专利名称：一种粤紫萁组织培养的方法
技术领域：
本发明属于蕨类植物组织培养技术领域，具体是一种粤紫萁组织培养的方法。
背景技术：
粤紫萁为蕨类紫萁科紫萁属植物，香港特有草本植物。植物高约53厘米，极短根状茎深褐色，粗厚而直立，藏于浅层土壤，支根盘根错节。原产地为香港岛柏架山、新界大屿山及大帽山。粤紫萁主要生长于丛林之下，亦曾于2000年在深圳市龙岗南澳笔架山的一条溪流意外地被发现，但为数只有三株。粤紫萁有凤凰之羽之称，目前国内数量仅以株记，极为稀少珍贵。寻找一种安全的繁殖方法，挽救粤紫萁这一濒危植物已迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种粤紫萁组织培养的方法。通过粤紫萁的茎尖作为外植体进行组培，实现粤紫萁的人工培养。本发明一种粤紫萁组织培养的方法，包括下列步骤1)外植体处理剪下粤紫萁的幼嫩茎尖，不能伤害粤紫萁本株，在经过消毒杀菌的工作台上用0. 的汞消毒液消毒10-20分钟，后用无菌水冲洗干净后留用。2)诱导培养将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中，于22-25°C 温度下避光培养5-7天后，放置在光照下培养，光强由弱逐渐变强。培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。以IL培养基用量，诱导培养基的配方为MSQ00ML-4000ML)， 激动素(0. 5Mg-3Mg)，3-吲哚乙酸(0. 5Mg-2. 5Mg)，萘乙酸(10Mg_50Mg)，磷酸二氢钠 (50Mg-1000Mg)，活性炭(1000Mg-2000Mg)，蔗糖 20000Mg，琼脂 7000Mg。3)繁殖培养将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天，如此循环三代即可得大量所需组培苗。以IL培养基用量，繁殖培养基的配方为MS^)0ML-4000ML)，激动素(0. 5Mg_3Mg)， 萘乙酸(15Mg-50Mg)，细胞分裂素(0. 5Mg-lMg)，磷酸二氢钠(50Mg-1000Mg)，活性炭 (1000Mg-2000Mg)，蔗糖 20000Mg，琼脂 7000Mg。4)生根培养将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中，30天后形成孢子体，在继续培养一个月，即可形成羽状叶并长出数条根须。以IL培养基用量，繁殖培养基的配方为MS(300ML-3000ML)，激动素(0. 5Mg_4Mg)，萘乙酸(10Mg_50Mg)，细胞分裂素 (0. 5Mg-lMg)，磷酸二氢钠(50Mg-2000Mg)，活性炭(1000Mg-2000Mg)，蔗糖 30000Mg，琼脂 8000Mgo5)炼苗栽培将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置5-7天后，取出组培苗，洗净培养基后移栽到大棚中，控制大棚温度在18-22 V，湿度在80 %以上，遮荫并逐渐增加光照和通风，半个月后即可进行常规管理。本发明是利用植物细胞全能性的生物技术，合理采取粤紫萁幼嫩茎尖作为外植体，在配合比合理的培养基中培养，可在短期内繁殖出大量的粤紫萁组培苗。本发明优点在于提供了一条全新的粤紫萁组培方法，突破季节限制，可一年四季采取外植体组培。
具体实施例方式实施例1粤紫萁为我国极其稀有的珍贵植物，宜在春季组培，此间适合组培苗炼苗的大棚环境条件容易把握，确保高的成活率。一种粤紫萁组织培养的方法，依下述步骤对本发明做进一步说明1)外植体处理春季，在不伤害粤紫萁本株的前提下剪下粤紫萁的幼嫩茎尖，在在经过消毒杀菌的工作台上用0. 的汞消毒液消毒10-15分钟。后用无菌水冲洗干净后留用。2)诱导培养将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中，于23°C温度下避光培养7天后，放置在光照下培养，光强由弱逐渐变强。培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。所述诱导培养基的配方为每升诱导培养基包含MS 200ML，激动素0. 5Mg，3_吲哚乙酸0. 5Mg，萘乙酸10Mg，磷酸二氢钠80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，琼脂7000Mg。3)繁殖培养将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天，如此循环三代即可得大量所需组培苗。所述繁殖培养基的配方为每升繁殖培养基包含MS 200ML，激动素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，细胞分裂素0. 5Mg，磷酸二氢钠80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，琼脂7000Mg。4)生根培养将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中，30天后形成孢子体，在继续培养一个月，即可形成羽状叶并长出数条根须。所述生根培养基的配方为每升生根培养基包含MS300ML，激动素0.5Mg，萘乙酸 15Mg,细胞分裂素0. 6Mg，磷酸二氢钠lOOMg，活性炭lOOOMg，蔗糖30000Mg，琼脂8000Mg。5)炼苗栽培将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置7天后，取出组培苗，洗净培养基后已在到大棚中，控制大棚温度在18-22°C，湿度在80%以上，遮荫并逐渐增加光照和通风，半个月后即可进行常规管理。
权利要求
1.一种粤紫萁组织培养的方法，其特征在于该方法包括下列步骤1)外植体处理剪下粤紫萁的幼嫩茎尖，不能伤害粤紫萁本株，在经过消毒杀菌的工作台上用0. 的汞消毒液消毒10-20分钟，后用无菌水冲洗干净后留用；2)诱导培养将消过毒的粤紫萁幼嫩茎尖插入原球茎诱导培养基中，于22-25°C温度下避光培养5-7天后，放置在光照下培养，光强由弱逐渐变强，培养30-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎；3)繁殖培养将第二步操作中的原球茎继续培养30-40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基上培养25-35天，如此循环三代即可得大量所需组培苗；4)生根培养将上一步繁殖培养形成的组培苗转入生根培养基中，30天后形成孢子体，在继续培养一个月，即可形成羽状叶并长出数条根须；5)炼苗栽培将已生根的的组培苗瓶放到大棚中摆置5-7天后，取出组培苗，洗净培养基后移栽到大棚中，控制大棚温度在18-22°C，湿度在80%以上，遮荫并逐渐增加光照和通风，半个月后即可进行常规管理。
2.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法，其特征在于所述诱导培养基的配方为每升诱导培养基包含MS 200ML，激动素0. 5Mg，3-吲哚乙酸0. 5Mg，萘乙酸10Mg，磷酸二氢钠80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，琼脂7000Mg。
3.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法，其特征在于所述繁殖培养基的配方为每升繁殖培养基包含MS 200ML，激动素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，细胞分裂素0. 5Mg，磷酸二氢钠80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，琼脂7000Mg。
4.根据权利要求1所述的一种粤紫萁组织培养的方法，其特征在于所述生根培养基的配方为每升生根培养基包含MS300ML，激动素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，细胞分裂素0. 6Mg，磷酸二氢钠lOOMg，活性炭lOOOMg，蔗糖30000Mg，琼脂8000Mg。
全文摘要
本发明属于蕨类植物组织培养技术领域，具体是一种粤紫萁组织培养的方法。它是利用植物细胞全能性的生物技术，合理采取粤紫萁幼嫩茎尖作为外植体，在合理的培养基中培养，可在短期内繁殖出大量的粤紫萁组培苗。本发明优点在于提供了一条全新的粤紫萁组培方法，突破季节限制，可一年四季采取外植体组培。本发明挽救了我国濒危植物粤紫萁，可使更多人观看到有凤凰之羽美称的粤紫萁。
文档编号A01H4/00GK102524058SQ20101059448
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月14日 优先权日2010年12月14日
发明者陈彩霞 申请人:陈彩霞