高效液相色谱测定头孢呋辛酯片中杂质含量的方法

高效液相色谱测定头孢呋辛酯片中杂质含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及高效液相色谱技术领域，具体设及一种高效液相色谱测定头抱快辛醋 片中杂质含量的方法。
【背景技术】
[0002] 头抱快辛醋片生产，储藏过程中由于会受到不同条件的影响，可能降解产生不同 的杂质，需对其进行限度控制。因此我们建立了头抱快辛醋片中杂质含量的HPLC-UV测定 法，更好的对头抱快辛醋片中可能存在的杂质进行检测，W更好的控制头抱快辛醋片的质 量。

【发明内容】

[0003] 本发明的目的是建立一种测定头抱快辛醋片中杂质含量的方法，更好的对头抱快 辛醋片中可能存在的杂质进行检测，W更好的控制头抱快辛醋片的质量。
[0004] 本发明的技术方案是：高效液相色谱测定头抱快辛醋片中杂质含量的方法，它包 括如下步骤： 杂质储备液的制备；取头抱快辛醋、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E用甲醇分别 溶解并稀释成每1血分别约含头抱快辛醋0. 250mg、杂质A0. 50mg、杂质B0. 37mg、杂质C 0. 12mg、杂质D0. 12mg、杂质E0. 12mg的溶液。
[0005] 杂质测试溶液的制备：分别取上述各杂质储备液1ml至100ml量瓶中用流动相定 容至刻度摇匀，即得。
[0006] 供试品溶液的制备；精密称取头抱快辛醋片适量，用甲醇溶解后加流动相定容至 刻度，制成每ImL约含头抱快辛醋0. 250mg的溶液。
[0007] 对照品溶液的制备；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至 刻度，摇匀。
[000引空白溶液的制备；取辅料适量，用甲醇溶解后加流动相定容至刻度。
[0009] 所述高效液相色谱仪的检测器为紫外吸收检测器，检测波长为278nm。
[0010] 所述流动相为〇.2mol/L磯酸二氨锭溶液：甲醇=62 : 38。
[0011] 本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱测头抱快辛醋片中杂质含量，分 离效率高、分析速度快、检测灵敏度高。通过检测头抱快辛醋片中杂质含量，控制每克头抱 快辛醋中杂质A不得大于2. 0%、杂质B不得大于1. 5%、其他单个杂质不得大于1. 0%，有利 于更好控制头抱快辛醋片的质量。
[001引【附图说明】：图1为杂质测试溶液色谱图； 图2为空白辅料测试色谱图； 图3为头抱快辛醋的线性回归图。
[0013] W下通过实施例形式再对本发明的内容作进一步详细说明，但不应就此理解为本 发明上述主题范围内仅限于W下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普 通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。
[0014] 实施例1 ;色谱柱的确定。
[0015] 仪器；高效液相色谱仪Waters 62695-2998,二极管阵列检测器； 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料（4. 6X150mm5|^0， 流速；1. 0ml/min; 进样量；20rt; 柱温；30C; 波长；278nm; 流动相；〇. 2mol/L磯酸二氨锭溶液：甲醇=62:38。
[0016] 杂质测试溶液的制备；取头抱快辛醋、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E用 甲醇分别溶解并稀释成每ImL分别约含头抱快辛醋0. 00250mg、杂质A0. 0050mg、杂质B 0. 0037mg、杂质C0. 0012mg、杂质D0. 0012mg、杂质E0. 0012mg的溶液。
[0017] 取杂质测试溶液进样记录色谱图。
[0018] 杂质A在22. 177分钟出峰、杂质B在33. 070、40. 637分钟出峰、杂质C在3. 686 分钟出峰、杂质D在8. 128分钟出峰、杂质E在9. 658分钟出峰、主峰在16. 185、18. 614分 钟出峰，见图1。
[0019] 结论；在该方法条件下杂质A、B、C、D、E和主峰能完全分离。
[0020] 实施例2 ;检测波长的确定。
[0021] 仪器；高效液相色谱仪Waters 62695-2998,二极管阵列检测器； 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料（4. 6X150mm5|^0 ; 流速：1.Oml/min; 进样量；20rt; 柱温；30C; 波长；190~400nm; 流动相；〇. 2mol/L磯酸二氨锭溶液：甲醇=62:38。
[0022] 杂质测试溶液的制备；取头抱快辛醋、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E用 甲醇分别溶解并稀释成每ImL分别约含头抱快辛醋0. 00250mg、杂质A0. 0050mg、杂质B 0. 0037mg、杂质C0. 0012mg、杂质D0. 0012mg、杂质E0. 0012mg的溶液。
[0023] 取杂质测试溶液进样记录色谱图。
[0024] 杂质A的最大吸收为283. 5皿、杂质B的最大吸收为277. 5皿和275. 1皿、杂质C 的最大吸收为264. 5nm、杂质D的最大吸收为272. 8nm、杂质E的最大吸收为277. 5nm、主峰 的最大吸收为279. 9nm。
[0025] 结论；在该方法条件下，由主峰于279. 9皿处出峰，故采用在278~280皿附近的波 长检测。
[0026] 实施例3 ;空白辅料干扰试验。
[0027] 取空白辅料溶液进样记录色谱图，见图2。
[002引色谱中无影响测定的峰出现。
[0029] 结论；表明辅料对杂质检查无干扰。
[0030] 实施例4 ;系统适用性实验。
[003U 仪器；LC-lOATvp/SPD-lOAvp N2000工作站； 色谱柱；4. 6 X 150mm 十八烷基键合硅胶色谱柱； 流速：1.Oml/min; 进样量；20rt; 柱温；35°C; 波长；278nm。
[0032] 取同一份样品溶液，连续进样5次，记录色谱图求得相对标准偏差应不大于 2.0%，结果见表1。
[003引结论；试验表明本色谱系统精密度良好。
[0034] 实施例5;线性和范围。
[0035] 取浓度为分别为 60. 795嗦/ml、121. 590嗦/ml、182. 385嗦/ml、243. 180嗦/ml、 303. 975嗦/ml、340. 452嗦/ml的头抱快辛醋溶液，各20W，分别注入液相色谱仪，记录色谱 图，W峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，结果见表2、图3。
[0036] 头抱快辛醋的回归方程得回归方程为C=2E-05S+10. 506 r=0. 9994。
[0037] 结果表明，头抱快辛醋浓度分别在60. 795~34. 452嗦/ml范围内进样浓度与峰面 积值有良好的线性关系。
[00測 实施例6 ;检测限。
[0039] 取一定浓度的头抱快辛醋溶液，逐级稀释得系列浓度的溶液，分别取系列浓度 溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，观察信噪比，当信噪比为3 ;1时，检测浓度为 62.5ng/ml。
[0040] 结论；结果表明，最小检出量为62. 5ng/ml。
[0041] 实施例7;重复性试验。
[0042] 取同一批号的样品6份，分别精密称定，测定杂质，结果见表3。
[00创实施例8 ;回收率试验。
[0044] 准确度是通过在供试品中加入指标的80%、100%、120%S个不同浓度各杂质测得 的回收率所得。已知杂质的准确度是加入已知量的杂质，再测定加样样品中已知杂质的测 定结果和理论值之间的比值（回收率)，W百分率％表示，要求回收率在70. 〇%-130. 0%之间。
[0045] 回收率计算公式
试验表明该法的准确度良好，结果见表4。
[0046] 结论；由表可见回收率较好。
[0047] 实施例9 ;溶液稳定性。
[0048] 取同一份供试品溶液，在0、2、4、6、8、12、18、24小时各取20W，注入液相色谱仪， 记录色谱图，结果见表5。
[0049] 结论；由表可见，随着溶液放置的时间延长其峰面积逐渐减少，有关物质则逐渐增 加，表明溶液在24小时内杂质面积有较明显变化，证明样品不稳定，故测定时应加W注意， 供试品溶液应即配即测。
[0050] 实施例10 ;耐用性实验。
[0051] 为了研究液相色谱条件的微小变化对试验结果的影响程度，进行耐用性实验。主 要影响因素有缓冲盐浓度、检测波长、流动相比例、柱温、流速、色谱柱。取系统测试液分别 进样，考察分离度，结果见表6。
[0052] 实验结果表明，该方法测定可靠，耐用性较好。
【主权项】
1. 高效液相色谱测定头孢呋辛酯片中有关物质含量的方法，其特征在于，它包括如下 步骤： (1) 杂质储备液的制备：取头孢呋辛酯、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E用甲醇分 别溶解并稀释成每ImL分别约含头孢呋辛醋0. 250mg、杂质A 0. 50mg、杂质B 0. 37mg、杂质 C 0? 12mg、杂质 D 0? 12mg、杂质 E 0? 12mg 的溶液； (2) 杂质测试溶液的制备：分别取上述各杂质储备液Iml至100mL量瓶中用流动相定 容至刻度摇匀，即得； (3) 供试品溶液的制备：精密称取头孢呋辛酯片细粉适量，用甲醇溶解后加流动相定 容至刻度，制成每ImL约含头孢呋辛酯0. 250mg的溶液； (4) 对照品溶液的制备：精密量取供试品溶液lml，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻 度，摇匀； (5) 空白溶液的制备：甲醇； (6) 测定：高效液相色谱仪以固定相为十八烷基键合硅胶色谱柱，流动相为0. 1~ 0. 2mol/L磷酸二氢铵溶液：甲醇=60:40~64:36 ; 柱温为25°C~35°C，检测波长为278~280nm分别吸取对照品溶液与供试品溶液各 15~25耵，注入高效液相色谱仪，读取数据； (7) 计算各杂质溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于 0.99,对照品溶液峰形对称，理论塔板数2000以上，杂质测试溶液色谱图中各杂质分离度 应不小于1.5,空白溶液色谱图，无与杂质测试溶液色谱图相同的峰出现，即空白溶液无干 扰； (8) 每克头孢呋辛酯片中杂质A不得大于2. 0%、杂质B不得大于1. 5%、其他单个杂质 不得大于1. 0%。2. 权利要求1所述的方法，高效液相色谱仪以固定相为十八烷基键合硅胶色谱柱，流 动相为〇. 2mol/L磷酸二氢铵溶液：甲醇=62:38,柱温为30°C，检测波长为278nm分别吸取 对照品溶液与供试品溶液各20沿，注入高效液相色谱仪，读取数据。3. 权利要求1所述的方法，高效液相色谱仪以固定相为十八烷基键合硅胶色谱柱，流 动相为0.1111〇1/1磷酸二氢按溶液：甲醇=60:40，柱温为25 <€，检测波长为278111]1分别吸取 对照品溶液与供试品溶液各15沿，注入高效液相色谱仪，读取数据。4. 权利要求1所述的方法，高效液相色谱仪以固定相为十八烷基键合硅胶色谱柱，流 动相0. 2mol/L磷酸二氢铵溶液：甲醇=64:36,柱温为35°C，检测波长为280nm分别吸取对 照品溶液与供试品溶液各25沿，注入高效液相色谱仪，读取数据。
【专利摘要】本发明公开了一种高效液相色谱测定头孢呋辛酯片中杂质含量的方法，它包括如下步骤：高效液相色谱仪以固定相为十八烷基键合硅胶色谱柱，流动相为0.1～0.2mol/L磷酸二氢铵溶液:甲醇=60:40～64:36。柱温为25℃～35℃，检测波长为278～280nm。分别吸取空白溶液、各杂质溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。计算杂质对照品溶液浓度的值为X与相应峰面积值为Y，进行线性拟合，得出线性回归方程，线性范围为杂质A在2.0136～7.5510μg/ml、杂质B在1.4826～5.5599μg/ml、杂质C在 0.5050～1.8936μg/ml、质D在0.5155～1.9330μg/ml、杂质E在0.4993～1.8723μg/ml范围内与其峰响应值成显著线性关系。本发明测定头孢呋辛酯原料药中杂质A、B、C、D、E，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN104950053
【申请号】CN201510414906
【发明人】王静, 王沛沛, 王玲, 王崇益
【申请人】江苏正大清江制药有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年7月15日