专利名称：：菌株mt-06及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及黄蓝状菌(7^aro,ces/7aras)MT-06菌株及其相关应用，具体地说，涉及含有将具有抑制植物病害发生及防除效果的黄蓝状菌(rahro,cesZ7sws)MT-06菌株作为植物病害防除剂，及其应用上述防除剂的防除方法。
背景技术：
：草莓白粉病，作为一种植物病害，防除方法有例如，利用轮作、太阳热进行耕种和进行物理防除、利用化学农药迸行化学防除、应用抗病品种进行防除、利用对弱毒性病原菌具有拮抗作用的微生物进行生物防除。这当中，化学农药，特别是有机合成杀菌剂的开发研究近年来发展异常迅猛，接二连三地开发出了具有较高效力、不同作用的多种药剂，同时也进一步开发出了多种施用方法。应用上述药剂的化学防除方法对草莓白粉病防除和防除作业中节省劳动力作出了很大贡献，已被广泛应用。但是近年来，由于耐药菌的产生，出现了化学防除方法防除效果低下的现象。此外，由于草莓植株低矮，果实细嫩，容易发生病虫害，尤其在采收期，草莓白粉病、灰霉病等发生非常严重。为了增产增收，一些果农甚至在采收期间也多次喷施高毒化学农药，而草莓表面粗糙，很容易残留农药。因此，近年经常出现草莓果实农药严重超标的问题，严重影响了草莓产业的发展。此外，多次反复大量使用化学农药，将自然界所不存在的化学物质释放到环境中，不用说对动植物有直接毒性的药剂，即使是不完全释放的药剂对环境造成的恶劣影响也是令人担忧的。鉴于上述，用化学农药进行病害防除，由于耐药菌的出现使防除效果低下的可能性较高，同时化学农药在草莓果实上残留以及对环境造成的污染等问题严重，这种情况下，针对草莓主要病害研究开发新的生物杀菌剂己成为必要。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供菌株MT-06及其对草莓白粉病的防治。本发明的一种菌株MT-06,其特征在于该菌株为黄蓝状菌MT-06CGMCCNo:2865。保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。本发明的菌株MT-06的应用，菌株MT-06对草莓白粉病的防治方法(1)菌株MT-06菌液的制作先将菌株MT-06在PDA培养基上，25°C3CTC培养510天后，取平皿上PDA培养基培养的MT-06菌株直径约为4ram6腿的圆形小块5块放入已经灭菌的PDA液体培养基中，制作3瓶，28。C静置培养；1215天后，将上述培养液，经搅拌机磨碎后，取混合液将分生孢子浓度稀释至105106个/1111后待用；(2)在草莓白粉病发病初期，用稀释后的混合液施药，共施药三次。步骤(2)中施药的方式为喷雾方式。步骤(2)中施药三次分别在草莓白粉病发病初期第一次施药，第一次施药后7d、14d进行第二次、第三次施药。本发明具有以下有益效果本发明针对草莓病害的一种生防菌，拮抗菌MT-06对草莓白粉病具有较好的防效，尤其在持效性方面表现突出，并且对环境、人畜及有益生物安全。同时进行了该菌株的生防机制方面的研究，为进一步将该菌作为生防因子进行开发利用奠定了基础。具体实施例方式下面结合实施例来说明本发明的技术方案一种菌株MT-06，该菌株为黄蓝状菌MT-06CGMCCNo:2865。一、菌株MT-06的基本形态在PDA培养基上呈等径辐射生长，菌落圆形，呈地毯状平铺，初期为柠檬黄色，25'C培养两周后，菌落表面形成黄色小点状的子囊壳，子囊壳成熟后为球形、橙红色，大小为237352um，其内形成子囊；子囊长棒状，长度48.19.6um，内含8个子囊孢子；子囊孢子圆形，大小3.94.8umX3.23.6um。二、菌株MT-06的生物学特性表1不同培养基对菌丝生长及产孢的影响培养基菌落直径/cm产孢量/X1()5个/ml3days6days/z、丄\_/，/ui丄PDA2.65.149.375PSA2.75.212.500查氏1.62.830.688燕麦片2.254.440.438淀粉琼脂1.93.720.562豆芽汁2.64.981.750酵母膏葡2.554.31.188菌株在PSA和PDA上生长速度最快，其次是豆芽汁培养基、燕麦片培养基和酵母膏葡萄糖琼脂培养基，在淀粉琼脂和査氏培养基上生长缓慢。PDA培养基产孢最多，其次为PSA、豆芽汁培养基、酵母膏葡萄糖琼脂培养基，查氏培养基、燕麦片培养基、淀粉琼脂培养基产孢较差，不宜用来做产孢培养基。表2不同光照条件对菌丝生长及产孢的影响光照菌落直径/cm产孢量/Xl。5个/ml3days6days24D2.124.849.3758L/16D2.344.962.12512L/12D2.835.092.87516L/8D3.025.152.75024L3.225.363.125光照时间越长，菌株的生长速度越快，但是光照对菌株生长速度的影响不是很大。24小时全黑的环境有利于产孢，产孢量:显著高于其他处理，其他四种处理均不利于产孢。表3不同pH值菌丝生长及产孢的影响菌落直径/cm产孢量3days/Xl()5个/ml6days42.504.800.12552.444.790.25062.444.830.37572.404.830.87582.344.770.93892.204.101.625102.203.730.562112.003.470.625121.702.900.188菌株在pH412的范围内均可生长，最适pH为47，在中性偏酸条件下生长较好。菌株在pH412均可产孢。pH为49时产孢量随pH的升高而增加，在pH为9时产孢量最高，pH为〉9时产孢量随pH的升高而迅速下降。表4不同温度对菌丝生长及产孢的影响菌落直径温度处理°C/cm3days6days产孢量/XlQ5个/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>菌落生长最适温度是30°C，低于10。C或高于4(TC不利于其生长。菌株在2535"C均可产孢，最适产孢温度为30°C。实施例一菌株MT-06对草莓白粉病的防治效果菌株MT-06菌液的制作先将菌株MT-06在PDA培养基上，25。C30。C培养510天后，取平皿上PDA培养基培养的MT-06菌株(带培养基)直径约为4mm6mra的圆形小块5块放入已经灭菌的PDA液体培养基中，制作3瓶，28。C静置培养；1215天后，将上述培养液，经搅拌机磨碎后，得到混合液，混合液离心，取上清液、培养物(菌丝和孢子)，上清液和培养物各稀释10倍，得到孢子浓度在105106个/1111，待用。施药本试验共设5个处理，3次重复，共计15个小区，每小区草莓面积lm2(品种丰香)，采用随机区组排列。5个处理分别为MT-06菌株液体培养混合液，MT-06菌株培养液(上清液10倍稀释后的培养液)，MT-06菌株培养物(稀饭10倍后的菌丝与孢子)，翠贝50%千悬浮液，清水处理为空白对照。在草莓白粉病发病初期第一次施药，第一次施药后7d、14d进行第二次，第三次施药。采用Jacto-HD400型手动喷雾器，全株均匀喷雾，共施药三次。病情调查第一次施药前夕调查病情基数，第三次施药后7d、14d。每小区10点取样，择每株具有代表性的3片复叶，以复叶上每一小叶上病斑面积占整个小叶面积的百分率分级。根据以下分级方法记录不同处理的病叶病级，计算病情指数及相对防治效果，数据采用Turkey法进行统计分析[4]。分级方法0级无病斑；1级病斑面积占整个叶面积的5%以下；3级病斑面积占整个叶面积的6%-15%;5级病斑面积占整个叶面积的16%_25%;7级病斑面积占整个叶面积的26%_50%;9级病斑面积占整个叶面积的50%以上。病情指数(%)=[1:(各级病叶数X相对级数值)/(调査总叶数X最高病级数)]X勤防治效果(％)={1-[(CK0病指Xptl病指)/(CK1病指XptO病指川X100其中CK0表示空白对照区施药前病情指数;CK1表示空白对照区施药后病情指数;Pt0表示药剂处理区施药前病情指数;pt1表示药剂处理区施药后病情指数。结果与分析表5各处理对草莓白粉病的防治效果分析。施药后7天施药后14天病情:指数防治效果病情指数防治效果MT-06菌株混合液5.5679.421.1191.32MT-06菌株培养液9.7848.257.4441.88MT-06菌株培养物6.6764.733.3373.96翠贝50%干悬浮液3.3382.363.8969.62清水18.912.8试验结果表明，完成三.次施药7天后，供试菌株的.三种处理对病害均有较好的防治效果，其中混合液的防效最好，仅次于杀菌剂翠贝50%干悬浮液的防效，培养物次之，再次为培养液。完成三次施药14天后，供试菌株混合液和培养物对病害的防治效果明显上升，并超过了杀菌剂翠贝50%干悬浮液。而翠贝50%干悬浮液和菌株培养液的防效则随着时间的推移降低了。最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例子。显然，本发明不限于以上实施例子，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。9权利要求1、一种菌株MT-06，其特征在于该菌株为黄蓝状菌MT-06CGMCCNo2865。2、权利要求1所述菌株MT-06的应用，其特征在于菌株MT-06对草莓白粉病的防治方法(1)菌株MT-06菌液的制作将菌株MT-06在PDA培养基上，25。C30。C培养510天后，取平皿上PDA培养基培养的MT-06菌株直径约为4腿6mm的圆形小块5块放入已经灭菌的PDA液体培养基中，制作3瓶，28'C静置培养；1215天后，将上述培养液，经搅拌机磨碎后，取混合液将分生孢子浓度稀释至105106个/ml后待用；(2)在草莓白粉病发病初期，用稀释后的混合液施药，共施药三次。3、根据权利要求2所述的菌株MT-06的应用，其特征在于步骤(2)中施药的方式为喷雾方式。4、根据权利要求2所述的菌株MT-06的应用，其特征在于步骤(2)中施药三次分别在草莓白粉病发病初期第一次施药，第一次施药后7d、14d进行第二次、第三次施药。全文摘要本发明公开了本发明的一种菌株MT-06，该菌株为黄蓝状菌MT-06CGMCCNo2865，同时公开了本发明的菌株MT-06对草莓白粉病的防治方法。本发明针对草莓病害的一种生防菌，拮抗菌MT-06对草莓白粉病具有较好的防效，尤其在持效性方面表现突出，并且对环境、人畜及有益生物安全。文档编号C12N1/14GK101649295SQ20091015268公开日2010年2月17日申请日期2009年9月17日优先权日2009年9月17日发明者华姜,孙国昌,震张,杜新法,柴荣耀,毛雪琴,王教瑜,王艳丽,邱海萍申请人:浙江省农业科学院