专利名称：一种小单孢菌及利用该菌制备多种抗生素的方法
技术领域：
本发明属于工业微生物领域，具体涉及一种能产生多种抗生素的海洋来源放线菌菌株小单孢菌(Micromonospora rosaria) SCSIO N160及其利用该菌发酵制备的大环内酯类抗生素 rosamicin, 6108 B, M4365-A1 和 M4365-G1, fIuostatins 类化合物 fluostatinC，fluostatin D， fluostatin E， fIuostatin F， fIuostatin I， fluostatin J， fIuostatinK，kinamycin 类抗生素 rabelomycin 及 benzo [b] f Iuorene 类抗生素 phenanthroviridone的方法。
背景技术：
化合物大环内酯类抗生素rosamicin (1)，6108B (2)，M4365_A1 (3)和 M4365-G1(4)，fIuostatins 类化合物 fluostatinC (5)，fluostatin D (6)，fluostatin E (7)，fluostatin F (8)及 kinamycin 类抗生素 rabelomycin (12)和 benzo [b] fIuorene 类抗生素phenanthroviridone (13)的结构式如图I所示，图I中的数字代表的化合物与上述化合物括号后的数字相对应。化合物rosamicin (1)，6108B (2)，M4365-A1 (3)和 M4365-G1 (4)属于大环内酯类抗生素(macrolide antibiotics),该类抗生素具有广谱抗菌活性，尤其对于 G+ 菌 Staphylococcusaureus 和 Diplococcus pneumoniae 有显著的抑制活性[Wagman GHj Waitz JAj Marquez J, et al.Anew Micromonospora-produced macrolideantibiotic, rosamicin. J Antibiot，1972，25:641-646.]。化合物 fluostatinC (5)，fluostatin D (6)，fluostatin E (7)，fluostatin F (8)均属于 fluostatins 类抗生素。rabelomycin (12)属于kinamycin类抗生素，具有很好的抗菌活性和细胞毒活性(表I)。phenanthroviridone (13)属于benzo [b] f Iuorene类抗生素，具有很好的抗菌活性和细胞毒活性(表I)。表I :化合物12和13的抗菌活性与细胞毒活性
权利要求
1.小单抱菌(Micromonosporarosaria) SCSIO N160，其保藏编号为CCTCC NO:M2012392。
2.一种制备抗生素 rosamicin, 6108B, M4365-A1, M4365-G1, f luostatinC, f IuostatinD,fluostatin E,fluostatin F,fIuostatin I,fluostatin J,fIuostatin K,rabelomycin和phenanthroviridone的方法,其特征在于,包括以下步骤 (a)制备权利要求I所述的小单抱菌(Micromonosporarosaria)SCSIO N160的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分开，发酵液经丁酮萃取，丁酮萃取层经过蒸馏浓缩后得到浸膏A ;菌丝体先用丙酮浸提，浸提液回收丙酮后剩余的水相混合液用丁酮萃取，丁酮萃取层经过蒸馏浓缩后得到浸膏B ;将浸膏A与B合并为浸膏C ； (b)浸膏C经硅胶柱层析，以体积比从100:(Γ0:100的氯仿-甲醇作为流动相梯度洗脱，氯仿-甲醇体积比为98:2梯度下洗脱下来的馏分Frl，氯仿-甲醇体积比为95:5梯度下洗脱下来的馏分Fr. 2，氯仿-甲醇体积比为90:10梯度下洗脱下来的馏分Fr. 3，氯仿-甲醇体积比为50:50梯度下洗脱下来的馏分Fr. 4 ； 馏分Fr.2经凝胶柱层析，用体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，得到馏分Fr. 2-A至Fr. 2-H，将馏分Fr. 2-C经中压反相层析，以体积比从100:0^0:100的甲醇水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇水=35 65的懼分得化合物rosamicin,将懼份Fr. 2-D上中压反相柱，以体积比从100:(Γ0:100的甲醇水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇水=40 60的馏分得化合物6108Β，将馏份Fr. 2-Ε用高压液相制备，流动相为体积比水乙腈=70:30，纯化得到化合物Μ4365-ΑI，将馏分Fr. 2-F用高压液相制备，流动相为体积比乙腈水=72:28，纯化得化合物114365-61 ； 馏分Fr. I经凝胶柱层析，用体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，得到馏分Frl-A, Frl-B, Frl-C, Frl-D, Frl-A经中压反相层析,用体积比100:0 0:100的甲醇水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇水=58 42的馏分得化合物fluostatin I，收集体积比甲醇水=50 :50的馏分得Frl-A-2，Frl-A-2用高压液相制备，用体积比乙腈水=80 :20为流动相洗脱，纯化得化合物fluostatin C和化合物fluostatin E ;Frl_B用高压液相制备,用体积比乙腈水=65:35为流动相，纯化得化合物fluostatin F和化合物rabelomycin ;Frl_C用硅胶柱层析，以体积比100:(Γ0:100的氯仿-甲醇作为流动相梯度洗脱，收集体积比氯仿甲醇=60 40的馏分得Frl-C-(3) ,Frl-C-(3)通过PTLC层析，以氯仿丙酮体积比为65:35为展开剂展开，收集比移值为0. 8的馏分，得化合物fluostatin D ；Frl-D以凝胶柱层析，用氯仿甲醇体积比5:5洗脱，再用高压液相制备，用体积比乙腈水=60:40为流动相，纯化得化合物 fluostatin K、化合物 fluostatin J 和化合物 phenanthroviridone。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的制备小单孢菌(Micromonosporarosaria) SCSIO N160的发酵培养物是通过以下方法制备将活化的小单孢菌SCSIO N160接入种子培养基中，28°C，200rpm，培养144h制得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，280C，200rpm,振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有淀粉10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，玉米粉3g，牛肉膏3g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，K2HPO4O. 5g，CaC032g，粗海盐 30g，余量为水，pH 7· 2。
4.权利要求I所述的小单抱菌(Micromonosporarosaria) SCSIO N160在制备抗生素 rosamicin、6108B、M4365-A1、M4365-G1、fluostatinC、fluostatin D、fluostatinE、 fluostatin F、 f IuostatinIΛ fluostatin J、 fluostatin K、 rabelomycin 或 phenanthroviridone 中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种小单孢菌及利用该菌制备多种抗生素的方法。小单孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160能够产生大环内酯类抗生素rosamicin(1)，6108B(2)，M4365-A1(3)和M4365-G1(4)，fluostatins类化合物fluostatinC(5)，fluostatin D(6)，fluostatinE(7)，fluostatin F(8)，fluostatin I(9)，fluostatin J(10)，fluostatin K(11)及kinamycin类抗生素rabelomycin(12)及benzo[b]fluorene类抗生素phenanthroviridone(13)，可利用该菌制备这13种抗生素，因此为这13种抗生素的生产制备提供了新的方法。
文档编号C12R1/29GK102978133SQ20121046794
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月16日 优先权日2012年11月16日
发明者张长生, 张文军, 李苏梅, 张海波, 张改云, 张光涛, 朱义广 申请人:中国科学院南海海洋研究所