G及鼠抗人肺炎链球菌 FamlPspA、Fam2PspA蛋白多克隆抗体IgG;
[0034] 1. 2)免疫纳米磁珠的包被：
[0035] 1. 2. 1)取5mg磁珠，用1mlMES缓冲液洗涂Η次，置于纳米磁分离器中进行磁分离 后移除上清；所述磁珠是W超顺磁性化3〇4为内核、粒径为18〇nm的駿基磁珠；所述MES缓 冲液是质量浓度是2g/L的2-(N-吗晰代）己礙酸；所述MES缓冲液的抑=6. 0 ;所述纳米 磁分离器的磁性强度是0. 4T;
[0036] 1. 2. 2)依次加入用步骤1. 2. 1)中的MES缓冲液配制的浓度是8-12mg/ml的邸C 溶液W及用步骤1. 2. 1)中的MES缓冲液配制的浓度是6-lOmg/ml的sulfo-N服溶液各 0. 5ml，W10-40巧m/min于旋转混合仪中活化1虹，置于纳米磁分离器中进行磁分离后移除 上清，用1ml步骤1. 2. 1)中的MES缓冲液重悬，得到活化后的磁珠；
[0037] 1. 2. 3)取5个离必管，在每个离必管中加入200μL步骤1. 2. 2)所得到的活化后 的磁珠，置于纳米磁分离器中进行磁分离后移除上清，向各离必管中加入用PBS缓冲液稀 释的浓度为50-200μg/ml的由步骤1. 1)所制备的兔抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白多克 隆抗体IgG溶液各1ml，室温下W15巧m/min于旋转混合仪中反应2-化，置于纳米磁分离 器中进行磁分离后移除上清后，各加入1ml含Img/ml己醇胺的上述PBS缓冲液，室温下W 15rpm/min于旋转混合仪中反应化W封闭磁珠上未与抗体反应的駿基；所述PBS缓冲液中 各成分含量如下；8g/L化化，0. 2g/LKC1，0. 24g/LKH2P〇4，1.44g/L胞2册〇4,所述PBS缓冲 液的抑=7. 4 ;
[0038] 1. 2. 4)封闭反应完成后，将该5个离必管置于纳米磁分离器中进行磁分离后移 除上清，各用1ml洗涂缓冲液洗涂Η遍；所述洗涂缓冲液中各成分含量如下；8g/L化化， 0. 2g/L KC1，0. 24g/L KH2P〇4，1.44g/L胞2册〇4,0. 5ml/L Tween-20,所述洗涂缓冲液的抑= 7.4；
[0039] 1.2.5)向各个离必管中分别加入1ml保存缓冲液重悬磁珠，置于4°C保存备用；至 此制得抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白免疫纳米磁珠；所述保存缓冲液中各成分含量如下： 8g/L NaCL，0. 2g/L KC1，0. 24g/L KH2P〇4，1.44g/L胞2册〇4,0. 3g/L化N3,5g/L牛血清白蛋白 度SA)，所述保存缓冲液的抑=7. 4 ;
[0040] 1. 2. 6)按与步骤1. 2. 1)-1. 2. 5)相同的方法利用由步骤1. 1)所制备的兔抗人肺 炎链球菌Fam2PspA蛋白多克隆抗体IgG制得抗人肺炎链球菌Fam2PspA蛋白免疫纳米磁 珠。将上述两种免疫纳米磁珠悬液按体积比1:1混合，即制得抗人肺炎链球菌免疫纳米磁 珠；
[0041] 2)量子点标记的抗人肺炎链球菌纳米探针的制备：
[0042] 其具体制备方法包括：
[0043] 2. 1)向微量离必管中依次加入4nmol駿基水溶性量子点、eOOnmolN-居基玻巧醜 亚胺sulfo-N服W及eOOnmol碳二亚胺邸C，W磯酸盐缓冲液定容为5ml，混合溶液，37°C反 应30min后，透析去除过量的作为活化剂的sulfo-N服及邸C，得到活化后的量子点；所述 磯酸盐缓冲液中各成分含量如下；2. 9g/L磯酸氨二钢，0. 295g/L磯酸二氨钢，4g/L氯化钢； 所述磯酸盐缓冲液的抑=7. 4 ;
[0044] 2. 2)在步骤2. 1)所得到的活化的量子点中，加入8-16nmol的步骤1. 1)中所制备 的鼠抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白多克隆抗体IgG，避光反应化，加入单端氨基化聚己二 醇PEG2000-NH2至终浓度为1%，封闭未反应的活化駿基位点，继续避光反应比；
[0045] 2. 3)用0. 2μmPES滤器过滤除去步骤2. 2)中的抗体聚集物，然后将滤液转移到 50000MW超滤离必管中，W8000g离必力在4°C下离必15min，除去未发生偶联反应的抗体和 反应中的副产物；
[0046] 2. 4)收集步骤2. 3)中超滤离必管滤膜上层量子点-抗体偶联物溶液，溶于2ml磯 酸盐洗涂液中，再将此溶液转移到一个新的50000MW超滤离必管中，W8000g离必力在4°C 下离必15min，收集超滤离必管滤膜上层量子点-抗体偶联物溶液，溶于1ml磯酸盐保存液 中，置于4Γ保存备用，至此制得量子点标记的抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白纳米探针；所 述磯酸盐洗涂液中各成分含量如下；2. 9g/L磯酸氨二钢，0. 295g/L磯酸二氨钢，4g/L氯化 钢，5ml/L吐温-20,0. 3g/L叠氮钢，所述磯酸盐洗涂液的抑=7. 4 ;所述磯酸盐保存液中各 成分含量如下；2. 9g/L磯酸氨二钢，0. 295g/L磯酸二氨钢，2g/L氯化钢，lOg/L牛血清白蛋 白，0. 3g/L叠氮钢；所述磯酸盐保存液的抑=7. 4 ;
[0047] 2. 5)按与步骤2. 1)-2. 4)相同的方法利用由步骤1. 1)所制备的鼠抗人肺炎链球 菌Fam2PspA蛋白多克隆抗体IgG制得量子点标记的抗人肺炎链球菌Fam2PspA蛋白纳米探 针。将上述两种量子点标记的纳米探针溶液按体积比1:1混合，即制得抗人肺炎链球菌纳 米探针；
[0048] 3)PBST缓冲液的配制：
[0049] 其具体配制方法包括：
[0050] 取8gNa化，0.2gKCl，0.24KH2P04，1.44gNa2HP04,0.3g化N3,0.5mlTween-20溶 解于800ml蒸傭水中，用5M化0H调整抑至7. 4,再定容至1000ml;
[005。 4)质控品的制备：
[0052] 4. 1阳性质控品；阳性质控品由灭活的人肺炎链球菌干燥结合到拭子上而成；
[0053] 4. 2阴性质控品：阴性质控品即经临床确定为人肺炎链球菌阴性的人群的咽拭 子。
[0054] 作为优选，本发明在步骤1.2. 2)中，依次加入用步骤1.2. 1)中的MES缓冲液配制 的浓度是lOmg/ml的邸C溶液W及用步骤1. 2. 1)中的MES缓冲液配制的浓度是8mg/ml的 sul化-N服溶液各0. 5ml，W15巧m/min于旋转混合仪中活化1虹，置于纳米磁分离器中进行 磁分离后移除上清，用1ml步骤1. 2. 1)中的MES缓冲液重悬，得到活化后的磁珠；
[00巧]所述步骤1. 2. 3)中，向各离必管中加入用PBS缓冲液稀释的浓度为100μg/ml的 由步骤1. 1)所制备的兔抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白蛋白多克隆抗体IgG溶液各1ml， 室温下W15巧m/min于旋转混合仪中反应化，置于纳米磁分离器中进行磁分离后移除上清 后，各加入1ml含Img/ml己醇胺的上述PBS缓冲液；
[005引所述步骤2.。中，在步骤2.1)所得到的活化的量子点中，加入12nmol的步骤 1. 1)中所制备的鼠抗人肺炎链球菌FamlPspA蛋白多克隆抗体IgG，避光反应化。
[0057] 作为优选，本发明所采用的量子点是駿基化两亲聚合物修饰的水溶性CdSe/ZnS 量子点。
[005引作为优选，本发明所采用的磁珠是W超顺磁性化304为内核、壳材料为聚苯己帰、 表面官能团为駿基、粒径为180nm的駿基磁珠。
[0059] -种基于磁性分离和量子点标记的检测人肺炎链球菌抗原的试剂盒的使用方法， 其特征在于；所述使用方法包括W下步骤：
[0060] 1)将待检样本用0. 5mlPBST缓冲液溶解后将溶解液转入1. 5ml普通离必管中； 所述PBST缓冲液中各成分含量如下；8g/L化化，0.2g/LKCl，0.24g/LKH2P〇4，1.44g/L 胞2册〇4,0. 3g/LNaN3,0. 5ml/LTween-20 ;所述PBST缓冲液的抑=7. 4 ;
[0061] 2)向步骤1)中的离必管中加入基于磁性分离和量子点标记的检测人肺炎链球菌 抗原的试剂盒中的抗人肺炎链球菌免疫纳米磁珠60-200μ1，室温下WlOrpm/min于旋转 混合仪上反应15-45min后取下，将离必管插入纳米磁分离器磁分离3min，用移液器吸出上 清；
[0062] 3)添加试剂盒中的PBST缓冲液1ml洗涂两遍，采用纳米磁分离器磁分离后吸出洗 涂液，最后用1mlPBS缓冲液重悬磁珠，制得免疫纳米磁珠-链球菌抗原复合物；所述PBS 缓冲液中各成分含量如下；8g/L化化，0. 2g/LKC1，0. 24g/LKH2P〇4，1.44g/L胞2册〇4;所述 PBS缓冲液的抑=7. 4 ;
[0063] 4)取100μ1步骤3)得到的免疫纳米磁珠-链球菌抗原复合物于另一离必管中， 再加入100μ1基于磁性分离和量子点标记的检测人肺炎链球菌抗原的试剂盒中的量子点 标记的抗人肺炎链球菌纳米探针，室温下W15巧m/min于旋转混合仪上反应25-45min，通 过量子点上的抗体与免疫纳米磁珠上的链球菌抗原的免疫结合，量子点被标记到链球菌抗 原表面，形成磁珠-链球菌抗原-量子点明治"复合物；
[0064] 5)反应完成后，采用纳米磁分离器磁分离3min，除去多余的量子点标记的抗人肺 炎链球菌纳米探针，用试剂盒中的PBST缓冲液液清洗2遍，复合物重新分散在100μ1PBS 缓冲液中，使用英光酶标仪对其英光值进行检测；所述PBS缓冲液中各成分含量如下；8g/L 化化，0. 2g/LKC1，0. 24g/LKH2PO4,1. 44g/L胞2册〇4;所述PBS缓冲液的抑=7. 4 ;
[0065] 6)按上述同样的方法检测试剂盒中提供的四份阴性质控品样品及一份阳性质控 品样品，分别读取英光值；四份阴性质控品样品的英光读数的平均值与3倍标准差之和即 为CUT-OFF值；若步骤5)中待检样本的检测英光值若大于CUT-OFF值即判断为待检样本中 人肺炎链球菌抗原为阳性，反之则判断为待检样本中人肺炎链球菌抗原为阴性；若阳性质 控品样品的英光值小于CUT-OFF值，则表明试剂盒失效。
[0066] 作为优选，本发明所提出的步骤2)中，向步骤1)中的离必管中加入基于磁性分 离和量子点标记的检测人肺炎链球菌抗原的试剂盒中的抗人肺炎链球菌免疫纳米磁珠 160μ1，室温下W10巧m/min于旋转混合仪上反应30min后取下，将离必管插入磁力架分离 3min，用移液器吸出上清；
[0067] 所述步骤4)中，取100μ1步骤3)多得到的免疫纳米磁珠-链球菌抗原复合物于 另一离必管中，再加入100μ1基于磁性分离和量子点标记的检测人肺炎链球菌抗原的试 剂盒中的量子点标记的抗人肺炎链球菌纳米探针，室温下W15巧m/min于旋转混合仪上反 应30min，通过量子点上的抗体与免疫纳米磁珠上的人肺炎链球菌抗原的免疫结合，量子点 被标记到人肺炎链球菌抗原表面，形成磁珠-链球菌抗原-量子点明治"复合物。
[0068] 作为优选，本发明所提供的待检样本包括但不限于咽拭子。
[0069] 本发明所需的駿基水溶性纳米量子点、180nm駿基磁珠，可到相关专业的研究单 位、公司购买或定制；所需的仪