专利名称：：β-氨基酸的制造方法
技术领域：
：本发明涉及一种β-氨基酸的制造方法，所述β-氨基酸的制造方法包括在氨基酸氨基变位酶(aminoacidaminomutase)的存在下由α-氨基酸合成β-氨基酸的步骤。
背景技术：
：已知β-氨基酸作为药物中间体是有用的化合物。以前为了立体选择性地得到氨基酸，采用通过光学离析消旋体氨基酸来离析纯化目标立体异构体的方法。但是，如果采用该方法，理论收率为50%，较低，是步骤多且烦杂的制造方法，所以得到的β-氨基酸也变得昂贵。因此，期待开发出可以实现高效率化及低价格化的氨基酸的制造方法。近年，报道了氨基酸氨基变位酶的存在，所述氨基酸氨基变位酶催化以L-氨基酸为基质合成β-氨基酸的反应，所述L-氨基酸可以比较廉价地得到。例如非专利文献1中报道了一种方法，所述方法利用来自东北红豆杉(Taxuscaspidata)的苯基丙氨酸氨基变位酶由L-苯基丙氨酸合成(R)_i3_苯基丙氨酸。另外，非专利文献2中报道了一种方法，所述方法利用来自球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)的酪氨酸氨基变位酶由L-酪氨酸合成β-酪氨酸。另外，非专利文献3中报道了一种方法，所述方法利用来自成团泛菌菌株Eh335(PantoeaagglomeransstrainEh335)的AdmH由L-苯基丙氨酸合成β-苯基丙氨酸。非专利文献1=Biochemistry,46(2007)9785-9794非专利文献2=Biochemistry,42(2003)12708-12718非专利文献3=Nature,448(2007)824-827非专利文献4J.Am.Chem.Soc.，129(2007)6988-6989
发明内容但是，上述现有技术在任何情况下均以赋予酶的特征为目的合成β-氨基酸，预测其反应收率及产量低，进而在离析纯化中必须进行烦杂的操作，因此不能说是工业上有利的方法。β_氨基酸是作为药品原料等有用的化合物，期待开发出高效地进行酶反应本身的制造方法。本发明的目的在于在利用酶反应的氨基酸的制造方法中高效地制造氨基酸。根据本发明，提供一种β_氨基酸的制造方法，所述β_氨基酸的制造方法包括在氨基酸氨基变位酶的存在下由α-氨基酸合成β-氨基酸的步骤，其特征在于，在反应液中使β-氨基酸作为固体析出。根据本发明，通过使氨基酸作为固体析出，可以高效地进行利用氨基酸氨基变位酶的酶反应，进而可以通过从反应液中收集固体而容易地纯化生成物。根据本发明，提供一种可以高效地制造氨基酸的方法。具体实施例方式本发明的实施方式为芳香族β_氨基酸的制造方法。上述制造方法包括在芳香族氨基酸氨基变位酶的存在下由芳香族α-氨基酸合成芳香族β-氨基酸的步骤，在反应液中使芳香族氨基酸作为固体析出。作为芳香族氨基酸氨基变位酶，例如可以举出苯基丙氨酸氨基变位酶、酪氨酸氨基变位酶。在苯基丙氨酸氨基变位酶中，可以举出S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶、R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶。在本说明书中，“S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶”是指具有S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶活性的蛋白质。另外，“S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶活性”是指可以S体选择性地合成β-苯基丙氨酸。“S体选择性”是指β-苯基丙氨酸中含有的(S)-i3-苯基丙氨酸的光学纯度为50%ee以上，但优选为80%ee以上，更优选为90%ee以上，最优选为99%ee以上。另外，在本说明书中，“R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶”是指具有R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶活性的蛋白质。另外，“R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶活性”是指可以R体选择性地合成β-苯基丙氨酸。“R体选择性”是指β-苯基丙氨酸中含有的(R)-i3-苯基丙氨酸的光学纯度为50%ee以上，但优选为80%ee以上，更优选为90%ee以上，最优选为99%ee以上。作为芳香族α-氨基酸，例如可以举出L-苯基丙氨酸、L-酪氨酸及它们的类似物。作为芳香族β-氨基酸，例如可以举出β-苯基丙氨酸、β-酪氨酸及它们的类似物。在β-苯基丙氨酸中，可以举出(S)-i3_苯基丙氨酸、(R)-i3_苯基丙氨酸。另外，在β-酪氨酸中，可以举出(S)-i3-酪氨酸、酪氨酸。R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶催化由L-苯基丙氨酸生成_苯基丙氨酸的反应。另外，还可以催化由L-苯基丙氨酸类似物生成对应的苯基丙氨酸类似物的反应(参见非专利文献4)。在L-苯基丙氨酸类似物中，可以举出L-4-氟苯丙氨酸、3-(2-噻吩基)-1^-丙氨酸丄-4-甲氧基苯丙氨酸、L-2-氟苯丙氨酸、L-4-甲基苯丙氨酸等。另外，在苯基丙氨酸类似物中，可以举出(R)-β-4-氟苯丙氨酸、(R)-β-3-(2-噻吩基)-丙氨酸、(R)-β-4-甲氧基苯丙氨酸、(R)-β-2-氟苯丙氨酸、(R)-β-4-甲基苯丙氨酸等。酪氨酸氨基变位酶催化由L-酪氨酸生成β-酪氨酸的反应。另外，也可以以L-酪氨酸类似物为基质(非专利文献2)。在L-酪氨酸类似物中，可以举出L-3，4-二羟基苯丙氨酸、L-3-氯酪氨酸等。已知芳香族氨基酸氨基变位酶催化的反应在由芳香族α-氨基酸合成芳香族β"氨基酸的过程中是可逆的，为低收率。芳香族氨基酸氨基变位酶催化的反应虽然取决于PH及温度等反应条件，但反应一旦达到平衡状态则基质与生成物的浓度基本相同，它的反应收率最大不超过大约60%。例如非专利文献1中报道了利用苯基丙氨酸氨基变位酶的(R)-P-苯基丙氨酸合成反应的收率为53士1%。另外，非专利文献2中报道了利用酪氨酸氨基变位酶的β-酪氨酸合成反应的最大收率约为60%。另外，非专利文献3中报道了利用AdmH的β-苯基丙氨酸合成反应的平衡常数为1.28，由平衡常数求出它的收率约为56%。在本实施方式中，“使之作为固体析出”是指在反应液中超过饱和浓度或过饱和浓度地生成芳香族氨基酸，使超过的部分作为固体产生。在芳香族氨基酸氨基变位酶催化的反应中，如果一边使生成的芳香族氨基酸作为固体析出一边进行反应，则可以高效率地制造芳香族β-氨基酸。利用苯基丙氨酸氨基变位酶进行的苯基丙氨酸合成反应如果一边使生成物的固体析出一边进行反应，则反应达到平衡状态时，在反应液中生成物的固体析出，另一方面，溶解的基质与生成物的浓度成为同等程度。此时，生成物的析出量越多，反应收率及产量变得越高。进而，通过从反应液中取出固体，生成物的纯化变得容易ο在芳香族氨基酸氨基变位酶反应中，通过对芳香族β-氨基酸的生成量与溶解度的关系进行最优化，可以一边使芳香族氨基酸作为固体析出一边进行反应。当然，芳香族β_氨基酸的生成量取决于使用的酶的性质，但也根据反应条件如ΡΗ、温度及基质添加量而变化。另外，芳香族β-氨基酸的溶解度根据反应液的PH及温度而变化。因此，通过对反应液的ΡΗ、温度及基质添加量进行最优化，可以一边使芳香族氨基酸作为固体析出一边进行反应。为了增加芳香族氨基酸的析出量，提高反应收率及产量，例如可以在芳香族β"氨基酸的溶解度低的条件下进行反应。另外，为了增加芳香族氨基酸的析出量，提高反应收率及产量，可以增加基质的添加量进行反应。具体而言，可以使向反应体系中加入的芳香族α-氨基酸的添加量为2.5重量％(wt%)以上，可以较优选为7重量％(wt%)以上，更优选为16重量％(wt%)以上。向反应体系中加入的芳香族α-氨基酸的添加量的上限没有特别限定，但如果添加量过多则反应体系内的固体量变多搅拌效率下降，所以芳香族氨基酸的生成速度降低。因此，优选为60重量％(wt%)以下，较优选为50重量％(wt%)以下，更优选为40重量％(wt%)以下。通过使之为能够适当搅拌反应液的程度的添加量，可以高效率地进行反应。作为基质的添加方法，可以在反应开始时一并添加，也可以随着反应的进行分批或连续地添加。另外，在反应液中基质也可以作为固体存在。例如使用苯基丙氨酸氨基变位酶时，可以使反应液的pH为6以上10以下。如果PH小于6，则苯基丙氨酸氨基变位酶的酶活性降低，所以β-苯基丙氨酸的生成速度变慢。另外，如果PH大于10，则β-苯基丙氨酸的溶解度变得过高。因此，β-苯基丙氨酸作为固体的析出量变少，无法提高反应收率及产量。另外，可以使反应液的温度为4°C以上、芳香族氨基酸氨基变位酶失活的温度以下。反应液的温度低于4°C时，由于芳香族氨基酸氨基变位酶的酶活性低，所以芳香族β-氨基酸的生成速度变慢。失活的温度是指在反应液中10分钟内有50%以上的芳香族氨基酸氨基变位酶失活的温度。如果为高于失活温度的温度，则有效地发挥作用的芳香族氨基酸氨基变位酶的量变少，所以芳香族氨基酸的生成速度变慢。使用苯基丙氨酸氨基变位酶时，反应温度可以为4°C以上。由此可以提高苯基丙氨酸氨基变位酶的酶活性，提高β-苯基丙氨酸的生成速度。较优选反应温度为15°C以上。由此，可以更高效率地进行反应。另外，使用苯基丙氨酸氨基变位酶时，反应液的温度可以为60°C以下。由此可以稳定地维持苯基丙氨酸氨基变位酶的酶活性，高效率地进行反应。为了通过利用芳香族氨基酸氨基变位酶的反应来增加芳香族β-氨基酸的析出量、进而使反应在短时间内完成，反应初期可以在酶活性高的条件下进行反应，反应末期可以在生成物的溶解度低的条件下进行反应。例如可以举出在反应的初期和末期改变反应液温度的方法。具体而言，可以在反应初期使下限值为20°C，使上限值为芳香族氨基酸氨基变位酶失活的温度。另外，可以在反应末期使反应液温度为4°C以上30°C以下。需要说明的是，S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶与R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的最适PH及最适温度近似。另外，(S)-i3-苯基丙氨酸与苯基丙氨酸的溶解度近似。因此，由于两种酶的性质及生成物的物性类似，所以利用S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的(S)-i3_苯基丙氨酸的制造方法的研究结果也能够适用于(R)-i3_苯基丙氨酸的制造方法。芳香族氨基酸氨基变位酶可以从产生芳香族氨基酸氨基变位酶的生物中获得。作为产生芳香族氨基酸氨基变位酶的生物，可以举出红豆杉属植物、泛菌属细菌、芽孢杆菌属细菌、链霉菌属细菌、软骨霉状菌属细菌。具体而言，可以举出下述例子短叶红豆丰多(Taxusbrevifolia)、东；!匕工丰多(Taxuscaspidata)^^LSL^(Taxuschinensis)地亚红豆杉(TaxusχmediacvHicksii)、成团泛菌菌株Eh335(PantoeaagglomeransstrainEh335)、短芽孢杆菌Vm4(BacillusbrevisVm4)、球孢链霉菌(Str印tomycesglobisporus)、藏红花软骨霉状菌Cmc5(ChondromycescrocatusCmc5)。短叶红豆^·(Taxusbrevifolia)^^LSL^(Taxuschinensis)>MJftMtES^(TaxusχmediacvHicksii)为产生苯基丙氨酸氨基变位酶的生物。东北红豆杉(Taxuscaspidata)为产生R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的生物。成团泛菌菌株Eh335(PantoeaagglomeransstrainEh335)为产生S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的生物。另外，短芽孢杆菌Vm4(BacillusbrevisVm4)、球孢链霉菌(Str印tomycesglobisporus)、藏红花软骨霉状菌Cmc5(ChondromycescrocatusCmc5)为产生酪氨酸氨基变位酶的生物。另外，还可以通过编码芳香族氨基酸氨基变位酶的DNA对宿主细胞进行转化，使芳香族氨基酸氨基变位酶表达，进行离析。根据上述方法，可以简便且高效地获得芳香族氨基酸氨基变位酶。作为反应中使用的芳香族氨基酸氨基变位酶，可以为经纯化的芳香族氨基酸氨基变位酶，也可以为产生芳香族氨基酸氨基变位酶的生物、被编码芳香族氨基酸氨基变位酶的DNA转化而得到的转化体或它们的处理物。处理物可以作为以破坏细胞为目的而对细胞进行机械破坏、超声波处理、冻融处理、干燥处理、加压或减压处理、渗透压处理、自溶、表面活性剂处理、酶处理的处理物以及经上述处理得到的含有芳香族氨基酸氨基变位酶的部分的固定化物、细胞的固定化物而得到。芳香族氨基酸氨基变位酶的使用量只要是与芳香族α-氨基酸的反应充分地进行的使用量即可，没有特别限定。芳香族氨基酸氨基变位酶的添加方法为，可以在反应开始时一并添加，也可以在反应中分批或连续添加。作为反应液的介质，可以使用水、水性介质、有机溶剂、或水或者水性介质与有机溶剂的混合液。作为水性介质，例如可以使用下述缓冲液，即，磷酸缓冲液、HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N-乙磺酸)缓冲液、Tris[三(羟甲基)氨基甲烷]盐酸缓冲液等。作为有机溶剂，只要是不阻碍反应进行的有机溶剂即可，可以为任意有机溶剂。反应时间只要是可以使芳香族氨基酸的固体析出的反应时间即可，没有特别限定。因此，只要至少能够确保直至反应液中的芳香族氨基酸的生成量超过芳香族氨基酸的溶解度所需的反应时间即可。反应时间可以根据使用的芳香族氨基酸氨基变位酶的使用量适当地设定。从反应液中分离纯化芳香族氨基酸的方法是通常有机合成化学中采用的方法，例如可以通过利用有机溶剂进行的提取、结晶化、薄层色谱法、高效液相色谱法等进行。结晶化法可以通过过滤反应液，使所得的固体重结晶来进行纯化。另外，也可以如下进行，即，暂时溶解反应液中析出的固体，除去菌体成分后，使结晶析出。以下给出本发明的实施例，但本发明并不限定于这些实施例。实施例<分析条件>_苯基丙氨酸、(R)-3_苯基丙氨酸、L_苯基丙氨酸根据高效液相色谱法进行定量。它们的分析条件如下所述。(1)苯基丙氨酸及(R)-0-苯基丙氨酸的分析条件(1)的分析主要是为了测定苯基丙氨酸的光学纯度。色谱柱CHIRALPAKWH4.6X250(Daicel化学工业株式会社)柱温50°C泵流速1.5ml/min洗脱液2mmol/l硫酸铜检测UV254nm在该分析条件下，(S)-0_苯基丙氨酸及(R)-0-苯基丙氨酸的检测限均约为1X1CT4重量％(wt%)。(2)0-苯基丙氨酸、L-苯基丙氨酸的分析条件(2)的分析主要是为了测定反应收率。色谱柱DevelosilTMS-UG-54.6X250(野村化学株式会社)柱温40°C泵流速1.Oml/min洗脱液5mmol/l柠檬酸缓冲液(pH6.0)甲醇=82(v/v)检测UV254nm<评价法>苯基丙氨酸的光学纯度由在上述(1)所示的分析条件下得到的色谱图的峰面积值算出。另外，(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率由在上述(2)所示的分析条件下得到的色谱图的峰面积值算出。具体而言，反应液含有苯基丙氨酸固体或者L-苯基丙氨酸固体时，采集一部分含有上述固体的反应液，与0.2mol/l盐酸溶液混合，溶解上述固体，分析得到的溶波。利用(S)-0-苯基丙氨酸标准品的标准曲线，由色谱图的峰面积值算出苯基丙氨酸的生成量(g)，由(式1)求出收率。(式1)收率(％)=苯基丙氨酸的生成量(g)/L_苯基丙氨酸添加量(g)X100(实施例1)表达S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的转化体的制作[(1)编码S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的DNA的合成]委托DNA2.0公司合成具有序列号1所示的碱基序列的DNA。使该合成DNA在5，末端及3’末端附近分别具有EcoRI及Hindlll的限制性内切酶识别序列。[(2)重组DNA的制作]制作重组质粒作为重组DNA。将合成的DNA及质粒pUC18用EcoRI及Hindlll进行消化，使用高效连接试剂盒(LigationHigh)(东洋纺绩公司制)进行连接后，利用得到的重组质粒转化大肠埃希氏菌(Eschrichiacoli)DH5a(东洋纺绩公司制)。用含有氨苄西林(Am)100ug/ml及X_Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-0-D-半乳糖苷)的LB琼脂培养基培养转化体，得到Am耐性且形成白色菌落的转化体。由如上所述得到的转化体提取质粒。按照通常的碱基序列的确定方法，确认了被导入质粒中的DNA片段的碱基序列为序列号1所示的碱基序列。将得到的具有编码S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶的DNA的质粒命名为pSPAM。[(3)转化体的制作及表达]利用pSPAM采用通常的方法转化大肠埃希氏菌(ESCheriChiaC0li)DH5a，将得到的转化体命名为MT-11046。将该转化体接种于500ml带挡板(baffle)的三角烧瓶中的含有100ug/mlAm的lOOmlLB培养基中，于30°C下振荡培养直至0D(660nm)达到0.5后，加入IPTG(异丙基硫代半乳糖吡喃糖苷)使之为lmmol/1，进一步振荡培养16小时。将培养液在SOOOrpm下离心分离20分钟，将得到的菌体直接在_20°C下冷冻保存或者混悬于0.lmol/1Tris-盐酸缓冲液(pH8.0)中，于_20°C冷冻保存。(实施例2)利用S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶进行的(S)_0_苯基丙氨酸的制造反应液(4.0g)含有8重量％(wt%)L-苯基丙氨酸、0.4glmol/1Tris-盐酸缓冲液(pH8.5)、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体混悬液(适量)及水，于25°C下使之反应48小时。收集一部分反应液中的固体，在上述所示的分析条件下进行分析，由此确认(S)-0-苯基丙氨酸固体的析出。(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率为83%。对于光学纯度，确认了苯基丙氨酸为检测限以下，光学纯度为99.5%ee以上。(比较例1)利用S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶进行的(S)-0-苯基丙氨酸的制造(非专利文献3中记载的反应条件下的(S)-0-苯基丙氨酸的制造)反应液(4.0g)含有1.7X10—2重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、0.8glOOmmol/1麦黄酮缓冲液(PH8.25)、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体混悬液(适量)及水，于30°C下使之反应4小时。在反应液中(S)-0-苯基丙氨酸固体未析出，(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率为48%。(实施例3)(S)_3_苯基丙氨酸的制造[pH的研究1]反应液(250g)含有12重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，于25°C下使之反应24小时以上。反应中将反应液的pH用25%氨水调节至表1所示的各pH。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸固体析出。各PH下的(S)-P-苯基丙氨酸的反应收率示于表1。[表1]<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(比较例2)_苯基丙氨酸的制造反应液(250g)含有12重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，于25°C下使之反应24小时以上。反应中将反应液的pH用6mol/l盐酸溶液或25%氨水调节至表2所示的各pH。确认了在研究的所有条件下(S)-P-苯基丙氨酸的固体未析出。各pH下的(S)-P-苯基丙氨酸的反应收率示于表2。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(实施例4)(S)_3_苯基丙氨酸的制造[pH的研究2]反应液(250g)含有36重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，于25°C下使之反应24小时以上。反应中将反应液的pH用25%氨水调节至表3所示的各pH。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。各PH下的(S)-P-苯基丙氨酸的反应收率示于表3。[表3]<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(实施例5)(S)_3_苯基丙氨酸的制造[pH的研究3]反应液(250g)含有12重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，于20°C下使之反应24小时以上。反应中将反应液的pH用25%氨水调节至pH为9.2。确认了在研究的条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率为62%。(比较例3)苯基丙氨酸的制造反应液(250g)含有36重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，于25°C下使之反应24小时以上。反应中将反应液的pH用6mol/l盐酸溶液或25%氨水调节至表4所示的各pH。确认了在研究的所有条件下(S)-P-苯基丙氨酸的固体未析出。各pH下的(S)-P-苯基丙氨酸的反应收率示于表4。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(实施例6)_苯基丙氨酸的制造[温度的研究1]反应液(4.0g)含有12重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、0.4glmol/1的Tris-盐酸缓冲液(PH8.5)、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体混悬液(适量)及水，在表5所示的各温度下使之反应24小时以上。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。在各温度下的(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率示于表5。[表5]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(实施例7)_苯基丙氨酸的制造[温度的研究2]反应液(250g)含有36重量％(wt%)L_苯基丙氨酸、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体(适量)及水，在表6所示的各温度下使之反应24小时以上。反应中将反应液的PH用25%氨水调节至pH为8.0。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。各温度下的(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率示于表6。[表6]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(实施例8)_苯基丙氨酸的制造[基质添加量的研究1]反应液(4.0g)含有表7所示的各添加量的L-苯基丙氨酸、0.4glmol/l的Tris-盐酸缓冲液(PH8.5)、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体混悬液(适量)及水，于25°C下使之反应24小时以上。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。各基质添加量下的(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率示于表7。[表7]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>基质添加量重量％(wt%)收率<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(实施例9)_苯基丙氨酸的制造[基质添加量的研究2]反应液(4.0g)含有表8所示的各添加量的L-苯基丙氨酸、0.4glmol/l的Tris-盐酸缓冲液(PH8.5)、实施例1中配制得到的MT-11046的菌体混悬液(适量)及水，于10°C下使之反应24小时以上。确认了在研究的所有条件下(S)-0-苯基丙氨酸的固体析出。各基质添加量下的(S)-0-苯基丙氨酸的反应收率示于表8。[表8]基质添加量重量％(wt%)收率<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(实施例10)(s)-3-苯基丙氨酸的纯化在实施例3中，在调节至pH为8.0的反应液中加入6mol/l盐酸调节pH至2.1，使作为固体析出的(S)-0-苯基丙氨酸溶解。之后，加入16g活性碳(含水率50%)，于25°C下搅拌30分钟，通过过滤除去活性碳和菌体成分。然后，将活性碳用32g水洗涤，合并滤液和洗涤液后，于10°C下一边缓慢搅拌一边将混合液用20%氢氧化钠水溶液调节pH至5.6，使(幻-0-苯基丙氨酸析出。过滤晶析液，将结晶用30ml冷水洗涤3次。干燥后，得到21.6g白色结晶(S)-0-苯基丙氨酸。将结晶的水溶液用HPLC进行分析，结果确认了苯基丙氨酸为检测限以下，光学纯度为99.5%ee以上。以上说明了本发明的实施方式及实施例，但这些是本发明的示例，也可以采用除上述之外的各种构成。实施方式中例如列举了利用芳香族氨基酸氨基变位酶的芳香族氨基酸的制造方法，但本发明也可以适用于除芳香族氨基酸之外的氨基酸。例如可以通过使用赖氨酸2，3-氨基变位酶制造赖氨酸。另外，可以通过使用精氨酸2，3_氨基变位酶制造精氨酸；可以通过使用谷氨酸2，3-氨基变位酶制造谷氨酸；可以通过使用亮氨酸2，3-氨基变位酶制造3-亮氨酸。权利要求一种β-氨基酸的制造方法，包括在氨基酸氨基变位酶的存在下由α-氨基酸合成β-氨基酸的步骤，其特征在于，在反应液中使β-氨基酸作为固体析出。2.如权利要求1所述的氨基酸的制造方法，其特征在于，所述氨基酸氨基变位酶为芳香族氨基酸氨基变位酶。3.如权利要求2所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族氨基酸氨基变位酶为苯基丙氨酸氨基变位酶。4.如权利要求3所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述苯基丙氨酸氨基变位酶为S体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶。5.如权利要求3所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述苯基丙氨酸氨基变位酶为R体选择性苯基丙氨酸氨基变位酶。6.如权利要求2所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述α-氨基酸为芳香族L-氨基酸。7.如权利要求6所述的氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族L-氨基酸为L-苯基丙氨酸。8.如权利要求2所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述β-氨基酸为芳香族β-氨基酸。9.如权利要求8所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族β-氨基酸为β-苯基丙氨酸。10.如权利要求9所述的氨基酸的制造方法，其特征在于，所述苯基丙氨酸为(S)-i3-苯基丙氨酸。11.如权利要求9所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述β-苯基丙氨酸为(R)-i3-苯基丙氨酸。12.如权利要求2所述的氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族氨基酸氨基变位酶为酪氨酸氨基变位酶。13.如权利要求6所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族L-氨基酸为L-酪氨酸。14.如权利要求8所述的氨基酸的制造方法，其特征在于，所述芳香族氨基酸为β-酪氨酸。15.如权利要求1至14中任一项所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述反应液的PH为6以上10以下。16.如权利要求1至15中任一项所述的β-氨基酸的制造方法，其特征在于，所述反应液的温度为4°C以上、所述氨基酸氨基变位酶失活的温度以下。全文摘要β-氨基酸的制造方法，包括在氨基酸氨基变位酶的存在下由α-氨基酸合成β-氨基酸的步骤，在反应液中使β-氨基酸作为固体析出。文档编号C12N15/09GK101809159SQ20088010877公开日2010年8月18日申请日期2008年9月30日优先权日2007年10月1日发明者秀崎友则申请人:三井化学株式会社