本发明涉及利用化学指示剂对非生物材料的检测，特别是涉及中成药及保健品中非法添加瑞格列奈的检测方法。
背景技术：
现代社会，人们生活节奏快，工作压力大，如今具有调节机体功能的保健食品成为不少人的需求。保健食品是食品的一个种类，具有一般食品的共性，能调节人体的机能，适于特定人群食用。保健(功能)食品在欧美各国被称为“健康食品”，在日本被称为“功能食品”。保健食品既可以是普通食品的形态，也可以为了方便食用做成口服液、片剂或胶囊等，但保健食品不是药物，不具有治疗效果。市售的保健食品以“纯天然，效果佳，无不良反应”的宣传使得消费者颇为青睐。然而，某些无良企业竟在保健食品中添加处方西药成分以增加功效，牟取经济利益。
中国消费者协会调查显示，有相当比例的保健食品中存在非法添加现象。具有辅助降血糖、缓解体力疲劳、改善睡眠、减肥降血脂等功能的产品，是非法添加的重灾区。降糖类保健品中非法添加的有双胍类、瑞格列奈、噻唑烷酮类及格列奈类。其中瑞格列奈即属于格列奈类中的一种药物成分。消费者在不知情的情况下，食用这样的保健品，易造成处方药过量服用，非但不能保健身体，反而会危害健康。另外保健食品中药成分与非法添加的西药共同服用，也可能会引起不良反应。
对于中成药和保健食品中降糖药物的非法添加，现阶段检测方法主要有以下两类：
一、仪器检测类
红外光谱法、拉曼光谱法、高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱联用法可用于检验中成药和保健食品中是否非法添加瑞格列奈降糖药。它们都具有快速、直接地检测药物的优点，同时也存在需要配备不方便携带的昂贵仪器、对检测环境有一定要求的局限性。
二、非仪器检测
薄层色谱法、显色反应、胶体金法可用于检验中成药和保健食品中是否非法添加瑞格列奈药物成分。其中薄层色谱法的优点是不需要使用大型、昂贵分析仪器，易于操作、结果直观明了，其缺点是对点板技术有一定要求、边缘效应、干扰因素多。显色反应(中国药典2010年版二部)分析成本低，专属性强，灵敏度高，其缺点是显色反应中使用的醋酸酐气味较大，对人体和环境不好；且其为易制毒试剂，使用限制较大，不适宜快检需求，且操作步骤中需要沸水浴加热，并配备加热工具，不适合现场快速检测；胶体金法(专利申请号:201510430055.0)该法灵敏度高，专属性强，操作步骤简单，试验结果明显，现象易观测，然而胶体金法中由于实验需要使用专属胶体金卡，制作过程复杂，技术及环境要求较高。另对于平时快检，成本较高。
技术实现要素：
基于此，有必要针对现有技术的问题，提供一种中成药及保健品中非法添加瑞格列奈的检测方法。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种中成药及保健品中非法添加瑞格列奈的检测方法，所述的检测方法具体步骤如下：
(1)取1次口服量的样品，取出内容物，研磨，加入到5-8ml的水中，振荡溶解，静置，得样品溶液，所述的1次口服量的样品为胶囊1-3粒、片剂1片以及散剂1包的任意一种；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中缓慢加入酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化，滴入氢氧化钠溶液后，溶液变为红色，振荡摇匀后，观察浅红色未消失时，则终止检测；
当红色消失时，进行以下步骤：
(3)取步骤(2)所述的混合溶液，静置1-5min，取混合溶液的2±0.1ml上清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入的kmno4溶液，振荡摇匀，观察其颜色是变为黄色或者是紫色；
其中，步骤(2)所述氢氧化钠溶液中含有氢氧化钠为0.0003-0.0006mmol，所述酚酞-乙醇溶液中含有的酚酞为0.15-0.75mg，步骤(4)所述kmno4溶液中含有kmno4为0.005-0.0125mmol。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述观察的溶液颜色为黄色时，则样品中有瑞格列奈，步骤(4)所述观察的溶液为紫色时，样品中没有瑞格列奈。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述水的用量优选为5-8ml，优选为6ml。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述酚酞乙醇的浓度为5g/l，用量为0.03-0.15ml，优选为所述酚酞乙醇溶液的浓度为5g/l，用量为0.03ml。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.01mol/l，用量为0.03-0.06ml，优选为所述氢氧化钠溶液的浓度为0.01mol/l，用量为0.03ml。
在其中一些实施例中，步骤(4)所述kmno4溶液的浓度为0.02-0.05mol/l，用量为0.25ml，优选为所述高锰酸钾的浓度为0.040mol/l，用量为0.25ml。
相对于现有技术，本发明具有如下优点及效果：
1、待测样品仅需加入低浓度的氢氧化钠溶液、酚酞-乙醇溶液以及kmno4溶液，根据显色反应，就可以判断样品中是否含有瑞格列奈药物，所用试剂均为普通化学试剂，鉴别方法操作简单且安全，分析成本低。
2、用蒸馏水提取待测样品，以kmno4溶液为显色反应剂，反应灵敏，专属性强，现象明显，不需要配备仪器，适用于现场快速检测。
3、本发明的的中成药及保健品中非法添加瑞格列奈的快速检测鉴别方法对瑞格列奈样品检出限为0.125mg/次。
附图说明
图1为高锰酸钾作为瑞格列奈显色反应剂时发生的化学反应。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明不仅限于以下实施例。
实施例1(对比例1)
(1)取待测样品胶囊剂2粒，取其内容物，研磨，加入到盛有5ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.03ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色后消失；
(3)取步骤(2)所述混合溶液，静置1-5min，取2ml混合溶液的上层清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入0.25ml0.1mol/lkmno4溶液，振荡摇匀，溶液变为紫色。
实施例2
(1)取待测样品胶囊剂3粒，取其内容物，研磨，加入到盛有6ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.05ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色后消失；
(3)取步骤(2)所述混合溶液，静置1-5min，取混合溶液的2ml上层清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入0.25ml0.05mol/lkmno4溶液，振荡摇匀，溶液逐渐由紫色变为黄色。
实施例3
(1)取待测样品片剂2片，研磨，加入到盛有6ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.03ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色未消失。
实施例4(对比例2)
(1)取待测样品片剂2片，研磨，加入到盛有5ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.1ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色未消失。
实施例5(对比例3)
(1)取待测样品颗粒剂1包，取其内容物，研磨，加入到盛有8ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.06ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色后消失；
(3)取步骤(2)所述混合溶液，静置1-5min，取混合溶液2ml的上层清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入0.25ml0.001mol/lkmno4溶液，振荡摇匀，滴加后较难观察溶液褪色，紫色较浅。
实施例6
(1)取待测样品颗粒剂1包，取其内容物，研磨，加入到盛有5ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.05ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色后消失；
(3)取步骤(2)所述混合溶液，静置1-5min，取2ml混合溶液的上层清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入0.25ml0.02mol/lkmno4溶液，振荡摇匀，滴加后观察溶液褪色明显，判断含有该药物成分。
实施例7
(1)取待测样品1片，研磨至粉末，加入到盛有8ml蒸馏水的具塞试管(10ml)中，振荡溶解，静置2min，得样品溶液；
(2)向步骤(1)所述的样品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振荡摇匀，再缓慢地加入0.06ml0.01mol/l氢氧化钠溶液，振荡摇匀，得混合溶液，观察混合溶液颜色变化。滴入氢氧化钠溶液后，混合溶液液面显红色，振荡摇匀后，红色后消失；
(3)取步骤(2)所述混合溶液，静置1-5min，取2ml混合溶液的上层清液；
(4)向步骤(3)所述的上清液中加入0.25ml0.04mol/lkmno4溶液，振荡摇匀，滴加后观察溶液褪色明显，判断含有该药物成分。
表1为实施例1-7检测中成药及保健品中非法添加瑞格列奈的结果与lc-ms检验结果的比较。
表1
表1中“-”代表未添加。
实验结果：上述对比试验表明，实施例1和实施例4的鉴别结果与lc-ms检验结果不符，实施例5无法判断，由此可知，蒸馏水提取液量大于或小于5-8ml，0.25mlkmno4溶液浓度大于或小于0.02-0.05mol/l，0.01mol/l氢氧化钠溶液添加量大于0.06ml都会出现干扰情况，给检测带来误差，导致结果不易判定或出现假阴性。综上所述，本发明采用的检测方法采用两步即可根据显色反应判断样品是否含有瑞格列奈药物，所用的提取液、反应试液均为普通的化学试剂，非常安全，操作简便，分析成本低。而且反应灵敏，专属性强，现象明显，不需要配备仪器，适用于现场快速检测。以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。