2. ImmX 50mm, 1· 7 μ m, Waters 公司)；流动相A 水；B 0. 2%三乙胺/乙腈溶液；流速0. 15mL/min ；柱温45°C ；进样体积5μ L ；梯度洗脱程序见表1 ；ELSD条件漂移管温度55°C ；载气氮气；气体压力40psi ；喷雾器模式冷却；数据率10bps。采用与标样对比保留时间定性，外标法定量。标样色谱图如图 I(A)所示，样品色谱图如图I(B)所示。表IUPLC梯度洗脱程序
权利要求
1.一种烟用料液中糖的分析方法，其特征在于在超声频率30KHZ 40KHZ、超声声强 0. 4 50W/cm2下，以水为萃取溶液，在20°C 50°C下，经5min 30min萃取烟用料液中的水溶性糖；以Amide色谱柱为分析柱，以乙腈和水混合液作为流动相，采用配备了蒸发光散射检测器的超高效液相色谱仪测定烟用料液中糖含量。
2.根据权利要求1所述的烟用料液中糖的分析方法，其特征在于在测定烟用料液中水溶性糖含量过程中，分析色谱条件为色谱柱用ACQUITY UPLC BEH Amide柱，流动相中加入了质量分数0. 2%的三乙胺，流动相流速0. 1 0. 2mL/min，柱温10°C 60°C ；蒸发光散射检测器条件为漂移管温度25°C 75°C，载气为氮气，气体压力20 60psi，喷雾器模式为冷却，数据率10bps，采用与标样对比保留时间定性，外标法定量。
3.根据权利要求2所述的烟用料液中糖的分析方法，其特征在于具体参数为①超声萃取烟用料液中的水溶性糖过程中，超声频率40KHz、超声声强0. 5ff/cm2下，萃取温度 35°C，时间IOmin ；②测定烟用料液中的水溶性糖含量过程中，色谱柱为Waters公司生产的ACQUITY UPLC BEH Amide柱，规格为2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m，流动相采用梯度洗脱，流速 0. 15mL/min，柱温45°C ；漂移管温度55°C，载气气体压力40psi。
4.根据权利要求3所述的烟用料液中糖的分析方法，其特征在于在测定烟用料液中水溶性糖含量过程中，流动相采用梯度洗脱，洗脱程序为，
5.根据权利要求4所述的烟用料液中糖的分析方法，其特征在于所测定的水溶性为果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、鼠李糖、木糖、甘露糖；超高效液相色谱仪采用Waters ACQUITY 超高效液相色谱仪，并配备有真空脱气机、二元梯度泵、自动进样器、恒温柱箱、蒸发光散射检测器和色谱工作站。
全文摘要
本发明属于一种采用超高效液相色谱仪测定烟用料液中水溶性糖含量的方法。本方法在超声频率30KHz～40KHz、超声声强0.4～50W/cm2下，以水为萃取溶液，在20℃～50℃下，经5min～30min萃取烟用料液中的水溶性糖；以Amide色谱柱为分析柱，以乙腈和水混合液作为流动相，采用配备了蒸发光散射检测器的超高效液相色谱仪测定烟用料液中糖含量。本发明具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、准确性和稳定性好的特点，特别适用于大批量烟用料液中多种水溶性糖的分析。
文档编号G01N30/36GK102226789SQ201110082070
公开日2011年10月26日 申请日期2011年4月1日 优先权日2011年4月1日
发明者乔丹娜, 向能军, 孟昭宇, 杨柳, 汤建国, 牟定荣 申请人:红塔烟草(集团)有限责任公司