专利名称：一种发酵乳杆菌La-Y1高密度培养的方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程领域，特别涉及一种发酵条件和发酵培养基，以及应用该培养基高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的方法。
背景技术：
大豆将是21世纪的维生素，是随着人口增加、粮食短缺状况下的粮食理想替代物，世界各国对大豆制品及其功能性成分都极其关注；美中不足的是豆类所含的低聚糖不易被消化吸收，却被肠道细菌发酵，引起嗝气、肠鸣、腹胀、腹痛等症状。人们试图利用各种 方法(大豆萌发、果实浸润、水抽提)除去大豆中的棉籽糖和水苏糖，但这些方法都工艺复杂，成本较高。目前行之有效的方法之一是采用现代生物工程技术的成果-外源酶制剂来消除大豆中a-半乳糖苷类化合物的影响。但是，商品化生产的a-半乳糖苷酶酶活不高且价格昂贵。目前，主要以微生物发酵法生产a-半乳糖苷酶制剂。a -半乳糖苷酶(EC3. 2. I. 22, a -D-galactosidase)，最初是从管底酵母(bottomyeast)中分离出来的，由于可以分解蜜二糖而称之为蜜二糖酶。通过对各种碳水化合物为基质的蜜二糖酶特性的研究，发现以具有a -D-半乳糖苷结构的碳水化合物为该酶的主要作用对象，因此蜜二糖酶被命名为a-半乳糖苷酶。a-半乳糖苷酶能水解含半乳糖的低聚糖、半乳糖苷聚糖、半乳糖脂等中的非还原性末端中的a-D-半乳糖苷。它们广泛存在于微生物、植物、动物中。现今对a-半乳糖苷酶的研究表明，该酶在饲料、制糖、食品、医药工业等领域具有广泛的应用前景，并已筛选出不少产a-半乳糖苷酶活性高的微生物，进行了广泛深入的研究。很早就发现酵母菌、乳酸菌和曲霉的一些种能产生a-半乳糖苷酶。以后又相继发现了较多的细菌，如假单孢杆菌、产气气杆菌、大肠杆菌和梭状芽孢杆菌等。其中乳酸菌中能产生a-半乳糖苷酶的有乳杆菌、乳链球菌、双歧杆菌、植物乳杆菌等。发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)作为异型发酵乳酸菌,传统上多用于谷物发酵。通过对不同的发酵乳杆菌菌株生理特征的研究发现，发酵乳杆菌有很多乳酸菌优良的特性，在国外发酵乳杆菌早已经列入益生菌类，应用于豆乳的发酵，以消除豆乳中的胀气因子a-半乳糖苷类低聚糖。从泡菜中分离筛选得到I株发酵乳杆菌La-Yl，经过液体培养基发酵，测定到产a -半乳糖苷酶最大酶活为17. 35U/mL。
发明内容
作为产a -半乳糖苷酶的优良菌株来源，对从泡菜中分离筛选得到的发酵乳杆菌La-Yl进行高密度培养具有很重要的意义。本发明提供了发酵乳杆菌La-Yl的最适发酵条件及最适发酵培养基组成，以提高培养基中发酵乳杆菌La-Yl的菌体浓度。本发明用于高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的发酵条件为培养温度37°C、初始PH6. O、发酵乳杆菌La-Yl的接种量5%。本发明用于高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的发酵培养基，各组分按重量配比2份葡萄糖，0. 5份牛肉膏、0. 5份胰酶解酪朊、2份玉米浆粉、0. 2份柠檬酸二胺、0. 5份乙酸钠、
0.I份吐温80、0. 025份硫酸锰、0. 058份硫酸镁，0. 2份磷酸二氢钾。该培养基的制备方法将2份葡萄糖、0. 5份牛肉膏、0. 5份胰酶解酪朊、2份玉米浆粉、0. 2份柠檬酸二胺、0. 5份乙酸钠、0. I份吐温80、0. 025份硫酸锰、0. 058份硫酸镁、0. 2份磷酸二氢钾混合，用蒸馏水彻底溶解，定容至100份，调节初始pH6. 0,121°C灭菌15min即可使用。该培养基高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的应用方法，包括以下步骤将20g葡萄糖、5g牛肉膏、5g胰酶解酪朊、20g玉米浆粉、2g柠檬酸二胺、5g乙酸钠、Ig吐温80、0. 25g硫酸锰、0. 58g硫酸镁及2g磷酸二氢钾制得的IL初始pH6. 0的培养基与发酵乳杆菌La-Yl混匀，37°C培养16_18h，得到高浓度的发酵乳杆菌La-Yl菌体。 将50mL发酵乳杆菌La-Yl与所述的培养基混匀，37°C培养16_18h，得到高浓度的发酵乳杆菌La-Yl菌体。本发明的优点I、发酵乳杆菌La-Yl在最适发酵条件及发酵培养基中相对于基础MRS培养基菌数增加了 10多倍，菌体浓度达到了 3. 05X101Qcfu/mL。2、该培养基中牛肉膏和胰酶解酪朊含量只需0. 5%，相对于基础MRS培养基中1%牛肉膏和1%胰蛋白胨，大大降低了成本。对直投式发酵剂的研制具有现实意义。
具体实施例方式以下通过实施例进一步对本发明进行描述实施例I、培养基及制备方法
葡萄糖20g
牛肉膏5g 胰酶解酪朊5g
玉米浆粉20g
柠檬酸二胺2g 乙酸钠5g
吐温80Ig
硫酸锰0. 25g
硫酸镁0. 58g
磷酸二氢钾2g将葡萄糖20g、牛肉膏5g、胰酶解酪朊5g、玉米浆粉20g、柠檬酸二胺2g、乙酸钠5g、吐温80 lg、硫酸猛0. 25g、硫酸镁0. 58g、磷酸二氢钾2g混合,用蒸懼水彻底溶解,定容至1L，调节初始pH6. O，121°C灭菌15min后得本发明的培养基。实施例2、培养基的应用及高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的方法将实施例I中所述培养基与50mL发酵乳杆菌La-Yl混匀，37°C培养16_18h。发酵乳杆菌La-Yl的菌体浓度达到了 3. 05 X 1010cfu/mL,相对于基础MRS培养基菌数增加了 10多倍。
最后，还需要注意的是，以上例举的仅是本发明的具体实施例子。显然，本发明不限于以上实施例子，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
权利要求
1.一种发酵乳杆菌La-Yl高密度培养的方法，其主要特征在于发酵条件为培养温度37°C、初始pH6. O、发酵乳杆菌La-Yl的接种量5%;发酵培养基的各组分按重量配比为2份葡萄糖，0. 5份牛肉膏、0. 5份胰酶解酪朊、2份玉米浆粉、0. 2份柠檬酸二胺、0. 5份乙酸钠、0.I份吐温80、0. 025份硫酸锰、0. 058份硫酸镁，0. 2份磷酸二氢钾。
2.如权利要求I所述培养基的制备方法，其特征在于将2份葡萄糖、0.5份牛肉膏、0.5份胰酶解酪朊、2份玉米浆粉、0. 2份柠檬酸二胺、0. 5份乙酸钠、0. I份吐温80、0. 025份硫酸锰、0. 058份硫酸镁、0. 2份磷酸二氢钾混合，用蒸馏水彻底溶解，定容至100份，调节初始pH6. 0，121°C灭菌15min即可使用。
3.如权利要求I所述的培养基高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的应用方法，其特征依次包括以下步骤 将20g葡萄糖、5g牛肉膏、5g胰酶解酪朊、20g玉米浆粉、2g柠檬酸二胺、5g乙酸钠、Ig吐温80、0. 25g硫酸锰、0. 58g硫酸镁及2g磷酸二氢钾制得的IL初始pH6. 0的培养基与发酵乳杆菌La-Yl混匀，37°C培养16_18h，得到高浓度的发酵乳杆菌La-Yl菌体。
4.如权利要求3所述的高密度培养发酵乳杆菌La-Yl的方法，其特征在于将50mL发酵乳杆菌La-Yl与培养基混匀，37°C培养16_18h，得到高浓度的发酵乳杆菌La-Yl菌体。
全文摘要
本发明公开了一种发酵乳杆菌La-Y1高密度培养的方法，包括(1)发酵条件为培养温度37℃、初始pH6.0、发酵乳杆菌La-Y1的接种量5％。(2)发酵培养基的各组分按重量配比2份葡萄糖，0.5份牛肉膏、0.5份胰酶解酪朊、2份玉米浆粉、0.2份柠檬酸二胺、0.5份乙酸钠、0.1份吐温80、0.025份硫酸锰、0.058份硫酸镁，0.2份磷酸二氢钾。本发明还公开了一种上述发酵乳杆菌La-Y1的应用方法。通过本发明，发酵乳杆菌La-Y1在培养基中相对于基础MRS培养基菌数增加了10多倍，菌体浓度达到了3.05×1010cfu/mL。培养基中牛肉膏和胰酶解酪朊含量只需0.5％，较基础MRS培养基大大降低了成本。对直投式发酵剂的研制具有现实意义。
文档编号C12N1/20GK102807959SQ20111014251
公开日2012年12月5日 申请日期2011年5月30日 优先权日2011年5月30日
发明者周永山 申请人:绍兴市古煌酿酒有限公司