专利名称：双酶酶解制备动物性蛋白胨的方法
技术领域：
本发明涉及生物制品技术领域，涉及一种动物性蛋白胨的制备方法，尤其是双酶酶解制备动物性蛋白胨的方法。
背景技术：
蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉齐U，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在临床检验、抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，可以用来治疗消化道疾病；不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨。蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。市售 产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量约5000左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以蛋白胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。中国专利200510137997. 6公开了一种动物性蛋白胨的制备工艺，其采用单一复合蛋白酶对鲜牛骨、甘骨杂、动物组织及内脏进行水解，所得产品的分子量大，氨基酸含量少；特别是产品的澄清度、酸碱稳定度等技术性能指标不稳定，从而影响了产品的应用。胰酶是胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶的混合物，在中性或弱碱性条件下活性较强。由于胰脂肪酶则能使脂肪分解为甘油及脂肪酸，从而促进消化、增进食欲，在医学上利用胰酶广泛的催化水解作用来治疗消化不良症。本发明充分利用胰酶的催化水解性质，模拟动物体内食物的消化原理，将酶学和工程学相互渗透结合，使相应的动物蛋白原料转化为蛋白胨等有用物质。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种双酶酶解制备动物性蛋白胨的方法。本发明动物性蛋白胨的制备方法，包括以下工艺步骤
原料配比以重量计
鲜牛骨85% 90%，动物组织及内脏10% 15% ；
制备工艺
Cl)将鲜牛骨清洗至无血色，置于高压釜中，加入鲜牛骨重量广3倍的水，在I. 5^2. 5Mpa下蒸煮6 10h,分离出骨胶液,冷却，去油；
(2)将动物组织及内脏清洗干净后绞碎，加入到上述骨胶液中，调ΡΗ=7. (T9. 0，升温至400C 60°C，先加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量3. 5^1. 5%的胰酶进行第一步水解，水解时间为2 3个小时；再加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量量的f I. 5%的复合蛋白酶进行水解，水解时间为广2h ;酶解结束后将酶解液升温至85 100°C，灭酶3(Γ40分钟；灭活完成后降温至6(T75°C，加活性炭或活性白陶土脱色，过滤，浓缩，干燥即得。所述胰酶的酶活量为1(Γ13万单位。所述胰酶可以直接从市场上购买得到，也可以通过下述方法制备而成
将新鲜、无杂质、无油的纯净猪胰脏或牛胰脏用绞肉机绞碎，加入胰脏重量6 8%的食用无水乙醇，用打浆机搅拌均匀，放置f6h ;加入胰脏重量I. 5^2倍的清水搅拌均匀，置于温度在35 45°C的恒温房，每5h测酶活量，直至酶活量达到1(Γ13万单位以上，便可使用。所述过滤是先用板框压滤机过滤，然后用孔径为O. Ium的微孔膜精滤。所述干燥为真空干燥或喷雾干燥。喷雾干燥时，设备进口热风温度为1500C 200°C，出口热风温度为60°C 90°C。·本发明相对现有技术具有以下优点
I、本发明先采用激活后的胰酶进行水解，活力稳定易控，可充分将大分子动物蛋白有效剪切，使中间产物的分子量有效控制在5000左右；接着利用复合蛋白酶继续进行水解，可进一步将5000分子量的中间产物降解至200(Γ2500之间；同时通过上述两种酶的协同作用，大大提高了蛋白质的水解深度，有效保证了产品各项性能指标的稳定性及优质性。2、本发明制备的蛋白胨氨基酸含量均恒保持在11%以上；另外，采用高压沉淀法进行验证，本发明制备的蛋白胨遇酸碱不沉淀、不混浊，遇高温不凝固、完全澄清，因此，是高档微生物培养基主要原料，可替化进口优质蛋白胨。3、本发明原料廉价易得，制备工艺简单，成本低，有利于工业化。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明动物蛋白胨的制备工艺进行详细说明。实施例I
(I)胰酶的制备将新鲜、无杂质、无油的纯净猪胰脏或牛胰脏用绞肉机绞碎，加入胰脏重量6 8%、质量百分数98%的食用乙醇，用打浆机搅拌均匀，放置f6h ;加入胰脏重量I. 5^2倍的清水搅拌均匀，放入温度在35 45°C的恒温房，每5h测酶活量，直至酶活量达到10 13万单，便可使用。(2)动物蛋白胨的制备
备料鲜牛骨85kg，动物组织和内脏15kg ；
制备工艺将鲜牛骨用高压水清洗无血色，然后放入高压釜，加入200kg的去离子，控制蒸汽压力在I. 5Mpa，蒸煮10h，分离出其中的骨胶液，冷却，去油；将动物组织和内脏用清洗后先用工业绞肉机绞碎，加入到上述骨胶液中，用火碱溶液调PH=7. 0，升温至60°C左右，加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量2. 5%的胰酶，水解2h ;再加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量1%的复合蛋白酶，搅拌酶解2h ;酶解结束后将酶解液升温至85°C，灭酶40分钟；灭活完成后降温至60°C，加活性炭或活性白陶土脱色；脱色后的酶解液先用板框压滤机过滤(滤材布选用8X8的纯棉帆布，纯棉帆布经O. 2%稀碱溶液脱脂后漂洗干净后使用)，再用用孔径为O. Ium的微孔膜精滤精滤；精滤液用双效降膜式浓缩机浓缩后，在压力喷雾干燥塔中进行喷雾干燥(设备进口热风温度为150°C，出口热风温度为60°C)，得到蛋白胨成品13. Ikg0分子量测定采SDS法测定蛋白胨的分子量在200(Γ2500之间。氨基酸的含量测定采用高效液相色谱仪测定氨基酸的含量在11. 8%。澄清度检测取20g蛋白胨溶解到IOOOmL纯水中，溶液澄清透明。碱性沉淀实验取20g蛋白胨溶解到IOOOmL纯水中，调Ph=8、，在121°C高温下保持30min，溶液澄清无沉淀。磷酸盐沉淀实验取20g蛋白胨溶解到IOOOmL纯水中，加磷酸氢二钾5g，调pH=7. 4 7. 6在121 °C高温下保持30min，溶液澄清无沉淀。实施例2 (1)胰酶的制备同实施例I.
(2)蛋白胨的制备
备料鲜牛骨90kg，动物组织和内脏IOkg ；
制备工艺将鲜牛骨用高压水清洗无血色，然后放入高压釜，加入300kg的去离子，控制蒸汽压力在2. OMpa，蒸煮8h，分离出其中的骨胶液，冷却，去油；将动物组织和内脏用清洗后先用工业绞肉机绞碎，加入到上述骨胶液中，用火碱溶液调PH=8. 0，升温至50°C左右，加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量2. 5%的胰酶，搅拌酶解2. 5h ;再加入原料总量I. 2%的复合蛋白酶，搅拌酶解I. 5h ;酶解结束后酶解液升温至90°C，灭酶30分钟；灭活完成后降温至70°C，加活性炭或活性白陶土脱色；脱色后的酶解液先用板框压滤机过滤(滤材布选用8X8的纯棉帆布，纯棉帆布经O. 2%稀碱溶液脱脂后漂洗干净后使用)，再用用孔径为
O.Ium的微孔膜精滤精滤；精滤液用双效降膜式浓缩机浓缩后，在压力喷雾干燥塔中进行喷雾干燥(设备进口热风温度为150°C，出口热风温度为60°C)，得到蛋白胨成品12. 8kg。经检测蛋白胨的分子量在200(Γ2500之间；氨基酸的含量在11. 3%。该蛋白胨遇酸碱不沉淀、不混浊，遇高温不凝固、完全澄清。具体检测方法同实施例I。实施例3
(1)胰酶的制备同实施例I.
(2)蛋白胨的制备
备料鲜牛骨88kg，动物组织和内脏12kg ；
制备工艺将鲜牛骨用高压水清洗无血色，然后放入高压釜，加入250kg的去离子，控制蒸汽压力在2. 5Mpa，蒸煮6h，分离出其中的骨胶液，冷却，去油；将动物组织和内脏用清洗后先用工业绞肉机绞碎，加入到上述骨胶液中，用火碱溶液调PH=9. 0，升温至45°C左右，加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量3. 5%的胰酶，水解时间为2小时，再加入原料总量1%的复合蛋白酶，搅拌酶解2h ;酶解结束后酶解液升温至100°C，灭酶30分钟；灭活完成后降温至65°C，加活性炭或活性白陶土脱色；脱色后的酶解液先用板框压滤机过滤(滤材布选用8X8的纯棉帆布，纯棉帆布经O. 2%稀碱溶液脱脂后漂洗干净后使用)，再用孔径为O. Ium的微孔膜精滤精滤；精滤液用双效降膜式浓缩机浓缩后，在压力喷雾干燥塔中进行喷雾干燥(设备进口热风温度为150°C，出口热风温度为60°C)，得到蛋白胨成品13. Okgo经检测蛋白胨的分子量在200(Γ2500之间；氨基酸的含量在11. 6%。该蛋白胨遇酸碱不沉淀、不混浊，遇高温不凝固、完全澄清。具体检测方法同实施例I。
权利要求
1.双酶酶解制备动物性蛋白胨的方法，包括以下エ艺步骤原料以重量计鲜牛骨85% 90%，动物组织及内脏10% 15% ；制备エ艺 Cl)将鲜牛骨清洗至无血色，置于高压釜中，加入鲜牛骨重量2 3倍的水，在I.5^2. 5Mpa下蒸煮6 10h,分离出骨胶液,冷却，去油；(2)将动物组织及内脏清洗干净后绞碎，加入到上述骨胶液中，调ΡΗ=7. (T9. O，升温至400C 60°C，先加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量3. 5^1. 5%的胰酶进行第一歩水解，水解时间为2 3个小时；再加入鲜牛骨、动物组织及内脏总重量量的f I. 5%的复合蛋白酶进行水解，水解时间为l 2h ;酶解结束后将酶解液升温至85 100°C，灭酶30 40分钟；灭活完成后降温至6(T75°C，加活性炭或活性白陶土脱色，过滤，浓缩，干燥即得。
2.如权利要求I所述动物性蛋白胨的制备エ艺，其特征在于所述胰酶的酶活量为10 13万単位。
3.如权利要求I所述动物性蛋白胨的制备エ艺，其特征在于所述胰酶的制备エ艺为将新鮮、无杂质、无油的纯净猪胰脏或牛胰脏用绞肉机绞碎，加入胰脏重量6 8%的食用无水こ醇，用打浆机搅拌均匀，放置f6h ;加入胰脏重量I. 5^2倍的清水搅拌均匀，置于温度在35 45°C的恒温房，每5h测酶活量，直至酶活量达到1(Γ13万単位，便可使用。
4.如权利要求1、2或3所述任何ー种动物性蛋白胨的制备エ艺，其特征在于所述过滤是先用板框压滤机过滤，然后用孔径为O. Ium的微孔膜精滤。
5.如权利要求1、2或3所述任何ー种动物性蛋白胨的制备エ艺，其特征在于所述干燥为真空干燥或喷雾干燥。
全文摘要
本发明提供了一种双酶酶解制备动物性蛋白胨的方法，属于生物制品技术领域。本发明是以鲜牛骨、动物组织及内脏为原料，采用胰酶和复合蛋白酶在弱碱条件下进行深层水解，并通过分离提纯等技术手段，获得了一种分子量稳定保持在2000~2500之间，氨基酸含量均恒的蛋白胨。本发明充分利用胰酶和复合蛋白酶催化水解的高效性、专一性、分布协同性及绿色环保性等特点，有效保证了产品各项性能指标的稳定性及优质性，得到的蛋白胨遇酸碱不沉淀、不混浊，遇高温不凝固、完全澄清，作为高档微生物培养基的主要原料，可完全替代进口产品。
文档编号C12P21/06GK102827911SQ20121035725
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月24日 优先权日2012年9月24日
发明者员长安 申请人:平凉市华科生物技术有限公司