本发明涉及食品检测技术领域，具体是一种食品中毒死蜱的检测试剂盒。
背景技术：
毒死蜱是一种高效、低毒、低残留的广谱性有机磷杀虫剂，其化学名称为O，O-二乙基-O-(3，5，6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯，在世界范围内应用于粮食、蔬菜、水果及经济作物的害虫防治，主要用于防治多种作物上的螟虫、黏虫、介壳虫、蚜虫、棉铃虫、蓟马、叶蝉和螨类等害虫。
毒死蜱是1965年由美国陶氏益农化学公司开发的硫代磷酸酯类杀虫剂，40多年来已成为一种久盛不衰的最大吨位的有机磷农药，现在已被认为是防治水稻害虫中取代甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、磷胺、水胺硫磷等高毒有机磷农药的最好选择，也是安全农产品农药残留监控的重要品种，在粮食等作物上引起的残留问题已有所报道，而且，环境样品中发现毒死蜱残留的情况也日趋严重，对人们的健康构成了潜在的威胁。毒死蜱在我国蔬菜残留量的限量标准是1mg/kg，而日本制定毒死蜱的残留限量标准时，将从我国进口量较大的菠菜中的毒死蜱残留量定为0.01mg/kg，欧洲的标准也达到0.05mg/kg。这些都对我国出口食品、农产品产生了不利的影响，随着人们对毒死蜱残留的毒性与环境风险的日益关注，因此，需要建立一种简便、快速、准确和高效的毒死蜱农药残留检测的方法。
目前国内检测食品中有机磷类农药残留常用的方法有速测卡法及分光光度法，其中速测卡法在检测过程当中需保持环境温度37℃条件进行反应，检测结果需通过肉眼与空白对照卡进行比对，为定性判断，肉眼的判断有时会存在较大误差，若所测结果为阳性样品，则需采用其他分析方法进一步确定其农药残留的含量；分光光度法检测过程中需保持环境温度在37℃左右，实验员需现场配置底物及根据酶的活性配置乙酰胆碱酯酶，检测结果需经计算得到酶抑制率，若得到阳性样品结果则需用其他分析方法进一步确定农药残留含量，以上两种方法步骤均较繁琐。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低成本、操作简便、快速、准确的食品中毒死蜱的检测试剂盒。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种食品中毒死蜱的检测试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20ml加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶；所述的C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂；所述的第一显色剂为10～14ml含有0.55～0.62mmol/L的溴的磷酸盐缓冲溶液；所述的第二显色剂为5.6～7.8g/L四甲基联苯二胺的乙醇溶液。
作为本发明进一步的方案：所述的第一显色剂为12ml含有0.58mmol/L的溴的磷酸盐缓冲溶液。
作为本发明进一步的方案：所述的第二显色剂为6.6g/L四甲基联苯二胺的乙醇溶液。
利用所述的食品中毒死蜱的检测试剂盒进行检测的方法，具体步骤如下：
（1）将1.5～1.8g蔗糖、2.2～2.5g牛血清白蛋白、1.2～1.4g甘氨酸、20～25ml甘油加入70～80ml浓度为20～30mmol/L的氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存得酶冷冻保护剂，待用；
（2）将酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，其中乙酰胆碱酯酶的稀释倍数为2200～2600倍，胆碱氧化酶的稀释倍数为350～400倍，过氧化物酶的稀释倍数为500～600倍；
（3）取少量待测样品，洗净，加水搅拌6～8min后静置2min，得待检样品溶液；
（4）分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加250～300μL纯净水，摇匀后，用塑料滴管向T酶瓶中滴加250～300μL待检样品溶液，向C酶瓶中滴加250～300μL纯净水或pH为7.2～7.6、浓度为0.15～0.18mol/L的磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于预加热至38～42℃的第一显色剂的溶液上；
（5）至溴挥发完后，在步骤（4）中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
（6）若步骤（5）中所述的点样处显蓝色或黄色，则说明待测样品中含有毒死蜱；反之，则说明待测样品中不含有毒死蜱。
作为本发明进一步的方案：所述的步骤（1）中，将1.62g蔗糖、2.4g牛血清白蛋白、1.35g甘氨酸、22ml甘油加入76ml浓度为25mmol/L的氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存得酶冷冻保护剂。
作为本发明进一步的方案：所述的步骤（2）中，乙酰胆碱酯酶的稀释倍数为2450倍，胆碱氧化酶的稀释倍数为360倍，过氧化物酶的稀释倍数为540倍。
作为本发明进一步的方案：所述的步骤（4）中，分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加280μL纯净水，摇匀后，用塑料滴管向T酶瓶中滴加280μL待检样品溶液，向C酶瓶中滴加280μL纯净水或pH为7.3、浓度为0.16mol/L的磷酸盐缓冲液。
作为本发明进一步的方案：所述的步骤（4）中，第一显色剂的溶液被预加热至40℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明成本低、制作简单，检测灵敏度高，且检测线性范围显著增宽，使用方便，操作简单快捷，在测试中不需要复杂的配制试剂过程，非专业人员按照说明书便可轻易完成检测。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种食品中毒死蜱的检测试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20ml加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶；C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂；第一显色剂为10ml含有0.62mmol/L的溴的磷酸盐缓冲溶液；第二显色剂为5.6g/L四甲基联苯二胺的乙醇溶液。
利用所述的食品中毒死蜱的检测试剂盒进行检测的方法，具体步骤如下：
（1）将1.8g蔗糖、2.2g牛血清白蛋白、1.4g甘氨酸、20ml甘油加入80ml浓度为20mmol/L的氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存得酶冷冻保护剂，待用；
（2）将酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，其中乙酰胆碱酯酶的稀释倍数为2600倍，胆碱氧化酶的稀释倍数为350倍，过氧化物酶的稀释倍数为600倍；
（3）取少量待测样品，洗净，加水搅拌6min后静置2min，得待检样品溶液；
（4）分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加300μL纯净水，摇匀后，用塑料滴管向T酶瓶中滴加250μL待检样品溶液，向C酶瓶中滴加300μL纯净水或pH为7.2、浓度为0.18mol/L的磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于预加热至38℃的第一显色剂的溶液上；
（5）至溴挥发完后，在步骤（4）中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
（6）若步骤（5）中所述的点样处显蓝色或黄色，则说明待测样品中含有毒死蜱；反之，则说明待测样品中不含有毒死蜱。
实施例2
本发明实施例中，一种食品中毒死蜱的检测试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20ml加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶；C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂；第一显色剂为14ml含有0.55mmol/L的溴的磷酸盐缓冲溶液；第二显色剂为7.8g/L四甲基联苯二胺的乙醇溶液。
利用所述的食品中毒死蜱的检测试剂盒进行检测的方法，具体步骤如下：
（1）将1.5g蔗糖、2.5g牛血清白蛋白、1.2g甘氨酸、25ml甘油加入70ml浓度为30mmol/L的氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存得酶冷冻保护剂，待用；
（2）将酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，其中乙酰胆碱酯酶的稀释倍数为2200倍，胆碱氧化酶的稀释倍数为400倍，过氧化物酶的稀释倍数为500倍；
（3）取少量待测样品，洗净，加水搅拌8min后静置2min，得待检样品溶液；
（4）分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加250μL纯净水，摇匀后，用塑料滴管向T酶瓶中滴加300μL待检样品溶液，向C酶瓶中滴加250μL纯净水或pH为7.6、浓度为0.15mol/L的磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于预加热至42℃的第一显色剂的溶液上；
（5）至溴挥发完后，在步骤（4）中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
（6）若步骤（5）中所述的点样处显蓝色或黄色，则说明待测样品中含有毒死蜱；反之，则说明待测样品中不含有毒死蜱。
实施例3
本发明实施例中，一种食品中毒死蜱的检测试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20ml加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶；C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂；第一显色剂为12ml含有0.58mmol/L的溴的磷酸盐缓冲溶液；第二显色剂为6.6g/L四甲基联苯二胺的乙醇溶液。
利用所述的食品中毒死蜱的检测试剂盒进行检测的方法，具体步骤如下：
（1）将1.62g蔗糖、2.4g牛血清白蛋白、1.35g甘氨酸、22ml甘油加入76ml浓度为25mmol/L的氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存得酶冷冻保护剂，待用；
（2）将酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，其中乙酰胆碱酯酶的稀释倍数为2450倍，胆碱氧化酶的稀释倍数为360倍，过氧化物酶的稀释倍数为540倍；
（3）取少量待测样品，洗净，加水搅拌7min后静置2min，得待检样品溶液；
（4）分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加280μL纯净水，摇匀后，用塑料滴管向T酶瓶中滴加280μL待检样品溶液，向C酶瓶中滴加280μL纯净水或pH为7.3、浓度为0.16mol/L的磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于预加热至40℃的第一显色剂的溶液上；
（5）至溴挥发完后，在步骤（4）中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
（6）若步骤（5）中所述的点样处显蓝色或黄色，则说明待测样品中含有毒死蜱；反之，则说明待测样品中不含有毒死蜱。
本发明成本低、制作简单，检测灵敏度高，且检测线性范围显著增宽，使用方便，操作简单快捷，在测试中不需要复杂的配制试剂过程，非专业人员按照说明书便可轻易完成检测。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。