金属铬的极低密度脂蛋白，则不会被抗铬的特异性抗体所捕获，也不会与辣根过氧化物酶、 碱性磷酸酶等酶标记的抗体所捕获，而所用试剂中也不含有金属铬（阴性对照组结果为阴 性），因而当所读取的OD值结果显示为阳性时，即可证明检测出极低密度脂蛋白上螯合的 金属络。
[0104] 方法二：酶联免疫与原子吸收光谱结合法(ELISA法+AAS法）检测铬-极低密度 脂蛋白螯合物按照如下步骤检测：
[0105] 1)包被：将能够捕获极低密度脂蛋白的物质，如抗极低密度脂蛋白抗体（抗极 低密度脂蛋白抗体）包被于固相载体上，用稀释缓冲液稀释抗极低密度脂蛋白抗体至 500-4000倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0106] 2)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗涤缓冲液进行洗涤，洗涤完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[0107] 3)加待测样本，并且温育：从循环系统中取样，作待测样本；以已知含量的铬-极 低密度脂蛋白螯合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至10-40倍，加入微孔中，37°C作用1-2 小时；
[0108] 4)洗脱：移去待测样本，洗涤，加入洗脱液，在37°C下洗脱1-3小时；
[0109] 5)检测：从ELISA微孔中取样，于原子吸收光谱仪检测螯合于极低密度脂蛋白上 的铬，读出相应数值；
[0110] 该实施例利用ELISA原理对血清中的极低密度脂蛋白进行捕获，并结合原子吸收 光谱（AAS)仪检测螯合于极低密度脂蛋白上的铬；由于溶液中仅含有极低密度脂蛋白，且 所用试剂中不含任何重金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读 取的结果显示为阳性时，即可证明检测出极低密度脂蛋白上螯合的金属铬。
[0111] 方法三：酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法（ELISA法+ICP-MS法）检测 铬-极低密度脂蛋白螯合物按照如下步骤检测：
[0112] 1)包被：将能够捕获极低密度脂蛋白的物质，如抗极低密度脂蛋白抗体包被于固 相载体上，用稀释缓冲液稀释抗极低密度脂蛋白抗体至500-4000倍，加入ELISA板微孔中， 4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0113] 2)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗涤缓冲液进行洗涤，洗涤完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[0114] 3)加待测样本，并且温育：从循环系统取全血，作待测样本；以已知含量的铬-极 低密度脂蛋白螯合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至10-40倍，加入微孔中，37°C作用1-2 小时；
[0115] 4)洗脱：移去待测样本，并用相应洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入洗脱 液，在37°C下洗脱1-3小时；
[0116] 5)酸化：在步骤4)中的溶液中加入酸化剂对溶液进行酸化，封口过夜，彻底酸 化；
[0117] 6)检测：加入过氧化氢，并且加热赶酸，并从ELISA试剂板中洗脱的溶液中取 〇. 5mL液体，于电感耦合等离子体质谱仪下检测螯合于极低密度脂蛋白的铬，读出相应数 值。
[0118] 该方法在利用ELISA原理的基础上，结合感耦合等离子体质谱（ICP-MS)原理， 用电感耦合等离子体质谱仪检测螯合于极低密度脂蛋白上的铬；即先采用ELISA原理将 铬-极低密度脂蛋白螯合物提取出来，再采用感耦合等离子体质谱仪对螯合于极低密度脂 蛋白上的铬进行定量检测；由于溶液中仅含有极低密度脂蛋白，且所用试剂中不含任何重 金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性 时，即可证明检测出极低密度脂蛋白上螯合的金属铬。
[0119] 方法四：提纯铭-极低密度脂蛋白螯合物与酶联免疫结合法（提纯法+ELISA法） 检测铬-极低密度脂蛋白螯合物，按照如下步骤检测：
[0120] 1)从全血中提取非特异性极低密度脂蛋白：采用超速离心法、高压液相层析法、 凝胶过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取极低密度脂蛋白，并将提取出的极低密 度脂蛋白复溶，得极低密度脂蛋白的溶液；
[0121] 2)包被：将抗铬抗体包被于固相载体上，用稀释缓冲液稀释抗铬抗体至 5000-40000倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰 箱；
[0122] 3)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗涤缓冲液进行洗涤，洗涤完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[0123] 4)加待测样本，并且温育：从步骤1)的溶液中取样，作待测样本；以已知含量的 铬-极低密度脂蛋白螯合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至10-40倍，加入微孔中，37°C作 用1-2小时；
[0124] 5)酶结合物温育：移去待测样本，并用洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入 用稀释缓冲液稀释的酶标抗体，37°C作用1-2小时，使其与酶标抗体反应；
[0125] 6)底物温育：移去酶标抗体，并用相应洗涤缓冲液进行洗涤，待洗涤完成后，加入 底物，37°C避光作用30分钟；
[0126] 7)终止反应：终止液至每一微孔；
[0127] 8)取波长450nm，加完终止液后，在酶标仪上分别读取待测样本组和标准品的OD 值，绘制标准曲线，通过与标准品组比较，求得待测样本的含量。
[0128] 本方法中，也可不使用酶标仪，直接通过显色情况进行定性检测。
[0129] 方法五：提纯铭-极低密度脂蛋白螯合物与原子吸收光谱结合法（提纯法+AAS 法）检测血样中铬-极低密度脂蛋白螯合物，按照如下步骤检测：
[0130] 1)从全血中提取非特异性极低密度脂蛋白：采用超速离心法、高压液相层析法、 凝胶过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取极低密度脂蛋白，并将提取出的极低密 度脂蛋白复溶，得极低密度脂蛋白的溶液；
[0131] 2)检测：从步骤1)的溶液中取样，于原子吸收光谱仪检测螯合于极低密度脂蛋白 上的铬，读出相应数值。
[0132] 方法六：提纯铭-极低密度脂蛋白螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法（提纯 法+ICP-MS法）检测铬-极低密度脂蛋白螯合物，按照如下步骤检测：
[0133] 1)从全血中提取非特异性极低密度脂蛋白：采用超速离心法、高压液相层析法、 凝胶过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取极低密度脂蛋白，并将提取出的极低密 度脂蛋白复溶，得极低密度脂蛋白的溶液；
[0134] 2)酸化：从步骤1)的溶液中取样，在溶液中加入硝酸对溶液进行酸化，封口过夜， 彻底酸化；
[0135] 3)检测：加入过氧化氢，并且加热赶酸后取0. 5mL溶液，于电感耦合等离子体质谱 仪下检测螯合于极低密度脂蛋白上的络，读出相应数值。
[0136] 方法四、方法五和方法六均是通过全血提取法分离出极低密度脂蛋白，再采用特 异性检测方法，测定极低密度脂蛋白中铬-极低密度脂蛋白螯合物上铬的含量；即先采用 物理分离手段，如超速离心法、高压液相层析法、凝胶过滤层析法等，将极低密度脂蛋白从 待测血浆样本中分离出来并复溶于生理盐水中，再利用ELISA原理、原子吸收光谱检测或 进行检测电感耦合等离子体质谱法检测铬-极低密度脂蛋白螯合物上的铬含量。
[0137] 方法七：电泳法+ELISA/AAS/ICP-MS法检测铬-极低密度脂蛋白螯合物，具体如 下：
[0138] 1)从全血中提取非特异性极低密度脂蛋白：采用超速离心法、高压液相层析法、 凝胶过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取极低密度脂蛋白，将提取出来的极低密 度脂蛋白复溶于生理盐水中，得极低密度脂蛋白的溶液；
[0139] 2)制备胶床：根据需要选择合适的介质（如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等），按 照相应要求制备好相应胶床；
[0140] 3)加样：从步骤1)的溶液中取8 μ L溶液，以已知含量的铬-极低密度脂蛋白螯 合物作标准品，加入2 μ L上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；
[0141] 4)电泳：连接电泳板，加电泳缓冲液，进行电泳，并根据需求将蛋白按照分子量、 等电点等参数的不同进行分离；
[0142] 5)检测：在胶床上找出含有铬的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带溶解，然 后再分别利用ELISA或ICP-MS或AAS等原理检测铬含量。
[0143] 此外，还可以利用此方法检测铬-极低密度脂蛋白螯合物的等电点、分子量及含 里寺D
[0144] 在方法七中，将极低密度脂蛋白提取出来，再采用凝胶电泳法对所提取的极低密 度脂蛋白进行分离，再找出富含铬的相应条带，再检测相关极低密度脂蛋白的含量；即极低 密度脂蛋白从红细胞中释放后，可以用多种方法提纯出来（例如超速离心法、高压液相层 析法、凝胶过滤层析法、凝胶电泳法，ELISA方法等），将提纯出来的极低密度脂蛋白复溶 于溶液中，取一定量的极低密度脂蛋白，利用电荷移动原理，进行电泳（electrophoresis， EP)，在凝胶板（可根据需要采用不同介质）上可根据分子量、等电点等不同跑出不同的条 带，寻找出富含铬的相应条带，将凝胶中的蛋白质复溶于溶液中，即可以在特定波长下检测 相关极低密度脂蛋白的含量，也可以利用ELISA、AAS、ICP-MS等原理检测出螯合于极低密 度脂蛋白上的铬含量，由于溶液中仅含有极低密度脂蛋白，且所用试剂中不含任何重金属 (阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性时，即 可证明检测出极低密度脂蛋白上螯合的金属铬。
[0145] 实施例1 :合成法合成铭-极低密度脂蛋白鳌合物，即包括以下步骤：
[0146] 本实施例所制备的铬-极低密度脂蛋白鳌合物，通过凝胶电泳进一步分离，并通 过电感耦合等离子体质谱或原子吸收光谱进行检测定性鉴定。
[0147] 本实施例所使用的试剂如下：
[0148] 1)硼酸盐缓冲液，其摩尔浓度为0. 01M，其制备方法示例如下：称取0. 31g硼酸溶 于 400mLddH20 中，用 0· lmol/L 的 NaOH 调节 pH 至 9. 0,定容至 500mL。
[0149] 2) EDTA-NaHCO3溶液，其制备方法如下：取 I. 86g EDTA · 2H 20 和 16. 8g NaHCO3,溶 于900mLddH20中，用1.0 M NaOH调整pH至8. 0定容至1000mL，高压灭菌，室温保存；
[0150] 3) ITCBE购买自日本同仁化学