专利名称：微生态检测用试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种试剂盒，具体是一种微生态检测用试剂盒，针对机体在多种疾病或内外不利因素作用下内环境的变化具有有效的指示。
背景技术：
人体或畜牧业上的家禽或猪羊牛等动物，甚至被人类保护的野生动物在作为生物有机体这一点上有其共同之处；即均是一个复杂生物系统，并且是一个时时与环境进行物质能量信息交流的开放的复杂系统。执行这种开放功能的主要包括:口、鼻、咽喉、呼吸道、肠道、泌尿生殖道以及皮肤等，此外还有功能方面的眼、耳、鼻、舌、声、意诸方面；而涉及物质交流主要在于口、鼻、咽喉、呼吸道、肠道、泌尿道以及皮肤等，这些部位处于机体对外开放的前沿，接受机体内环境的刺激，可以有效地指示机体正在发生的变化和即将受到的刺激的影响，及在此影响下发生变化的趋势，用于指导健康管理或临床实践中的机体健康状态的分析，以及指导亚健康或疾病的预防以及治疗，具有实用意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种试剂盒，可以检测口、鼻、咽喉、呼吸道、肠道、泌尿生殖道以及皮肤等部位的正常菌群的变化，以菌群生长变化的总体结果及菌落内部的变化组合及比例变化来判断菌群所处环境的变化，从而获得机体状态的趋势特征。为实现上述目的本发明采用的技术方案是:一种微生态检测用试剂盒，包括一个基础培养基、1%普鲁士蓝水溶液、1%中性红水溶液和1%TTC溶液，其中，所述基础培养基包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和琼脂；基础培养基和1%普鲁士蓝水溶液的体积比为40:1 ;基础培养基和1%中性红水溶液的体积比为40:1 2 ;基础培养基和1%TTC溶液的体积比为 100:1。
上述1%TTC溶液的配制方法如下:每100 mg TTC加入I mL蒸馏水与5 mL的0.4M琥珀酸钠蒸馏水溶液和4 mL生理盐水混合，115°C下保持15分钟，高压灭菌。上述微生态检测用试剂盒在制备检测人体内环境的检测试剂中的应用。上述微生态检测用试剂盒在制备检测人或动物的排泄物或分泌物的检测试剂中的应用，所述排泄物或分泌物来自人或动物的肠道、泌尿生殖道、呼吸道、及皮肤；
在使用试剂盒的时候，对人或动物的排泄物或/和分泌物标本，进行倍比稀释，稀释至10_3或10_5，具体依照菌落技术要求，一个平板上的细菌菌落数目为100 300个，将稀释后的标本涂布在培养基上，37°C孵箱培养24-48hr，观察结果:动物或人若处在健康状态的结果为:深蓝色平板+蓝色或无色菌落；动物或人为疾病状态的结果为:黄色平板+黄色或红色菌落；健康与疾病过渡状态的结果为:深蓝或黄平板+红色或黄色或无色菌落。本发明在口、鼻、咽喉、呼吸道、肠道、泌尿生殖道以及皮肤等部位寻找目前与机体有内在联系的正常菌群的变化作为指示，根据这些正常菌群的生长特点和反应性建立试剂盒。本发明不拘泥于传统微生物学的分离鉴定工作，而是以菌群生长的总体结果及菌落内部的变化组合及比例变化判断它们所处环境的变化，这种环境的变化又是机体状态改变所导致的结果，因此可以获得机体状态的变化信息。本发明无意拘泥任何现成的理论，将正常菌群总体的整合变化结果用于反映其所在机体的特征，可以利用该特征进一步探索病人的病变发展趋势。本发明能够快速，简便地对人体或者动物的内环境的变化作出检测。
图1为正常鼠粪便标本在检测系统中生长的结果，平板为蓝色；
图2为肿瘤小鼠粪便标本在检测系统中上生长的结果，平板为黄色；
图3为5-fu化疗后小鼠粪便标本在检测系统中生长的结果，平板为黄色；
图4为临床病人的粪便标本在检测系统中的结果，I号病人的为蓝色，2号病人的为黄
色；
图5为痰液标本在检测系统中的结果，A为正常人的显示蓝色，B为呼吸道感染患者的显示为淡黄色。
具体实施例方式实施例1微生态检测用试剂盒，按照如下配方:蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂作为基础培养基，分别在其中加入下列物质，普鲁士蓝(又名中国蓝)配制成1%水溶液，以
2.5 mL加入100 mL上述培养基。中性红配成1%水溶液，以2.5 mL 5 mL的体积加入100mL上述培养基。还有I mL 1%TTC溶液加入IOOml上述培养基中，该检测培养基在外观上呈现草绿色。1%TTC溶液配制方法如下:200 mg TTC加入2 mL蒸馏水与10 mL的0.4M琥珀酸钠蒸馏水溶液和8 mL生理盐水混合，115°C下保持15分钟，高压灭菌。此时该检测系统对环境变化具有最强的敏感性。在使用试剂盒的时候，对人或动物的体液标本，如粪便、尿痰液适量或皮肤表面或腋窝处或腹股沟处或者泌尿生殖道棉签抹取适量标本，然后进行倍比稀释，一般稀释至10_3或10_5即可，具体依照菌落技术要求，一个平板上的细菌菌落数目以100 300个为宜。每个标本分别涂布在上述检测培养基上，37°C孵箱培养24-48hr，观察结果。在这套组合检测系统上，动物或人若处在健康状态，结果组合为:深蓝色平板+蓝色或无色菌落；动物或人若为疾病状态者，结果显示为黄色平板+黄色或红色菌落；状态呈过渡状态者，即通常所述亚健康状态，结果为深蓝或黄平板+红色或黄色或无色菌落。由这套组合对人或动物的状态可以进行有效检测，在此基础上，有利于进一步探索病人的病变发展趋势。实施例2，正常鼠与肿瘤鼠的比较
取健康小鼠分为两组，一组正常饲养，另一组接种黑色素瘤细胞(简称B16细胞)待瘤体长至1.5cm，分别取正常饲养的小鼠与肿瘤小鼠的粪便应用本发明试剂盒进行检测。结果可见，正常饲养的鼠小鼠粪便稀释涂布，生长后平板由草绿色变为深蓝色，菌落呈蓝色，这指示该组小鼠肠道微生态状态良好。而肿瘤小鼠虽然外观状态尚可，且进食等方面与正常鼠也相差不明显，但由本发明检测可见平板由草绿色变为黄色，显示其肠道微生态状态恶化，进而由此可检测肿瘤小鼠内在状态已明显变差。参见图1和图2。实施例3， 5-FU化疗后小鼠粪便检测结果化疗药的应用对机体是一种损伤因素，本实施例中选用5-FU这种最常用的化疗药为代表，以人用量经换算后对实施例2中的肿瘤小鼠进行腹腔注射，连续使用三天，取粪便标本用本发明试剂盒进行检测，可见平板颜色转变为明显的黄色，且菌落也成为红色者为主，指示化疗药应用后对小鼠肠道微生态有明显的破坏作用。见图3。实施例4，临床病人的粪便标本检测结果
以下两个病人，取自大坪医院风湿科，一号患者不伴随肠道不适，二号患者具有肠道不适感觉。取粪便标本进行检测，结果从平板和菌落颜色两者来看，两个病人表现出明显的差另IJ，与临床实际相符。表明本发明的灵敏性高。涂抹一号患者的平板显示蓝色，涂抹二号患者的平板显示黄色，见图4。实施例5，其它体液标本的测定
前述实施例的标本均来自 于粪便，作为微生态指示系统，还可以对其它位置的菌群进行检测，本例采用了呼吸道的痰液标本，取自大坪医院呼吸内科。一个是正常人，其痰液稀释培养后平板颜色偏向加深为蓝色，另一个是呼吸道有感染者，平板变黄，见图5，菌落变红，显示伴随感染，或是对感染的治疗，出现了呼吸道微生态的破坏。经本发明的试剂盒清楚的显示出来。综上所述，本发明的机体状态相关的检测系统应用了正常菌群反应特性，通过试验检测验证了菌群若总体上产酸较多，则整个平板上由中国蓝显示为由草绿色变为蓝色，同时，该培养基中生长出来的菌落颜色也多数呈现蓝色，或仅有个别菌落为红色，但总体上平板颜色为蓝色，这代表肠道内的内环境总体上略显碱性，这样产酸的菌总体偏多以作平衡，为该系统检测出来。相反，若是平板总体偏于黄色，并且往往此时培养基上的菌落颜色多呈红色，则说明该次检测细菌总体上产碱能力偏强，推知其相应的生存环境偏酸性，代表内环境中有酸性物质堆积，如H的堆积，不论其产生过多，或者是消除减慢，都对应着机体面临的不良刺激，代表机体处于异常状态。综上，综合形成一个机体健康状态指示系统检测试剂盒，从而完成了本项发明。简便、有效显出其实用性。
权利要求
1.一种微生态检测用试剂盒，其特征在于:包括一个基础培养基、1%普鲁士蓝水溶液、1%中性红水溶液和1%TTC溶液，其中，所述基础培养基包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和琼脂；基础培养基和1%普鲁士蓝水溶液的体积比为40:1 ;基础培养基和1%中性红水溶液的体积比为40:1 2 ;基础培养基和1%TTC溶液的体积比为100:1。
2.根据权利要求1所述微生态检测用试剂盒，其特征在于:所述1%TTC溶液的配制方法如下:每100 mg TTC加入I mL蒸懼水与5 mL的0.4M琥拍酸钠蒸懼水溶液和4 mL生理盐水混合，115°C下保持15分钟，高压灭菌。
3.权利要求1或2所述微生态检测用试剂盒在制备检测人体内环境的检测试剂中的应用。
4.权利要求1或2所述微生态检测用试剂盒在制备检测人或动物的排泄物或分泌物的检测试剂中的应用，所述排泄物或分泌物来自人或动物的肠道、泌尿生殖道、呼吸道、及皮肤； 在使用试剂盒的时候，对人或动物的排泄物或/和分泌物标本，进行倍比稀释，一个平板上的细菌菌落数目为100 300个，将稀释后的标本涂布在培养基上，37°C孵箱培养24-48hr，观察结果:动物或人若处在健康状态的结果为:深蓝色平板+蓝色或无色菌落；动物或人为疾病状态的结果为:黄色平板+黄色或红色菌落；健康与疾病过渡状态的结果为:深蓝或黄平板+红色或黄色 或无色菌落。
全文摘要
本发明公开了一种微生态检测用试剂盒，包括基础培养基、1%普鲁士蓝水溶液、1%中性红水溶液和1%TTC溶液，其中基础培养基包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和琼脂；基础培养基和1%普鲁士蓝水溶液的体积比为40∶1，基础培养基和1%中性红水溶液的体积比为40∶1～2，基础培养基和1%TTC溶液的体积比为100∶1。本发明针对机体在多种疾病或内外不利因素影响下内环境的变化具有有效的指示作用。
文档编号C12Q1/04GK103146799SQ20131010461
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月28日 优先权日2013年3月28日
发明者刘俊康, 刘艳霞, 徐巍巍, 刘蕾, 邓渝 申请人:中国人民解放军第三军医大学