专利名称：一种重组融合蛋白vip-tat及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程领域，具体地说，涉及一种重组融合蛋白VIP-TAT及其应用。
背景技术：
血管活性肠肽(vasoactiveintestinal peptide, VIP)是 1970年发现的具有显著扩张血管功能的神经肽，属于是促胰液素/胰高血糖素/胰泌素家族。VIP及其受体不仅分布在中枢神经系统和外周神经系统，在外周组织和器官，如心、肺、血管、胃肠道、胰腺、泪腺、泌尿生殖道等，也广泛分布。而且VIP及其受体还在免疫系统，如胸腺、淋巴，和免疫细胞中表达，具有免疫调节的功能。已有的研究发现VIP具有调节循环系统(调节血压、增强心肌收缩力和扩张血管)、调节消化系统(促进消化上皮分泌和调节胃肠道蠕动)，免疫调节(抗T细胞凋亡、调节免疫相关细胞因子的释放)及抗炎的作用。VIP 受体可分为 3 类VPAC1，VPAC2 和 PACl。VPACl 和 VPAC2 都是 VIP 和 PACAP共同分享的受体，而PACl则是和VIP结合较弱的受体，其与VIP的结合力是其与PACAP结合力的1/1000。已有研究表明，VPAC受体不仅分布在细胞膜上，而且在癌细胞，如乳腺癌细胞和结肠癌细胞的细胞内/细胞核和核膜上也有功能性的分布。而且已有发现表明VIP的各个受体可以通过内化内转移到细胞核上，然后介导不同于细胞膜上受体所介导的生物学功能。也就是说，激活细胞内/细胞膜上的VIP受体可产生与激活细胞膜表面受体不同的生物学功能。本发明首次将VIP与一穿膜肽TAT融合构建能够高效激活细胞内/细胞核膜上的VIP受体的新型多肽VIP-TAT，从而实现了其活性的突破——VIP-TAT具有天然VIP所不具备的生物学活性。TAT 是一种蛋白转导域(Protein transduction domain,PTD),最初发现于HIV病毒TAT蛋白中的具有穿膜功能的核心区；由11个氨基酸YGRKKRRQRRR组成，含有8个碱性氨基酸，生理条件下带较高的正电荷，并形成稳定的a螺旋结构。TAT具有强大的运载潜能，能将外源性蛋白质、DNA、RNA 、化学药物等转运至细胞内，甚至可以穿越血脑屏障。此过程不受化合物/复合物分子类型和大小的限制，并且对宿主细胞没有显著毒副作用。本研究首次构建了将VIP和TAT融合的新型融合蛋白VIP-TAT，并且发现其具备现有VIP所没有的新型生物学活性，包括1)重组融合蛋白VIP-TAT可高效激活核转位的VIP受体；2)重组融合蛋白VIP-TAT抑制结肠癌细胞增殖；3)重组融合蛋白VIP-TAT可通过呼吸道高效吸收进入脑部；4)重组融合蛋白VIP-TAT显著提高血液及脑部超氧化物歧化酶(Super Oxygen Dehydrogenises, SOD)含量；5)融合蛋白VIP-TAT抗东莨菪碱诱导的学习记忆损伤的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种重组融合蛋白VIP-TAT及其应用。一种重组融合蛋白VIP-TAT，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。编码重组融合蛋白VIP-TAT的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所示。
所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备激活细胞内/细胞核定位的VIP受体药物中的应用。所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备抑制结肠癌细胞增殖药物中的应用。所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备提高血液或脑部SOD含量药物中的应用。VIP-TAT可作为抗脑部氧化损伤和抗脑部衰老的药用。所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备抗东莨菪碱诱导学习记忆损伤药物中的应用。VIP-TAT可作为抗老年痴呆的药物。所述重组融合蛋白VIP-TAT可通过呼吸道高效吸收进入机体血液和脑部的生物活性，VIP-TAT可通过鼻粘膜吸收，简化用药途径。本发明首次实现重组的VIP和TAT融合的新型融合蛋白VIP-TAT的制备及生物学功能的研究。首次发现VIP-TAT具有和VIP显著不同的生物活性。VIP-TAT具有的与VIP的区别如下
权利要求
1.一种重组融合蛋白VIP-TAT，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码权利要求1所述重组融合蛋白VIP-TAT的基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.权利要求1所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备激活细胞内/细胞核定位的VIP受体药物中的应用。
4.权利要求1所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备抑制结肠癌细胞增殖药物中的应用。
5.权利要求1所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备提高血液或脑部SOD含量药物中的应用。
6.权利要求1所述重组融合蛋白VIP-TAT在制备抗东莨菪碱诱导学习记忆损伤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种重组融合蛋白VIP-TAT及其应用。本发明重组融合蛋白VIP-TAT的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，编码该蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。本发明重组融合蛋白VIP-TAT具有VIP所不具备的生物学活性，包括高效激活细胞内/细胞核定位的VIP受体，抑制结肠癌细胞HT29的增殖，可通过呼吸道吸收进入脑部，显著提高机体SOD水平及显著抗东莨菪碱诱导学习记忆损伤。这些活性使得VIP-TAT在预防与治疗结肠癌、抗脑部氧化损伤、抗学习记忆损伤以及预防和治疗老年痴呆方面具备VIP所不具备的应用前景。而且VIP-TAT可通过呼吸道吸入用药，改善了其用药途径，扩大其应用范围，极大地提高了VIP-TAT在脑部、肺部中的应用价值。
文档编号C12N15/62GK103044556SQ201310011389
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月14日 优先权日2013年1月14日
发明者余榕捷, 张华华 申请人:余榕捷