01 :血浆/血清样本：用EDTA抗凝/无抗凝采血管抽取2-3mL静脉血，室温静置 5分钟后，4000rmp/min，离心5分钟，获取上清备用，标本离心后，放置-80°C冰箱长期保存 备用，所有的试剂和样本在使用之前放置在室温（18°C _25°C )，所有的样本至少复空；
[0032] S102:用 pH9. 6 的 50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作为稀释液，对 血浆/血清样本1 : 2稀释，同样适用其他类型的体液标本或者细胞培养上清；
[0033] S103:用 pH9. 6 的 50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作为稀释液，溶 解IL-11蛋白质标准品粉末，充分震荡混勾后，制备成4ng/ml的标准品，取100ul的4ng/ ml的标准品，加入400ul的稀释液，配制成800pg/ml的标准品，在6管分别加入400ul的稀 释液，800pg/ml的标准品中移出200ul，进行倍比稀释，分别得到266. 7pg/ml、88. 89pg/ml、 29. 6pg/ml、9. 88pg/ml、3. 29pg/ml、0pg/ml ;
[0034]S104:加入lOOul的标准品于IL-11抗体包被的96孔板中：，血浆/血清/细胞 上清/其他体液样本1 : 2稀释，用专用薄膜覆盖孔后，室温孵育2. 5小时或者4°C过夜，并 轻微震荡；
[0035] S105:用 pH9. 6 的 50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作为稀释液，将 山羊抗人IL-11抗体：稀释为2 y g/ml，在聚苯乙烯的96孔酶标板的微孔中加入50 y 1包 被液，用保鲜膜封好，在4°C冰箱中放置过夜（> 16h)，次日，用350 y 1 150mM的PBST缓冲 液（137mM NaCl，2mM KH2P04，10mM Na2HP04,加入 0.05% 的 Tween-20,调节至 pH7.4)浸泡式 洗板，3minX3次；
[0036]S106:每孔加入300 y 1的2% BSA:，室温封闭4h，用350 y 1 PBST缓冲液浸泡式 洗板，lminX3次；
[0037] S107:丢弃液体，用排枪或者自动加样设备每孔加入300ul PBST缓冲液，每次均 需从孔中彻底清除液体，在最后一次洗涤时，完全去孔中残存的液体，并倒置96孔板，在干 净的吸水纸上排干，共洗涤4次；
[0038] S108:在每孔中加入100ul生物素标记的IL-11抗体，室温孵育1小时，并轻微震 动，丢弃液体，用排枪或者自动加样设备每孔加入300ul PBST缓冲液，每次均需从孔中彻底 清除液体，在最后一次洗涤时，完全去孔中残存的液体，并倒置96孔板，在干净的吸水纸上 排干。共洗涤4次；
[0039] S109:加入100ul链亲和素：溶液于每孔中，室温孵育45分钟并轻微震荡，丢弃液 体，用排枪或者自动加样设备每孔加入300ul PBST缓冲液，每次均需从孔中彻底清除液体， 在最后一次洗涤时，完全去孔中残存的液体，并倒置96孔板，在干净的吸水纸上排干，共洗 涤4次；
[0040] S110 :加入100ul的TMB底物试剂于每孔中，室温避光震荡孵育30分钟，加入50ul 2M H2S04溶液终止反应，立即在酶标仪Model 680酶标仪中读取450nm吸光值；
[0041] S111 :结果的判读：首先确定3个阴性对照孔的读数，取平均值作为本底读数。对 于每一例血浆/血清/细胞培养液/其他体液样品或IL-11标准品，利用梯度稀释的IL-11 标准品绘制标准曲线，从而计算出每一例有效病例的血浆/血清/细胞培养液/其他体液 的IL-11浓度。
[0042] 在本发明的实施例中，IL-11属于IL-6因子家族，影响炎症因子趋化作用、癌细胞 的运动和侵袭等作用。癌基因Ras调控IL-11基因，IL-11和gpl30的受体的二聚体作用 发挥信号传递作用。血浆中的IL-11是Gpl30野生型的胃癌患者的侵袭和预后的标记物。 IL11在胰腺癌的发生、侵袭和预后等的作用尚不清楚。IL可调控胰腺星状细胞，促进胰腺 癌的恶性微环境的产生。IL11独立预测肝癌的骨转移。IL11信号的直肠癌的潜在治疗靶 点。IL-11在不同类型的癌症其预后可能不同。IL-11具有抗炎功能。我们前期工作发现 胰腺肉瘤样癌患者血浆中IL-11升高具有良好的预后。在血液来源的恶性肿瘤患者经过重 组的IL-11治疗后可明显减轻菌血症、不明原因的感染，促进患者较好的预后。体内体外证 实IL-11能够减轻IL-1介导的炎症及破坏作用，并且炎症在胰腺癌的发生发展等方面扮演 重要作用。因此，IL-11可能在胰腺癌的发生、发展及预后等方面扮演重要作用。
[0043] 检测的标准和方法：
[0044]入组标准：1)辅助诊断胰腺癌：对临床上首次入院的患者，临床症状上为胰腺癌 疾病待排除的患者。影像诊断如CT与MRI等方法尚难以明确为胰腺癌的患者，血清中 CA19-9未检测明显升高的患者。可对此类患者用EDTA抗凝/无抗凝采血管抽取2-3mL静 脉血，在24h内完成血浆/血清的IL-11检测。
[0045] 2)预后的评估作用：对于临床病理学明确诊断的胰腺癌患者，可通过检测血浆 中IL-11的表达水平评价胰腺癌患者的预后情况。可对此类患者用EDTA抗凝采血管抽取 2-3mL静脉血，在24h内完成IL-11血浆检测。患者可以在未经过任何治疗措施前用EDTA 抗凝采血管抽取2-3mL静脉血，在24h内完成血浆/血清的IL-11检测。也可以在胰腺癌 患者在手术后、化疗后、放疗后3-7天检测血浆/血清中IL-11的表达水平，或者在手术后、 同步放化疗后检测血浆/血清中IL-11的表达水平。最后，根据血浆/血清的IL-11的表 达水平评价胰腺癌患者的预后情况。
[0046] 方法的具体步骤为：
[0047] 3、试剂盒的选择，使用ELISA检测试剂盒（RayBiotech，GA，USA)公司。使用双抗 夹心ELISA方法检测。
[0048] 4、具体步骤和方法：
[0049] 1)样本：样本要求，本发明主要采用血浆/血清样本，但同样适用于可疑胰腺癌患 者或者明确诊断的胰腺癌患者其他体液标本，如胸水、腹水、穿刺的其他用于诊断的体液标 本。血浆/血清样本：用EDTA抗凝/无抗凝采血管抽取2-3mL静脉血，室温静置5分钟后， 4000rmp/min，离心5分钟，获取上清备用。样本通常24小时内完成检测，对于可能复查的 标本。标本离心后，放置-80°C冰箱长期保存备用。所有的试剂和样本在使用之前放置在室 温（18°C -25°C )。所有的样本至少复空。
[0050] 2)样本稀释：用pH9. 6的50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作为稀 释液，对血浆/血清样本1 : 2稀释，同样适用其他类型的体液标本或者细胞培养上清。
[0051] 3)制备标本品标准品购买自（RayBiotech，GA，USA)公司。用pH9. 6的 50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHC03)作为稀释液，溶解IL-11蛋白质标准品粉 末，充分震荡混勾后。制备成4ng/ml的标准品。取100ul的4ng/ml的标准品，加入400ul 的稀释液，配制成800pg/ml的标准品，在6管分别加入400ul的稀释液，800pg/ml的标准品 中移出 200ul，进行倍比稀释，分别得到 266. 7pg/ml、88. 89pg/ml、29. 6pg/ml、9. 88pg/ml、 3. 29pg/ml、0pg/ml。
[0052] 4)加入lOOul的标准品于IL-11抗体包被的96孔板中（RayBiotech，GA，USA)，血 浆/血清/细胞上清/其他体液样本1 : 2稀释，用专用薄膜覆盖孔后，室温孵育2. 5小时 或者4°C过夜，并轻微震荡。
[0053] 5)包被：用pH9. 6的50mM碳酸盐缓冲液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作为稀释液， 将山羊抗人IL-11抗体（Santa Cruz Biotechnology公司）稀释为2 μg/ml。在聚苯乙稀的 96孔酶标板的微孔中加入50 y 1包被液，用保鲜膜封好，在4°C冰箱中放置过夜（> 16h)。 次日，用 350 y 1 150mM 的 PBST 缓冲液（137mM NaCl，2mM KH2P04,10mM Na2HP04,加入 0? 05% 的Tween-20,调节至pH7. 4)浸泡式洗板，3min X 3次。
[0054] 6)封闭：每孔加入 300y1 的 2% BSA(Sigma-Aldrich 公司，Cat. No. A7906)，室温 封闭4h。用350 y 1PBST缓冲液浸泡式洗板，IminX 3次。
[0055] 7)丢弃液体，用排枪或者自动加样设备每孔加入300ul PBST缓冲液，每次均需从 孔中彻底清除液体。在最后一次洗涤时，完全去孔中残存的液体，并倒置96孔板，在干净的 吸水纸上排干。共洗涤4次。
[0056] 8)在每孔中加入100ul生物素标记的IL-11抗体（RayBiotech，GA，USA)，室温孵 育1小时，并轻微震动。丢弃液体，用排枪或者自动加样设备每孔加入300ul PBST缓冲液， 每次均需从孔中彻底清除液体。在最后一次洗