专利名称：筛选方法、由其确定的组合物、可用于其确定的工具和由其生产的细胞群的制作方法
技术领域：
本发明涉及确定(鉴定)支持限定细胞亚群(一种或多种)培养的组合物的方法。进一步方面，本发明涉及确定促进限定细胞亚群(一种或多种)分化的组合物的方法。再进一步方面，本发明涉及确定诱导限定细胞亚群(一种或多种)程序性细胞死亡(凋亡)的组合物的方法。再一方面，本发明涉及确定促进限定细胞亚群(一种或多种)的细胞衰老的组合物的方法。又一方面，本发明涉及确定调节限定细胞亚群(一种或多种)的细胞生长阻滞的培养基的方法。再进一步方面，本发明涉及通过本发明方法确定的组合物及其多种应用和利用其生产的新型细胞亚群(一种或多种)。再一方面，本发明涉及筛选潜在活性剂以确定对异常细胞群的一个或多个性质改变具有影响的活性剂的方法。再进一步方面，本发明涉及筛选异常细胞群以确定易感于暴露于药理学活性剂的异常细胞群的方法。再一方面，本发明涉及便于实施本发明方法的制品。
背景技术：
细胞凋亡与细胞增殖之间的平衡对于保持稳态非常重要。细胞死亡与增殖之间的不平衡可导致肿瘤形成。在恶性细胞中，凋亡途径通常被扰乱，导致失控的生长和对抗肿瘤治疗的抗性。得到最佳描述的引发凋亡的系统其中一种是⑶95/Fas/APO-l途径。⑶95表示为造血和非造血细胞，包括单核细胞、活化的淋巴细胞、中性白细胞和成纤维细胞。
确定对异常细胞群(例如，肿瘤细胞)的一个或多个性质(例如，凋亡)改变产生影响的潜在活性剂的能力将在促进新治疗的开发中具有重要价值。
类似地，确定易感于暴露于药理学活性剂(例如，抗体、核酸及类似物)的异常细胞(例如，肿瘤细胞)群(一种或多种)和使其生长和/或分离的能力也将在促进新治疗的开发中 具有重要价值。
不幸地，癌症患者常常复发。通过手术和化疗明显克服的肿瘤在数月或数年之后复发。在近十年中，证明癌症细胞的小型亚组一有时被称为癌症干细胞(CSCs)或肿瘤起始细胞
(tumor initiating cell)-是肿瘤生长、转移和复发的驱动力的证据逐渐增多。根据
癌症干细胞假说，肿瘤再次生长的原因是因为现有的癌症药物杀死迅速分裂的癌症细胞，但几乎不伤害少数实际上驱动肿瘤生长的细胞。为成功治愈癌症(而非仅治疗癌症)，需要开发特异性靶向CSCs的药物。由于CSCs在1994年于白血病中被首次鉴定到，其已被报告于多种人类癌症中，例如，脑、胸、结肠、胰腺及其他组织的癌症。
因此，还有另一开发特异性靶向CSC的药剂的障碍是接近这些细胞。总体上，CSC表示肿瘤中细胞的小亚组。为手头具有足够的CSC用于诸如疾病研究和药物发现的应用，必需克服两个主要的障碍。第一，必须能够分离这种细胞。第二，必须能够以保持其致瘤活性和干细胞样性质的形式在培养中增殖这种细胞。
发明概述
根据本发明一方面，建立了确定支持限定细胞亚群(一种或多种)培养的组合物的方法。在此考虑应用的限定细胞亚群(一种或多种)包括
能够在移植到动物模型中时重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种);
具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种);
具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种)；
在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种);
在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，该无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白；及类似物中的一种或多种；
及其任意两种或更多种的组合。
根据另本发明一方面，已经建立了确定如下组合物的方法其促进限定细胞亚群(一种或多种)分化成为缺乏致瘤活性的细胞。
根据本发明再一方面，已经建立了确定如下组合物的方法其诱导限定细胞亚群(一种或多种)程序性细胞死亡(凋亡)。
根据本发明又一方面，已经建立了确定如下组合物的方法其促进限定细胞亚群(一种或多种)的细胞衰老。
根据本发明再一方面，已经建立了确定如下培养基的方法其调节限定细胞亚群(一种或多种)的细胞生长阻滞。
根据本发明进一步方面，已经提供了通过本发明方法确定的新型组合物。还提供了通过本发明方法确定的新型组合物的多种应用和利用其生产的新型细胞群。
因此，本发明方法能够确定这样的培养基其可用于多种用途，例如，支持限定细胞亚群(一种或多种)的培养，促进限定细胞亚群(一种或多种)分化成为不具致瘤活性的细胞，诱导限定细胞亚群(一种或多种)的程序性细胞死亡(凋亡)，促进限定细胞亚群(一种或多种)的细胞衰老，调节限定细胞亚群(一种或多种)的细胞生长阻滞，及类似用途。所得培养基能够生成新型细胞亚群，该新型细胞亚群包含大量具有期望性质的细胞，如，例如，不具致瘤活性的细胞、易感于程序性细胞死亡(凋亡)的细胞、衰老状态中的细胞、呈现细胞生长速率阻滞的细胞及类似细胞。
根据本发明又一方面，建立了筛选潜在活性剂以确定在暴露于其后对异常细胞群的一个或多个性质改变产生影响的那些药剂(和/或包含其的组合物)的方法。本发明方法如下实施将其上包括多个复合微环境的支撑物(载体)用作对异常细胞亚群(一种或多种)的支撑物。
在此考虑应用的异常细胞亚群(一种或多种)包括异常心脏细胞、异常肝细胞，异常胰腺细胞、异常肺细胞、异常脑细胞、过度增殖性细胞及类似细胞。
根据本发明再一方面，已被充分描述的fas受体激动剂IgM抗体促使Jurkat T细胞淋巴瘤细胞被固定在胞外基质底物上的能力得到证实。
根据本发明又一方面，已经建立了筛选异常细胞群以确定易感于暴露于一种或多种药理学活性剂的那些细胞群(一种或多种)的方法。本发明方法如下实施将其上包括多个复合微环境的支撑物用作对一种或多种药理学活性剂(或在测的异常细胞亚群(一种或多种))的支撑物。
根据本发明再一方面，已经建立了确定如下组合物的方法其诱导异常细胞亚群(一种或多种)的程序性细胞死亡(凋亡)。
根据本发明又一方面，已经建立了确定易感于暴露于药理学活性剂(例如，抗体、核酸及类似物)的异常细胞(例如，肿瘤细胞)群(一种或多种)的方法；和使这种细胞群生长和/或分离的方法。
根据本发明进一步方面，提供了便于实施本发明 方法的制品。还提供了本发明制品的多种应用。
附图简述
图1是用于实践本发明的阵列玻片的示例性构造。
图2是用于实践本发明的阵列玻片的示例性制备方法。
图3示例支持Jurkat细胞附于其上包括多个复合微环境的支撑物的组分的确定，该其上包括多个复合微环境的支撑物被考虑用于实践本发明(参见实施例9)。
图4是在暴露于抗CD95时结合于FITC的羊抗鼠次级IgM的荧光强度的图，该抗CD95在纤连蛋白存在的情况下在水凝胶上以400 μ m的点进行印迹(参见实施例9)。
图5示例Jurkat细胞在抗CD95IgM单克隆抗体(MAB)存在的情况下不能保持附于纤连蛋白。Jurkat细胞在抗⑶95存在的情况下被温育48hrs。观察到细胞附于点具有剂量依赖性。
图6示例当Jurkat细胞在固定抗CD95存在的情况下被固定于纤连蛋白时胱天蛋白酶3信号增加(24hr时间内)。这种胱天蛋白酶3活性与fas介导的活化细胞死亡途径直接相关。
发明详述
根据本发明，提供了确定本文限定细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养基的方法，所述方法包括
创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分，
针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群(一种或多种)，和
选择促进所述细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养的那些复合微环境。
在此考虑应用的限定细胞群包括
在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞群(一种或多种)，
具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞群(一种或多种);
具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞群(一种或多种);
在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞群(一种或多种)；和
在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞群(一种或多种)，该无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白及类似物中的一种或多种；
及其任意两种或更多种的组合。如本文所用，短语“在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞群(一种或多种)”是指目标细胞群(一种或多种)(其一般衍生自肿瘤)促进肿瘤形成的能力一例如，在被移植到动物模型中时。
如本文所用，短语“具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞群(一种或多种)”是指表达如下标记的细胞CD44+/CD24-、CXCR4+、CD133+、CD138-、CD20、α 2 β I+、CD44+、EpCam+, Cdl66+、LGR5、⑶24+及类似物，及其任意两种或更多种的组合。
如本文所用，短语“在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞群(一种或多种)”是指对例如如下药剂具有抗性的细胞阿拉伯糖胞P密唳(ARA-C)>阿糖胞苷、博莱霉素、马利兰、卡培他滨(Capecitabine)、卡钼、卡莫司汀(Carmustine)、苯丁酸氮芥、顺钼、环磷酰胺、达 卡巴嗪(Dacarbazine)、柔红霉素、多西紫杉醇、阿霉素、表柔比星、依托泊苷(Etoposide)、氟达拉滨(Fludarabine)、5-氟尿卩密唳、吉西他滨(Gemcitabine)、轻基脲、伊达比星(Idarubicin)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、伊立替康(Irinotecan)、洛莫司汀(Lomustine)、二氯甲基二乙胺(Mechlorethamine)、美法仑(Melphalan)、6-巯基嘌呤(6_MP)、氨甲喋呤、丝裂霉素、C米托蒽醌、奥沙利钼(Oxailplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、链脲菌素、替莫唑胺(Temozolomide)、6_ 硫鸟嘌呤、拓扑替康(Topotecan)、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺、长春瑞滨(Vinorelbine)、阿仑单抗(Alemtuzumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、吉妥单抗(Gemtuzumab)、替伊莫单抗(Ibritumomab)、利妥昔单抗(Rituximab)、托西莫单抗(Tositumomab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、阿地白介素、IL-2、α干扰素、咪喹莫特(Imiquimod)、来那度胺(Lenalidomide)、阿那曲唑(Anastrozole)、比卡鲁胺(Bicalutamide)、依西美坦(Exemestane)> 氟他胺(Flutamide)、氟维司群(Fulvestrant)、来曲唑(Letrozole)、甲地孕酮(Megestrol)、雷洛昔芬(Raloxifene)、他莫昔芬(Tamoxifen)、托瑞米芬(Toremifene)及类似物。
如本文所用，短语“在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞群(一种或多种)，该无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白及类似物中一种或多种”是指这样的细胞在无血清细胞培养基存在的情况下生长——该无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛胰岛素和人类转铁蛋白中的一种或多种，并且在悬浮培养中作为球体生长，并且进一步能够在胎牛血清存在的情况下分化成为粘附细胞。
根据另本发明一方面，提供了确定本文限定的细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养基的方法，所述方法包括
针对多个复合微环境筛选所述细胞群(一种或多种)，其中各复合微环境包括多种组分，其中一种或多种密切类似于或模拟在细胞通常所处的体内环境中或在所述细胞群(一种或多种)来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分(一种或多种)；和
选择促进所述细胞群(一种或多种)的短期和/或长期培养的那些微环境。
如本文所用，“密切类似于”在细胞群(一种或多种)来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分的组分是在结构上和/或在功能上基本上类似于这种组分的组分(例如，其类似物和/或同系物)。
如本文所用，“模拟”在细胞群(一种或多种)来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分的组分是与在目标体内环境中发现的组分给予基本上相同的功能性质的组分。
根据本发明又一方面，提供了确定用于本文限定细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期培养基的方法，所述方法包括选择这样的微环境其在针对多个复合微环境筛选所述细胞群(一种或多种)时，促进所述细胞群(一种或多种)短期和/或长期培养，其中各复合微环境包括多种组分，其中一种或多种密切类似于在细胞亚群(一种或多种)通常所处的体内环境中或在所述细胞群(一种或多种)来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分(一种或多种)。
如本文所用，“同源物种”的指代包括与目标物种同科的物种，例如，灵长类科、犬科、猫科、牛科、啮齿类科及被认为与人类同源的类似科。因此，可于小鼠、大鼠、猴子及类似动物中寻找在目标细胞亚群(一种或多种)通常所处的体内环境中发现的组分(一种或多种)。
本文对“同源物种”的指代还包括在蛋白质水平上呈现至少30%序列类似性(相对于目 标物种)的任何生物体。在本发明的某些实施方式中，术语“同源物种”包括在蛋白质水平上呈现至少40%序列类似性(相对于目标物种)的任何生物体。在本发明的某些实施方式中，术语“同源物种”包括在蛋白质水平上呈现至少50%>序列类似性(相对于目标物种)的任何生物体。在本发明的某些实施方式中，术语“同源物种”包括在蛋白质水平上呈现至少60%序列类似性(相对于目标物种)、至少70%序列同源性或至少80%序列同源性的任何生物体。
在此确定的培养基可用于多种应用，例如，增殖具有致瘤活性的新型细胞系、不具致瘤活性的细胞系、易感于程序性细胞死亡(凋亡)的细胞、衰老状态的细胞、呈现细胞生长速率阻滞的细胞及类似细胞系。这种细胞系可以多种方式分离，例如，通过与初始微环境复本(replicate)的比较和目标细胞的回收。
利用本发明方法确定的培养基一般包括多种组分，该组分在结合在一起时足以支持本文限定的具体细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养。这种培养基包括为具体细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养提供适当基质的制剂。
本领域技术人员容易理解，考虑用于制备本文所述测试培养基的不同组分中的多种无需以活性形式引入；相反，这种组分可以前体形式(即，以化学保护物种(例如，前体药物)、物理保护物种(例如，被包覆的颗粒材料)或类似物)引入。
在本发明的具体实施方式
中，该包括各复合微环境的多种组分中一种或多种密切类似于在所述细胞亚群(一种或多种)通常所处的体内环境中或在所述细胞群(一种或多种)通常所处物种的同源物种的体内环境中发现的组分(一种或多种)。本领域技术人员仅需参考科学文献以确定将要利用本发明方法测试的候选组分。最小的组分包括已显示在目标亚群的生活力中发挥作用的胞外基质蛋白(ECMPs)和/或生长因子。
在此考虑应用的各微环境包括选自如下的至少两种或更多种组分的多因子阵列胞外基质蛋白或其组分、细胞粘附分子、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、非蛋白聚糖的多糖、细胞通信分子、复合碳水化合物、脂质、维生素及其代谢物、天然存在的低分子量生物活性分子、合成的低分子量生物活性分子、合成的聚合物、生物聚合物、抗体、核酸、无机盐、培养基补充物及类似物。本领域技术人员容易理解，生物活性组分可适于多于一种上述种类，例如，生长因子也可被考虑为信号传导分子。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的三种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的四种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的五种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的六种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的七种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的八种或更多 种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的九种或更多种组分的多因子阵列。
在本发明的某些方面，在此考虑应用的各微环境包括选自上述多种组分的十种或更多种组分的多因子阵列。
因此，任何一种微环境将可能包含少于全部上述多种组分，但至少一种上述代表性组分将被显示在给定多因子阵列的至少一种微环境中。本领域技术人员容易理解，组合以创建给定微环境的组分数量可变化很大,本文用于制备多因子阵列所考虑的多种组分的相对含量也可变化很大。微环境的示例性种类可通过创建本文应用所考虑组分的多种任选组合而生成，如下表示例性显示地，其中“ + ”表示组分存在(++或+++表示相对于仅“存在”的组分而言，较高相对含量的这种组分存在);和“-”表示组分不存在于特定微环境中)。
微环境
组分[I [2 [3 U |5 θ [ [8~[9~[10
胞外基质蛋白 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + + + -细胞粘附分子 - + + + ++++++ +++ +++ +++
糖类+-+-+-+-+-
糖蛋白~^+ ^~^+ ^~^+ ^~^~~~ +
蛋白聚糖+-+-+-+-+-
细胞通信分子 -+-+-+-+-+
复合碳水化合物 +-----
月旨质----- +
维生素+-+-+-+-+-
权利要求
1.确定细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养基的方法，其中所述细胞亚群(一种或多种)选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种)； 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种); 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分， 针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群(一种或多种)，和 选择促进所述细胞亚群(一种或多种)短期和/或长期体外培养的那些复合微环境。
2.权利要求1所述的方法，其中构成各复合微环境的所述多种组分中的一种或多种密切类似于在所述细胞亚群(一种或多种)通常所处的体内环境中或所述细胞群(一种或多种)的来源物种的同源物种的体内环境中发现的组分(一种或多种)。
3.权利要求所述的方法1，其中所述多个微环境包括选自如下的两种或更多种组分的多因子阵列胞外基质蛋白或其组分、细胞粘附分子、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、非蛋白聚糖的多糖、细胞通信分子、复合碳水化合物、脂质、维生素及其代谢物、天然存在的低分子量生物活性分子、合成的低分子量生物活性分子、多肽、合成的聚合物、生物聚合物、抗体、核酸、无机盐和培养基补充物。
4.权利要求3所述的方法，其中所述细胞通信分子选自生长因子、信号传导分子、激素和细胞因子。
5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在移植到动物模型中时能重演肿瘤。
6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群具有致瘤活性并呈现干细胞样性质。
7.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群具有一种或多种指示异常行为的分子标记。
8.权利要求7所述的方法，其中所述具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞选自表达 CD44+/CD24-、CXCR4+、CD133+、CD138-、CD20、α 2 β I+、CD44+、EpCam+、Cdl66+、LGR5、和⑶24+、及其任意两种或更多种的组合的细胞。
9.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗。
10.权利要求9所述的方法，其中所述用于治疗过度增生性疾病的药剂选自阿拉伯糖胞嘧啶(ARA-C)、阿糖胞苷、博莱霉素、马利兰、卡培他滨、卡钼、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺钼、环磷酰胺、达卡巴嗪、柔红霉素、多西紫杉醇、阿霉素、表柔比星、依托泊苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、6-巯基嘌呤(6-MP)、氨甲喋呤、丝裂霉素、C-米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、链脲菌素、替莫唑胺、6-硫鸟嘌呤、拓扑替康、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺、长春瑞滨、阿仑单抗、贝伐单抗、吉妥单抗、替伊莫单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、阿地白介素、IL-2、α干扰素、咪喹莫特、来那度胺、阿那曲唑、比卡鲁胺、依西美坦、氟他胺、氟维司群、来曲唑、甲地孕酮、雷洛昔芬、他莫昔芬和托瑞米芬。
11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞亚群在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长，所述无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素和人类转铁蛋白中的一种或多种。
12.权利要求11所述的方法，其中在无血清细胞培养基存在的情况下生长的所述细胞在悬浮培养中作为球体生长，并能够在胎牛血清存在的情况下分化成为粘附细胞，所述无血清细胞培养基包含bFGF、EGF、牛胰岛素和人类转铁蛋白中的一种或多种。
13.确定细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期体外培养基的方法，其中所述细胞亚群(一种或多种)选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种); 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种); 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 针对多个复合微环境筛选所述细胞群(一种或多种)，其中各复合微环境包括多种组分，所述组分中的一种或多种密切类似于或模拟在所述细胞通常所处的体内环境中发现的组分(一种或多种)，和 选择促进所述细胞群(一种或多种)短期和/或长期培养的那些微环境。
14.确定细胞亚群(一种或多种)的短期和/或长期培养基的方法，其中所述细胞亚群(一种或多种)选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种)； 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种)； 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合，所述方法包括在针对多个复合微环境筛选所述细胞群(一种或多种)时，选择促进所述细胞群(一种或多种)短期和/或长期培养的那些微环境， 其中各复合微环境包括多种组分，所述组分中的一种或多种密切类似于在所述细胞亚群(一种或多种)通常所处的体内环境中发现的组分(一种或多种)。
15.培养基制剂，其通过前述权利要求中任一项所述的方法确定。
16.细胞群(一种或多种)的短期和/或长期培养方法，其中所述细胞亚群(一种或多种)选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种); 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种)； 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括使所述细胞群与权利要求15所述的培养基制剂接触。
17.细胞群，其通过权利要求16所述的方法增殖。
18.确定细胞亚群的体外分化培养基的方法，其中所述细胞亚群(一种或多种)选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种); 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种); 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分， 针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群，和 选择促进所述细胞亚群体外分化的那些复合微环境。
19.确定诱导细胞亚群(一种或多种)的程序性细胞死亡(凋亡)的培养基的方法，所述细胞亚群选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种); 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种); 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分， 针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群，和 选择诱导所述细胞亚群凋亡的那些复合微环境。
20.确定促进细胞亚群(一种或多种)的细胞衰老的培养基的方法，所述细胞亚群选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种); 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种); 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分， 针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群，和 选择促进所述细胞亚群衰老的那些复合微环境。
21.确定调节细胞亚群(一种或多种)的细胞生长阻滞的培养基的方法，所述细胞亚群选自 在移植到动物模型中时能重演肿瘤的细胞亚群(一种或多种)； 具有致瘤活性并呈现干细胞样性质的细胞亚群(一种或多种)； 具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞亚群(一种或多种)； 在暴露于一种或多种用于治疗过度增生性疾病的药剂后抵抗药物治疗的细胞亚群(一种或多种)；和 在无血清细胞培养基存在的情况下悬浮生长的细胞亚群(一种或多种)，所述无血清细胞培养基包含如下中的一种或多种bFGF、EGF、牛血清白蛋白、白血病抑制因子、神经元存活因子、胰岛素、人类转铁蛋白； 以及其任意两种或更多种的组合， 所述方法包括 创建多个复合微环境，其中各复合微环境包括多种组分， 针对所述多个复合微环境筛选所述细胞亚群，和 选择调节所述细胞亚群的细胞生长阻滞的那些复合微环境。
22.包括组分多因子阵列的制品，所述组分选自胞外基质蛋白或其组分、细胞粘附分子、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、非蛋白聚糖的多糖、细胞通信分子、复合碳水化合物、脂质、维生素及其代谢物、天然存在的低分子量生物活性分子、合成的低分子量生物活性分子、多肽、合成的聚合物、生物聚合物、抗体、核酸、无机盐和培养基补充物、及其任意两种或更多种的组合。
23.筛选潜在活性剂(一种或多种)以确定那些影响异常细胞群一个或多个性质改变的活性剂的方法，所述方法包括 创建阵列，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群或所述潜在活性剂(一种或多种)固定在所述复合微环境点上； 将潜在活性剂(一种或多种)或原代细胞施加于所述阵列上的各点，使得所述阵列包括 固定的异常细胞群，所述固定的异常细胞群与所述潜在活性剂(一种或多种)接触，或 固定的潜在活性剂(一种或多种)，所述固定的潜在活性剂与所述异常细胞群接触； 和评价所述细胞的一个或多个性质，作为所述细胞已经接触的潜在活性剂(一种或多种)的函数，和 选择那些影响所述异常细胞群一个或多个性质改变的潜在活性剂(一种或多种)。
24.权利要求23所述的方法，其中所述活性剂是抗体、天然存在的分泌蛋白和肽、可溶性受体、miRNA, siRNA、生物仿制剂、FAB’ S、支架蛋白、病毒(例如腺病毒或慢病毒)、噬菌体或其他大分子量分子。
25.权利要求23或24所述的方法，其中所述异常细胞群选自原代细胞、异种移植源性样本、瘤性细胞、具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞和粘附细胞。
26.权利要求25所述的方法，其中所述瘤性细胞在移植到动物模型中时能重演肿瘤。
27.权利要求25所述的方法，其中所述具有一种或多种指示异常行为的分子标记的细胞指示增殖性疾病或自身免疫性疾病。
28.权利要求27所述的方法，其中所述增殖性疾病选自细胞增殖性疾病和肥大细胞增殖性疾病。
29.权利要求27所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自类风湿性关节炎、过敏性鼻炎、狼疮和糖尿病。
30.权利要求23-29中任一项所述的方法，其中所述复合微环境包括选自如下的两种或更多种组分胞外基质蛋白或其组分、细胞粘附分子、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、非蛋白聚糖的多糖、细胞通信分子、复合碳水化合物、脂质、维生素及其代谢物、天然存在的低分子量生物活性分子、合成的低分子量生物活性分子、多肽、合成的聚合物、生物聚合物、抗体、核酸、无机盐和培养基补充物。
31.筛选潜在活性剂(一种或多种)以确定那些影响异常细胞群一个或多个性质改变的活性剂的方法，所述方法包括 将潜在活性剂(一种或多种)或原代细胞施加于阵列上各点，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群或所述潜在活性剂(一种或多种)固定在所述复合微环境点上，使得所述阵列包括 固定的异常细胞群，所述固定的异常细胞群与所述潜在活性剂(一种或多种)接触，或 固定的潜在活性剂(一种或多种)，所述固定的潜在活性剂与所述异常细胞群接触，和评价所述细胞的一个或多个性质，作为所述细胞已经接触的潜在活性剂(一种或多种)的函数，和 选择那些影响所述异常细胞群一个或多个性质改变的潜在活性剂(一种或多种)。
32.筛选潜在活性剂(一种或多种)以确定那些影响异常细胞群一个或多个性质改变的活性剂的方法，所述方法包括 在将潜在活性剂(一种或多种)或原代细胞施加于阵列上各点后，评价所述细胞的一个或多个性质，作为所述细胞已经接触的潜在活性剂(一种或多种)的函数，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群或所述潜在活性剂(一种或多种)固定在所述复合微环境点上，使得所述阵列包括 固定的异常细胞群，所述固定的异常细胞群与所述潜在活性剂(一种或多种)接触，或 固定的潜在活性剂(一种或多种)，所述固定的潜在活性剂与所述异常细胞群接触；和 选择那些影响所述异常细胞群一个或多个性质改变的潜在活性剂(一种或多种)。
33.筛选潜在活性剂(一种或多种)以确定那些影响异常细胞群一个或多个性质改变的活性剂的方法，所述方法包括 在将所述潜在活性剂(一种或多种)或原代细胞施加于阵列上各点和评价所述细胞的一个或多个性质作为所述细胞已经接触的潜在活性剂(一种或多种)的函数时，选择那些影响所述异常细胞群一个或多个性质改变的潜在活性剂(一种或多种)， 所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群或所述潜在活性剂(一种或多种)固定在所述复合微环境点上，使得所述阵列包括 固定的异常细胞群，所述固定的异常细胞群与所述潜在活性剂(一种或多种)接触，或 固定的潜在活性剂(一种或多种)，所述固定的潜在活性剂与所述异常细胞群接触。
34.筛选异常细胞群以确定那些易感于暴露于药理学活性剂(一种或多种)的异常细胞群的方法，所述方法包括 创建阵列，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群固定在所述复合微环境点上， 将药理学活性剂施加于所述阵列上的各点；和分析所述细胞的性质改变(一种或多种)，作为其暴露于药理学活性剂的函数，和 选择影响所述异常细胞群一个或多个性质的期望改变的药理学活性剂(一种或多种)。
35.筛选异常细胞群以确定那些易感于暴露于药理学活性剂(一种或多种)的异常细胞群的方法，所述方法包括 将药理学活性剂施加于阵列上各点，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群固定在所述复合微环境点上；和分析所述细胞的性质改变(一种或多种)，作为其暴露于药理学活性剂的函数，和 选择影响所述异常细胞群一个或多个性质的期望改变的药理学活性剂(一种或多种)。
36.筛选异常细胞群以确定那些易感于暴露于药理学活性剂(一种或多种)的异常细胞群的方法，所述方法包括 在通过将药理学活性剂施用于所述阵列上的各点创建所述阵列和分析所述细胞的性质改变(一种或多种)作为其暴露于药理学活性剂的函数时，选择影响所述异常细胞群一个或多个性质的期望改变的药理学活性剂(一种或多种)，所述阵列包括多个复合微环境点，所述异常细胞群固定在所述复合微环境点上。
37.制品，其包括支撑物，所述支撑物的至少一个表面被施以阵列，所述阵列包括多个纳米升尺寸的复合微环境点，潜在活性剂(一种或多种)固定在所述复合微环境点上。
38.制品，其包括支撑物，所述支撑物的至少一个表面被施以阵列，所述阵列包括多个纳米升尺寸的复合微环境点，异常细胞固定在所述复合微环境点上。
全文摘要
根据本发明一方面，建立了确定支持限定细胞群培养的组合物的方法。根据另本发明一方面，建立了确定促进限定细胞群分化的组合物的方法。根据本发明再一方面，建立了确定诱导限定细胞群凋亡的组合物的方法。根据本发明又一方面，建立了确定促进限定细胞群细胞衰老的组合物的方法。根据本发明又一方面，建立了确定调节限定细胞亚群(一种或多种)的细胞生长阻滞的培养基的方法。根据本发明进一步方面，提供了通过本发明方法确定的新型组合物。还提供了通过本发明方法确定的新型组合物的多种应用和利用其生产的新型细胞群。根据本发明又一方面，建立了确定支持异常细胞群培养的组合物的方法。根据本发明再一方面，建立了确定促进异常细胞群分化的组合物的方法。根据本发明又一方面，建立了确定诱导异常细胞群凋亡的组合物的方法。
文档编号G01N33/48GK103025887SQ201180033240
公开日2013年4月3日 申请日期2011年5月2日 优先权日2010年5月3日
发明者M·张, J·宾汉姆, N·希罗彼安 申请人:麦克罗斯特姆公司