色液A、显色液B、 终止液、浓缩洗涂液及样品稀释液，封板膜、锡锥袋、产品说明书和产品质检报告。试剂盒采 用间接竞争化ISA方法，检测时，在相应的反应孔中加入阴阳对照和待测样品，若样品中含 有特异性抗体，则与微孔表面的祀抗原结合而形成抗原-抗体复合物。充分洗涂后加入酶 标二抗液，连接在抗体上的酶催化底物使反应液呈现蓝色，在终止液的存在下改变为黄色。 颜色的深浅与样品中抗体的含量成正相关。
[0024] 所述酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每 个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被特异祀抗原。
[0025] 所述封板膜是可粘贴塑料膜，大小与酶标板横切面大小一致。
[002引实施例3
[0027] -种检测人血清中的抗酿酒酵母抗体（ASCA)IgG的酶联免疫检测试剂盒。试剂 盒由一块经过特殊包被有祀抗原的96孔酶标板、6个已知浓度的ASCAIgG抗体溶液、阴阳 性对照品、酶标二抗液、显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涂液、样品稀释液、封板膜、锡锥 袋、产品说明书和产品质检报告。试剂盒采用间接竞争化ISA方法，检测时，在相应的反应 孔中加入阴阳对照和待测样品，若样品中含有特异性抗体，则与微孔表面的祀抗原结合而 形成抗原-抗体复合物。充分洗涂后加入酶标二抗液，连接在抗体上的酶催化底物使反应 液呈现蓝色，在终止液的存在下改变为黄色。颜色的深浅与样品中抗体的含量成正相关。
[0028] 所述酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每 个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被特异祀抗原。
[0029] 所述封板膜是可粘贴塑料膜，大小与酶标板横切面大小一致。
[0030] 本实用新型的使用方法如下：
[0031] ii采用常规方法收集全血标本，置血样本在室溫下30分钟后吸取血清待用。待 测血清如在24小时内使用，可于2-8 °C条件保存，若需长期存放，应保存于-20°CW下，并 避免反复冻融。
[0032] (2)向包被特异祀抗原的酶标板的微孔中加入待检血清样品，静置使其抗原-抗 体反应结合；
[0033] 巧）用样品稀释液将待测血清按比例稀释，每孔加入IOOuL室溫振荡解育；
[0034] 星；洗涂：去掉孔内溶液，加入洗涂液，静置，去掉洗涂液，并重复3次；
[00对通酶标二抗：加入酶标二抗，每孔100uL，室溫振荡解育；
[0036] 瘦洗涂：同步骤是；
[0037] 感显色：加显色液A、显色液B，室溫振荡显色15 min,在酶的作用下，酶底物转 换成显色物质；
[0038] 终止反应：每孔加入终止液，然后在450皿光波长下测定OD值；
[003引 ?计算抗体浓度值：根据标准曲线中各已知标准品的浓度与OD值的比，可W通 过公式来计算待测抗体的浓度值。随后根据说明书中标明的试剂盒界定值（化t-off值） 来确定所测血样本中的抗体浓度属于正常范围还是异常范围。
[0040] 实验结果说明：
[00川議!绘制标准曲线：标准孔复孔所得孤值求出平均值，W标准品的浓度单位（u/ ml)为横坐标，对应OD值为纵坐标，在数据分析软件中绘出标准曲线；
[004引P样品浓度：由标准品的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样 品的OD值带入方程式，即为样品浓度；
[0043] f懇化t-off值：本试剂盒根据cut-off值的界定判断阴阳性结果。
【主权项】
1. 一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，结构包括盒体和盒内的一块包被有特异靶 抗原的96孔酶标板、14瓶试剂及两张封板膜，其特征在于：酶标板是采用96孔板作为固定 载体，在微孔中预包被能结合被测抗体的特异靶抗原；14瓶试剂分别为：6瓶已知浓度的抗 体溶液、阴性对照样品、阳性对照样品、酶标二抗液、显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤 液、样品稀释液。2. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的 ELISA试剂盒需求盒体为69克硬质纸材所制。3. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述 96孔酶标板为聚苯乙烯酶标板，该板置于真空锡箱袋内。4. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，封板膜 是与酶标板横切面大小一致的可粘贴性塑料膜。5. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述6 瓶已知浓度的抗体溶液，阴性对照品、阳性对照品、酶标二抗液、样品稀释液、浓缩洗涤液及 终止液分别装在用白色瓶身为特征的复合塑料瓶；显色液A液和显色液B液分别装在用棕 色盖子和棕色瓶身为特征的复合塑料瓶。6. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶 标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反 应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被特异靶抗原。7. 根据权利要求1所述的一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，6瓶已 知浓度的抗体溶液、阴性对照品、阳性对照品均为lml溶液/瓶；样品稀释液、浓缩洗涤液 及酶标二抗液均为15ml溶液/瓶；显色液A液和显色液B液均为8ml溶液/瓶；终止液为 l〇ml溶液/瓶。
【专利摘要】本实用新型提供一种检测人血清中抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒组成包括：包被有特异靶抗原的96孔酶标板、6个不同浓度的抗体的溶液、阴阳性参照品、酶标二抗液、显色液A和B、反应终止液、浓缩洗涤液、样品稀释液、封板膜及锡箔袋。本试剂盒实验过程包括向相应的反应孔中加入测定标准品和未知血样品，当待测样品中含有特异抗体时，抗体与包被在酶标板表面的靶抗原结合形成抗原抗体复合物。随后加入酶标二抗以及酶底物；酶催化显色液反应呈现蓝色，并在加入终止液后终止反应；此时的反应液呈现黄色，其颜色的深浅与样品中的抗体含量成正相关。本试剂盒具有操作简单、特异性强、灵敏度高等优点。
【IPC分类】G01N33/53, G01N21/78
【公开号】CN205027757
【申请号】CN201520787940
【发明人】杨武, 尚建平
【申请人】山西瑞豪生物科技有限公司
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2015年10月14日