专利名称：一种新型的牛结核分枝杆菌双相培养基的制作方法
技术领域：
这种新型的牛结核分枝杆菌双相培养基属于一种医疗用品。解决了原有培养基只 为单一固体培养基即丙酮酸钠培养基，培养周期长，不能快速发现污染菌的缺陷。
背景技术：
在临床上，痰菌检查是诊断肺结核病以及判断肺结核病传染性强弱的最直接、最 主要的依据，只有培养出分枝杆菌，才能进一步做药敏试验找到对分枝杆菌有效的药物。分 枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌。结核分枝杆菌复合群中包括牛结核分 枝杆菌。牛结核分枝杆菌分离培养采用丙酮酸钠固体培养基。丙酮酸钠固体培养基基础液谷氨酸钠(纯度99%以上)7. 2克磷酸二氢钾2. 4克硫酸镁(MgSO4· 7H20) 0. 24 克柠檬酸镁0. 6克丙酮酸钠1. 6克葡萄糖4. 0克蒸馏水600毫升无机盐和有机物试剂均应采用化学纯(CP)试剂新鲜鸡卵液1000毫升2%孔雀绿水溶液20毫升制备方法量取蒸馏水600毫升。加入各无机盐成份、谷氨酸钠和丙三醇，IOCTC加热30分钟， 冷却后加入葡萄糖。洗净新鲜鸡卵表面，浸泡在70%乙醇或其它稀释消毒液中20 30分 钟。取出，擦干，开口，收集鸡卵液，搅勻。通过消毒的纱布过滤成鸡卵液。将600毫升基础 液和1000毫升新鲜鸡卵液混勻。加2%孔雀绿水溶液20毫升，混勻，静置1小时后，分装7 毫升至标准螺旋盖培养管经培养基蒸汽凝固灭菌器，85°C灭菌50分钟。丙酮酸钠液体培养基制备天门冬氨酸0. 2g, MgSO4O. 05g,丙酮酸钠0. 27g, KH2PO4O. 5g，，葡萄糖0. 67g枸橼酸 钠0. 5g，水IOOml，PH 7. 2，加入2 %孔雀绿水溶液4ml，121 °C，20分钟高压冷却后加25ml无
菌血浆。沙氏培养基制备蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂粉13g，水1000ml，121 °C，20分钟高压后无菌灌装。做痰、体液等标本的牛结核分枝杆菌的培养时，需要对其进行前处理，即在离心管 内加入标本后，再加入标本体积1-2倍的4%的NaOH液漩涡振荡10秒后，静置20分钟。临床上要求提高牛结核分枝杆菌培养的效率，适宜牛结核分枝杆菌生长的是丙酮 酸钠固体培养基，在固体培养基中，牛结核分枝杆菌长成菌落需要三周以上的时间，而在丙酮酸钠液体培养基中生长速度快两周即可。前处理虽能尽量除去杂菌，但同时也应尽可能 减少对分枝杆菌的损害，因此，前处理不能完全除去杂菌。在培养过程中，也就不可避免的 存在污染菌，污染菌大多数是真菌，为了快速鉴别污染菌，在装有丙酮酸钠培养基的瓶中再 加入沙保罗氏培养基，沙氏培养基是专用于真菌培养分离的培养基，真菌在其上生长速度 较快，所以能快速发现和鉴别污染菌，从而提高了培养效率。
发明内容本培养基的目的是克服上述的问题，提供一种适用于牛结核分枝杆菌培养基，在 原有丙酮酸钠固体培养基的基础上，管内同时配置丙酮酸钠液体培养基和沙保罗氏培养 基，丙酮酸钠液体培养基加快牛结核分枝杆菌的生长，沙氏培养基能快速发现污染菌，在牛 结核分枝杆菌培养的检查中缩短时间，提高效率。本培养基制备过程是先无菌加入IOml丙 酮酸钠固体培养基，放斜面冷却后再加入IOml沙氏培养基，放斜面冷却，此时注意两种培 养基不要混合，最后加入IOml丙酮酸钠液体培养基。本实用新型的技术方案一种新型的牛结核分枝杆菌双相培养基，其特征是夕卜 瓶为塑料瓶，瓶高7cm，瓶体厚1mm，瓶体外径4cm，瓶盖高12mm，盖厚1mm，瓶盖内有防漏液胶 垫。瓶内为丙酮酸钠固体培养基斜面、沙保罗氏固体培养基斜面、IOml丙酮酸钠液体培养 基。丙酮酸钠固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm，丙酮酸钠固体培养基的正对 面为沙保罗氏固体培养基，沙保罗氏固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm。进一 步的技术方案所述的装置内有沙氏培养基斜面。所述的装置内装丙酮酸钠液体培养基和丙酮酸钠固体培养基。本实用新型的有益效果是该培养基能缩短牛结核分枝杆菌培养时间，并能快速 发现污染菌提高了牛结核分枝杆菌的检验质量。通过大样本(520例)实验表明，使用该培 养基在相同的条件下，比单纯的丙酮酸钠固体培养基培养速度快了一周，并把发现和鉴别 污染菌的时间由原来的5至6天缩短到2天。本单位使用该培养基后，不仅缩短了牛结核 分枝杆菌的培养时间，还降低了污染率，提高了牛结核分枝杆菌的培养效率，受到了临床大 夫和病人的一致欢迎。充分说明了该标本瓶的实用性、科学性、结构合理的特点，是一种新 型实用的培养基，值得在牛结核分枝杆菌培养检验中推广应用。
以下结合附图对本实用新型作进一步说明
图1为本实用新型培养基的主视图。图2为本实用新型培养基的左视图。图中1瓶盖、2瓶体、3丙酮酸钠固体培养基、4沙氏培养基、5丙酮酸钠液体培养
基
具体实施方式
如
图1、2所示，该牛结核分枝杆菌培养装置由培养瓶和培养基组成，培养瓶为PVC 材料制成，有螺旋内丝与瓶颈外丝配合，瓶盖内垫子由硅胶制成，瓶盖与瓶体能够紧密连接。瓶内装有丙酮酸钠固体培养基、丙酮酸钠液体培养基和沙氏培养基。使用本装置进行培养的过程为(1)在冰箱中取出本培养装置。(2)使用时拧开瓶盖，微倾斜培养基瓶，使用灭菌后的吸管吸取前处理后的痰等液体标本，先加入2滴覆盖丙酮酸钠培养基斜面，再加入2滴覆盖沙氏培养基斜面后，再加1 滴入丙酮酸钠液体培养基，最后拧紧瓶盖，竖直放37°C培养。
权利要求一种新型的牛结核分枝杆菌双相培养基，特征在于外瓶为塑料瓶，瓶高7cm，瓶体厚1mm，瓶体外径4cm，瓶盖高12mm，盖厚1mm，瓶内为丙酮酸钠固体培养基斜面和沙保罗氏固体培养基斜面和10ml丙酮酸钠液体培养基，丙酮酸钠固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm，丙酮酸钠固体培养基的正对面为沙保罗氏固体培养基，沙保罗氏固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm。
2.根据权利1所述的一种新型的牛结核分枝杆菌双相培养基，瓶盖内有防漏液胶垫。
专利摘要该培养基属于一种医疗用品。提供一种适用于牛结核分枝杆菌分离的培养基，外瓶为塑料瓶，瓶内为丙酮酸钠固体培养基斜面和沙保罗氏固体培养基斜面和10ml丙酮酸钠液体培养基，丙酮酸钠固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm，其正对面为沙保罗氏固体培养基，沙保罗氏固体培养基斜面高45mm，在瓶底的部分宽15mm，瓶盖内有防漏液胶垫，因为丙酮酸钠液体培养基能加快牛结核分枝杆菌的生长，沙氏培养基能快速发现污染菌，在牛结核分枝杆菌培养的检查中缩短培养周期，提高工作效率。
文档编号C12Q1/04GK201648404SQ2010201749
公开日2010年11月24日 申请日期2010年4月4日 优先权日2010年4月4日
发明者冯冬霞, 刘亚芹, 吴长刚, 张法国, 杨振斌, 隋振亚 申请人:刘亚芹;吴长刚