性肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR。
[0046] (1)自纺织纤维样品中提取蛋白：
[0047] 将纺织纤维样品剪碎，乙醇浸泡，氯仿-甲醇溶液浸泡。滤去浸泡溶液后干燥纤维 样品，加入蛋白提取溶液提取。过滤，滤液离心，取上清液待进一步处理。
[0048] (2)胰酶酶解处理：
[0049] 提取得到的蛋白样品采用碳酸氢铵溶解，加入二硫苏糖醇并于室温下孵育，再加 入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于37°C下孵育。酶解后的样本脱盐后热干，低 温保存待分析。
[0050] (3)生物质谱分析
[0051] 将上述处理后的纺织纤维蛋白的酶解样品注入色谱-生物质谱联用系 统检测，利用生物质谱分析方法获得羊绒标志肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和 GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR的检测信号。
[0052] 三、结果
[0053] 如图1至图5所示，羊绒成分标志性肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和 GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR仅在羊绒标准品（图1、图2)及含羊绒纤维的混合样品 (图5)中鉴定到，羊毛纤维的存在对羊绒的鉴定结果未产生干扰（图3、图4)。因此本发明 羊绒标志性肽段检测方法显示很好的特异性。
[0054] 实施例2 (纺织品中羊绒含量标志性肽段含量间对应关系的构建）
[0055] 一、材料
[0056] 羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品。
[0057]二、方法
[0058] 分别取标准羊绒样品按不同比例分别与羊毛纤维标准样品混合，获得羊绒含量分 别为5% -100%共7个样品，提取总蛋白质，采用内标法检测序列为SEQIDN01和SEQID N02的羊绒标志性肽段。
[0059] 三、结果
[0060] 如图6、图7及表1所示，基于对上述羊绒标志性肽段的分析，羊绒定量标准曲线线 性范围为5% -100%，线性相关系数（R2)均在0.99以上。上述结果表明，建立的羊绒定量 检测方法的灵敏度及线性范围已足够满足羊绒纺织行业的质量检测要求。
[0061] 表1羊绒成分标志肽段标准曲线测定结果
[0062]
[0063] 实施例3 (供试材料中羊绒的鉴别、定量分析）
[0064] -、材料
[0065] 羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品。市售羊绒衣料31、52、53、54，经纤维细度仪鉴 定均为羊绒、羊毛混纺衣料，其中羊绒比例为30-40%。
[0066]二、方法
[0067] 分别处理各供试品，提取总蛋白质，检测序列为SEQIDN01和SEQIDN02的羊绒 标志性肽段。根据定量标准曲线获得供试样品中羊绒的含量。
[0068] 三、结果
[0069] 如图8~11所示，所有供试材料中序列为SEQIDN01和SEQIDN02的羊绒标志 性肽段均为鉴定阳性，说明供试品S1、S2、S3、S4中均含有羊绒成分。供试品S1、S2、S3、S4 中羊绒检测结果列于表2,可见检测结果重复性好且与用纤维细度仪鉴定结果一致。
[0070] 表2受试纺织衣料样品中羊绒含量检测结果
[0071]
[0072] 实施例4
[0073] -种利用序列为SEQIDN01或SEQIDN02的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒 的方法，包括以下步骤：
[0074] 1)自待测样品中提取总蛋白质；
[0075] 2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量。
[0076] 其中步骤1)又具体包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸 泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。
[0077] 步骤2)包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而 后加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于35~39°C下孵育，将酶解后的蛋白脱 盐、干燥，即得到酶解产物。
[0078] 实施例5
[0079] -种利用序列为SEQIDN01或SEQIDN02的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒 的方法，包括以下步骤：
[0080] 1)自待测样品中提取总蛋白质；
[0081] 2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量；
[0082] 3)利用羊绒纯品与其他纺织品混合成为多组不同羊绒含量的纺织品混合物，各组 纺织品混合物中羊绒含量已知，在此基础上利用与步骤2)相同的检测方法确定纺织品中 羊绒含量与上述某一标志性肽段含量之间对应关系标准曲线，而后利用该标准曲线和步骤 2)所检测得到的羊绒标志性肽段含量确定出待测样品中羊绒含量。
[0083]其中步骤1)又具体包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸 泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。
[0084] 步骤2)包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而 后加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于35~39°C下孵育，将酶解后的蛋白脱 盐、干燥，即得到酶解产物。
[0085] 实施例6
[0086] 一种利用序列为SEQIDN01或SEQIDN02的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒 的方法，包括以下步骤：
[0087] 1)自待测样品中提取总蛋白质；
[0088] 2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量。
[0089] 对于上述检测结果，若显示存在序列为SEQIDN01或SEQIDN02的肽段则证明 待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒。
[0090] 以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例， 并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应 包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种纺织品中羊绒的检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 自待测样品中提取总蛋白质； 2) 检测步骤1)所述的总蛋白质中序列为SEQ ID NOl的肽段含量。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于还包括步骤3):利用与步骤2)相同的检测 方法确定纺织品中羊绒含量与序列为SEQ ID NOl的肽段含量之间对应关系标准曲线，而后 利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的序列为SEQ ID NOl的肽段含量确定出待测样品中 羊绒含量。3. -种纺织品中羊绒的检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 自待测样品中提取总蛋白质； 2) 检测步骤1)所述的总蛋白质中序列为SEQ ID N02的肽段含量。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于还包括步骤3):利用与步骤2)相同的检测 方法确定纺织品中羊绒含量与序列为SEQ ID N02的肽段含量之间对应关系标准曲线，而后 利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的序列为SEQ ID N02的肽段含量确定出待测样品中 羊绒含量。5. 根据权利要求1~4任一项所述的方法，其特征在于步骤1)包括以下步骤：将待测 样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉 淀、取上清液待用。6. 根据权利要求1~4任一项所述的方法，其特征在于步骤2)包括以下步骤：对步骤 1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中序列为SEQ ID NOl的 肽段含量或序列为SEQ ID N02的肽段含量。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步 骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而后加入巯基封闭试剂，最后加入胰蛋白 酶于35~39°C下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述巯基封闭试剂是碘乙酰胺。9. 一种用于权利要求1所述方法的肽段，其特征在于该肽段的序列如SEQ ID NOl所 不。10. -种用于权利要求3所述方法的肽段，其特征在于该肽段的序列如SEQ ID N02所 不。
【专利摘要】本发明提供了一种纺织品中羊绒的检测方法。该方法首先确定了具有准确指向性的羊绒标志性肽段，该肽段特异性突出，当待测样品总蛋白中具有该肽段时可确切证明羊绒成分的存在，实验结果不会受到其他常规纺织品成分的影响。除了定性检测之外，可以利用上述标志性肽段的含量进行羊绒定量检测，肽段含量与羊绒含量间具有较好的线性关系，检测结果稳定、可靠。本发明以特异性的羊绒标志性肽段为基础开发了针对纺织品中羊绒的检测方法，该方法准确、有效且操作较为简便，具有突出的推广前景。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/88
【公开号】CN105241993
【申请号】CN201510716825
【发明人】水雯箐, 曹琦琛, 李珊珊
【申请人】中国科学院天津工业生物技术研究所
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年10月28日