一株纳豆芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株纳豆芽抱杆菌。该纳豆芽抱杆菌为纳豆芽抱杆菌(Bacillusnatto)W-0923，菌种保藏号为CCTCC：M2012496。它可以用作溶解人体血栓的保健品。本发明通过试验表明：纳豆芽抱杆菌为纳豆芽抱杆菌W-0923(菌种保藏号为CCTCC：M2012496)体外溶解血栓效果显著。
【专利说明】一株纳豆芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株纳豆芽孢杆菌及其应用，属于微生物及医药应用领域。 【背景技术】
[0002]当今，人类健康最大的“杀手”是心脑血管疾病，血栓是心脑血管疾病最突出的表现形式之一。血栓原本只是老年人的易发疾病，但如今亦开始呈现年轻化的趋势。因此，开发一种治疗血栓的药物具有深远的社会价值和广阔的市场空间。
[0003]纳豆是一种功能性风味产品，具有溶血栓的作用，从中分离出一种新的纳豆芽孢杆菌，对其进行发酵培养生产具有抗血栓作用的酶制剂，能够起到较好的针对血栓的预防、保健和治疗的作用。
[0004]纳豆芽孢杆菌为好氧菌，广泛分布在水、空气和土壤中，其在孢子状态下稳定性良好，能耐压、耐高温、耐酸碱，能够在胃酸环境下保持活性。因此，能够广泛应用在微生物发酵医药领域。本品是一种益生菌，具有无毒、无副作用、安全高效的特点，因而可以做为发酵生产抗血栓酶制剂的菌种。
【发明内容】
[0005]本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)ff-0923是从湖北恩施地区苗圃土壤中采用土壤稀释分离法分离获得到的，已于2012年12月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称 CCTCC，保藏号为 CCTCC:M2012496)。
[0006]本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)具有以下微生物学特性:菌落近似圆形、菌落边缘树杈状参差不齐、表面褶皱干燥、灰白色、不透明、菌体杆状、单生或成短链，周生鞭毛、革兰氏阳性、具芽孢。
[0007]本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)的培养方法或繁殖方法:菌种活化保藏培养基采用LB培养基，配方:胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Nacl 10g/L，水1000ml，PH7.0 ;种子液培养基；发酵培养基。
[0008]该纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)可以用作血栓溶解制剂，起到溶解血栓的作用。
【具体实施方式】
[0009]实施例1:
1、纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)的分离与纯化
(1)湖北恩施地区苗圃土壤表层到15cm处取样200g，每个地点采几个样本，混合过粗筛，取25g作分离用；
(2)培养基平板制备:将上述LB平板在配方胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Nacl10g/L基础上加琼脂15g，水1000ml，PH7.0，121°C灭菌15min，倒平板，冷却；
(3)将(I)中的纳豆粉碎，称取lg，与无菌生理盐水混合于试管中，在85°C水浴中加热IOmin,后震荡混匀，制成纳豆粉悬液,静置Imin,取上清液梯度稀释至10〃 ；
(4)取(3)中10_7悬液200μ L，加入到LB平板上，用涂布棒涂匀，放入37°C培养箱倒置培养24h ；
(5)取上述平板菌落中较大较好的菌落,进行平板划线,连续三代,达到纯培养,最后菌种保藏。
[0010]2、菌株鉴定
(I)微生物学特性:菌落近似圆形、菌落边缘树杈状参差不齐、表面褶皱干燥、灰白色、不透明、菌体杆状、单生或成短链、周生鞭毛、革兰氏阳性、具芽孢。
[0011](2)生化特性如表1所示:
【权利要求】
1.纳豆芽抱杆菌{Bacillusnatto) W-0923，保藏号 CCTCC:M 2012496 ； 权利要求1所述的纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto) ff-0923 (保藏号CCTCC:M2012496)的发酵方法: 1)纳豆芽抱杆菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏号 CCTCC:M 2012496)菌种活化:将斜面上保存的菌种接种到LB试管斜面上面，于37°C培养24h，所述LB培养基配方为蛋白陈10 g，牛肉膏5g，NaCI 5g，琼脂15 g，蒸馏水1000 mL ； 2)纳豆芽抱杆菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏号CCTCC:M 2012496)种子液的制备:从斜面上挑一环菌接种到装有LB培养液的三角瓶中，置于恒温振荡培养箱中，振荡培养，37°C，200r/min培养8h即可获得种子液，所述的LB培养基配方为:蛋白陈10g，牛肉膏5g,氯化钠5g,蒸懼水IL ； 3)纳豆芽抱杆菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏号 CCTCC:M 2012496)发酵培养:将摇床发酵的菌液接种到装有100L培养基的200L种子发酵罐，初始pH7.5，温度37°C，通风体积比1:0.8，从菌种接种后12h菌体生长处于指数生长中期，转入2000L的发酵罐，以70%的罐装量，pH7.5，温度为37°C，前期通风体积比为1:0.8，后期通风体积比为1:1发酵，所述大量发酵培养配方为:豆粉1.8%，淀粉0.5%，碳酸钙0.3%，硫酸镁0.01%,磷酸二氢钾0.2%，其余为水，pH 7.0，所述的百分数为重量百分数。
2.权利要求1所述的纳豆芽抱杆菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏号CCTCC:M2012496)在开发溶解人体血栓产品方面的应用。
【文档编号】C12R1/07GK103966116SQ201310036945
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年1月31日 优先权日:2013年1月31日
【发明者】张云峰, 田璨熙 申请人:湖北国力生物技术开发有限公司