专利名称：苏云金芽胞杆菌高毒力菌株ybt-1520及发酵工艺与产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种分离筛选得到的用于生物杀虫剂的高毒力苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520(一种苏云金芽胞杆菌，保存于CCTCC1，保藏号M94067，保藏日期1994年10月4日)的选育，它的生产工艺以及生物杀虫剂技术领域。
目前棉铃虫对化学农药的抗性与日剧增，大多数化学农药对棉铃虫，特别是对抗性棉铃虫防效不佳，以致棉铃虫在部分地区猖獗危害。近十年来，国内外不少发明者致力于筛选二元或三元农药复配制成农药混剂，虽然对棉铃虫的防治起到一定的作用，但化学农药对生态环境以及对昆虫天敌的影响是不言而喻的。因此开发生物农药防治某些有害昆虫，特别是选择对棉铃虫有特异性的菌株及其生产制剂，是当前农业害虫综合治理上急待解决的问题。
生物杀虫剂具有不污染环境，对人畜安全，昆虫不易产生抗药性，生产技术简单等突出优点，而苏云金芽胞杆菌杀虫剂是目前最重要的生物杀虫剂，主要用来防治鳞翅目害虫。
目前世界上所采用的菌株均为HD-1或其类似菌株，其鞭毛抗原血清型为H3ab。HD-1菌株由Dulmage于1970年从饲养的棉红铃虫中分离出来，比当时的商品生产菌株毒力高20～212倍，由此开创了苏云金芽胞杆菌杀虫剂的新起点。Abbott公司和Sandoz公司的Dipel和Javelin产品菌株分别是HD-1和NRD-12，实验室摇瓶发酵液对棉铃虫毒力效价为2000IU/ul左右。这两个菌株除了后者产生苏云金素外，检测不到差别。苏云金芽胞杆菌不同菌株之间主要通过其鞭毛抗原的差异来反映，目前商业化的菌株主要属于血清型H3ab，而同一血清型的菌株之间仍有毒力的差异，因此对一个苏云金芽胞杆菌的鉴定必须反应其杀虫基因的数量，类型及组合方式。HD-1和NRD-12都含有cryIA(a)、cryIA(b)、cryIA(c)、cryIIA和cryIIB杀虫晶体蛋白基因，前三个基因N-末端所在的HindIII片断分别为4.5kb、5.3kb和6.6kb。cryIA(a)和cryIA(c)基因拷贝数相同，但都比cryIA(b)基因的拷贝数低。在SDS-PAGE电泳中可检测到130kDa和65kDa晶体蛋白，它们分别是三个cryIA基因的产物(参见科学出版社，1990，苏云金杆菌，喻子牛主编)。
本发明的YBT-1520菌株对棉铃虫有特异性高毒力，与HD-1同属H3ab。与HD-1相比，它所产生的晶体蛋白类型和所含的杀虫晶体蛋白基因都相同，但这些基因所在的位置，基因拷贝数的比例，基因的核苷酸序列都有明显的差异，特别是其总体上的毒力比HD-1和NRD-12高。
本发明的目的在于克服已有技术不足，选育一种对棉铃虫等害虫有特异性高毒力苏云金芽胞杆菌菌株，设计它的发酵工艺和制备生物杀虫剂。
本发明通过以下技术方案实现本发明的特征包括苏云金芽胞杆菌YBT-1520的分离筛选方法，液体深层发酵工艺及液剂和粉剂产品的制备。
一、分离筛选方法采用醋酸盐选择培养基(简称BPA掊养基)，从土壤中分离，并以小菜蛾幼虫为试验昆虫进行毒力测定，筛选获得本发明菌株。
1.BPA培养基配方牛肉膏5克，蛋白胨10克，醋酸钠34克，蒸馏水1000毫升，pH值7.2～7.4。
2.分离方法称取1克土壤样品于BPA培养基中，充分振荡后，置30℃摇床培养4小时，取出于75～80℃水浴热处理10～15分钟，稍静置后，吸0.5毫升置于BPA平板培养基上，涂布均匀，倒置于30℃培养箱中培养24小时，挑选3～5个类似苏云金杆菌的菌落接种到BPA斜面上，30℃培养72小时以上，石炭酸复红染色镜检，将有伴胞晶体的分离体确定为苏云金芽胞杆菌。
3.毒力测定3.1初筛将苏云金杆菌分离体接种到牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏0.5％，蛋白胨1.0％，NaCl0.5％，琼脂2.0％，pH7.2)斜面(18×180mm)上，30℃培养72小时以上，加10ml无菌水洗下菌苔，打碎成均匀菌悬液作为原液。用1∶10的原液稀释液浸泡白菜叶，取出凉干，置感染瓶中，每瓶投入三龄小菜蛾幼虫10头，每个菌株3次重复，并用无菌水作空白对照，25℃感染48小时后检查结果。
3.2复筛将初筛中校正死亡率在90％以上的菌株进行复筛。复筛按原液1∶1000稀释，并以菌株HD-1为参考标准，方法同初筛。
4.菌种培养、传代和保藏在牛肉膏蛋白胨培养基斜面上于30℃培养，可于4℃短期保藏，以冷冻管，或砂土管长期保藏，作为原始菌种，生产菌种需从原始菌种中转接，接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上。
5.YBT-1520菌株的生物学及遗传特性生物学特性菌体直杆状，营养体呈链状或单生，长3～5微米，宽1～1.2微米，革兰氏染色阳性，芽胞呈圆柱状或近椭圆，偏端生，芽胞囊不膨大，在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落圆形，边缘平滑，菌苔丰满呈蜡质状，生长温度10～45℃，最适生长温度26～32℃，适宜pH6.8～7.4，兼性嫌氧，在含7％NaCl的牛肉蛋白胨培养基中生长在核糖，葡萄糖，果糖，麦芽糖和可溶性淀粉培养基中产酸，甲基红反应阳性，芽胞生长后期产生较大伴胞晶体，伴胞晶体呈菱形，方形，不规则形等，大小不一。在发酵培养中，可以在以多种农副产品为原料的培养基中旺盛生长，产生大量伴胞晶体，对昆虫的毒力效价达3000IU/ul。用热处理的芽胞接种种子罐，用对数生长期菌接种发酵罐，菌体生长延迟期短，同步率高。
遗传学特性苏云金芽胞杆菌YBT-1520为本室分离的高毒力杀虫分离株，其鞭毛抗原血清型为H3ab，伴胞晶体由130kDa和65kDa晶体蛋白组成。
该菌株的杀虫晶体蛋白基因的特点与典型的H3ab菌株有较大差异。通过多聚酶链反应(PCR)鉴定，表明该菌株含有cryIA(a)、cryIA(b)、cryIA(c)、cryIIA和cryIIB五类杀虫晶体蛋白基因。这与典型菌株HD-1一样，但在该菌株中前三类基因的拷贝数不一样。通过PCR和Southern杂交表明该菌株的cryIA(c)基因拷贝数很高，cryIA(a)基因次之，cryIA(b)拷贝数很低。拷贝数依次为cryIA(c)＞cryIA(a)＞cryIA(b)。而在HD-1及NRD12中却是cryIA(b)基因拷贝数最高，cryIA(a)和cryIA(c)拷贝数相同。通过Southern杂交还表明cryIA(c)基因N-末端所在的HindIII片断为7.0kb，cryIA(b)基因片断显示不出来，进一步说明该基因拷贝数低。
该菌cryIA(c)基因的核苷酸序列与典型的cryIA(c)基因的序列(Adang，M.J.，etal，1985，Gene.36289-300)有四个核苷酸的差异，即在1365、1368、1389和1407位置上分别是C、T、G、C，而不是A、G、T、T。
该菌株对棉铃虫(Heliothis armigera)和小菜蛾(Plutella xylostella)有很高的毒力，比HD-1和NRD-12毒力高。
二、苏云金芽胞杆菌YBT-1520的生产工艺YBT-1520菌株作为生物杀虫剂的发酵工艺分为液体深层发酵和制剂化两部分液体深层发酵工艺(见
图1)和制剂化过程如下(1)原始菌种用冷冻管或砂土管保藏于华中农业大学微生物农药室的毒力高，性能稳定的苏云金芽胞杆菌YBT-1520菌株作为原始菌株。
(2)斜面菌种斜面培养基配方牛肉膏0.5％，蛋白胨1.0％，NaCl0.5％，琼脂2.0％，pH7.2。将培养基分装入试管或茄子瓶，湿热灭菌(15磅/平方英寸，121℃)30分钟，待温度降到50℃左右时摆成斜面。如果温度太高，冷凝水多，可将斜面置37℃培养一天，如无菌生长，方可使用。
斜面菌种的培养将原始菌种接种于试管斜面培养基上，30℃培养24小时进行活化。然后从试管斜面转接于茄子瓶斜面，30℃培养72小时，肉眼观察菌苔丰满，表面乳白色，无噬菌斑，显微镜检查无杂菌，90％以上芽胞脱落方可用于生产。供生产用斜面菌种，在冰箱内保存最多不超过一周。
(3)种子罐培养种子罐培养基配方豆饼粉3.0～5.0％，玉米粉1.0～5.0％，鱼粉0.3～2.0％，酵母粉0.1～2.0％，无机盐0.2～1.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌后pH为7.0～7.2。按种子罐容积的60～80％投入培养基，然后把高压蒸汽直接通入发酵罐使温达到121℃，压力为15磅/平方英寸，维持30分钟，冷却至30～35℃后，接入经活化的斜面菌种制成的菌悬液。pH值灭菌前8.5，灭菌后7.0～7.2。
种子罐的培养基也可采用以下配方豆饼粉3.5～4.5％，玉米粉1.0～3.0％，鱼粉0.8～1.6％，酵母粉0.1～0.5％，无机盐0.2～0.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌后pH为7.0～7.2；种子罐接种在已培养好的茄子瓶斜面菌种中加入无菌水，制成每毫升含0.2～1.0亿活细胞的菌悬液，转入500毫升血清瓶内，塞上经灭菌的针头或接种管，并用绳索捆紧置80℃水浴锅内保温15～20分钟，以杀死游离的噬菌体并活化芽胞。经热处理的芽胞悬液，用压差法接入种子罐。接种时种子罐培养基pH值为7.0。
种子罐培养在温度30～32℃，罐压0.3～0.5公斤/平方厘米通气量1∶0.6～1∶0.8搅拌200～250rpm的条件下。培养6～12小时。经显微镜观察芽胞全部萌发长成营养体，菌形正常，无杂菌污染，培养液含活菌数0.6～1.0亿个/毫升，方可作合格的种子液应用。
(4)发酵罐培养发酵罐培养基配方豆饼粉3.0～5.0％，玉米粉1.0～5.0％，鱼粉0.3～2.0％，酵母粉0.1～2.0％，无机盐0.2～1.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2。
发酵罐的培养基也可采用以下配方豆饼粉3.5～4.5％，玉米粉1.0～3.0％，鱼粉0.8～1.6％，酵母粉0.1～0.5％，无机盐0.2～0.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2。
发酵培养按发酵罐容积的60～70％投入培养基，通过高压蒸汽使发酵罐温度达到121℃，压力为15磅/平方英寸，维持灭菌30分钟，冷却至30～33℃后，按投料体积1～10％移入种子液。在温度28～32℃，罐压0.3～0.8公斤/平方厘米，通气量1∶0.6～1∶1.2(V/V)，搅拌200～250rpm条件下培养24～48小时，用显微镜检查有20～40％的芽胞囊破裂后，便可以放罐。
发酵控制本培养基灭菌前pH值调至8.5左右，灭菌后的pH值为7.0～7.2左右，使芽胞萌发率达到最高。当菌体开始生长后pH值下降至5.8～6.0，随后又回升至放罐时pH值8.5左右。通气在发酵前期，菌数低，耗氧少；进入对数期，耗氧增大，一般要求通气流量达到1∶1.0至1∶1.2(指发酵培养基体积与每分种通入空气的体积之比)。当芽胞开始形成以后，虽然菌体代谢活性降低，但氧对芽胞的成熟和伴胞晶体的形成有重要影响，因此在发酵后期仍应保持较大的通气量。温度随时检查温度值，控制温度变化在30±2℃。
(5)发酵物后处理发酵液经酸化和适量浓缩后加入助剂制成液剂产品或经喷雾干燥制成粉剂。
发酵液液剂化首先用HCl将发酵液调pH值5.0-6.0，然后根据发酵液水平进行适当浓缩。采用流体式连续离心机将发酵液浓缩0.5～1倍，使毒力效价达到所需水平，然后加入5～10％NaCl和0.3％苯甲酸钠防腐剂和其它助剂。
发酵粉剂化发酵液经浓缩达到一定浓度后，加入适量的填料(如硅藻土或碳酸钙)和润湿剂(1～0.3％农乳100)，打入喷雾干藻塔顶的高位槽中。当进口温度达到140～150℃，开始喷雾，控制流入离心盘浆液的速度，使喷雾干燥塔中层温度保持在60～65℃，这样使所干燥的制剂含水量在4％以下。
(6)产品质量检验发酵中间产物以及产品质量检验，按我国已建立的以小菜蛾幼虫作供试昆虫的生物测定方法进行。采用本实验室制备的标准品[CS3ab-1991，毒力效价18000IU/mg(国际单位/毫克)]，将标准品和待测样品进行系列稀释，将不同浓度的感染液和小菜蛾人工饲料混合制成感染饲料，感染三龄小菜蛾幼虫，检查不同浓度下的幼虫死亡率，用统计法计算待测样品和标准品的LC50值，由下列公式计算待测样品的毒力效价 (7)产品包装制剂按每个小包装为1公斤，产品按所含有效成分的不同分为几个种类。
液剂I型 毒力效价为2000IU/ul液剂II型 毒力效价为4000IU/ul液剂III型毒力效价为8000IU/ul粉剂I型 毒力效价为8000IU/mg粉剂II型 毒力效价为16000IU/mg粉剂III型毒力效价为32000IU/mg以上提出苏云金芽胞杆菌剂型和规格，但不限与此。
三、本发明的积极成果用本发明及其实施例制成的YBT-1520名杀虫剂(商品名简称棉丰杀虫剂)选用粉剂产品防治第二代棉铃虫，可达到控制目的。当施用200倍稀释液时防治效果可达95％以上；400倍稀释液可达90％以上，与400倍Dipel粉剂(美国Abbott公司生产的商品苏云金芽胞杆菌制剂)与1000倍20％灭多威防治效果相当(见表1)。由于棉铃虫对化学农药抗药性的产生，在化学防治面临失控的情况下，本发明及其产品在防治棉铃虫方面具有较高的使用价值和推广价值。
YBT-1520粉剂(棉丰杀虫剂)防治稻纵卷叶螟和玉米螟田间防治效果见表2和表1YBT-1520粉剂(II型)防治第三代棉铃虫的田间防治效果
表2YBT-1520粉剂(II型)对水稻稻纵卷叶螟田间防治效果
表3所示。由表2和表3看出，1000倍棉丰杀虫剂粉剂对稻纵卷叶螟与相同稀释倍数的Dipel粉剂防治效果相当，对于玉米螟来说30g/kg颗粒剂与50％1605颗粒剂的防治效果相当。
表3YBT-1520粉剂防治一代玉米螟田间药效
实施例1.斜面菌种(1)菌种来源本实验室筛选的高毒力菌株YBT-1520。
(2)斜面的准备培养基配方牛肉膏5克，蛋白胨10克，NaCl5克，琼脂20克，水1000毫升，pH7.2。培养基分装，分装试管(18×180mm)装量10ml，塞上棉塞；每支茄子瓶(200ml)装量60ml，塞上棉塞，内用一层纱布，外用一层牛皮纸包扎瓶口，湿热灭菌(15磅/平方英寸，121℃)30分钟，待温度降至50℃左右时摆成斜面，斜面置37℃培养一天后，如无菌生长，方可使用。
(3)斜面菌种的培养将烧红的接种环冷却，蘸一点无菌水(不可过多，以免滴入砂土管把砂土打湿)，按无菌操作从砂土管挑到一环砂土，均匀涂布于试管斜面培养基上，30℃培养24小时进行活化、然后从试管斜面转接于茄子瓶斜面，去掉牛皮纸，只包一层纱布(便于通气)，置30℃培养72小时，肉眼观察菌苔丰满，表面乳白色，无噬菌斑，显微镜检查无杂菌，90％以上芽胞脱落方可用于生产。每支茄子瓶斜面含活芽胞数在300亿以上。
2.种子罐培养种子罐培养基配方豆饼粉3.2％，玉米粉2.0％，鱼粉0.8％，酵母粉0.16％，无机盐0.3％，泡敌0.01％，pH调至8.5。所有原料都需要过80目筛。按种子罐容积的65～80％投入培养基，然后将高压蒸汽直接通入发酵罐使温度达到121℃，15磅/平方英寸，保持30分钟。在整个灭菌过程中，必须连续搅拌以避免培养基中固体物质的聚集和沉淀。搅拌速度只要能维持不产生固体物质的沉淀即可。在冷却过程中，必须保证一定的罐压避免杂菌污染。
种子罐接种在已培养好的茄子瓶斜面菌种中加入无菌水，制成每毫升含0.2～1.0亿活细胞的菌悬液，然后转入500毫升血清瓶内，塞上经灭菌的针头或接种管，并用绳索捆紧，置80℃水浴锅内保温15～20分钟，以杀死游离的噬菌体并活化芽胞。将经热处理的芽胞悬液，用压差法接入种子罐。接种时种子罐温度为30～35℃，pH值为7.0～7.2。
种子罐培养在温度30～35℃，罐压0.3～0.5公斤/平方厘米，通气量1∶0.6～1∶0.8，搅抖200～250rpm的条件下培养6～12小时。经显微镜观察芽胞全部萌发长成营养体，菌形正常，无杂菌污染，培养液含活菌数0.6～1.0亿个/毫升，方可作合格的种子液应用。
3.发酵罐培养发酵罐培养基配方豆饼粉3.2％，玉米粉2.0％，鱼粉0.8％，酵母粉0.16％，无机盐0.3％，泡敌0.01％，pH调至8.5。所有原料都需要过80目筛。
发酵培养按发酵罐容积的60～70％投入培养基，通入高压蒸汽使发酵罐温度达到121℃，压力为15磅/平方英寸，维持30分钟，冷却至30～33℃，pH值为7.0～7.2。按投料体积的1～10％移入种子液。在温度28～35℃，罐压0.3～0.8公斤/平方厘米，通气量1∶0.6～1.2(V/V)，搅拌200～250rpm常开的条件下培养24～48小时，用显微镜检查有20～40％的芽胞囊破裂后，便可以放罐。
4.发酵物后处理当发酵液效价稳定在2000～3500IU/ml，无杂菌污染时，方可进行酸化，适量浓缩，加入助剂制成液剂产品和经喷雾干燥制成粉剂。
A.调pH。放罐后应迅速用HCl将发酵液pH调至5.0～6.0，以防止伴胞晶体的降解。
B.浓缩。根据发酵液水平(毒力效价)，采用流体式连续离心机将发酵液浓缩0.5～1倍，使毒力效价达到所需水平。
C.液剂化。在经酸化和浓缩的发酵液中加入防腐剂(NaCl 5％和苯甲酸钠0.3％)及润湿剂(2％农乳100)，即可包装成品。
D.粉化剂。在经酸化和浓缩的发酵液中加入适量填料(硅藻土)和润湿剂(3％农乳100)后打入喷雾干燥塔顶的高位槽中。使喷雾干燥塔中层温度保持在60～65℃，这样使所干燥的制剂含水量在4％以下。
5.产品质量检验发酵中间产物以及产品的质量检验，按我国已建立的以小菜蛾三龄幼虫作供试昆虫的生物测定方法进行。标准品为本实验室制备的CS3ab-1991，效价18000IU/mg(国际单位/毫克)。
权利要求
1.一种生产生物杀虫剂的高毒力菌株，具有cryIA(a)、cryIA(b)和cryIA(c)杀虫晶体蛋白基因，其特征在于，所述的菌株为YBT-1520(一种苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis，CCTCC NO. M94067，保藏日期1994年10月4日)，它包括A.该菌株的三个杀虫晶体蛋白基因的拷贝数依次为cryIA(c)＞cryIA(a)＞cryIA(b)；B.cryIA(c)基因N-末端所在的HindIII片断为7.0kb；C.cryIA(c)基因的核苷酸序列与典型的cryIA(c)基因核苷酸序列有四个核苷酸的差异，即在1365，1368，1389和1407核苷酸位置上分别是C、T、G、C，而不是A、G、T、T。
2.一种利用苏云金芽胞杆菌作为生物杀虫剂的液体发酵方法，该方法所用的菌株是分离筛选得到的苏云金芽胞杆菌高毒力菌株YBT-1520(一种苏云金芽胞杆菌，CCTCC，NO. M94067，保藏日期1994年10月4日)，其特征包括以下步骤A.将原始菌种接种于试管斜面培养基上，30℃培养24小时进行活化，然后转接于茄子瓶斜面，30℃培养72小时，即为生产用斜面菌种；B.在已培养好的茄子瓶斜面菌种中加入无菌水，制成每毫升含0.2～1.0亿活细胞的菌悬液，然后转入500ml血清瓶内，塞上灭过菌的针头或接种管，将瓶置80℃水浴锅内保温15～20分钟对菌悬液进行热处理，用压差法将该菌悬液接入种子罐，接种时该罐培养基pH为7.0～7.2；C.按种子罐容积的60～80％投入培养基，高压蒸汽灭菌(15磅/平方英寸，121℃)维持30分钟，冷却至30～35℃后，接入经活化的斜面菌苔制成的菌悬液；D.按发酵罐容积的60～70％投入培养基，高压蒸汽灭菌，即在121℃，压力为15磅/平方英寸，搅拌200～250rpm条件下，维持30分钟灭菌，冷却至30～33℃后，按投料体积的1～10％移入种子液；E.种子罐培养，在温度30～32℃，罐压0.3～0.5kg/cm2，通气量1∶0.6～1∶0.8(V/V)，搅拌200～250rpm条件下培养6～12小时；F.发酵罐培养，在温度28～32℃，罐压0.3～0.8kg/cm2，通气量1∶0.6～1∶1.2(V/V)，搅拌200～250rpm条件下培养24～48小时，用显微镜检查有20～40％的芽胞囊破裂后，便可放罐；G.种子罐培养基配方为豆饼粉3.0～5.0％，玉米粉1.0～5.0％，鱼粉0.3～2.0％，酵母粉0.1～2.0％，无机盐0.2～1.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2；H.发酵罐培养基配方为豆饼粉3.0～5.0％，玉米粉1.0～5.0％，鱼粉0.3～2.0％，酵母粉0.1～2.0％，无机盐0.2～1.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是A.种子罐培养基配方为豆饼粉3.5～4.5％，玉米粉1.0～3.0％，鱼粉0.8～1.6％，酵母粉0.1～0.5％，无机盐0.2～0.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2；B.发酵罐培养基配方为豆饼粉3.5～4.5％，玉米粉1.0～3.0％，鱼粉0.8～1.6％，酵母粉0.1～0.5％，无机盐0.2～0.8％，泡敌0.01～0.03％，所有原料都需要过80目筛，灭菌前pH为8.5，灭菌后pH为7.0～7.2。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征是发酵罐发酵进入对数期时，其通气量为1∶1.0～1∶1.2(V/V)。
5.一种生物杀虫剂的生产方法，该方法所用的菌株属于分离筛选得到的苏云金芽胞杆菌高毒力菌株YBT-1520(一种苏云金芽胞杆菌，CCTCC NO. M94067，保藏日期为1994年10月4日)，并按照权利要求2和3的工艺生产，其特征是A.用HCl将发酵液pH调至5.0～6.0，根据发酵液水平，采用离心机将发酵液浓缩0.5～1倍，使毒力效价达到所需水平，然后加入5～10％NaCl、0.3％苯甲酸钠和1～3％农乳100，经检验，包装后即为液体剂型生物杀虫剂。B.在浓缩发酵液中，加入适量硅藻土或碳酸钙和1～3％农乳100，使毒力效价达到所需水平，经喷雾干燥工序，使制剂含水量控制在4％以下，并经检验，包装后即为粉剂型生物杀虫剂。
全文摘要
本发明涉及苏云金芽胞杆菌的选育及其发酵工艺与产品研制。其特征是，分离到一株对棉铃虫有特异性高毒力的苏云金芽胞杆菌YBT-1520菌株，其鞭毛抗原血清型为H3ab，杀虫晶体蛋白基因拷贝数依次为cryIA(c)＞cryIA(a)＞cryIA(b)，cryIA(c)基因N-末端所在HindⅢ的片断为7.0kb，且cryIA(c)基因核苷酸序列与典型的cryIA(c)有四个核苷酸差异。采用液体发酵工艺生产生物杀虫剂，对棉铃虫防效达95％以上，对稻纵卷叶螟和玉米螟也有良好效果。
文档编号A01N63/02GK1118375SQ95106749
公开日1996年3月13日 申请日期1995年6月22日 优先权日1995年6月22日
发明者孙明, 喻子牛, 戴经元, 刘子铎, 张连勇, 刘勇, 陈亚华, 王淑珍, 李林, 罗曦霞, 喻凌, 王波 申请人:华中农业大学, 南宫市生化农药总厂