改进的细胞培养基的制作方法

专利名称：：改进的细胞培养基的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种培养基，特别是一种细胞培养基，用于培养至少一种细胞和/或用于从生物体，特别是从细胞或细胞培养物中，收获多肽、蛋白质和/或疫苗，其中这些生物体在按照本发明所述的培养基中进行培养，而上述期望得到的多肽、蛋白质或疫苗从生物体和/或培养上清液中收获。以令人惊奇的方式发现的是，从柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸这些组分中选取的有机酸或有机酸的盐、衍生物或复合物，添加到一种培养基中，提高了细胞的生长速度和/或产率和/或降低了有毒代谢物的生成。当把这些按照本发明所述的物质单独或相互混合或与其他糖混合后添加到一种培养基中，特别是一种细胞培养基时，特别当把这些物质添加到一种不含或几乎不含谷氨酰胺的培养基，或在一种含有谷氨酰胺替代物的培养基中使用这些物质时，可以实现按照本发明这方面所带来的提高产率和/或减少副产品的目标。这些按照本发明所述的物质，作为细胞代谢的调节物质使用。它们作为附加的能量源和/或碳源发挥作用。基于此点，可以在一种培养基，特别是一种含糖和/或谷氨酰胺的细胞培养基中以相应更高的浓度使用这些物质。这些按照本发明所述的物质也可以在一种培养基，特别是一种不含糖和/或谷氨酰胺的细胞培养基中使用。
背景技术：
：在生产疫苗，例如病毒或多肽时，闩益把动物细胞，特别是哺乳动物细胞作为宿主细胞使用。这里，通常使用连续生长的细胞，也就是要么是永生化细胞，要么是肿瘤细胞的细胞系。对于一些应用来说，要使用诸如直接从人或动物获得的原代细胞。在进行体外培养时，原代细胞和细胞系之间有着很大的差别。原代细胞只能分裂几次，而细胞系在实际中常常可以无限分裂。此外，原代细胞和永久细胞系之间的细胞代谢，例如葡萄糖消耗率、乳酸盐产率和谷氨酰胺消耗率也会不同。在使用细胞，特别是哺乳动物细胞时，过程优化的一个目标是力图提高在培养系统中的活细胞浓度积分，也就是由活细胞浓度曲线和时间曲线得到的积分。因为这个活细胞浓度积分与产物浓度，例如多肽浓度正相关(Renard，J.M等，BiotechnologyLetters,1988，10(2):91-96)。这个活细胞浓度积分能通过提高活细胞浓度，或通过延长过程时间而增加。当这些细胞长期在生物反应器中存活，也就是说当细胞长期具有活性或当稳定期变长时，这个过程时间可以延长。如果细胞活性低，就会在培养过程中出现很多死细胞，它们在发酵过程中溶解并释放细胞特异性的蛋白质。在培养中的特异蛋白质总含量使得提纯所需要的多肽变得更困难。关于活性的减少以及由此造成的短过程时间，有多种解释在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中，底物有一限制效应，这些细胞会由于这种物理发酵条件而开始凋亡或副产物的新陈代谢会累积在培养基里，对细胞产生毒性作用。一种在其中细胞活性可长时间保存，也就是说在其中稳定期得以延长的培养基或方法是值得期待的，因为在稳定期，已经达到了最大的活细胞浓度。稳定期的延长使得活细胞浓度积分增大并增加产物生成。另外一种用来提高活细胞浓度积分的参数是增加峰值细胞密度。通过使用更好的培养基和更好的培养方法，可以进一步提高峰值细胞密度。峰值细胞密度或细胞活性是细胞代谢的一项功能。当细胞代谢效率低时，细胞会向培养基中分泌如乳酸盐这样的能量充足的中间代谢物。细胞也会向培养基中分泌如铵这样有毒的中间代谢物。而铵又会对细胞生长、产率和产物质量，例如糖基化产生负作用。例如当细胞通过具有高糖酵解活性的葡萄糖进行代谢时，糖酵解中间产物的细胞内浓度会变化。这会对抗压稳定性、产率和生长所需要的各种基因表达谱产生影响(Verstrepen，K.J.等，TrendsBiotechnol.，2004，22(10):531-537)。在这样的条件下，这个活细胞浓度积分处于低水平，这又意味着产物生成的减少。在永久细胞系中已知的是，它们与原代细胞相比，具有退化的细胞代谢。大量在细胞系和原代细胞之间的原始代谢酶，基于此点进行了比较。在检测过的细胞系中，联系糖酵解与柠檬酸循环的酶不存在活性，而在原代细胞中存在(Neermann，J.和Wagner，R.，J.Cell.Physiol.，1996，166(1):152-169)。在大量连续哺乳动物细胞中，从葡萄糖到乳酸盐的流量高，而从丙酮酸盐到柠檬酸循环的流量低。葡萄糖通过这些细胞大部分转换为乳酸盐，接下来这些能量充足的乳酸盐被分泌到培养基，特别是一种细胞培养基中。除了葡萄糖之外，这些细胞系还以高速率把谷氨酰胺作为能量源进行代谢。因此，这两个底物，葡萄糖和谷氨酰胺，属于连续哺乳动物细胞培养基中最重要的底物。至今有多种改进永久细胞系细胞代谢的尝试。这些尝试力图对葡萄糖和谷氨酰胺在这个过程中加以限制，作为限制糖酵解流量的手段。通过这种底物限制，细胞的过度代谢应该会受到抑制，因此细胞也应该会产生更少的乳酸盐和铵(美国专利US2004/0048368A1;欧洲，A.F.等，Biotechnol.Bioeng.，2000，67(1):25-34)。限制谷氨酰胺对CHO细胞的生长和凋亡的影响进行了精确的检测。结果显示，在限制谷氨酰胺时，细胞生长率降低，但是细胞进入细胞凋亡的比率更少(Sanfeliu，A.和Stephanopoulus，G.，Biotechnol.andBioeng.，1999，64(1):46-53)。在专利WO98/41611中提出，把葡萄糖和谷氨酰胺浓度调整为一个低数值。这应该通过葡萄糖或谷氨酰胺浓度与氧消耗率的结合而产生。这种方法以复杂的规则以及补充底物为前提，因此这个过程特别在大规模条件下难于掌握。发酵罐故障的风险以及由此而引发的财务风险大。另一方面，欧洲专利EP0435911Bl指出，必须要在标准细胞培养基中增加谷氨酰胺来实现改进的细胞生长以及提高产物生成。在类似的方式下，利用批式流加或灌注的方式给动物细胞添加谷氨酰胺，对于生物制剂生产来说是必要的(Duvar，S.等，T画kript，2004，5(1):34-36)。就此而言，谷氨酰胺关于细胞代谢的作用，在这些文献中有相互矛盾的表述。Chen，K.等(Biotechnol.Bioeng.，2001，72:55-62)尝试通过同源重组来抑制乳酸盐的产生。乳酸脱氢酶基因的一个拷贝被钝化，因此细胞特异性的乳酸盐产率降低了50%。Irani,N.等(J.Biotechnol.，1999，66:238-246)把这个丙酮酸羟化酶基因克隆到了一种细胞系中。这样做的期望是，这些细胞因此向柠檬酸循环输送更多的丙酮酸盐，同时产生更少的乳酸盐。根据欧洲专利EP0338841A1所述，这个谷氨酰胺合成酶基因作为选择性标记物克隆到细胞中。这种做法的优点是，无需向培养基中添加外部的谷氨酰胺。细胞自身生成了谷氨酰胺并分泌出少量铵。Altamirano，C.等(Biotechnol.Progress,2000，16(1):69-75)在一种低蛋白质含量的培养基中，在分批操作条件下，把葡萄糖和谷氨酰胺替换为难于代谢的替代物，也就是半乳糖和谷氨酸盐。因此，这些细胞虽然产生了更少的代谢副产品，但细胞生长和产物生成也比在控制过程中更低。此后，有人建议发展一种"两阶段过程"细胞首先应该在葡萄糖中生长，然后在生产阶段把半乳糖作为碳源使用。(Altamimno,C等，Biotechnol.Bioeng.，2001,76(4):351-60;Altamirano，C等，J,Biotechnology,2004，110(2):171-9)。美国专利US4.049.494描述了一种无血清、化学定义的并可高温灭菌的培养基。这个培养基具有下述特性，它不含谷氨酰胺同时含有葡萄糖和丙酮酸盐。这个培养基是专门为带幼仓鼠肾细胞的病毒生产而研制的。与之类似，专利WO03/106661A2描述了一种用于培养哺乳动物细胞的底物组合。这个组合包含一种不含谷氨酰胺同时含有丙酮酸盐的培养基。这些底物组合应该可以降低乳酸盐和/或铵的生成。该专利显示，在一种培养基中的lmM丙酮酸盐和5.5mM葡萄糖的组合，促进了小鼠卵丘-卵母细胞复合体的成熟。让人感兴趣的是，结果显示，谷氨酰胺没有或只对这些细胞的成熟有少量影响(Downs,S.M.和Hudson,E.D.，Zygote,2000，8(4):339-51)。Hassel，T.和Butler，M.(J.CellScience,1990，96(Pt3):501-8)在一种培养基中用谷氨酸盐或2-酮戊二酸取代了谷氨酰胺，而细胞在这个培养基中进行了适应。在适应期之后，所使用的McCoy细胞产生了更少的乳酸盐和铵。要强调的是，这些细胞在开始时在微载体上生长，并且要么在以后的指数生长期，要么在稳定期中生长。在这些生长期中，这些细胞具有一个改变的代谢谱。此外，这些细胞需要针对不含谷氨酰胺的培养基进行预先适应。在一种专用培养基中，把谷氨酰胺从中除去。这些检测过的克隆产物无需进行细胞适应就可以轻松在这个专用培养基中生长。因此，铵生成减少了，同时产物增多了(Deer，R，禾口Cunningham,M.，GeneticEng.News,2000，20(7):42)。Kurano，N.等(JournalofBiotechnology,1990，15(1-2):113-28)用天冬酰胺取代了谷氨酰胺。在批式流加条件以及不含谷氨酰胺的条件下，把天冬酰胺添加到一种CHO培养物中，其中铵的产量减少了。此后，谷氨酰胺在培养基中由二肽、丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gin)或甘氨酰-谷氨酰胺(Gly-Gln)取代。结果显示，通过这种方法，细胞生成了更少的铵(Roth，E.等，invitrocellular&developmentalbiology,1988，24(7):696-698;Christie,A.和Butler，M.，J.Biotechnology,1994，37G):277-90)。谷氨酰胺由稳定的谷氨酰胺替代物L-丙氨酰-谷氨酰胺(GlutaMAX)替代，目的是检测这些物质对谷氨酰胺限制的影响(Sanfeliu，A.和Stephanopoulus，G.，Biotechnol.禾口Bioeng.，1999，64(1):46-53)。在欧洲专利EPl342780Al中，公开了另外一种应该可以降低葡萄糖消耗和乳酸盐生成的物质组合。与之对应，应该为这个培养基添加未结合的自由拧檬酸盐以及在一种络合剂中结合的柠檬酸铁。在一种培养基(灌注液)中，乳酸盐和丙酮酸盐以10:1的比例作为底物提供给大鼠心脏细胞。这其中使用了乳酸盐，是因为乳酸盐是心脏细胞的一种优选底物。结果可以显示，这个糖酵解过程由于添加了乳酸盐而被抑制(Depre，C.等，ActaCardiologica，1993，48(1):147-64;Ovchinnikov，IV和Kim,N,P.，UkrainskiiBiokhimicheskiiZhurnal，1985，57(4):72-5)。在一种化学定义的无蛋白培养基中，检测了琥珀酸盐、苹果酸盐、乳酸盐和丙酮酸盐对仓鼠胚胎的影响。结果可以显示，在培养基中的琥珀酸盐和苹果酸盐支持胚细胞的发育(Ain,R.禾口Seshagiri，P.B.，MolecularReproduction&Development,1997，47(4):440-7)。在这份出版物中，焦点指向了发育生物学，特别是胚细胞(原代细胞)的发育。有关报告指出，CHO细胞(Chinesehamsterovary，中华仓鼠卵巢细胞)不能把核糖、乳糖、蔗糖、甘油、乳酸盐、丙酮酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐或苹果酸盐作为能量来源使用(Faik，P.和Morgan,MJ.，Cellbiol.Int.Reports,1977，1(6):555-62)。以令人惊奇的方式发现的是，当按照本发明在这里选择了正确的浓度同时选择了正确的氨基酸浓度(谷氨酰胺、谷氨酸盐、天冬酰胺)和碳源时，恰恰是这些物质可以通过细胞，特别是通过CHO细胞作为底物使用。为这个培养基添加醋酸盐的原因是，这在类似的方式下像丁酸盐一样提高了细胞的产率(专利WO03/064630)。有人把葡萄糖与另外一个C2-碳源组合在一起，以便选择一种遗传修饰的酵母菌株(专利WO2004/099425)。不过在这份出版物中，关注的焦点是用于选择一种新酵母菌株的方法，而不是用于生物体培养的方法。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种提高产量的培养基，特别是一种细胞培养基、一种细胞培养物以及一种培养细胞或细胞培养物的方法，特别是用于从细胞或细胞培养物生产生物产品的方法，在这个方法中细胞培养物的整个活细胞浓度可以被提高，从而在整个处理过程中可以收获大量所需要的生物产品。此外值得期待的还有，这个培养基，特别是这个细胞培养基，可针对下述细胞使用这些细胞显示，在糖基化途径或能量代谢途径中，特别是在柠檬酸循环或糖酵解中，有一个或多个不能准确定位的代谢阻断，或者显示，在从培养基的代谢物到细胞的传输过程中和/或在细胞器之间存在阻断。因此本发明以这个技术问题为基础，提供一种用于培养细胞或细胞培养物的培养基，以及在糖基化途径或在能量代谢途径中细胞代谢阻断的培养基，例如在拧檬酸循环或糖酵解中，或者一种用于培养在从培养基的代谢物到这些细胞的传输过程中和/或在细胞器之间的细胞中有阻断的细胞培养基，在其中，细胞生长得以改进，或者代谢副产品的产量变少，其中与之对应的是，通过整个过程，可以获得大量所需要的生物产品。本发明以这个技术问题为基础，提供一种选择特异性细胞的方法，特别是遗传修饰和/或代谢改变，特别是优化的细胞的方法。以令人惊奇的方式发现的是，将有机酸或有机酸的盐、衍生物或复合物添加到培养基，特别是细胞培养基里，提高了细胞的生长速度和/或产率和/或降低了有毒代谢物的生成，上述物质选自以下组柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸其中，按照本发明优选的有机酸或有机酸的盐、或复合物选自以下组琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸。当把这些按照本发明所述的物质单独或相互混合或与其他糖混合或在无糖的情况下添加到一种培养基中，特别是一种细胞培养基时，特别是当把这些物质添加到一种含有或不含谷氨酰胺的培养基中，或者在一种含有或不含谷氨酰胺替代物，或具有高浓度天冬酰胺或含有天冬酰胺替代物，或含有高浓度谷氨酸盐或含有谷氨酸盐替代物的培养基时，可以实现按照本发明这方面所带来的提高产率和/或减少副产品的目标。本发明通过提供一种培养基，特别是一种细胞培养基、一种细胞培养物和一种根据本专利权利要求的方法，解决了本发明涉及的这个技术问题。本发明特别是通过提供一种培养基，特别是一种用于培养包含至少一种细胞的细胞培养物的细胞培养基，解决了本发明涉及的这个技术问题。其中这个培养基，特别是这个细胞培养基，至少含有一种物质，该物质选自以下组由柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异拧檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐、衍生物或者复合物。按照本发明，优选的是，这个培养基，特别是这个细胞培养基，至少含有一种物质，该物质选自以下组琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐或复合物。"本发明所使用的酸的盐"，理解为特指琥珀酸盐、苹果酸盐、a酮戊二酸盐、延胡索酸盐、草酰乙酸盐、异柠檬酸盐、草酰琥珀酸盐、酒石酸盐、已二酸盐或乳酸盐。对于"柠檬酸的盐"，理解为柠檬酸盐。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个细胞培养基，至少含有两种物质，该物质选自以下组从由琥珀酸、苹果酸、a酮戊二氨酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐或复合物，其中前述酸的一种或多种也可以作为盐或复合物存在。特别优选的是，这个组分扩展到了柠檬酸。优选的是，这个培养基含有乳酸。优选的是，这个培养基含有乳酸盐。优选的是，这个培养基含有至少一种乳酸复合物。优选的是，这个培养基含有一种乳酸衍生物。优选的是，这个培养基含有作为乳酸衍生物的丙氨酸和/或含有至少一种含丙氨酸的肽。优选的是，这个培养基含有丙氨酸和/或含有至少一种含丙氨酸的肽，其浓度为0.1g/1或更高，特别优选lg/l或更高，更优选5g/l或更高，最优选25g/l或更高。优选的是，这个培养基含有作为乳酸衍生物的丙酮酸盐和/或含有至少一种丙酮酸盐衍生物。优选的是，这个培养基含有丙酮酸盐和/或含有至少一种丙酮酸盐衍生物，其浓度为0.1g/1或更高，特别优选lg/l或更高，最优选5g/l或更高，最最优选25g/l或更高。在一个优选的实施例中，这些在上述描述中列举的浓度是最终浓度。在一个优选的实施例中，这些在上述描述中列举的浓度是各种物质的总浓度。优选的是，这个培养基含有乳酸、乳酸盐、至少一种乳酸复合物和/或至少一种乳酸衍生物，其浓度为0.1g/l或更高，优选lg/l或更高，特别优选5g/l或更高，极其优选25g/l或更高。优选的是，这个培养基含有琥珀酸。优选的是，这个培养基含有琥珀酸盐。优选的是，这个培养基含有一种琥珀酸衍生物。优选的是，这个培养基含有一种琥珀酸盐衍生物。在一个本发明优选的实施例中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个细胞培养基，具有所有上述酸或物质，其中也可以取代这些酸而使用相应的盐或复合物。特别是当诸如在糖基化途径或能量代谢途径，例如在柠檬酸循环或糖酵解中的阻断位置不能准确定位，或细胞在从培养基代谢物到细胞的运输过程中和/或在细胞器之间的细胞中有阻断时，有代谢阻断的细胞可以在这样的成分中特别进行培养。优选的是，这个培养基，特别是这个细胞培养基含有琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异拧檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸和乳酸，其中前述这些酸的一种或多种也可以作为盐或复合物存在。特别优选的是，这个组分扩展到了柠檬酸。这些按照本发明所述的物质适合长效培养生物体，特别是培养动物细胞，尤其是培养哺乳动物细胞。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有至少一种按照本发明所述的物质，其浓度为至少15mg/1,优选至少30mg/1,特别优选至少100mg/1，极其优选至少300mg/1,最优选至少1000mg/1。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有至少一种按照本发明所述的物质，其浓度为0.03g/l或更高，优选0.1g/l或更高，特别优选lg/l或更高，极其优选5g/l或更高，最优选25g/l或更高。在另外一个优选的实施例中，这个按照本发明所述的培养基是一个富集培养基。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是富集培养基含有至少一种按照本发明所述的物质，其浓度为0.2g/l或更高，优选lg/l或更高，特别优选5g/l或更高，极其优选25g/l或更高，最优选至少100g/1。在一个本发明优选的实施例中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有至少一种糖，特别优选的是一种单糖或二糖。优选的是，这个培养基含有一种糖。优选的是，这种糖选自以下组葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、核糖、葡萄糖胺、蔗糖、乳糖和它们的混合物。优选的是，这个培养基含有至少一种糖，其浓度为0.1g/l或更高，优选lg/l或更高，特别优选5g/l或更高，极其优选25g/l或更高，最优选100g/l或更高。优选的是，这个培养基含有半乳糖。优选的是，这个培养基含有半乳糖和第二种糖。优选的是，这个培养基含有半乳糖，其浓度为O.lg/l或更高，优选lg/l或更高，特别优选5g/l或更高，极其优选25g/l或更高，最优选100g/l或更高。优选的是，这个培养基含有葡萄糖，其浓度为100g/1或更低，优选的是25g/1或更低，更优选5g/l或更低，特别优选lg/l或更低，极其优选O.lg/l或更低。优选的是，这个培养基不含葡萄糖。在另外一个优选的实施例中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基不含糖。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有谷氨酰胺，其浓度为低于8mmo1/1，优选低于5mmo1/1，特别优选低于3mmo1/1，最优选低于2mmo1/1。这个培养基，特别是这个细胞培养基，也可以优选不含谷氨酰胺。在另外一个优选的替代选择中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有至少一种谷氨酰胺衍生物，也含有至少一种含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物，特别优选含谷氨酰胺的二肽。优选的是，这至少一种谷氨酰胺衍生物是一种含谷氨酰胺的肽。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有谷氨酰胺衍生物，其总浓度大于30mg/1，优选大于150mg/1，特别优选大于750mg/1，最优选大于2000mg/1。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有谷氨酰胺衍生物，浓度为0.05g/l或更高，优选0.2g/l或更高，特别优选0.8g/l或更高，最优选3.2g/l或更高。不同的培养基，特别是这个细胞培养基，也可以优选的不含谷氨酰胺衍生物。优选的是，这个培养基含有天冬酰胺。优选的是，这个培养基含有至少一种天冬酰胺替代物，特别是至少一种天冬酰胺衍生物。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有天冬酰胺或至少一种天冬酰胺替代物，特别优选含有至少一种具有高浓度的天冬酰胺衍生物，这就是说其浓度，特别是总浓度大于0.05g/l，特别优选大于0.15g/1，更优选大于0.3g/1，再优选大于0.6g/1。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基含有谷氨酸盐或至少一种谷氨酸盐替代物，优选的是至少一种具有高浓度的谷氨酸盐衍生物，这就是说其浓度为0.05g/l或更高，优选0.15g/l或更高，更优选0.3g/l或更高，特别优选0.6g/l或更高。在一个优选的实施例中，本发明涉及一种含有乳酸和半乳糖以及前述高天冬酰胺浓度的细胞培养基，同时不含谷氨酰胺。在另外一个特别优选的实施例中，本发明涉及一种细胞培养基，这个培养基含有乳酸、半乳糖和前述高浓度的天冬酰胺同时不含有谷氨酰胺，但含有至少一种含谷氨酰胺的肽。在另外一个优选的实施例中，本发明涉及一种含有乳酸和半乳糖，此外含有前述高浓度的谷氨酸盐同时不含谷氨酰胺的细胞培养基。在另外一个优选的实施例中，本发明涉及一种含有琥珀酸和前述高浓度的天冬酰胺或天冬酰胺替代物，同时不含谷氨酰胺的细胞培养基。按照本发明优选的是，这个培养基不含葡萄糖、不含谷氨酰胺并含有天冬酰胺以及乳酸和半乳糖。其中，天冬酰胺的浓度为0.05g/l或更高，优选0.15g/l或更高，特别优选0.3g/l或更高，最优选0.6g/l或更高。按照本发明优选的是，这个培养基不含葡萄糖和谷氨酰胺，并含有谷氨酸盐以及乳酸和半乳糖。其中，谷氨酸盐的浓度为0.05g/l或更高，优选0.15g/l或更高，特别优选0.3g/l或更高，更优选0.6g/l或更高。按照本发明优选的是，这个培养基不含葡萄糖并含有含谷氨酰胺的肽、乳酸和半乳糖。在另外一个特别优选的实施例中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基是一种富集培养基。优选的是，这个富集培养基乳酸含有乳酸、乳酸盐、至少一种乳酸复合物和/或至少一种乳酸衍生物，其浓度为lg/l或更高，优选5g/l或更高，特别优选25g/l或更高，极其优选100g/1或更高。优选的是，这个富集培养基含有半乳糖，其浓度为lg/l或更高，特别优选5g/l或更高，极其优选25g/l或更高，最优选100g/l或更高。优选的是这个按照本发明所述的培养基，特别优选富集培养基含有谷氨酰胺衍生物，其浓度为0.2g/1或更高，更优选1g/l或更高，特别优选5g/1或更高，最优选10g/1或更高。优选的是，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个富集培养基含有天冬酰胺或至少一种天冬酰胺替代物，特别优选的是含有至少一种天冬酰胺衍生物，其浓度为0.2g/1或更高，更优选1g/1或更高，特别优选2g/1或更高，尤其优选5g/1或更高，最优选10g/1或更高。优选的是，这个按照本发明所述的富集培养基含有谷氨酸盐或至少一种谷氨酸盐替代物，特别优选的是含有至少一种谷氨酸盐衍生物，其浓度为0.2g/l或更高，优选lg/l或更高，特别优选2g/l或更高，极其优选5g/l或更高，最优选10g/l或更高。在一个优选的替代方案中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基是一种基础培养基，优选一种摩尔渗透压浓度为240到360mOsmol/kgH20的基础培养基。在一个优选的替代方案中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基、一种基础培养基，优选一种摩尔渗透压浓度为280到350mOsmol/kgH20的基础培养基，最优选一种摩尔渗透压浓度为280到320mOsmol/kgH20基础培养基。在另外一个优选的替代方案中，这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基是一种富集培养基，优选一种摩尔渗透压浓度为150到1500mOsmol/kgH20的富集培养基。按照本发明优选的是，这个培养基不含血清。按照本发明优选的是，这个培养基含有血清。一种培养基特别是指一种细胞培养基。按照本发明优选的是，这个培养基是一种液体培养基，特别是一种液体细胞培养基。对于本领域技术人员而言，通过这些在培养基中上述成分浓度的给定优选最低数值，无需太多耗费就可以查明该成分的所选浓度范围和该成分的所选最大浓度。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的有机酸浓度最大为200g/1，特别优选100g/1，更优选50g/1，最优选25g/1。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的乳酸盐和/或乳酸衍生物，特别是丙氨酸和/或丙酮酸的浓度最大为200g/1，特别优选100g/1,极其优选50g/l，最优选25g/l。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的谷氨酰胺衍生物的浓度最大为60g/1，特别优选30g/1，更优选10g/1，非常优选5g/1，极其优选1.2g/1，最优选l.lg/1。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的天冬酰胺或天冬酰胺衍生物的浓度最大为60g/1，特别优选30g/1，更优选5g/1，极其优选1.2g/1，最优选l.lg/1。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的谷氨酸盐或谷氨酸盐衍生物的浓度最大为60g/1，特别优选30g/1，更优选5g/1，极其优选1.2g/1，最优选l.lg/1。按照本发明优选的是，按照本发明所使用的半乳糖的浓度最大为200g/1，特别优选100g/1，极其优选50g/1，最优选25g/1。本发明也涉及按照本发明所述的培养基，特别是按照本发明所述的用于培养包含至少一种细胞的细胞培养物的细胞培养基的应用。本发明也通过制备一种细胞或细胞培养物，解决了本发明涉及的这个技术问题。这个细胞或细胞培养物，按照本发明优选进行代谢优化，使得它在按照本发明所述的培养基和方法中可以进行培养。按照本发明，这个细胞或细胞培养物的特征是，这个细胞培养物在具有按照本发明所述物质的培养基中可以存活或者分裂，或者可以峰值细胞密度得以提高，或让稳定期得以延长，或让凋亡过程得以减慢，或让细胞代谢的副产品，例如铵或乳酸盐的产量得以降低。按照本发明优选的是，一种细胞或细胞培养物可以代谢乳酸以及乳酸的盐(乳酸盐)或乳酸复合物或乳酸盐替代物。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，优选可以分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是，一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖的培养基中存活，优选可以分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在了种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，并且可以代谢乳酸盐，优选可以分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，并且可以代谢乳酸盐，具有天冬酰胺的高消耗，可以在这样一种培养基中优选进行分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，并且可以代谢乳酸盐，具有谷氨酸盐的高消耗，可以在这样一种培养基中优选进行分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，并且可以代谢乳酸盐和半乳糖，可以在这样一种培养基中优选进行分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(integralofviablecells,IVC)，最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。按照本发明优选的是一种细胞或细胞培养物，它可以在一种不含葡萄糖和不含谷氨酰胺的培养基中存活，并且可以代谢乳酸盐和半乳糖，具有天冬酰胺或谷氨酸盐的高消耗，可以在这样一种培养基中优选进行分裂，特别优选可以达到更高的活细胞积分(IVC),最优选产生更少的代谢副产品，特别是乳酸盐或铵。本发明也通过提供一种用于培养一种包含至少一种细胞的细胞培养物的方法，解决了本发明涉及的这个技术问题。其中把这个细胞培养物带入到一种培养基中并在此进行培养，同时培养基的pH值在至少五分之一的培养时间内为pH7.2或更高。本发明也通过提供一种用于培养一种包含至少一种细胞的细胞培养物的方法，解决了本发明涉及的这个技术问题。其中把这个细胞培养物带入到一种按照本发明所述的培养基，特别是按照本发明所述的细胞培养基中并在此进行培养。优选的是，这个带入到这个按照本发明所述的培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基中的含有至少一种细胞的细胞培养物，用于生产生物产品。优选的是，这个生物产品从至少一种肽、至少一种蛋白质、至少一种病毒成分、至少一种细菌或由这些物质组成的混合物中选取。特别优选的是，这个生物产品至少是一种疫苗。优选的是，这个生物产品从这个细胞培养物和/或这个培养基，特别是这个按照本发明所述的细胞培养基中收获。优选的是，这至少一种细胞含有至少一种编码这个生物产品的基因。按照本发明，对于至少一种细胞的细胞培养物而言，理解为它可以在一种培养基，特别是一种细胞培养基中存活，并且优选在这个培养基中分裂或刺激细胞分裂。按照本发明优选的是，这至少一种细胞是一种真核细胞，特别优选一种真菌细胞，尤其是一种酵母菌细胞、一种植物细胞或一种动物细胞，例如一种昆虫或哺乳动物细胞，特别是一种人或啮齿动物细胞、一种仓鼠细胞或一种骨髓癌细胞，例如CHO、NSO、PERC6、HEK293或BHK21细胞。按照本发明同样优选的是，这至少一种细胞是一种原核细胞。按照本发明同样优选的是，这至少一种细胞是上述细胞中的一个后代。按照本发明优选的是，这至少一种细胞源自一种细胞系，特别是一种无限增殖化的细胞系和/或一种肿瘤细胞系。同样按照本发明优选的是，这至少一种细胞是一种原代细胞。针对按照本发明所述细胞的举例，在后文中会列举。按照本发明优选，这个细胞培养物是一种细胞群。按照本发明优选，这个细胞培养物可替换为一个细胞克隆。按照本发明，这个细胞培养物也可以包含多个细胞种类或细胞类型，优选的是，这个细胞培养物可以由多个细胞种类或细胞类型组成或者包含它们。按照本发明优选的是，这个细胞培养物可以由细胞组织组成或含有细胞组织。按照本发明优选的是，在按照本发明所述的方法中，这涉及到一种分批方法、一种分流批量方法、一种流加方法、一种连续方法或一种灌注方法。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养结束时为7.2或更高，更优选7.3或更高，特别优选7.4或更高，非常优选7.5或更高，极其优选7.6或更高，最优选7.7或更高。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在至少五分之一，更优选至少五分之二，特别优选至少五分之三，极其优选至少五分之四的培养时间内为pH7.2或更高，更优选7.3或更高，特别优选7.4或更高，非常优选7.5或更高，极其优选7.6或更高，最优选7.7或更高。-按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养过程中为7.2或更高，更优选7.3或更高，特别优选7.4或更高，非常优选7.5或更高，极其优选7.6或更高，最优选7.7或更高。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养过程中最小pH6.6和最大pH7.9，更优选最小pH6.7和最大pH7.9，最优选最小pH6.8和最大pH7.9。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养过程中最小pH6.6和最大7.5，更优选最小pH6.7和最大pH7.5，最优选最小pH6.8和最大pH7.5。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养过程中最小pH6.6和最大7.2，更优选最小pH6.7和最大pH7.2，最优选最小pH6.8和最大pH7.2。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在培养过程中从不大于pH9.0，非常优选从不大于pH8.5，更优选从不大于pH8.0，特别优选从不大于pH7.8，最优选从不大于pH7.7。按照本发明优选的是，这个培养基的pH值在按照本发明所述方法的培养过程中大于pH7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，特别优选大于pH7.5，极其优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。按照本发明优选的是，这个pH值在按照本发明所述方法的培养过程中，至少在按照本发明的方法的五分之四(4/5)的总培养时间内大于pH7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，特别优选大于pH7.5，极其优选大于pH7.6,最优选大于pH7.7。其中当用一种培养皿把细胞接种到这个生产阶段中时，开始计算按照本发明所述方法的总培养时间。也就是说，一种扩展这些供上述生产阶段使用的细胞的细胞培养的间期并不计算在总培养时间之内。按照本发明优选的是，这个pH值在按照本发明所述方法的培养过程结束时大于pH7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，特别优选大于pH7.5，极其优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。按照本发明优选的是，这个在按照本发明所述方法的pH值最大为7.8，更优选最大为8.0。本发明也涉及一种用于生产按照本发明所述的培养基，特别是一种按照本发明所述的细胞培养基的方法，其中至少一种物质从由柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐、衍生物或复合物中选取，并在水中或一种细胞培养溶剂或培养基溶剂，特别是一种细胞培养基溶剂，或一种常规的培养基，特别是细胞培养基中溶解。本发明也涉及一种用于生产按照本发明所述的培养基，特别是一种按照本发明所述的细胞培养基的方法，其中至少一种物质从柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐或复合物中选取，并在水中或一种细胞培养溶剂或培养基溶剂，特别是一种细胞培养基溶剂，或一种常规的培养基，特别是细胞培养基中溶解。本发明也涉及一种方法，特别是一种按照本发明所述的方法，该方法用于培养一种细胞培养物，用于从一种细胞群中选择一种遗传修饰、特别是代谢优化的细胞。其中a)—种作为细胞群的细胞在一种按照本发明所述的培养基经过至少一周培养，特别优选经过至少四周培养；接下来b)这个细胞被分离。这个被分离的细胞是一种活细胞。按照本发明优选的是，这个培养过程根据按照本发明所述的培养方法发生。以令人惊奇的方式显示出的是，在一种按照本发明所述的培养基中的培养过程中，可以选取和分离遗传修饰的新细胞。这种遗传修饰，通过细胞代谢的改变，特别是改进而显现出来。特别是这样一种具有改变的细胞代谢的细胞，与常规细胞相比，可以特别良好地生长，特别是在一种按照本发明所述的培养基中是如此。这个改变的细胞代谢通过遗传修饰而出现。因此，通过在一种按照本发明所述的培养基中的细胞群培养，可以分离出这种遗传修饰的细胞。按照本发明优选的是，这至少一个在步骤b)中分离的细胞在另外一个步骤c)中被转移到一种新的培养基中。按照本发明特别优选的是，这个新的培养基是一种新鲜的培养基。按照本发明特别优选的是，这个新的培养基是一种按照本发明所述的培养基。按照本发明特别优选的是，这个新的培养基是一种不按照本发明所述的培养基，也就是一种出自现有技术的培养基。按照本发明优选的是，这至少一个在步骤b)中分离的细胞在步骤c)中扩增。按照本发明优选的是，这个培养基在执行按照本发明所述方法时的pH值大于7.2，优选大于pH7.3，再优选大于pH7.4，还优选大于pH7.5，特别优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。按照本发明优选的是，这个培养基在执行按照本发明所述方法时在五分之四(4/5)的总培养时间内的pH值大于pH7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，还优选大于pH7.5，特别优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。其中当用一个培养皿把细胞接种到这个生产阶段中时，开始计算按照本发明所述方法的总培养时间。也就是说，一个扩展这些供上述生产阶段使用的细胞的细胞培养间期并不计算在总培养时间之内。按照本发明优选的是，这个培养基在执行按照本发明所述方法时在培养过程结束时的pH值大于7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，再优选大于pH7.5，特别优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。按照本发明优选的是，这个pH值最大为7.8,更优选最大为8.0。按照本发明优选的是，这至少一种细胞在至少一个时间段，特别优选至少2个时间段，最优选至少5个时间段内进行继代培养。按照本发明优选的是，这至少一种细胞要长时间进行传代培养，直到大于l:4的分流比例为止。本发明也涉及一种从按照本发明所述的方法中获得的所选细胞。按照本发明优选的是，这个细胞可以代谢作为碳源的乳酸盐。按照本发明优选的是，在把半乳糖作为唯一碳源时，这个细胞具有l比4分流比例。按照本发明优选的是，这个细胞在一种不含葡萄糖和谷氨酰胺的培养基中，具有至少l比4的分流比例。按照本发明优选的是，这个细胞的生长率(p)短于24小时，特别优选短于20小时，非常优选短于18小时。本发明也涉及一种含有至少一种按照本发明所述的细胞培养物。按照本发明优选的是，这个细胞培养可以代谢作为碳源的乳酸盐。按照本发明优选的是，在把半乳糖作为唯一碳源时，这个细胞具有l比4分流比例。按照本发明优选的是，这个细胞培养在一种不含葡萄糖和谷氨酰胺的培养基中具有至少1比4的分流比例。按照本发明优选的是，这个细胞的生长率(p)短于24小时，特别优选短于20小时，非常优选短于18小时。按照本发明，也有一种方法用于从至少一种细胞中获得生物产品，其中这至少一种细胞，按照一种按照本发明所述的方法进行培养，并从中获得这个生物产品。这些按照本发明的这些方面所发现的物质，特别是指琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸和乳酸。按照本发明非常优选的是，柠檬酸也属于这些物质。这些按照本发明的这些方面所需要的物质，特别是可以单独，尤其是其中的一些或所有物质可以相互组合后添加到一种培养基，特别是一种细胞培养基中。此外优选的是，与其他糖进行组合。这些合适的糖主要从像葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖和乳糖这样的单糖和二糖中选取。可以把这些糖中的一个或多个作为碳源选择。这些按照本发明的这些方面所需要的物质，可以在一种培养基，特别是一种细胞培养基中使用。其中，培养基含有谷氨酰胺或不含谷氨酰胺或含有例如浓度小于8mM的少量谷氨酰胺，或者这个培养基，特别是细胞培养基可以含有谷氨酰胺替代物，例如丙胺酰-谷氨酰胺或甘氨酰-谷氨酰胺，或者这个培养基，特别是细胞培养基可以含有多个含谷氨酰胺的肽的混合物。这些按照本发明的这些方面所需要的物质，可以优选在一种培养基，特别是一种细胞培养基中使用。其中，这个培养基含有天冬酰胺或天冬酰胺替代物。天冬酰胺或天冬酰胺替代物的浓度，可以优选如大于0.05g/1，更优选大于0.15g/1，特别优选大于0.3g/1，最优选大于0.6g/1。天冬酰胺替代物优选可以如含有含天冬酰胺的肽，例如但不限于Leu-Asn(Sigma，目录编号L0641)，或lle-Asn(Sigma，目录编号13635)，或Glu-Asn-Gly(Sigma，目录编号P514S)。这些肽原则上优选含有2个氨基酸或多于2个氨基酸，特别是3或4个氨基酸。这些按照本发明的这些方面所需要的物质，可以优选在一种培养基，特别是一种含有谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物的细胞培养基中使用。谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物的浓度，可以优选如大于0.05g/1，更优选大于0.15g/1，特别优选大于0.3g/1，最优选大于0.6g/1。谷氨酸盐替代物优选可以如含有含谷氨酸盐的肽，例如不受限的Asp-Glu(Sigma，目录编号A1916-250MG)，或Glu-Glu(Sigma，目录编号G3640-25MG)，Glu-His(Sigma，目录编号G6882-100MG)，Glu-Leu(Sigma，目录编号G7007-10MG)，Glu-Lys(Sigma，目录编号G5136-25MG)。这些肽原则上优选含有2个氨基酸或多于2个氨基酸，特别是3或4个氨基酸。本发明也通过提供一种培养基、一种细胞培养物或一种方法，用于延长过程时间、改进一种在含水的系统，按照本发明优选的是在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中，含有至少一种细胞的细胞培养物的细胞生长，解决了本发明涉及的这个技术问题。其中，这个细胞生长在一种培养基，特别是在一种细胞培养中，通过以上物质的添加而改善。本发明特别提供了一种培养基，一种细胞培养物和一种用于实现更高细胞生长或延长细胞活性或在含有至少一种细胞培养物中降低代谢副产品生成的方法。其中这是在一种含水的系统中，按照本发明优选的是，在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中，其中这个细胞生长在一种培养基，特别是在一种细胞培养中，通过添加上述有机酸而改善。按照本发明，这个培养基的特征是，培养基优选含有这其中的一种有机酸或盐。通过添加按照本发明所述的物质，细胞生长和/或产物生成得以提高，或培养时间得以延长和/或代谢副产品的生成得以降低。按照本发明，这个细胞培养的特征是，细胞培养在具有按照本发明所述物质的培养基中可以存活或者分裂或可以让峰值细胞密度得以提高，或让稳定期得以延长，或让凋亡过程得以减慢，或让细胞代谢的副产品，例如铵或乳酸盐的生成得以降低。其中，这个培养基可以优选含有低浓度的谷氨酰胺或不含谷氨酰胺，并含有高浓度的天冬酰胺，可以含有葡萄糖或其他糖，特别是不含葡萄糖或含有半乳糖。取代高浓度天冬酰胺，优选可以含有高浓度谷氨酸盐。按照本发明，细胞生长是这个细胞培养的生长，但根本上并不是由于至少一种细胞的至少一种细胞分裂所产生的。如果这个细胞生长提高了，这根本上是通过细胞分裂频率(细胞生长率，也称为p)的提高引起的。一种细胞培养物的稳定期是一种为本领域技术人员熟悉的一个细胞培养的生长曲线的典型生长期。这个生长曲线包含一个延迟期、一个指数生长期(logphase)、一个稳定期和一个死亡期。这些阶段的进程可以改变。这些阶段的进程和持续时间也由于例如通过在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中添加按照本发明所述的物质而受到影响。"活细胞浓度积分"，是超过一个确定的时间的活细胞浓度(Renard，J.M.等，BiotechnologyLetters,1988，10(2):91-96)。这个活细胞浓度积分，也就是特别指在一个过程的持续时间中，特别是在一种细胞培养的持续时间中所有活细胞的数量。这个活细胞浓度积分能通过细胞数量，或能通过过程持续时间改变。按照本发明优选的是，通过一种按照本发明所述的培养基或方法，实现活细胞浓度积分的增大。按照本发明优选的是，这个细胞生长得以提高或这个峰值细胞密度得以提高，或者稳定期得以延长或凋亡期得以减慢，或细胞代谢的副产品，例如铵或乳酸盐的生成得以降低。按照本发明优选的是，在按照本发明所述的方法中，这涉及到一种批量方法、一种分流批量(可反复分批操作)方法、一种流加方法、一种连续方法或一种灌注方法。按照本发明优选的是，在一种按照本发明所述的方法中，这个包含至少一种细胞培养物，用于生产一种生物产品。按照本发明优选的是，这个生物产品从至少一种多肽、至少一种蛋白质、至少一种病毒成分、至少一种病毒或它们的混合物中选取。按照本发明优选的是，这个生物产品至少是一种疫苗。>为生产一种所需要的生物技术产品，特别是一种多肽、蛋白质或一种疫苗，根据产物的不同，这要么使用原核细胞，例如细菌，要么真核细胞，例如酵母菌细胞或植物细胞，特别是动物细胞，优选哺乳动物细胞。这个用于生产产物的基因，可以在宿主细胞中在自然的方式下或重组体方式而出现。这个产物范围会从带少量氨基酸的肽到所有病毒中变化。特别在翻译后过程中的转运后发生修饰，特别是发生糖基化的复杂蛋白质中，优选使用动物细胞。在另外一个选择中，计划使用真核细胞，例如酵母菌。按照本发明优选的是，这个生物产品从细胞培养和/或从细胞培养上清液或从细胞中(细胞内)自行获得。按照本发明优选的是，这个生物产品也可以是这些细胞本身，例如可以是一种原代细胞、一种干细胞、一种原始细胞组织、一种组织成分或一种完整的组织。按照本发明优选的是，这至少一种细胞含有至少一种为这个生物产品编码的基因。这个基因可以是一种外源基因，也就是一种在自然的方式下在产物细胞中不存在的基因，或这个基因可以是一种在自然的方式下在产物细胞中存在的细胞特异性基因。这样一种细胞特异性的基因可以比如在这些产物细胞中活跃或不活跃的存在。当这个细胞特异性的基因不活跃时，这个基因会由于外部的调节而激活。按照本发明优选的是，一种用于培养至少作为细胞培养物的一种细胞的方法，其中这至少一种细胞在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中培养，在这里按照本发明优选在其细胞生长中按照一种按照本发明所述的方法进行刺激。按照本发明优选的是，一种用于从至少一种细胞中收获一种生物产品的方法，其中这至少一种细胞按照一种按照本发明所述的方法进行培养并从中收获这个生物产品。以令人惊奇的方式发现的是，恰恰是这些有机酸(柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二氨酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸)促进了细胞生长和/或多肽的生成，和/或抑制了代谢副产品的产生，特别是当人们在使用更高的浓度时如此。尤其是当在一种不含谷氨酰胺或含少量谷氨酰胺的培养基中使用这些组分或在一种具有高浓度天冬酰胺或天冬酰胺替代物的培养基中使用这些组分时，或在一种具有高浓度谷氨酸盐或谷氨酰胺替代物培养基中，或在一种具有含或不含葡萄糖的培养基中，或在一种含有半乳糖的培养基中使用这些组分时，会产生上述效果。在这方面，本发明与根据欧洲专利EP0435911Bl的叙述有所不同。在前述专利文献中提出，在培养基中使用更高浓度的谷氨酰胺(大于8mM)，而在本发明则要求优选一种降低的谷氨酰胺浓度，特别是一种不含谷氨酰胺的培养基。在欧洲专利EP0435911Bl中(第8页第14行和第14页)，琥珀酸盐、苹果酸盐、a酮戊二氨酸盐、延胡索酸盐和柠檬酸盐作为金属离子螯合剂这些组分在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中进行了检测。根据所实施的实验发现，柠檬酸盐是一种良好的金属离子螯合剂(第22页，权利要求5)。除了柠檬酸盐，这些其他检测过的有机酸没有展示出让人满意的结果。由于这个目标是在欧洲专利EP0435911B1中发现一种良好的金属螯合剂，因此在所检测的有机酸中使用了非常低的浓度(苹果酸盐为10.7mg/l，a酮戊二氨酸盐为5.9mg/1，琥珀酸盐为0.96mg/l，延胡索酸盐为0.88mg/l)。此外，在欧洲专利EPO435911Bl中，这些物质明确在一种谷氨酰胺浓度大于8mM的培养基中使用，因为这出现在该发明的说明书中。在欧洲专利EP0435911Bl的叙述和本发明之间的另外一个差别是把这些按照本发明所述的物质作为代谢的调剂物使用。基于此，这些物质可以在一种培养基，特别是在一种含糖和/或谷氨酰胺的细胞培养基中优选使用。这些有机酸也可以优选在一种培养基，特别是在一种不含糖和/或谷氨酰胺的细胞培养基中使用。在欧洲专利EP0435911B1中，这些细胞的主要能量源和碳源是葡萄糖和谷氨酰胺，这样这些物质在低浓度下就不具有作为代谢调节物的意义。以令人惊奇的方式发现的是，恰恰是最己知的细胞代谢副产品之一的乳酸盐，促进了细胞生长和活细胞浓度积分。大量出版物指出，乳酸盐是一种代谢副产品，甚至对于这些细胞而言有毒性。以令人^C奇的方式发现的是，乳酸盐对细胞生长有正面促进作用，当这个培养基，特别是这个细胞培养基，不含谷氨酰胺或含有少量谷氨酰胺，例如含有浓度小于8mM的谷氨酰胺，或当谷氨酰胺由含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物取代时，或当这个培养基含有天冬酰胺，特别是当天冬酰胺具有更高的浓度，例如天冬酰胺的浓度大于0.3g/1时，或当天冬酰胺由含天冬酰胺替代物取代时，或当这个培养含有基谷氨酸盐，特别是当谷氨酸盐浓度大于0.3g/l时，或当谷氨酸盐由含谷氨酸盐的替代物取代时，或这个培养基含或不含葡萄糖时，特别是当这个培养基不含葡萄糖时，特别是当这个培养基含有半乳糖时是如此。当这个培养基不含谷氨酰胺和含有除葡萄糖以外的其他糖作为碳源，特别是当这个培养基含有半乳糖时，乳酸盐的这个正面效果会特别明显。因此，本发明的一个优选方面涉及一种培养基，特别是一种细胞培养基，用于培养一种细胞，或用于收获一种多肽、一种蛋白质或一种疫苗(例如一种病毒)，源自生物体，特别是源自细胞或细胞培养物，优选的是源自真核细胞或细胞培养物，其中这些生物体在一种合适的培养基中培养，并且所需要的多肽或蛋白质或疫苗从这些生物体和/或培养上清液中收获并因此鉴定出，这个细胞生长通过在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中添加柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐或复合物而被刺激。本发明的第二个优选方面涉及一种方法，用于培养一种细胞或从生物体，特别是从细胞或细胞培养物，优选从真核细胞或细胞培养物中收获一种多肽、一种蛋白质或一种疫苗(例如一种病毒)，其中这些生物体在一种合适的培养基中进行培养，并且所需要的多肽或蛋白质或疫苗从这些生物体和/或培养上清液中收获并因此鉴定出，这些生物体与含有至少下述物质之一的物质的培养基相联系柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐或复合物。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基几乎不含谷氨酰胺，例如谷氨酰胺的浓度小于8mM，优选小于5mM，特别优选小于3mM，最优选小于2mM。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基，特别是向这个细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基和/或营养培养基不含谷氨酰胺。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基含有含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物。这个在培养基中含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物的浓度优选至少50mg/1，更优选至少250mg/1,特别优选至少500mg/1，最优选至少1000mg/1。这个在培养基中含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物的浓度优选至少0.05g/1，更优选至少0.2g/1，特别优选至少0.8g/1，最优选至少3.2g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基含有天冬酰胺或天冬酰胺替代物。这个在培养基中含天冬酰胺或天冬酰胺替代物的浓度优选至少0.05g/1，更优选至少0.15g/1，特别优选至少0.3g/1，最优选至少0.6g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基含有谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物。这个在培养基中含谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物的浓度优选至少0.05g/1，更优选至少0.15g/1，特别优选至少0.3g/1，最优选至少0.6g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基不含葡萄糖。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基含有半乳糖。这个在培养基中含半乳糖的浓度优选至少0.1g/1，更优选至少lg/l，特别优选至少5g/1，最优选25g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个乳酸盐浓度至少为0.1g/1，优选至少lg/1，特别优选至少5g/1，最优选25g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长剌激通过向培养基添加上述物质而得以实现，因为这个培养基和/或营养培养基不含谷氨酰胺或含谷氨酰胺的替代物。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基含有含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物。这个在营养培养基中含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物浓度优选至少0.2g/1，更优选至少lg/1，特别优选至少5g/1，最优选至少10g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基含有天冬酰胺或天冬酰胺替代物。这个在营养培养基中的天冬酰胺或天冬酰胺替代物浓度优选至少0.2§/1，更优选至少lg/1，特别优选至少5g/1，最优选至少10g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基含有谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物。这个在营养培养基中的谷氨酸盐或谷氨酸盐替代物浓度优选至少0.2g/1，更优选至少lg/1，特别优选至少5g/1，最优选至少10g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基含有乳酸盐或乳酸盐替代物。这个在营养培养基中的乳酸盐或乳酸盐替代物浓度优选至少1g/1，更优选至少5g/1，特别优选至少25g/1，最优选至少100g/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基不含葡萄糖。这个在营养培养基中的葡萄糖浓度优选最大100g/1，更优选最大25g/1，特别优选最大5g/1，最优选最大lg/1。按照本发明这个方面特别优选的生长刺激通过向培养基特别是向细胞培养基添加上述物质而得以实现，因为这个营养培养基含有半乳糖。这个在营养培养基中的半乳糖浓度优选至少lg/1,更优选至少5g/1，特别优选至少25g/1，最优选至少100g/1。本发明的第三个方面涉及一种细胞或一种细胞培养物，其特征是，这个细胞培养物在一种具有按照本发明所述物质的培养基中可以存活或者分裂或可以让峰值细胞密度得以提高，或让稳定期得以延长，或让凋亡过程得以减慢，或让细胞代谢的副产品，例如铵或乳酸盐的生产得以降低。根据通过向培养基，特别是向这个细胞培养基添加这些按照本发明所述的物质而引起的这个生长刺激，可以按照本发明优选在一种高细胞密度发酵中(在发酵中最高可达到的总细胞浓度，例如特别是>1x1()S细胞/ml，尤其在大规模下(工作体积>1L，例如30-20000L)是〉lxl(^细胞/ml)，可以提高峰值细胞密度，或延长稳定期，其中这些细胞活性保持的时间更长，这就是说，这个细胞浓度的积分会提高，因此产物产量会提高。这个按照本发明所述的方法原则上适合用于生产任意一种多肽、蛋白质或疫苗，例如生产病毒。不过优选的是，可以糖基化或不被糖基化的多肽。这些多肽可以是自然的，人多肽或人多肽的重组变异体。这个按照本发明所述的培养基优选适合用于生产具有翻译后修饰的多肽，特别是适合用于生产糖蛋白。在一种培养基，特别是在一种细胞培养基中添加的按照本发明所述的物质，可以促进或抑制确定的糖基化路径，因此促进了所需要的多肽或疫苗所需要的糖基化结构的产生。这些按照本发明所述的物质，可以单独或通过相互组合促进或抑制在细胞中确定的翻译后修饰，其结果是，在生产过程中，表达了这些所需要的多肽变异体或疫苗变异体。例如，这些按照本发明所述的物质可以提高蛋白质唾液酸化作用或蛋白质半乳糖苷化。通过使用这些按照本发明所述的物质和培养基，细胞培养过程中的pH值非典型地都在理论值的上边缘。在细胞培养过程中常见的是，过程的pH值从pH7.0到pH7.1开始，这些细胞通过其代谢活性分泌酸，特别是乳酸盐到培养过程中。因此，培养过程中的pH值通常都在酸性范围之内。以令人惊奇的方式确定的是，在使用按照本发明所述的细胞培养过程中，pH值由于细胞改变的代谢而向碱性方向移动。因此，无需联系理论就可以联系起来的是，这些细胞具有更好的代谢并且不再向培养过程分泌酸。相反的是，它们代谢酸。这是另外一个支持的证据，这些细胞通过这些按照本发明所述的物质和方法，具有另外一种不同代谢。作为结果，培养过程中的pH值在7.2之上(大于pH7.2或另外表述为碱性强于pH7.2)。这对于蛋白质糖基化，例如但不限于，对蛋白质半乳糖苷化或蛋白质唾液酸化作用有益。一些细胞内的糖基化酶在pH值大于7.2时更活跃，这样，它们就会以更高的速度对要生产的蛋白质进行糖基化。这是一个重要的过程特性，这通过按照本发明所述物质的代谢而引发。因此，本发明的第四个方面是一种使用前述的培养基的培养方法。在这个方法中，细胞培养过程的pH值要大于pH7.2，优选大于pH7.3，更优选大于pH7.4，再优选大于pH7.5，非常优选大于pH7.6，最优选大于pH7.7。这个按照本发明所述的方法，原则上适合用于培养原核细胞，例如细菌，或真核细胞，例如酵母菌或动物细胞。术语"动物细胞"包含非哺乳动物细胞和哺乳动物细胞。非哺乳动物细胞的例子是草地贪夜蛾、埃及斑蚊、白纹伊蚊细胞。不过本发明优选的生物体是哺乳动物细胞。这些哺乳动物细胞可以是原代细胞，不过优选永久细胞系。例如，这些适合的永久细胞系可以具有人的起源，例如PER-C6，人肝细胞(HepG2，HB8065)、人肺细胞(W138，ATCCCCL75)、人子宫颈癌细胞(HeLa，ATCCCCL2)。这些永久细胞系也可以具有动物起源，例如源自老鼠或仓鼠，例如SV-40永久猴肾细胞(COS-7，ATCCCRL1651)，犬肾细胞(MDCK)，猴肾细胞(CV1，ATCCCCL70)，非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL-1587)，幼地鼠肾细胞(BHK，ATCCCCL10)，中华仓鼠卵巢细胞(CHO-DG44，Urlaub和Chasin，Proc.Natl.Acad,Sei.USA，1980，77:4216，或CHO-DUKX，或ATCC编号为ATCCCCL61的CHO-Kl)，淋巴细胞(Jurkat淋巴细胞系)，布法罗鼠肝细胞(BRL3A,ATCCCRL1442)，小鼠乳腺肿瘤细胞(MMT060562，ATCCCCL51)，SP2/0细胞，骨髓癌细胞(例如NSO)，杂交瘤细胞和三元杂交瘤细胞。这些杂交细胞系可以源自包含人和老鼠在内的任意一个物种。上述细胞的这些后代同样适合在按照本发明所述的培养基和按照本发明所述的方法中进行培养。然而这些按照本发明优选的细胞，也可以源自一种哺乳动物细胞系而不是杂交瘤细胞.这些按照本发明特别优选的细胞系是CHO、NSO、PERC-6和BHK-21细胞系的所有变异体，其中这些细胞系通过一种外源核酸进行转变，这个外源核酸为其感兴趣的多肽进行编码。"外源核酸"意味着一种并非出自宿主细胞的核酸序列。这个外源核酸也可以与一种宿主细胞核酸同源，而这个核酸在宿主细胞中的这个位置上不能以正常的方式存在。这些按照本发明优选的细胞有能力在具有按照本发明所述的物质和方法的培养基中存活或分裂或提高峰值细胞密度，或延长稳定期或减慢凋亡期，或降低细胞代谢副产品，例如铵或乳酸盐的产量。这些细胞的代谢可以在培养基中通过按照本发明所述的物质或按照本发明所述的方法进行适应。这个适应可以通过细胞的定向分子生物学改变或通过细胞在按照本发明所述的培养基和方法中的适应而发生。术语"克隆"是指一种母细胞的后代，例如包括在上述细胞系之一的后代。当一种细胞具有另外的细胞内特性并与原始的母细胞不同时，会形成克隆。按照通常的方式，克隆会在母细胞的基因转移时，例如通过转染而形成。术语"代谢优化"是指，细胞代谢针对所需要的条件进行的适应或改变。细胞代谢的这种适应或改变可以通过定向遗传干涉到宿主细胞，克隆特定基因到细胞，或切断特定基因而实现。或当这些细胞在所需要的方法条件下和/或在培养基进行培养，使得这些细胞自身可以对这些已经改变的条件进行适应时，细胞代谢的这种适应或改变可以实现。通过在新条件下的培养，可以形成可选取并隔离以及遗传修饰的新细胞。这种遗传修饰通过一种改变，特别是细胞代谢的改进而显现出来。特别是具有一种所述改变的细胞代谢的细胞，与传统的细胞相比，在所希望的条件下生长得特别好，这是由于其代谢已经被优化所致。一种按照本发明所述的产物是在这些细胞中表达并从这个培养系统，也就是这些细胞和/或细胞培养基中收获的一种多肽、一种蛋白质或一种病毒，这可以是任何感兴趣的蛋白质。例如这可以是诊断的或治疗的蛋白质，像白介素、酶、多聚体蛋白或多聚体蛋白的亚基以及抗体或抗体片段。这个针对感兴趣的蛋白质的重组基因可以包含一个负责从宿主细胞中分泌感兴趣的蛋白质的信号序列。这个蛋白质可以从一个转基因的启动子或其自然激活的基因座以及一个在杂交瘤细胞中的免疫球蛋白基因座中表达出来。这个蛋白质也可以从一个宿主特异性启动子中表达出来。例如当一种CHO细胞用于生产蛋白质时，这个外源基因从一种CHO启动子中表达出来。这个产物也可以是一种疫苗，例如一种病毒或一种有能力在宿主细胞的帮助下自己进行复制的病毒样颗粒。这些要培养的细胞可以附着或在微载体上生长，不过细胞优选在悬液里生长。此外，这些细胞在含血清的培养基(例如在胎牛血清，FBS，也被称为FCS血清)中生长，但优选一种不含血清的"无血清"培养基。这些在无血清培养基中的细胞，会需要胰岛素和用于优化生长的铁转蛋白。铁转蛋白可以至少部分通过替代物，例如通过拧檬酸铁取代。这大多数细胞系需要一个或多个生长因子，包含作为生长因子的重组多肽或蛋白质。这种培养基可以含有多肽，但优选一种含低多肽或一种不含多肽或一种不含蛋白质的培养基。当这种培养基含有一种多肽时，优选一种重组方式生成的多肽。这个培养基可以含有出自动物源中的蛋白胨，但优选源自酵母菌的蛋白胨，特别优选源自植物中的蛋白胨。尤其是使用不含蛋白胨并完全由化学定义的培养基。对于"培养基(Nahrmedium)"，也被本领域技术人员称作"培养基(Kulturmedium)"或"细胞培养基(Zellkulturmedium)"，都理解为一种用于保存和/或培养含有至少一种细胞培养物的培养基(Medium)。按照本发明，一种液体培养基，也被称作培养液是优选的培养基。这里使用术语"培养基(Nahrmedium)"概念作为所有培养基的总称。培养基包括但不限于，术语"基础培养基(Basalmedium)"(Kulturemedium)、"富集培养基(ZufUtterungsmedium)"(Feedmedium)禾口"灌注培养基(Perfusionsmedium)"。培养基也是一禾中含有细胞所需要的营养成分的液体。这些按照本发明所述的物质，可以在一种培养基中与其他细胞的营养成分共同出现。但也可能的是，这些按照本发明所述的物质并不在一种培养基中出现，而是在另外一种溶液，例如从一种原溶液中从细胞外添加到在培养过程中含或不含细胞的一种培养基中。因此，这些按照本发明所述的物质并不直接地，而是间接地，通过培养基，特别是一种细胞培养基与细胞取得联系。就此而言，一种按照本发明所述物质与细胞相联系的方法同样是本发明的一部分。"Nahrmedium"、"Kulturmedium"或"Basalmedium"是指一种培养基，特别是一种促进细胞生长和/或细胞活性和/或产物生成的培养液。优选的是这个培养基为液态。按照本发明优选的是使用一种高细胞密度细胞培养基，通过它为在一种特定培养期中活细胞浓度至少为1x105/ml,优选至少1x106/ml的动物细胞群提供所需要的营养成分。为这些高密度细胞提供营养成分的培养基，通过下述所示至少一种氨基酸，通常是多个氨基酸甚至含胱氨酸的所有氨基酸。至少一种能量源，通常是一种碳源，例如葡萄糖、无机盐，维生素，例如维生素C和/或维生素E，微量元素，也被定义为具有微摩尔浓度的无机成分；缓冲液，最多4个核苷或核苷酸、抗氧化剂以及谷胱甘肽；脂类，例如胆固醇、磷脂酰胆碱或脂类前体，例如胆碱或肌醇。一种高密度细胞培养基，优选加入至少一种上述物质并可以含有高浓度的上述成分。这个培养基，特别是这个细胞培养基，可以选择补充下述所有成分中的一种或多种a)激素和其他生长因子，例如IGF-1、胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子b)盐和缓冲液，例如钙、镁和磷酸盐c)核苷和碱基，例如腺苷、胸腺嘧啶核苷、次黄嘌呤d)蛋白质和组织水解产物。可以为其添加按照本发明所述物质的这个培养基的配方，可以优选符合已公开的配方中的一种。这个Medien(培养基)配方可以优选在已经公开的方式下使用，但这些配方经常被修改，并根据所使用细胞的要求而进行适应。已公开的培养基配方的例子是，RoswellParkMemorialinstitute(RPMI)1640Medium、L-15陽Medium、Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)，Eagle的MinimalEssentialMedium(MEM)，Ham的F12Medium或Iscove改进的DMEM。这些公开的培养基配方可以单独或以任意一种混合比例混合作为基础培养基粉末使用。可以为其添加按照本发明所述物质的配方表述，可以特别优选一种商业化培养基，其配比未公开，例如但不限于GIBCO的CD-CHO培养基，Sigma的Ex-Cell325PFCHO培养基(目录编号14340C)。"营养培养基(Feedmedium)"或"富集培养基(ZufUtterungsmedium)"是一种在培养细胞时添加到培养系统中的培养基，也就是说，在这些细胞与另外一些培养基，如培养基(基础培养基)取得接触之后，富集培养基被添加到培养系统中。营养培养基包含促进细胞生长和/或细胞活性和/或产物生成的物质。通过添加营养培养基，可以延长过程时间，因为这些细胞活性可以保持更长的时间。这些营养培养基可以含有一个或多个能量来源，具体而言例如葡萄糖这样的碳水化合物。葡萄糖可以包含在营养培养基中，或从另外一种原溶液中个别饲养并向这个培养系统中添加。这个营养培养基可以含有一个或多个氨基酸。营养培养基可以只包含必需氨基酸或非必要氨基酸，或者也可以含有两种氨基酸的混合物。这个营养培养基可以含有谷氨酰胺或不含谷氨酰胺或含有谷氨酰胺替代物或含有由谷氨酰胺和含谷氨酰胺的替代物组成的混合物。谷氨酰胺也可以在这个营养培养基中与其他物质组合，或从一个原溶液中个别饲养，作为单一物质添加到这个培养系统中。营养培养基可以只有基础培养基的单倍浓度，但优选具有比单倍浓度更高的营养培养基，例如基础培养基浓度的两倍或更高倍数。营养培养基的配方与基础培养基的类似，这就是说，通常这些营养培养基含有在基础培养基存在的同样物质或其中的一部分。营养培养基可以通过其无机成分与基础培养基区分开。营养培养基可以是诸如一种不含盐的基础培养基，或一种含低盐的基础培养基的变异体。营养培养基也可以含有在基础培养基配方中不存在的其他物质。在分子中含有D-或L-谷氨酰胺，特别是L-谷氨酰胺的物质，被认为是"含谷氨酰胺的物质"、"谷氨酰胺衍生物"或"含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物"。这个分子可以以不同的方式含有D-或L-谷氨酰胺，例如但不限于，谷氨酰胺可以与另外一种物质共价结合。由D-或L-谷氨酰胺组成的肽或寡肽(Roth，E.等，invitrocellular&developmentalbiology,1988，24(7):696-698)，特别被认为是"含谷氨酰胺的物质"、"谷氨酰胺衍生物"或"含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物"。例如可以用以谷氨酰胺为基础的二肽，例如丙胺酰-谷氨酰胺(Ala-Gin)或甘氨酰-谷氨酰胺(GIy-Gln)替代谷氨酰胺(Christie,A.和Butler，M.，JournalofBiotechnology,1994，37(3):277-90;Sanfeliu，A.和Stephanopoulus，G.，Biotechnol.undBioeng.,1999，64(1):46-53;(Kurano，N.等，J.Biotechnology,19卯，15:113-128)。"含谷氨酰胺的物质"这个概念也在专利WO03/106661中(第7页，第1行)进行了描述。在分子中含有D-或L-天冬酰胺，特别是L-天冬酰胺的物质，被认为是"含天冬酰胺的物质"、"天冬酰胺衍生物"或"含天冬酰胺的天冬酰胺替代物"。这个分子可以以不同的方式含有D-或L-天冬酰胺，例如但不限于，天冬酰胺可以与另外一种物质共价结合。由D-或L-天冬酰胺组成的肽或寡肽，特别被认为是"含天冬酰胺的物质"、"天冬酰胺衍生物"或"含天冬酰胺的天冬酰胺替代物"。例如不受限制的Leu-Asn(Sigma，目录编号L0641)，或lle-Asn(Sigma，目录编号13635),或Glu-Asn-Gly(Sigma，目录编号P5148)。这个肽原则上可以含有2个或多于2个的氨基酸。在分子中含有D-或L-谷氨酸盐，特别是L-谷氨酸盐的物质，被认为是"谷氨酸盐替代物"、"谷氨酸盐衍生物"或"含谷氨酸盐的谷氨酸盐替代物"。这个分子可以以不同的方式含有D-或L-谷氨酸盐，例如但不限于，谷氨酸盐可以与另外一种物质共价结合。由D-或L-谷氨酸盐组成的肽或寡肽，特别被认为是"谷氨酸盐替代物"、"谷氨酸盐衍生物"或"含谷氨酸盐的谷氨酸盐替代物"。例如但不限于，Asp-Glu(Sigma，目录编号A1916-250MG)，Glu-Glu(Sigma，目录编号G3640陽25MG)，Glu-His(Sigma，目录编号G6882-100MG)，Glu-Leu(Sigma，目录编号G7007誦10MG)，Glu-Lys(Sigma，目录编号G5136-25MG)。这个肽原则上可以含有2个或多于2个的氨基酸。在分子中含有D-或L-乳酸盐，特别是L-乳酸盐的物质，被认为是"乳酸盐替代物"、"乳酸盐衍生物"或"含乳酸盐的乳酸盐替代物"。例如但不限于，乳酸亚铁(ll)水合物(Sigma，目录编号44953)，或乳酸猛(ll)三水合物(igma，目录编号13227)或乳糖。这个分子可以以不同的方式含有D-或L-乳酸盐，例如但不限于，乳酸盐可以与另外一种物质共价结合。例如但不限于，(+)D-乳酸乙酯(Sigma，目录编号69796)。乳酸盐衍生物也是可以在细胞内容易转换为乳酸盐的分子，例如但不限于，丙酮酸盐或丙氨酸。在这种情况下，可以把丙酮酸盐添加到培养基中。细胞外丙酮酸盐，容易运送到这个细胞中，并通过丙酮酸盐-脱氢酶转换为乳酸盐。至于丙氨酸，细胞外的丙氨酸可以运送到这个细胞中并通过在丙酮酸盐间期的丙氨酸转氨酶转换为乳酸盐。这对于含丙氨酸的肽来说也是如此，因此把含丙氨酸的肽同样定义为"乳酸盐衍生物"。术语"分流比"也被称为"稀释因子"，是一个用于表达两种液体之间的分流比的标准。当要把两种液体相互混合在一起时，为了达到一个目标浓度，这个溶液要按照一个分流比相互混合在一起。通过下面的例子可以解释清楚分流比按照培养要求，在一个培养皿中接种了细胞浓度为2x10Vml的细胞培养基并让其生长3天。在第三天，测得这个细胞浓度为20xl0Vml。这个培养结果要通过新鲜的培养基进行稀释，使得目标灌注浓度重新达到2x105/ml。在这种情况下，必须要把这些成熟的培养物(接种物)以l:10的比例用新鲜的培养基进行稀释。当工作体积应该在新的培养中为ll时，必须要加入100ml接种物和900ml新鲜的培养基。在这种情况下，就得到了1:IO的分流比例。所有细胞在其中进行培养以生成一种所需要的多肽、蛋白质或一种所需要的疫苗的过程变异体，原则上适合针对本发明使用。不过一种按照本发明优选的方法是高浓度细胞方法。这个高浓度细胞培养方法被定义为一种在培养的特定阶段内的活细胞浓度至少为1x105/ml，优选的是至少为lx10Vml的方法，其中这个培养可以从一种单细胞或从另外一种细胞培养物或从一种接种物中扩展。按照本发明优选的方法是连续培养(kontimiierlicheKultur—)、流加(Fed—batch—)、分批(Batch—)、灌注(Perfusion)或分流批量(split—batch—Verfahren)方法。这个培养主要在分批方法中实现，其中所有用于细胞培养的成分，在过程开始时被放在培养瓶里。在分批方法中，把这些细胞接种到一合适的培养基中并在一定的培养时间后收获。接下来，从培养中把这个所需要的产物，例如一种多肽分离出来。一种按照本发明特别优选的方法是流加方法，其中在接种和过程结束之间的这些细胞与另外一种培养基，例如一种营养培养基建立了联系。例如但不限于，流加过程从一种基础培养基开始。在基础培养基中接种这些细胞。在一段时间后，例如但不限于，在接种后的l-4天之后，这个培养物与另外一种培养基建立了联系，例如这个培养基可以是一种营养培养基(富集培养基)。可以通过分批地，间隔地或连续地向这个细胞培养中添加这个富集培养基。因此，这个培养物的体积会在培养中增大。另外一种按照本发明适合的培养方法是灌注，在其中把在一种培养基中的这些细胞在一个生长期之后利用其他新鲜的培养基，例如利用灌注培养基进行添加，其中这个消耗的带或不带细胞的培养基从这个过程中分离。灌注培养基可以与培养基(基础培养基)区分开来，或相同的基础培养基也可以作为灌注培养基使用。在灌注方法中，这些细胞首先在一种基础培养基接种。在细胞培养过程中，这些细胞(生物量)从细胞培养物(细胞悬浮液)中分离，一方面这些消耗的培养基从过程中分离，另一方面通过这个新鲜的培养基为这些细胞提供了新的营养成分。当在这个过程中培养系统中如果细胞被保留，把这称为"灌注"。当在这个过程中，这个系统中如果细胞从消耗的培养基除去，把这称为"连续方法"。在灌注过程中，这些细胞也在特定的时间段内从培养系统中除去以获得最大细胞浓度。本领域技术人员也把这个过程称为"析出"(bleeding)。这个细胞分离通过不同的技术实现，其中一些技术间接促进这个细胞分离过程。针对一些可能的细胞分离方法的例子是过滤、细胞包囊、在微载体上的细胞粘附、细胞沉淀或离心分离。另外一种按照本发明合适的方法是这个带或不带添加细胞的分流批量方法(可以重复分批操作)。在这个方法中，在一个生长期之后收获一部分细胞悬浮液，而剩下的细胞悬浮液则在发酵罐中作为接下来的分批操作的接种物保留了下来。用这个接种物，然后用新鲜的培养基重新填充这个发酵罐直到达到所需要的工作体积为止，然后开始第二个批量操作。在上述的操作方式中，为进行离线测量而从培养系统中除去的样本，与这个描述的方法没有关系。这只是用来更好地理解或监控这个过程。术语"收获"或"细胞收获"是上游过程的批处理生产的结束标志。在分批和流加过程中，这个上游过程只通过一个收获结束，而这在分流批量、灌注和连续方法中可以有多个收获。根据所选操作方式，这个细胞培养过程(上游过程)包含一个延迟期、一个指数生长期、一个稳定期和一个凋亡期。这个发酵过程可以在这个生长期的一个时期中结束。优选的是，这个发酵过程在稳定期或凋亡期结束。在上游过程结束时，这些细胞从这个悬浮液中分离出来。在这里，把这个细胞分离过程称为"收获"或"细胞收获"。在细胞收获之后，另外的过滤步骤可以分离这个产物。术语"接种"是指向一种新的培养系统(例如一种生物反应器和一种合适的培养基，特别是一种细胞培养基)接种细胞。这个接种物，也就是这些细胞或细胞悬浮液，在之前针对这个目的进行了准备。通常，这些要接种的细胞在实际的生产过程之前进行扩展，这样就有足够的细胞可以为这个新的培养系统接种所需要的细胞浓度。"细胞生长"是至少在一个培养期中活细胞浓度的增加。术语"细胞活性"是指活细胞浓度与细胞总浓度之间的比例，其中后者也包括死细胞。这个比例可以在任何一种方式下进行计算。其中一种方法是用染料标记这些细胞，而在活或死细胞上的染料会有差别。一个用于分辨活和死细胞的例子是使用台盼蓝染料。接下来，就可以数出所标记的细胞并确定活和死细胞的数量。然后计算出这个细胞活性，在其中就可以计算在活细胞数和细胞总数之间的比例。术语"摩尔渗透压浓度"是一个在水溶液中溶解颗粒渗透压的单位。这个溶解颗粒含有离子以及不能电离的分子。摩尔渗透压浓度以溶解在lkg水中(1mOsmol/kgH20在38。C时相当于19mmHg的渗透压)的渗透压的活性微粒的浓度表示。术语"摩尔渗透压浓度"是指，在ll溶液中的颗粒数量。因此，在培养基中存在并且提高溶液的摩尔渗透压浓度的物质是蛋白质、肽、氨基酸、不能代谢的聚合物、维生素、离子、盐、食用糖、代谢物、有机酸和脂类等等。术语"pH值"是摩尔氢离子活性aH+的以10为底的负对数(pH=-logaH+)。pH值小于7.0的溶液显酸性，pH值为7.0的溶液为中性。在pH值大于7.0的溶液中，显碱性。当要相互比较两个溶液的pH值时，具有更高pH值的溶液与具有相对更低的pH值相比，定义为"碱性更强"。例如溶液1的pH值为6.8，溶液2的pH值为7.0。在这种情况下，溶液2与溶液1的pH值相比碱性更强，pH值可以通过不同的方法进行测定。例如但不限于，一个生物反应器的pH值可以在线通过一个pH电极测量。另外一种确定培养液pH值的方法是离线取样，并通过外置pH电极测量pH值。其他有利的设计方案在从属权利要求中体现。根据下面的示例，可以更清楚地解释本发明。图1:在常规情况下，在一种按照本发明所述的不含葡萄糖和谷氨酰胺的培养基(Routine-Stammhaltung)中，代谢优化的CHO细胞的生长数据。图2:在按照本发明所述的培养基中与在对照流加方法中相比的细胞的生长曲线。图3:在一种流加培养中乳酸盐的浓度变化。图4:在一种流加培养中铵的产量变化。图5:—种培养过程中pH值的变化。这些pH值在离线状态下测量，并且在培养过程中，没有调整这个过程的pH值。图6:在一种具有按照本发明所述的基础培养基和不同组合的营养培养基的流加培养中，野生细胞(未进行代谢优化)的生长情况。图7:在一种具有按照本发明所述的基础培养基和2种不同的营养培养基的流加培养中，代谢优化的细胞的生长情况。图8:在一种具有按照本发明所述的含有和不含琥珀酸钠的培养基的流加培养中，代谢优化的细胞的生长情况。图9:在一种具有按照本发明所述的含有和不含琥珀酸钠的培养基的流加培养中，乳酸盐浓度的变化情况。具体实施方式材料和方法细胞培养条件细胞在液氮的气相中保存。一到两个安瓿在37。C预热的培养基中解冻并送到转瓶、摇瓶或T型瓶中。在第一种培养阶段中，根据克隆的情况，会出现一次培养基变化。细胞根据克隆的情况，会每两天或每三天或每两三天会放入到新的培养基中进行分离，这就是说，细胞悬浮液的一部分从培养过程中取出，而细胞悬浮液的一小部分作为下次培养的接种物继续使用。这个接种物通过新鲜预热过的培养基添加。细胞在37。C时在一种培养箱中的C02气体中孵育。一种孵育细胞的替代选择是在孵化室中在37°C下进行培养。在这种方式下，细胞在几次传代培养中能被保持住。其中传代是指持续两到三天的培养时间。在不同的时间点下，从培养基(Stammhaltung)中获取细胞悬浮液并作为接种物供实验使用。这个实验在不同的培养系统，例如在转瓶、T型瓶、摇瓶、培养试管或在受控的生物反应器中进行。对于这个实验，使用了一种表达抗体的CHO细胞系。这个在细胞上清液中的产物浓度(抗体浓度)通过ELISA确定。Sigma公司的一种CHO培养基(CR1020，Lot:64K2403)作为培养基(基础培养基)供这个实验使用。这是一种无血清和无蛋白质培养基。这涉及一种已生产完成并无菌过滤的培养基。这个实验通过分批方法或通过流加方法实现。当在流加方法中实现时，这个过程首先在这个分批方法中在上述基础培养基中开始，细胞在这种方式下培养了1-4天。在1-4天之后，这些细胞通过一种营养培养基进行了补充，这就是说，这个过程转换为流加。补料在有规则的间隔下实现。在流加实验中，使用了HyQ公司的一种无蛋白质和无血清营养培养基(R05.2附录，目录编号SH30584.04，LotNr:APF21457G)。所有按照本发明使用的物质(化学物质)，从Sigma公司得到并由此制备原溶液。从这些原溶液中，把这些物质添加到培养试管中以获得所需要的最终浓度。这些制备好的不同培养试管，最后用抗体产生的CHO克隆，以目标浓度(l-3xl05/ml)进行接种。为此，计算出接种物的相应数量，并离心分离出接种物细胞悬浮液所需要的数量。在不含按照本发明所述物质的情况下，这个细胞团最后获得了新鲜培养基的相应体积(Sigma，CR1020，Lot:64K2403)。因此，在这些需要检测的细胞悬浮液中，调整了这个所需要的接种的细胞浓度。这个如此制备的细胞悬浮液，按照比例装入装有按照本发明所述物质的培养试管。这些培养试管在37。C下并在8%的C02气体中振荡孵育。这些培养试管，在分批方法或在流加方法中培养8-11天。按照培养的要求，在有规则的间期，例如每天或每隔三天从培养瓶中提取试样测量离线变量。从这个试样中，测得了代谢变量和细胞浓度。这些细胞浓度和细胞活性，通过一个CeDex设备进行了测量。这些代谢变量(葡萄糖、乳酸盐、谷氨酰胺和铵)通过一个分析器(BioProfile100)进行了确定。实施例l:使用按照本发明所述物质的分批实验按照本发明所述物质的如下最终浓度，在一种培养基中在接种之后设定在培养基中琥珀酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中苹果酸的最终浓度为1g/1在培养基中a酮戊二酸的最终浓度为1g/1在培养基中延胡索酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中酒石酸的最终浓度为0.5g/1在培养基中己二酸的最终浓度为0.5g/1在培养基中乳酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中鸟氨酸的最终浓度为1g/1在培养基中瓜氨酸的最终浓度为1g/1在培养基中丙酮酸钠的最终浓度为0.5g/1这些按照本发明所述的物质，在分批方法中进行了检测。这个培养基或基础培养基(Sigma公司的无血清和无蛋白质CHO培养基CR1020，Lot:64K2403),含有浓度为4.7g/1的葡萄糖和浓度为1.5mM的谷氨酰胺(表1)。表l:使用按照本发明所述物质的分批实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>实施例2:使用按照本发明所述物质的流加实验按照本发明所述物质的如下最终浓度，在一种培养基中在接种之后设定在培养基中琥珀酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中苹果酸的最终浓度为1g/1在培养基中a酮戊二酸的最终浓度为1g/1在培养基中延胡索酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中酒石酸的最终浓度为0.5g/1在培养基中己二酸的最终浓度为0.5g/1在培养基中乳酸钠的最终浓度为Ig/1在培养基中鸟氨酸的最终浓度为1g/1在培养基中丙酮酸钠的最终浓度为0.5g/1作为与实施例1的差别，这些按照本发明所述的物质在流加方法中进行了检测，从每个要检测的物质中，用两个相互独立的培养试管进行了接种(n=2)。这个培养基(Sigma公司的无血清和无蛋白质CHO培养基，CR1020，Lot:64K2403),含有浓度为4.7g/1的葡萄糖和浓度为0.7mM的谷氨酰胺。这个使用的营养培养基是从HyQ公司(R05.2附录，目录编号SH30584.04,LotNr:APF21457G)获得的。这个营养培养基不含谷氨酰胺(表2)。表2:使用按照本发明所述物质的分批实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>从所选试样中，这个产物浓度(抗体浓度)在上清液中通过ELISA确定(表3)。表3:所选物质的最终产物的结果。对照的绝对值使用了100%。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>实施例3:在所有使用的培养基中，含有按照本发明所述的物质并不含谷氨酰胺的流加实验按照本发明所述物质的如下最终浓度，在一种培养基中在接种之后设定对照，无添加物在培养基中琥珀酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中a酮戊二酸的最终浓度为1g/1在培养基中乳酸钠的最终浓度为1g/1这些按照本发明所述的物质，在流加条件下进行了检测。这个培养基(Sigma公司的无血清和无蛋白质CHO培养基，CR1020,Lot:64K2403),含有浓度为4.7g/1的葡萄糖并且不含谷氨酰胺。这个使用的营养培养基是从HyQ公司(R05.2附录，目录编号SH30584.04,LotNr:APF21457G)获得的。这个营养培养基不含谷氨酰胺(表4)。表4:使用在不含谷氨酰胺的培养基中按照本发明所述物质的流加实验结果。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>实施例4:使用按照本发明所述的物质和含谷氨酰胺的谷氨酰胺替代物的流加实验。按照本发明所述物质的如下最终浓度，在一种培养基中在接种之后设定对照，无添加物在培养基中琥珀酸钠的最终浓度为1g/1在培养基中CX酮戊二酸的最终浓度为1g/1在培养基中乳酸钠的最终浓度为1g/1这些按照本发明所述的物质，在流加条件下进行了检测。这个培养基(Sigma公司的无血清和无蛋白质CHO培养基，CR1020,Lot:64K2403),含有浓度为4.7g/1的葡萄糖和浓度为4mM的谷氨酰胺。这个使用的营养培养基是从HyQ公司(R05.2附录，目录编号SH30584.04,LotNr:APF21457G)获得的。这个营养培养基使用了3g/1的丙胺酰-谷氨酰胺(Ala-Gin)和3g/1的甘氨酰-谷氨酰胺(GIy-GLn)。这个营养培养基不含谷氨酰胺(表5)。表5:使用按照本发明所述的物质和谷氨酰胺衍生物的流加实验结果。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>实施例5:在培养基(Stammhaltung)中，利用在一种无葡萄糖和无谷氨酰胺培养基(基础培养基)中的按照本发明所述的物质而进行的代谢优化的细胞的程序化培养为此制备了一种不含葡萄糖和谷氨酰胺的商业化培养基。这个培养基按照表6，补充了按照本发明所述的物质，并因此准备了这个最终的培养基。这个在表6中显示的物质浓度是每个在培养基中物质的最终浓度。这个培养基与一种无血清、无蛋白质和无蛋白胨同时含有按照本发明所述物质的培养基相对应。这个用于细胞培养的最终培养基不含葡萄糖和谷氨酰胺，含有半乳糖和乳酸盐。表6:用于程序化培养具有按照本发明所述物质的CHO细胞的培养基(基础培养基)<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>这些代谢优化的细胞，在摇瓶中在分批条件下针对培养基(Stammhaltung)进行了培养。细胞在上述培养基中以l-2xl()S/ml的活细胞接种浓度接种。这个培养在37'C和在7.5%pC02气体的条件下进行为期2天的孵育，在第二天，对这个培养结果继代培养。为此，在第二天计数细胞浓度，并使用同样的接种细胞浓度同样新鲜的培养基向培养瓶进行了接种。两天的一个培养周期被定义为一个时间段。在这个方法下，这个培养进行多个时间段，同时在每个时间段中的活细胞浓度，在转种前立刻确定下来。这个算出的数值，在一个图表中绘制了出来(图1)。从图1明显看出，这些细胞在按照本发明所述的培养基中可以良好生长。细胞在这个按照本发明所述的培养基中具有17.9小时的双倍时间。在一个两天的培养模式中，细胞具有一个1:6.3的高分流比。如果细胞在培养基(Stammhaltung)每第三天进行分流时，细胞会具有一个大于l:10的分流比。这个高分流比或短双倍时间，是在一种无血清、无蛋白质、无蛋白胨、无葡萄糖和无谷氨酰胺的培养基中获得的。接下来，进行了第二组流加实验。在所有从这里开始的实验中(实施例6到9)，使用了如下常见材料和方法第一种使用过的培养基是一种商业化培养基(基础培养基)。这个基础培养基是一种不含葡萄糖和谷氨酰胺的基础培养基，其配比不清楚。这个基础培养基在各自的示例中利用按照本发明所述的物质进行添加。在示例中物质的己知浓度是在基础培养基中各自物质的最终浓度。因此，如果需要，这些具有按照本发明所述的物质添加到培养基以达到最终给出的浓度。在添加物质之后，基础培养基的pH值调整为7.1±0.1。基础培养基的摩尔渗透压浓度调整为310±20mOsmol/kgH2O。因此，制备并无菌过滤了这个最终的基础培养基。这个如此准备的基础培养基与一种无血清、无蛋白质和无蛋白胨的基础培养基相一致。第二个使用的培养基是一种营养培养基(富集培养基)。这是一种无血清和无蛋白质营养培养基。这个营养培养基是一种由氨基酸、盐和维生素组成的独特表述。这个营养培养基，在每个示例中用按照本发明所述的物质进行了添加。这个在示例中物质的已知浓度是在营养培养基中各自物质的最终浓度。这个最终的营养培养基具有6.0到7.8的pH值和460-750mOsmol/kgH20的摩尔渗透压浓度。所有实验，都在流加条件下进行。这些实验从利用CHO细胞对这些基础培养基进行接种开始。接种物浓度为l-3105/ml。这些培养最多可以进行7天，并且在培养中利用与之一致的营养培养基在一定的间隔内添加。这些在实验中使用的术语，根据如下示例进行了解释。例如，实验的名字为S4:MEL-St-MEL。S4:实验编号。在Sl到S6之间变化第一个縮写(MEL):所用细胞的规格。要么叫MEL(代谢设计)，要么叫St(标准，野生)。第二个縮写(St):所使用基础培养基的规格。要么叫MEL(按照本发明所述的基础培养基)，或St(标准基础培养基)。第三个縮写(MEL):所使用营养培养基的规格。要么叫MEL(按照本发明所述的营养培养基)，或St(标准营养培养基)。在这个按照本发明所述的方法中，需要利用乳酸盐添加所需要的细胞，这是由于它们需要乳酸盐作为碳源。这样的营养培养基或这个还通过乳酸盐添加的培养，在培养基表中用附注"Extrafeed"标识。其原因在于，乳酸盐属于这些给定的营养培养基。可是，乳酸盐并没有加入到这些营养培养中，这是由于人们想避免可溶性问题。取而代之的是，这个乳酸盐浓度每天都确定，并且在需要时(在乳酸盐不受限前)从培养物的一种分离的原溶液中添加。实施例6:带有按照本发明所述物质的流加实验，在培养基中不含葡萄糖和谷氨酰胺。对于这个流加实验，使用了如下培养基组合。表7:在使用的培养基中的物质的最终浓度<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>SI:St-St-St-标准细胞(野生细胞)，标准基础培养基，标准营养培养基SI:MEL-MEL-MEL=代谢优化的细胞，按照本发明所述的基础培养基，按照本发明所述的营养培养基这些结果显示，这些代谢优化的细胞在按照本发明所述的培养基中显示出了与对照(图2)相比较的细胞生长，例如对照。与对照相比不同的是，这代谢了更少的铵(图4)和乳酸盐，而对照会产生乳酸盐(图3)。这个带有按照本发明所述物质的培养的pH值变为了碱性(更高的pH值)或保持不变。这个对照(常规方法)的pH值转变为酸性pH值(低pH值)(图5)。实施例7:标准细胞(野生细胞，基因并未进行修改)在流加条件，利用如下培养基组合进行了克隆检测。200680041997.9说明书第42/44页表8:在这个实验中使用的培养基中的物质最终浓度<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>S6:St-St-MEL=标准细胞(野生细胞)，标准基础培养基，按照本发明所述的营养培养基S6:St-MEL-MEL=标准细胞(野生细胞)，按照本发明所述的基础培养基，按照本发明所述的营养培养基S6:St-MEL-St=标准细胞(野生细胞)，按照本发明所述的基础培养基，标准营养培养基在现有技术中，至今已经有多种糖的组合在基础培养基和营养培养基中进行了检测。所有的组合计划，这些细胞在一种含有葡萄糖的基础培养基中接种。接下来，通过流加过程开始启动，在其中这个营养培养基含有像半乳糖这样的物质。使用这种方法的原因是，这些细胞在含半乳糖的基础培养基中的生长率低或根本不生长，因此必须用含葡萄糖的基础培养基开始(Altamirano，C等，Biotechnol.Bioeng.，2001,76(4):351-60;Altamirano，C等，J.Biotechnology,2004，110(2):171-9;Altamirano,C等，Biotechnol.Progress,2000，16(1):69-75)。但这里按照本发明，这些细胞在含半乳糖的培养基中具有与在含葡萄糖的培养基中类似的生长率，这样一种基础培养基利用按照本发明所述的物质完全有新的机会开始细胞培养。因此，这里一种按照本发明所述的基础培养基与不同的营养培养基组合在了一起。从这些数据中明显看出的是，这个按照本发明所述的营养培养基可以更好地与按照本发明所述的基础培养基组合在一起(图6，比较S6:St-St-MEL与S6:St-MEL-MEL)。这个按照本发明所述的基础培养基，也可以与一种标准营养培养基组合在一起，其中这个营养培养基包含如半乳糖和葡萄糖这样的糖。特别是当这个基础培养基含有这些按照本发明所述的物质并且营养培养基含有葡萄糖时，这些细胞甚至还会在更高的细胞浓度上生长(图6，比较S6:St-MEL-MEL与S6:St-MEL-St)。一个类似的实验，利用代谢优化的细胞实现了(图7)。具有代谢优化的细胞的流加实验的培养基如下表9:在培养基中的物质最终浓度，这个浓度在这个实验中使用。葡萄糖半乳糖乳酸盐谷氨酰胺谷氨酸盐天冬酰胺[g/1][g/1][g/1][g/1][g/1]本实验的基础培养基S1:MEL-MEL-MEL032.500.80.23本实验的营养培养基S1:MEL-MEL-MEL060ExtraFeeded07.150.15本实验的基础培养基S2:MEL-MEL-St032.500.80.23本实验的营养培养基S2:MEL-MEL-St6000130.150.15SI:MEL-MEL-MEL-代谢优化的细胞，按照本发明所述的基础培养基，按照本发明所述的营养培养基S2:MEL-MEL-St=代谢优化的细胞，按照本发明所述的基础培养基，标准营养培养基实施例9:利用两个在培养基中的按照本发明所述的物质进行的流加实验在这个实验中，两个按照本发明所述的物质(乳酸盐和琥珀酸盐)在一个流加实验中相互组合在一起。针对这个流加实验，使用了下面的培养基组合表10:在这个实验的培养基中所使用的物质的最终浓度<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>S5:MEL-MEL-MEL=代谢优化的细胞，按照本发明所述的带有乳酸盐的基础培养基，按照本发明所述的带有乳酸盐的营养培养基。S5:MEL-MEL-MEL-S=代谢优化的细胞，按照本发明所述的带有乳酸盐和琥珀酸盐的基础培养基，按照本发明所述的带有乳酸盐和琥珀酸盐的营养培养基图8显示了在含和不含琥珀酸钠的情况下，这个在按照本发明所述的培养基中代谢优化的细胞的生长情况。图9显示了在含和不含琥珀酸钠的情况下，这个在按照本发明所述的培养基中的乳酸盐浓度的变化情况。权利要求1、用于培养细胞培养物的培养基，其特征在于，所述培养基含有至少一种选自以下组的物质柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、α酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐、衍生物或者复合物。2、用于培养细胞培养物的培养基，其特征在于，所述培养基含有至少一种选自以下组的物质琥珀酸、苹果酸、a酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异拧檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐、衍生物或者复合物。3、根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有的所述至少一种物质的浓度为0.03g/1或更高。4、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有乳酸和/或乳酸衍生物。5、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有作为乳酸衍生物的丙氨酸和/或含丙氨酸的肽。6、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有作为乳酸衍生物的丙酮酸盐和/或丙酮酸盐衍生物。7、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有至少一种糖。8、根据权利要求7所述的培养基，其特征在于，所述至少一种糖选自以下组葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、核糖、葡萄糖胺、蔗糖、乳糖和它们的混合物。9、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有半乳糖。10、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有的所述糖的浓度为0.1g/l或更高。11、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有浓度为25g/1或更低浓度的葡萄糖。12、根据权利要求1到10中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含葡萄糖。13、根据权利要求1到12中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含葡萄糖，并且所述培养基含有含谷氨酰胺的肽、乳酸和半乳糖。14、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有浓度低于8mmo1/1的谷氨酰胺。15、根据权利要求1到13中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含谷氨酰胺。16、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有至少一种谷氨酰胺衍生物。17、根据权利要求16所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有总浓度为0.05g/1或更高浓度的谷氨酰胺衍生物。18、根据权利要求1到15中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含谷氨酰胺衍生物。19、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有天冬酰胺。20、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基至少含有一种天冬酰胺衍生物。21、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有谷氨酸±卜22、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基含有至少一种谷氨酸盐衍生物。23、根据权利要求1到13中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含葡萄糖和谷氨酰胺，并且所述培养基含有浓度至少为0.05g/1的天冬酰胺以及乳酸和半乳糖。24、根据权利要求1到13中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基不含葡萄糖和谷氨酰胺，并且所述培养基含有浓度至少为0.05g/1的谷氨酸盐以及乳酸和半乳糖。25、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基是液体培养基。26、根据前述权利要求中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基是一个摩尔渗透压浓度为240—3600mOsmol/kgH20的基础培养基。27、根据权利要求1到25中任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基是一个摩尔渗透压浓度为150—1500mOsmol/kgH20的基础培养基。28、按照权利要求1到27所述的培养基用于培养包含至少一种细胞的细胞培养物的应用。29、一种培养包含至少一种细胞的细胞培养物的方法，其特征在于，所述细胞培养物被放入一个培养基并在其中培养，同时培养基的pH值在至少五分之一的培养时间里为7.2或更高。30、一种培养含有至少一种细胞的细胞培养物的方法，其特征在于，所述细胞培养被放入根据权利要求1到27中任一项所述的培养基中并进行培养。31、根据权利要求29或30所述的方法，其特征在于，所述细胞是真核细胞。32、根据权利要求29到31所述的方法，其特征在于，所述细胞是哺乳动物细胞。33、根据权利要求29或30所述的方法，其特征在于，所述细胞是原核细胞。34、根据权利要求29到33中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基的pH值在培养结束时为7.2或更高。35、根据权利要求30到34中任一项所述的方法，其特征在于，所述pH值至少在五分之一的培养时间内为7.2或更高。36、根据权利要求29到35中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基的pH值在培养过程中为7.2或更高。37、一种生物产品的生产方法，其特征在于，细胞培养物包含至少一种细胞，所述细胞根据权利要求29到36中任一项所述的方法进行培养，从所述细胞培养物和/或培养基中获得所述生物产品。38、根据权利要求37所述的方法，其特征在于，所述生物产品选自至少一种多肽、至少一种蛋白质、至少一种病毒成分、至少一种病毒或它们的混合物。39、一种从细胞群中筛选遗传修饰的、特别是代谢优化的细胞的方法，其特征在于a)根据权利要求29到36中任一项所述方法，一种细胞培养物作为细胞群在权利要求1到26中任一项所述的培养基中培养至少一周，并且接下来b)把上述细胞进行分离。40、根据权利要求39所述的方法，其特征在于，在步骤b)中分离的细胞在另外一个歩骤c)中被转移到一个新鲜的培养基。41、根据权利要求40所述的方法，其特征在于，所述分离的细胞在步骤c)中被扩增。42、根据权利要求39到41中任一项所述的方法，其特征在于，所述分离的细胞被传代培养一次或多次。43、根据权利要求39到41中任一项所述的方法，其特征在于，所述分离的细胞被传代培养直到分流比达到大于l:4。44、通过权利要求39到43中任一项所述的方法筛选获得的细胞。45、根据权利要求44所述的细胞，其特征在于，所述细胞的生长率(P)小于24小时。46、包含权利要求44或45所述的细胞的细胞培养物或细胞群。全文摘要本发明涉及培养基，特别是细胞培养基，所述培养基含有至少一种选自以下组的物质柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、α酮戊二酸、延胡索酸、草酰乙酸、异柠檬酸、草酰琥珀酸、酒石酸、己二酸、乳酸和它们的混合物以及这些酸的盐、衍生物或者复合物。此外，本发明还涉及所述细胞培养基的生产方法和应用，以及在本发明的细胞培养基中的培养细胞培养物的方法，以及通过所述方法可以收获的细胞。文档编号C12N5/00GK101310008SQ200680041997公开日2008年11月19日申请日期2006年9月8日优先权日2005年9月28日发明者阿齐兹·恰伊勒申请人:塞尔卡有限公司