专利名称：16个基因座快速复合pcr扩增荧光检测试剂盒及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测人类基因组DNA中多个STR基因座的试剂盒，具体涉及一种检测15个STR基因座和1个性别鉴定基因座的快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，属于生物检测技术领域。
背景技术：
短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是由于STR基因座的片段小、容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性，因此法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国 ABI公司为代表的研发商建立起了荧光复合扩增体系。目前最具代表性的是ABI (Applied Biosystems, USA)公司的 Identif iler 和 Promega (USA)公司的 PowerPlex-16 荧光检测试剂盒。法医DNA分析就是利用DNA分型技术，确定现场法医物证的DNA基因型，并应用同样技术确定犯罪嫌疑人的DNA基因型，通过两者的比对，从而认定犯罪事实或排除犯罪嫌疑。随着法医DNA分型技术的发展，目前已经能对类似血痕、精斑、唾液斑、毛发、骨骼等进行DNA分型，达到认定水平，成为刑事技术中科技含量最高、实用性最强的方法之一，检验结果得到了司法机关特别是审判机关的普遍采信，DNA分型技术成为刑事侦查和法庭审判的最重要依据之一。目前的STR分型技术，往往包括样本检材的DNA提取、PCR扩增和分型检测三项主要操作步骤，获得一个样本的最终分型结果往往需要8个小时以上。缩短样本DNA检验时间，在实际检案中将有利于快速锁定犯罪嫌疑人，或排除无辜人员，在案件侦破过程中具有重要意义，已经成为科研攻关的一个新的重点，是法庭科学DNA分型技术发展的必然方向。
发明内容
本发明实施例的目的是针对上述现有技术的缺陷，提供了一种能够缩短获得样本最终分型结果时间的16基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒。为了实现上述目，采取的技术方案
一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括PCR 缓冲液、MgCl2, dNTPs和牛血清蛋白的混合物，热启动快速Taq酶，16对引物混合物以及超纯水；
其中16对引物混合物为
权利要求
1. 一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括 PCR缓冲液、MgCl2, dNTPs和牛血清蛋白的混合物，热启动快速Taq酶，16对引物混合物以及超纯水；其中16对引物混合物为
2.根据权利要求1所述的一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，其特征在于所述的16个基因座分为4组，并其对应的引物对分别用4种不同的颜色的荧光染料进行标记，所述的四种荧光染料为蓝色荧光染料6-FAM、绿色荧光染料HEX;黄色荧光染料 TAMRA、红色荧光染料标记ROX ；内标选用橙色荧光SIZ。
3.根据权利要求2所述的一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，其特征在于所述的16个基因座分为4组，其对应的引物分别用4中不同的颜色的荧光染料进行标记，分组方式为Amelogenin, D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539 和 D6S1043 为一组， 采用蓝色荧光染料标记，荧光标记物为6-FAM ；TP0X、TH01、D2S1338和CSFlPO为一组，采用绿色荧光染料标记，荧光标记物为HEX ；vWA、D5S818和FGA为一组，采用黄色荧光染料标记， 荧光标记物为TAMRA ；D8S1179、D21S11和D18S51为一组，采用红色荧光染料标记，荧光标记物为ROX ；内标选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，其特征在于使用所述试剂盒的PCR扩增体系的pH值为8. 0-9.0，镁离子浓度为 1. 5-3. 5mM，4种dNTP的终浓度各为200-300 μ M，牛血清蛋白在所述PCR扩增体系中的终浓度为0. 1-lmg/ml,以及热启动快速Taq酶的用量为0. 1-0. 4U/ μ L, 16对引物混合物中的单对引物终浓度如下表所示
5. 一种16个基因座快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒的应用，其特征在于其用于DNA 分型。
全文摘要
本发明公开了一种检测人类基因组DNA16个基因座的快速复合PCR扩增荧光检测试剂盒，该试剂盒包括扩增前试剂和扩增后试剂；所述扩增前试剂包括PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs和牛血清蛋白的反应混合物，热启动快速Taq酶，16对引物混合物以及超纯水；所述扩增后试剂包括用于基因分型的等位基因混合物和内标。本发明只需对人基因组DNA样本进行约40-50min的核酸扩增，即可进行STR分型检测，单管扩增检测可以同时获得15个STR基因座和1个性别鉴定基因座的分型结果，大大缩短了获得样本最终分型结果的时间。
文档编号C12Q1/68GK102424834SQ20111024373
公开日2012年4月25日 申请日期2011年8月24日 优先权日2010年9月10日
发明者倪峥飞, 周怀谷, 夏子芳, 杜蔚安, 杨辉, 郑卫国, 陶莉 申请人:上海市公安局物证鉴定中心, 无锡中德美联生物技术有限公司