一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法
【专利摘要】本发明涉及一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，属于海洋生物加工【技术领域】；包括原料预处理、酶解、离心、层析四个步骤，具体是将鱼类或鱼类下脚料清洗后搅碎，加水混合均匀，并调节pH值，加入蛋白酶，并在一定条件下进行酶解，然后通过三足式离心机离心去掉残渣与油脂，得到酶解上清液，酶解上清液流经大孔树脂层析柱，用蒸馏水流过大孔树脂层析柱直到无颜色液体流出，再用20%-80%的乙醇洗脱大孔树脂层析柱，收集洗脱液，挥发去乙醇得到苦味肽；该方法在提取苦味肽的同时制备了低腥苦味的蛋白酶解液，且制备的苦味肽中肽的含量在95%以上，游离氨基酸含量在5%以下，2000Da以下的肽约占80%；该方法过程简单，操作容易，成本低，安全可靠，易于产业化。
【专利说明】一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种苦味肽的提取方法，具体涉及一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，属于海洋生物加工【技术领域】。
【背景技术】
[0002]鱼类蛋白酶解液含有丰富的多肽、小肽、氨基酸、微量元素等多种小分子营养成分，具有生物利用率高等优点，还具有抗氧化、降血压、增强免疫等活性，它可广泛用作调味料、膨化食品和方便、保健食品的基料，也可作为病人的康复食品，其产品能以粉状、液体和糊状等多种形态存在，便于按照不同生理状态人群、不同作业条件下人群的营养特征和市场需求情况，与其它食品物料充分混合在一起，重新加工成丰富多彩的海洋工程食品，具有很好的发展前景，市场潜力巨大。
[0003]由于酶解作用会产生低分子苦味肽，苦味肽富含疏水性氨基酸，使得酶解液苦味突出，限制了其在食品工业中的应用，成为鱼类酶解蛋白开发利用的瓶颈。苦味肽中的一些疏水性氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等同时又是必需氨基酸，因此具有较高的营养价值，苦味肽也是一些小分子肽，同样具有肽类良好的吸收机制和理化加工特性，也具有某些生物活性。目前酶解液苦味的研究大多集中在脱苦方法上，有环糊精、明胶、改性淀粉和果胶等的包埋掩盖法，微生物发酵的生物脱苦法，通过转肽作用将疏水性氨基酸富集生成不溶于水的疏水性肽的类蛋白反应等。也有专利公开了利用大孔吸附树脂制备脱腥蛋白肽或低聚肽的技术。专利“利用大孔吸附树脂生产无腥味鱼鳞胶原蛋白肽的方法(CN201010028931) ”公开了一种生产无腥味鱼鳞胶原蛋白肽的方法，将经活性炭脱色及过滤澄清的鱼鳞胶原蛋白肽 水解液经大孔吸附树脂柱吸附，先经乙醇溶液洗脱腥味物质，后经氨水洗脱胶原蛋白肽，经膜分离、浓缩，再经冷冻干燥得到无腥味鱼鳞胶原蛋白肽，将乙醇洗脱液经乙醇回收、喷雾干燥得腥味物质。这里没有指明腥味物质具体是什么物质，同时用到氨水洗脱经膜分离、浓缩，再经冷冻干燥得到无腥味鱼鳞胶原蛋白肽，工艺复杂，成本高；专利“一种以脱脂米糠为原料联产制备植酸和低聚肽(CN201010520721)”公开了一种脱脂米糠制备植酸和低聚肽的方法，将低浓度盐酸浸米糠提取植酸后的沉淀，采用碱性蛋白酶和复合蛋白酶分步水解，酶解液经过超滤、大孔吸附树脂分离纯化，冷冻干燥后，获得米糠低聚肽。工艺中，酶解液先调PH3.0-5.0，后经大孔吸附树脂吸附，再用75%乙醇洗脱，蒸去乙醇冷冻干燥得到米糠低聚肽。这里没有说明低聚肽的分子量组成以及有关理化特征。本发明提供的提取制备苦味肽的方法，将鱼类蛋白酶解液以一定流速流经大孔吸附树脂柱，流出液低腥苦味，再用乙醇洗脱吸附树脂柱提取制备苦味肽，苦味肽的理化特征明确。工艺过程简单，不需要调PH值，不需要氨水洗脱，不但可以获得低分子苦味肽，还可以去除酶解液的苦味，为鱼类蛋白酶解液与苦味肽的开发利用提供基础。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，该方法工艺简单，成本低廉，采用该方法可以获得低分子苦味肽，而且可以去除酶解液的口味。
[0005]为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是:
一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，具体包括如下步骤:
(O原料预处理:将鱼类或鱼类下脚料清洗后搅碎，加水混合均匀，并调节PH值为
5.5~8.0 ；
(2)酶解:在混合均匀的原料中加入蛋白酶，并在一定条件下进行酶解，冷却得到酶解
液；
(3)离心:将酶解液用三足式离心机(配有滤袋)离心去掉残渣与油脂，得到上清液；
(4)层析:酶解上清液以一定流速流经大孔树脂层析柱，再用蒸馏水流过大孔树脂层析柱直到有无颜色液体流出，然后用20%-80%的乙醇洗脱大孔树脂层析柱，收集洗脱液，挥发去乙醇得到苦味妝。
[0006]步骤(1)所述的加水混合，加入的水与鱼类或鱼类下脚料的比例为:1:2~1:5。
[0007]步骤 (2 )所述的酶解是指加入质量分数为混合原料0.3%~Ο.65%的蛋白酶，在450C~55°C温度下，酶解I~6小时，酶解结束，升温至90°C~95°C灭酶15分钟，并冷却。
步骤(2)所述的蛋白酶为中性蛋白酶、风味酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶中的一种、两种或三种。
[0008]步骤(3)所述的三足式离心机为食品加工或制药用离心机，
步骤(4)所述的大孔树脂为食品级大孔吸附树脂。
[0009]本发明的有效效果是:
(1)本发明提供的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，工艺过程简单，操作容易，成本低；
(2)本发明提供的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，制备的苦味肽中，肽的含量在95%以上，游离氨基酸含量在5%以下，2000Da以下的肽约占80% ；
(3)本发明提供的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，在提取苦味肽的同时制备了低腥苦味的蛋白酶解液，为蛋白酶解液的开发利用提供基础；
(4)本发明提供的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，所使用的大孔树脂，再生方便，可反复使用，安全可靠，易于实现产业化生产。
【具体实施方式】
[0010]下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
[0011]实施例1
取罗非鱼下脚料2kg，清洗去内脏后，经绞肉机绞碎后放入反应器中，加入绞碎罗非鱼肉重量3倍的水，调pH值为7.0,同时加入原料重量0.25%的中性蛋白酶和0.3%的风味酶，酶解4h，水解结束，升温至95°C灭酶15分钟，冷却后得到酶解液，经转速3000r/min的三足式离心机(配600目的滤袋)离心，去掉残渣与油脂，收集过滤液A ;将6BV体积过滤液A以蛋白质浓度7.2mg/mL、流速5BV/h流经树脂床体积为BV的AB-8大孔吸附树脂层析柱；再用5BV蒸馏水将柱内未被吸附的滤液A冲洗掉；然后用12BV的40%乙醇溶液、3BV/h流速流经层析柱洗脱提取，收集洗脱液，挥发乙醇，即得到苦味肽16.6 g,得率0.83%。苦味肽中肽含量为97.8%, 2000Da以下的短肽含量占75.2%，与苦味有关的疏水氨基酸脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸等8种氨基酸含量达到40.8%。
[0012]实施例2
取罗非鱼肉2kg,经绞肉机绞碎后放入反应器中，加入绞碎罗非鱼肉重量2倍的水,调pH值为6.8，同时加入原料重量0.35%的中性蛋白酶和0.2%的风味酶，酶解3.5h，水解结束，升温至95°C灭酶15分钟，冷却后得到酶解液，经转速3000r/min的三足式离心机(配800目的滤袋)离心，去掉残渣与油脂，收集过滤液A ;将IOBV体积过滤液A以蛋白质浓度
7.2mg/mL、流速3BV/h流经树脂床体积为BV的DA201-C大孔吸附树脂层析柱；再用5BV蒸馏水将柱内未被吸附的滤液A冲洗掉；然后用12BV的60%乙醇溶液、3BV/h流速流经层析柱洗脱提取，收集洗脱液，挥发乙醇，即得到苦味肽21.0g，得率1.05%。苦味肽中肽含量为95.6%, 2000Da以下的短肽含量占81.3%，与苦味有关的疏水氨基酸脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸等8种氨基酸含量达到36.2%。
【权利要求】
1.一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:具体包括如下步骤: (O原料预处理:将鱼类或鱼类下脚料清洗后搅碎，加水混合均匀，并调节PH值为5.5~8.0 ； (2)酶解:在混合均匀的原料中加入蛋白酶，并在一定条件下进行酶解，冷却得到酶解液； (3)离心:将酶解液用配有滤袋的三足式离心机离心去掉残渣与油脂，得到上清液； (4)层析:酶解上清液以一定流速流经大孔树脂层析柱，再用蒸馏水流过大孔树脂层析柱直到无颜色液体流出，然后用20%-80%的乙醇洗脱大孔树脂层析柱，收集洗脱液，挥发去乙醇得到苦味肽。
2.根据权利要求1所述的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:步骤(1)所述的加水混合，加入的水与鱼类或鱼类下脚料的比例为:1:2~1:5。
3.根据权利要求1所述的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:步骤(2)所述的酶解是指加入质量分数为混合原料0.3%~Ο.65%的蛋白酶，在45°C~55°C温度下，酶解I~6小时，酶解结束，升温至90°C~95°C灭酶15分钟，并冷却。
4.根据权利要求1所述的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:步骤(2)所述的蛋白酶为中性蛋白酶、风味酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶中的一种、两种或二种。
5.根据权利要求1所述的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:步骤(3)所述的三足式离心机为食品加工或制药用离心机。
6.根据权利要求1所述的一种鱼类蛋白酶解液提取苦味肽的方法，其特征在于:步骤 (4)所述的大孔树脂为食品级大孔吸附树脂。
【文档编号】C12P21/06GK103981246SQ201410234947
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月30日 优先权日:2014年5月30日
【发明者】杨萍, 洪鹏志, 周春霞, 刘唤明, 邓楚津 申请人:广东海洋大学