一种优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体。本申请对核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的β-甘露聚糖酶基因进行改造，得到优化基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。构建了优化β-甘露聚糖酶基因的重组毕赤酵母表达载体并将其转化到毕赤酵母感受态细胞X33中筛选得到高效表达β-甘露聚糖酶的转β-甘露聚糖酶毕赤酵母菌株；酶学性质测定表明，优化的β-甘露聚糖酶基因能在毕赤酵母中稳定、高效的表达及遗传，所表达的β-甘露聚糖酶酶活性以及稳定性显著高于原始β-甘露聚糖酶基因毕赤酵母中所表达的β-甘露聚糖酶的酶活性及稳定性。
【专利说明】—种优化的β -甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体
【技术领域】
[0001]本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种优化的甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体。
【背景技术】
[0002]在豆类、谷类及其副产品中普遍存在着一种抗营养因子一β-甘露聚糖，它具有极强的吸水性，在单胃动物消化道内易形成凝胶状，影响营养物质与消化液的接触，降低了饲料利用率。而β_甘露聚糖酶是一类能够特异性降解β_甘露聚糖的水解酶，属于半纤维素酶类。水解的底物有半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖和甘露聚糖，产物有少量的单糖和2-10个单糖分子构成的寡糖。能有效降低消化道内容物黏度；而且，其分解β -甘露聚糖产生的甘露低聚糖，能作为双歧杆菌的增殖因子、促进肠道内有益菌群的增殖，提高动物的生产性能。β -甘露聚糖酶一方面可以提高饲料消化利用率，扩大饲料原料来源，缓解饲用原料短缺的局面；另一方面可减少养殖的粪便排出量及替代部分抗生素，从而减少对环境的污染及避免药物残留。
[0003]β -甘露聚糖酶是一种广谱诱导型多功能酶，国内外现主要用于造纸工业纸浆的漂白、油井的破胶、降解植物胶生产低聚糖用作双歧杆菌促生长因子，防病抗衰老的保健食品以及饲料工业中作为抗营养因子。
【发明内容】
[0004]本发明的目的之一是提供一种优化的β -甘露聚糖酶基因，优化后的序列GC含量由原来的0.56减少到0.54 ；CAI值有原来的0.68提高到0.81。
[0005]本发明的另一目的是提供有优化的β_甘露聚糖酶基因的重组毕赤酵母表达载体。
[0006]本发明的另一目的是提供有优化的β_甘露聚糖酶基因的重组菌株。
[0007]本发明对核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示的β -甘露聚糖酶基因进行优化。
[0008]SEQ ID N0.1:
[0009]I CTGCCGAAAGCATCCCCTGCACCGAGCACCAGCAGCAGTGCTGCCTCCACCTCCTTCGCT
[0010]61 AGCACCTCCGGCCTCCAATTCACCATTGATGGCGAAACTGGCTACTTCGCCGGAACGAAC
[0011]121 AGCTACTGGATCGGTTTCCTCACTGACAACGCGGACGTCGACCTCGTCATGGGCCACCTG
[0012]181 AAGTCGTCCGGCCTCAAGATCCTCCGCGTGTGGGGCTTCAACGATGTCACCTCGCAGCCC
[0013]241 TCCTCCGGCACAGTTTGGTACCAACTGCACCAGGACGGCAAATCGACAATCAACACGGGT
[0014]30I GCCGACGGTCTCCAGCGCCTCGACTACGTCGTCTCGTCTGCCGAACAGCACGACATCAAA
[0015]361 CTCATCATCAACTTCGTCAACTACTGGACCGATTACGGTGGTATGTCTGCGTACGTGAGC
[0016]421 GCGTATGGCGGATCCGGCGAGACGGATTTCTATACCAGTGATACCATGCAGAGTGCCTAT
[0017]481 CAGACATATATCAAGACGGTCGTGGAGCGGTACAGTAACTCCTCGGCGGTGTTTGCGTGG
【权利要求】
1.一种优化的β -甘露聚糖酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
2.β -甘露聚糖酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
3.β -甘露聚糖酶，其特征在于，其由如SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.3所示的核苷酸序列编码。
4.包含权利要求1所述的优化的β-甘露聚糖酶基因的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pPICZa A- β -MAN。
6.包含权利要求1所述的β-甘露聚糖酶基因的重组菌株。
7.根据权利要求6所述的重 组菌株，其特征在于，所述菌株为重组毕赤酵母菌。
【文档编号】C12R1/84GK103898133SQ201410147753
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月14日 优先权日:2014年4月14日
【发明者】聂金梅, 李阳源, 胡爱红, 钟开新, 周银华 申请人:广东溢多利生物科技股份有限公司