中，于4°C浸泡4个小时，然后置于烘箱中，37°C烘干2小时。
[0013]本发明还提供了一种如上所述试剂盒实现的ΝΤ-ρι.οΒΝΡ检测方法，其特征在于包括以下步骤:
步骤1:将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；
步骤2:精确吸取25 μ I血清样本，样本为全血时吸取40 μ I样本，加入到样本孔中，再立即在下部的缓冲液孔中加入ΙΟΟμΙ样本稀释液，样本稀释液采用生理盐水或PBS，15-30分钟内用荧光免疫层析分析仪定量判定结果；
步骤3:设置好荧光免疫层析分析仪的相关参数后，将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果，所述荧光免疫层析分析仪是一种光学检测系统，对NT-proBNP 的检测范围为 0_20ng/ml。
[0014]本发明提供一种利用稀土荧光免疫层析技术制备的ΝΤ-ρι.οΒΝΡ快速定量免疫层析检测试剂盒，同时适合血清和全血样本，并适合临床上单人份检测，相对于NT-proBNP定性胶体金试剂，能定量检测样本中的NT-proBNP含量，具有更明确的临床指导意义，具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
[0015]【附图说明】:
附图1是本发明中试纸卡的结构示意图。
[0016]附图2是本发明中实施例2的准确度分析结果示意图。
[0017]附表3是本发明中实施例3的精密度分析结果数据。
[0018]附图标记:PVC板1、样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5。
[0019]【具体实施方式】:
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明:
如附图1所示，本发明首先提出了一种ΝΤ-ρι.οΒΝΡ检测试剂盒，盒内设有试纸卡，所述试纸卡由下至上依次设有=PVC板1、样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5，其中结合垫3上吸附有稀土荧光微球标记的NT-proBNP单克隆抗体，所述稀土荧光微球的直径为60-120nm,稀土突光微球掺杂稀土镧系元素,在基态下稳定,在340_380nm的激发光源作用下发射出波长范围在540-600nm的荧光；所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体，来源于针对2-6个不同的NT-proBNP抗原表位的单克隆抗体细胞株；
所述结合垫3的稀土荧光微球的直径优选是90-1 1nm ;所述稀土荧光微球优选掺杂有稀土镧系元素，为铕(Eu)、钐(Sm)、铒(Er)、钕(Nd)等镧系元素的任意一种或几种的混合物；所述稀土突光微球优选掺杂稀土络合物；结合垫上稀土突光微球标记的抗体优选来源于针对3个不同抗原表位的单克隆细胞细胞株。
[0020]实施例1:
NT-proBNP检测试剂盒中试纸卡的各组成部分可以通过以下措施制得:
1、样品垫2的制备:
将玻璃纤维膜浸泡于含有2.0%Triton X-100, 2% BSA, 0.1M Tris缓冲液，ρΗ7.5的处理液中，于4°C浸泡4个小时，然后置于烘箱中，37°C烘干2小时。
[0021]2、吸附荧光微球标记抗体的结合垫3的制备:
将玻璃纤维膜浸泡于200mM Tris-HCL处理液中(含1.5% Triton X-100,1.5%BSA,pH7.5)，4°C浸泡4小时，然后取出37 °C烘箱烘干4小时，备用。将玻璃纤维膜在B1-DotXYZ3050三维喷点平台上，用B1-Jet Quanti300非接触式微定量喷头将稀土荧光微球标记的NT-proBNP单克隆抗体喷到玻璃纤维膜，37°C烘干2小时，备用；
稀土荧光纳米微球的醛基化:取3mg稀土荧光纳米微球，用50mM，pH9.5的碳酸盐缓冲液，采用离心法洗漆3遍,离心速度为12000rpm,时间为5分钟,最后重悬于100 μ I的上述碳酸盐缓冲液中，加入300 μ I醛基化的葡聚糖，混匀，室温下暗反应4小时，采用同样的离心法洗涤和重悬到100μ I的上述碳酸盐缓冲液中，置于4°C备用；
稀土荧光纳米微球标记NT-proBNP单克隆抗体的制备:将2mg用于检测的NT-proBNP单克隆抗体用上述碳酸盐缓冲液于4°C透析过夜，然后与上述醛基化的稀土荧光微球混合，4°C反应过夜；然后，加入硼氢化钠至终浓度10mM，4°C反应4小时；再加入等体积的封闭液(10mM Tris-HCL，pH7.5，含 2%BSA，5% 蔗糖)，4°C封闭过夜；然后用 10mM Tris-HCL, pH7.5的缓冲液采用离心法洗涤3遍，重悬于100 μ I的10mM Tris-HCL缓冲液中(含1.2%NaCL,0.5%BSA,0.2%Tween 20)，4°C避光保存备用；
3、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜4的制备:
根据前述配对实验和亲和力测定实验，选择用于捕获的抗体对应的单克隆抗体细胞株，按照标准的腹水生产工艺制备并纯化用于捕获的NT-proBNP单克隆抗体，保存于_20°C备用;
分别用包被稀释液将ΝΤ-ρι.οΒΝΡ单克隆抗体和羊抗小鼠IgG抗体调整浓度到l_5mg/ml，膜液量为1-2 μ 1/cm，将它们分别作为检测线和质控线平行喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，检测线和质控线间隔为3-7_，然后置于烘箱中，37°C烘干2小时；
试纸卡的组装:在PVC板I上依次粘贴经过处理的样品垫2、吸附有稀土荧光标记的抗体的结合垫3、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜4和吸水垫5，组装后得到试纸大板，按照要求切割成4_宽,将试纸装入塑料卡内形成试纸卡。
[0022]上述各步骤中选用的设备及原料优选以下原料:
NT-proBNP特异性配对抗体；NT-proBNP质控品:英国朗道实验诊断有限公司；稀土荧光微球:上海甄准生物科技有限公司；硝酸纤维素(NC)膜=Millipore公司产品；牛血清白蛋白(BSA)，聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白:Sigma产品，其它常用试剂均为分析纯试剂。
[0023]实施例2:准确度试验
选用上述试纸卡以及荧光免疫层析分析仪(型号:NE0-007)， 荧光免疫分析仪参数的设定:在荧光免疫分析仪上设定好试纸卡工艺参数后，取上述组装好的试纸卡，分别用0.2,0.5、l、2、5、20ng/ml的NT-proBNP校准品，用试纸卡进行测定，得到各校准品的荧光强度值，将结果输入到分析仪的参数中，完成分析仪的参数的设定。
[0024]主要检测材料:临床样本由相关医院获得,共200份Roche电化学发光免疫法定值样本，其中血清样本100份，全血样本100份，NT-proBNP含量分布区间为0_20ng/mL之间。
[0025]检测方法:
步骤1:将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；
步骤2:精确吸取25 μ I血清样本，样本为全血时吸取50 μ I样本，加入到样本孔中，再立即在下部的缓冲液孔中加入100 μ L样本稀释液(生理盐水或PBS)，15-30分钟内用荧光免疫层析分析仪定量判定结果；
步骤3:设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果。
[0026]试验结果分析:
临床样本检测试剂制备完成后，按检测方法对所有临床样本进行检测，并分析检测结果O
[0027]试验结果:
如附图2所示，以实验系统的检测值为Y轴，以对照系统的测验值为X轴，绘制散点图，并进行相关性分析。临床样本检测对200份临床定值样本检测，样本平均偏差值均小于10%，最大偏差小于25%，