专利名称：坏死梭杆菌专用高效培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种坏死梭杆菌专用高效培养基及其制备方法。
背景技术：
坏死梭杆菌是一类在低氧分压条件下才能生长的专性厌氧菌， 该菌缺乏完整的代谢酶系统，能量代谢以无氧发酵方式进行，而无 氧发酵获得能量比有氧氧化产生能量低得多，现有的坏死梭杆菌培 养基一般采用牛肉汤、疱肉培养基和肝脑浸汁混合而成，由于营养 低氧化并且还原电势高，细菌生长不旺盛或不生长，不能达到疫苗 生产或研究需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种坏死梭杆菌专用高效培养基及其制 备方法，其培养基在培养坏死梭杆菌过程中，细菌生长旺盛，细菌产 量大，价格低廉，适于疫苗生产或白细胞毒素提取。本发明的技术方案是这样实现的坏死梭杆菌专用高效培养基 及其制备方法，其特征在于培养基由以下12种必需成分组成，牛肉、猪胰脏、胃蛋白酶、肝脏、氯仿、Na2HP04H H20、 NaCl、氯 化血红素、维生素K、半胱氨酸盐酸盐、葡萄糖和水； 具体的制备方法由以下步骤完成1、收集并处理培养基主要原料，包括牛肉、猪胰脏和肝脏；将 牛肉、猪胰脏和肝脏处理去除筋膜、脂肪，肝脏和部分牛肉切成小块，部分牛肉和猪胰脏剁碎备用；2、 制备基础培养液l:将18 Kg剁碎牛肉和30 Kg蒸馏水装入 容器中，加热到4()GC，用20。/。NaOH调Ph8.2，加入剁碎猪胰脏4Kg 和800 mL氯仿，42QC放置3d，浓盐酸调pH值5.4，煮沸过滤弃去 肉渣备用；制备基础培养液2:将猪肝脏500g切片，加蒸馏水2500g，煮沸30 min，过滤弃去肉渣备用；制备基础培养液3:切片牛肉500g，加蒸馏水2500g，煮沸30min, 过滤弃去肉渣备用；3、 取500 1000 mL基础培养液l，胃蛋白胨40 50 g，500 1000 mL基础培养液2， 500 1000 mL基础培养液3，Na2HP04H *H20 15 18 g， NaC130g，氯化血红素5 10g，维生素K0.5 lg，半胱氨酸 盐酸盐2.5 5 g，葡萄糖100 200 g，调pH值7.4 7.8制得培养基。本发明的积极效果是在坏死梭杆菌的培养过程中可降低成本，细 菌生长旺盛，细菌产量大，价格低廉，适于疫苗生产或白细胞毒素提 取。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述-实施例1:1、收集并处理培养基主要原料，包括牛肉、猪胰脏和肝脏；将 牛肉、猪胰脏和肝脏处理去除筋膜、脂肪，肝脏和部分牛肉切成小 块，部分牛肉和猪胰脏剁碎备用；2、 制备基础培养液h将18 Kg剁碎牛肉和30 Kg蒸馏水装入 容器中，加热到4()GC,用20。/。NaOH调Ph8.2，加入剁碎猪胰脏4Kg 和800 mL氯仿，42°C放置3d，浓盐酸调pH值5.4，煮沸过滤弃去 肉渣备用；制备基础培养液2:将猪肝脏500g切片，加蒸馏水2500g，煮沸30 min， 过滤弃去肉渣备用；制备基础培养液3:切片牛肉500 g，加蒸馏水2500g，煮沸30min,过滤弃去肉渣备用；3、 取500mL基础培养液1,胃蛋白胨40g， 500 mL基础培养液 2， 500mL基础培养液3， Na2HP04H H20 15 g， NaCl 30 g，氯化血 红素5g，维生素K0.5g，半胱氨酸盐酸盐2.5g，葡萄糖100g，调 pH值7.4制得培养基。实施例2:1、 收集并处理培养基主要原料，包括牛肉、猪胰脏和肝脏；将 牛肉、猪胰脏和肝脏处理去除筋膜、脂肪，肝脏和部分牛肉切成小 块，部分牛肉和猪胰脏剁碎备用；2、 制备基础培养液l:将18 Kg剁碎牛肉和30 Kg蒸馏水装入 容器中，加热到4()GC，用20。/。NaOH调Ph8.2，加入剁碎猪胰脏4 Kg 和800 mL氯仿，42°C放置3d，浓盐酸调pH值5.4，煮沸过滤弃去 肉渣备用；制备基础培养液2:将猪肝脏500g切片，加蒸馏水2500g，煮沸30 min，过滤弃去肉渣备用；制备基础培养液3:切片牛肉500g，加蒸馏水2500g，煮沸30min，过滤弃去肉渣备用；3、取800mL基础培养液l,胃蛋白胨45g， 800 mL基础培养液 2， 800mL基础培养液3， Na2HP04H H20 17 g， NaCl 30 g，氯化血 红素8g，维生素K0.8g，半胱氨酸盐酸盐3.5g，葡萄糖150g，调 pH值7.6制得培养基。实施例3:1、 收集并处理培养基主要原料，包括牛肉、猪胰脏和肝脏；将 牛肉、猪胰脏和肝脏处理去除筋膜、脂肪，肝脏和部分牛肉切成小 块，部分牛肉和猪胰脏剁碎备用；2、 制备基础培养液l:将18 Kg剁碎牛肉和30 Kg蒸馏水装入 容器中，加热到4(^C，用20n/。NaOH调Ph8.2，加入剁碎猪胰脏4Kg 和800 mL氯仿，42QC放置3d,浓盐酸调pH值5.4，煮沸过滤弃去 肉渣备用；制备基础培养液2:将猪肝脏500g切片，加蒸馏水2500g，煮沸30 min，过滤弃去肉渣备用；制备基础培养液3:切片牛肉500g，加蒸馏水2500g，煮沸30min, 过滤弃去肉渣备用；3、 取1000mL基础培养液l,胃蛋白胨50g， 1000 mL基础培养 液2, 1000mL基础培养液3， Na2HP04H H20 18 g， NaCl 30 g，氯 化血红素10g，维生素Klg，半胱氨酸盐酸盐5g，葡萄糖200g， 调pH值7.8制得培养基。
权利要求
1、坏死梭杆菌专用高效培养基，其主要成分为碳源物质和氮源物质，其特征在于它由以下物质组成500～1000mL基础培养液1，胃蛋白胨40～50g，500～1000mL基础培养液2,500～1000mL基础培养液3，Na2HPO4H·H2O15～18g，NaCl 30g，氯化血红素5～10g，维生素K 0.5～1g，半胱氨酸盐酸盐2.5～5g，葡萄糖100～200g，调pH值7.4～7.8制得培养基。
2、 根据权利要求1所述的坏死梭杆菌专用高效培养基的制备， 其特征在于具体的制备方法由以下步骤完成(1) 、收集并处理培养基主要原料，包括牛肉、猪胰脏和肝脏；将牛 肉、猪胰脏和肝脏处理去除筋膜、脂肪，肝脏和部分牛肉切成小块， 部分牛肉和猪胰脏剁碎备用；(2) 、制备基础培养液l:将18 Kg剁碎牛肉和30 Kg蒸馏水装入容 器中，加热到40。C，用20%NaOH调Ph8.2，加入剁碎猪胰脏4 Kg和 800 mL氯仿，42。C放置3天，浓盐酸调pH值5.4，煮沸过滤弃去肉制备基础培养液2:将猪肝脏500g切片，加蒸馏水2500g，煮沸30 min,过滤弃去肉渣备用；制备基础培养液3:切片牛肉500g，加蒸馏水2500g，煮沸30min, 过滤弃去肉渣备用；(3) 、取1000 mL基础培养液l，胃蛋白胨50g， 1000 mL基础培养 液2， 500 mL基础培养液3， Na2HP04H H20 18 g， NaCI 30 g，氯化血红素5g，维生素K0.5g，半胱氨酸盐酸盐2.5g，葡萄糖100g加 热混匀过滤，调pH值7.4即制备得专用培养基。
全文摘要
本发明涉及一种坏死梭杆菌专用高效培养基及其制备方法，其主要成分为碳源物质和氮源物质，其特征在于它由以下物质组成500～1000mL基础培养液1，胃蛋白胨40～50g，500～1000mL基础培养液2，500～1000mL基础培养液3，Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>H·H<sub>2</sub>O 15～18g，NaCl 30g，氯化血红素5～10g，维生素K 0.5～1g，半胱氨酸盐酸盐2.5～5g，葡萄糖100～200g，调pH值7.4～7.8制得培养基。在使用该培养基培养坏死梭杆菌时，细菌生长旺盛，细菌产量大，价格低廉，适于疫苗生产或白细胞毒素的提取。
文档编号C12N1/20GK101519642SQ20091006677
公开日2009年9月2日 申请日期2009年4月8日 优先权日2009年4月8日
发明者刘晓颖, 杨福合, 王克坚, 程世鹏, 陈立志 申请人:中国农业科学院特产研究所