专利名称：一种分离纯化鲍鱼蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及水产加工下脚料加工领域。
背景技术：
鲍鱼是名贵的海珍品，营养价值丰富，但在鲍鱼蛋白生产中腥臭问题难以解决， 常常成为废弃物，得不到利用且造成很大的环境污染。目前国内外尚未有对鲍鱼蛋白进行分离纯化的报道。
发明内容
本发明提供一种分离纯化鲍鱼蛋白的方法，该方法旨在提高鲍鱼附加值；为海洋水产制备调味品及功能性保健品提供良好的原料；减少鲍鱼深加工过程对环境的污染和能源消耗。本发明的技术方案是它包括以下步骤
A)将新鲜鲍鱼脏器洗净后，加入鲍鱼脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍鱼脏器预处理液，进行B步骤；
B)在低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液，进行C步
骤；
C)将上述步骤的处理液离心，去除上清液，得沉淀物，进行D步骤；
D)乙醇脱色脱腥将从鲍鱼脏器中分离出的蛋白，在50%-95%的食用酒精中洗涤后，离心取沉淀，重复洗脱多次；
E)干燥经过干燥得到鲍鱼蛋白。本发明的突出优点是
1.本发明首次采用高压脉冲电场(PEF)提取技术结合乙醇脱色技术分离纯化鲍鱼蛋白。2.本发明在原料处理过程中所使用的处理方法能够最大限度的去除非蛋白成分， 提高蛋白的得率和纯度。3.本发明采用高压脉冲电场(PEF)提取技术结合乙醇脱色技术解决了鲍鱼蛋白脱色、脱腥的问题。4.有利于废物利用，减少废物对环境的污染。
具体实施例方式本发明的技术方案按如下所述实现
A)原料处理在1_30°C的常温或低温下，将新鲜鲍鱼脏器冲洗干净，去除结缔组织，按照料液重量比1:1-1:5加入蒸馏水，打浆、过20-40目筛、搅勻，制备成鲍鱼脏器预处理液。B)高压脉冲电场处理在常温或低温下，将鲍鱼脏器预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15-35kV/cm、频率200_3170Hz、脉宽1. 5μ s_17y s的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500 μ s，得PEF处理液，进入步骤C。C)将上述步骤B的处理液离心，去除上清液，得沉淀物，进行D步骤。或者所述的C)步骤是将PEF提取液离心后，弃上清，得到蛋白沉淀；在体积分数3%的HAc溶液环境下，调配质量分数2%-5%的壳聚糖溶液，50°C水浴条件下搅拌、溶解 IOmin,待完全溶解成透明、粘稠状胶体溶液后，按与PEF提取液体积比1 10加入上清液中， 并在30°C水浴条件下搅拌30min，充分吸附蛋白质；之后，离心，弃上清液，得到蛋白沉淀； 合并两步蛋白沉淀，进入D步骤。D)乙醇脱色脱腥
所述的D步骤是将C步骤所得的蛋白沉淀加入1-4倍该体积的的浓度50%-95%的食用酒精，洗涤后离心，弃上清液；将得到的沉淀按上述操作步骤重复多次，得到脱色脱腥的鲍鱼蛋白。该蛋白可进一步水解制备调味品或功能性保健品。E)干燥
将上步骤D中得到的鲍鱼蛋白干燥后得到鲍鱼蛋白粉。实施例1
在10°C下，取IOkg洗净、将新鲜鲍鱼脏器，按料液比1:1加蒸馏水、打浆、过40目筛、 搅勻，制备成鲍鱼脏器预处理液。将鲍鱼脏器预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15kV/cm，频率3170Hz，脉宽1. 5 μ s，处理时间1500 μ s，得PEF处理液，在分离因数为 15160G的条件下离心分离，弃上清液，得到鲍鱼蛋白沉淀物。将上述鲍鱼蛋白沉淀物加入1倍体积95%的食用酒精洗涤后离心，弃上清液。将得到的沉淀按上述酒精洗涤步骤重复2次。将得到的蛋白沉淀用1倍蒸馏水复溶后，经喷雾干燥得到鲍鱼蛋白粉。实施例2:
在20°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼脏器，按料液比1:2加蒸馏水、打浆、过40 目筛、搅勻，制备成鲍鱼脏器预处理液。将鲍鱼脏器预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度20kV/cm，频率1000Hz，脉宽2. 0 μ s，处理时间1200 μ s，得PEF处理液，弃上清得到蛋白沉淀；在体积分数3%的HAc溶液环境下，调配质量分数3%的壳聚糖溶液，50°C水浴条件下搅拌、溶解lOmin，待完全溶解成透明、粘稠状胶体溶液后，按与壳聚糖提取液体积比 1 10加入，并在30°C水浴条件下搅拌30min，充分吸附蛋白质。之后，进行离心，弃上清，得到蛋白沉淀；合并两步蛋白沉淀。将蛋白沉淀加入4倍体积65%的食用酒精洗涤后离心，弃上清液。将得到的沉淀按上述酒精洗涤操作步骤重复2次。将得到的蛋白沉淀用2倍蒸馏水复溶后，蒸发去除其中的残余酒精，再经冷冻干燥后得到鲍鱼蛋白粉。实施例3
在室温条件30°C下，取IOKg洗净后的鲍鱼脏器，去结缔组织后按料液比1:4加蒸馏水打浆、过20目筛后，制得原料预处理液。将鲍鱼脏器预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度25kV/cm，频率1500Hz，脉宽5. 0 μ s，处理时间800 μ s，得PEF处理液。将PEF提取液离心后，弃上清得到蛋白沉淀；将蛋白沉淀加入3倍体积75%的食用酒精洗涤后离心，弃上清液。将得到的沉淀按上述操作步骤重复3次，热风干燥经粉碎后得到鲍鱼蛋白粉。实施例4:在室温条件1°C下，取IOKg洗净后的鲍鱼脏器，按料液比1:3加蒸馏水打浆、过40目筛后，制得原料预处理液。将该预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度30kV/cm，频率 500Hz，脉宽8. 0 μ s，处理时间500 μ s，得PEF处理液。在分离因数为15160G的条件下离心分离，弃上清得到鲍鱼蛋白沉淀物。将上述鲍鱼蛋白沉淀物加2倍体积85%的食用酒精洗涤后离心，弃上清液。将得到的沉淀按上述酒精洗涤步骤重复2次。将得到的蛋白沉淀用1倍蒸馏水复溶后，经喷雾干燥得到鲍鱼蛋白粉。实施例5
在室温条件10°c下，取IOKg洗净后的鲍鱼脏器，去结缔组织后加50L水打浆、勻浆，将此勻浆过20目筛后，均质后，制得原料预处理液。将鲍鱼脏器预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度:35kV/cm，频率200Hz，脉宽17. 0 μ s，处理时间300 μ S。将PEF提取液离心后，弃上清得到蛋白沉淀；将蛋白沉淀加4倍体积50%的食用酒精洗涤后离心，弃上清液。 将得到的沉淀按上述操作步骤重复3次，热风干燥经粉碎后得到鲍鱼蛋白粉。
权利要求
1.一种分离纯化鲍鱼蛋白的方法，其特征在于它包括以下步A)将新鲜鲍鱼脏器洗净后，加入鲍鱼脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍鱼脏器预处理液，进行B步骤；B)在低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液；C)将上述步骤的处理液离心，去除上清液，得沉淀物，进行D步骤；D)乙醇脱色脱腥将从鲍鱼脏器中分离出的蛋白，在50%-95%的食用酒精中洗涤后，离心取沉淀，重复洗脱多次；E)干燥经过干燥得到鲍鱼蛋白。
2.根据权利要求1所述的分离纯化鲍鱼蛋白的方法，其特征在于所述的高压脉冲电场处理的方法是在1-30°C的温度下，将鲍鱼脏器预处理液通过电场强度15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1. 5μ s-17y s的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500 μ S。
3.根据权利要求1所述的分离纯化鲍鱼蛋白的方法，其特征在于所述的D步骤是将 C步骤所得的蛋白沉淀加入1-4倍该体积的的浓度50%-95%的食用酒精，洗涤后离心，弃上清液；将得到的沉淀按上述操作步骤重复多次，得到脱色脱腥的鲍鱼蛋白。
4.根据权利要求1所述的分离纯化鲍鱼蛋白的方法，其特征在于所述的C)步骤是 将PEF提取液离心后，弃上清，得到蛋白沉淀；在体积分数3%的HAc溶液环境下，调配质量分数2%-5%的壳聚糖溶液，50°C水浴条件下搅拌、溶解lOmin，待完全溶解成透明、粘稠状胶体溶液后，按与PEF提取液体积比1 10加入上清液中，并在30°C水浴条件下搅拌30min，充分吸附蛋白质；之后，离心，弃上清液，得到蛋白沉淀；合并两步蛋白沉淀。
全文摘要
本发明涉及一种分离纯化鲍鱼蛋白的方法，它的步骤是①将洗净后的鲍鱼脏器，打浆后经高压脉冲电场处理，离心去除含有多糖和脂肪的上清液后得到鲍鱼蛋白质沉淀；②将从鲍鱼脏器中分离出的蛋白，在食用酒精中洗涤后,离心取沉淀，重复洗脱多次。所采用的PEF细胞膜电穿孔技术结合乙醇脱色技术可有效提高蛋白质得率和纯度，并使所得到的蛋白质不变性，质量好。该蛋白可进一步水解制备调味品或功能性保健品。
文档编号A23J1/04GK102178027SQ20111012317
公开日2011年9月14日 申请日期2011年5月13日 优先权日2011年5月13日
发明者方婷, 郭芳, 陈锦权 申请人:漳州欧圣食品有限公司, 陈锦权