一种利用oprk1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为的方法及试剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于生物检测【技术领域】，涉及一种利用OPRK1基因SNP检测绵羊规癖行为的方法及试剂。以PCR-SSCP技术为手段，发现了OPRK1基因在绵羊中的单核苷酸多态性T118A或G90A，并且该基因多态性和绵羊规癖行为性状相关，通过该检测，不需要长时间观测动物，不需要再进行必要分辅助治疗，即可尽早、尽快发现绵羊是否患有行为规癖，简单易行，降低了生产损失，提高了动物生产能力。
【专利说明】-种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为 的方法及试剂
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测【技术领域】，涉及一种利用0PRK1基因 SNP检测绵羊规癖行为 的方法及试剂。
【背景技术】
[0002] 有研究把猪长时间静止站立确定为是一种动物"规癖行为"。圈养条件下，动物长 时间卧息或者站立观望可以认为是动物的一种"规癖"或者"呆板"行为。有学者认为，行 为规癖的出现是由于对生产性状的过度选育而造成的，也有学者研究发现规癖是由于动物 在圈养条件下，其生存环境单调狭小造成的。Grandin(1998)在70年代没有发现牛卷舌和 其它异常行为，而在1996年发现荷斯坦牛品种表现为卷舌规癖，这可能是长期定向选择的 结果，对高产母猪（产仔数高）的研究也发现其表现较多的行为规癖。对动物园动物研究 表明，动物园中驯养的灵长类动物因饲养环境单调狭小带来的紧张对其健康不利，导致动 物出现无目的踱步、咬栅栏、摇摆身体、空嚼等呆板行为。因此，在绵羊驯化饲养过程中，由 于选择选配或者饲养环境单调狭小，可能造成其规癖行为显著升高，比如长时间呆立观望 行为。
[0003] 目前的养殖现状分析表明，长期圈养对绵羊行为带来一系列影响，比如应激行为 的产生，特别是随着应激时间的积累，这种应激可转变成行为规癖，即规癖行为。规癖行为 对绵羊生产性能造成一定的影响，主要体现在长时间来回踱步、呆立或静立、啃咬毛发、异 物等现象。严重者厌食少食、日渐消瘦。公羊性能力低下，无法完成交配，母羊则不表现发 情或者假发情，无法配种怀孕，对生产造成较大的经济损失。国内对规癖行为涉猎很少，特 别是利用分子生物学的方法检测规癖行为，现在还没有发现。
[0004] 20世纪70年代，发现应激反应能引起机体分泌多种内源性阿片肽，包括内啡 肽、脑啡肽、强啡肽。目前发现并克隆3种阿片受体，分别为Kappa受体、Mu受体和Delta受 体，Kappa阿片受体又称作0PRK1 (Kappa Opoioid Receptor 1)基因，该基因属于G蛋白偶 联受体家族成员，有7个疏水性的跨膜段，3个细胞内环和3个细胞外环，在氨基端存在数个 糖苷化位点，胞内环区及羧基端有多个潜在的磷酸化位点，第1和第2胞外环区各有一个可 形成二硫键的Cys。研究表明0PRK1阿片受体主要分布在与痛觉、情绪、行为等有关的中枢 神经系统区域，对影响动物的神经反应和行为表现有重要作用。
[0005] 李剑虹等曾利用SNP方法对大白、长白和杜洛克猪的Kappa阿片（0PRK1)受体进 行分析，结论认为，Kappa阿片受体基因 SNP对母猪静止站立行为性状存在一定影响。有研 究报道Kappa阿片受体基因敲除的小鼠对激动剂的镇痛作用消失，运动减少和烦躁不安的 作用也大大降低。Kappa阿片受体也参与脑内系统神经回路的活动，系统神经回路上的神 经递质（包括多巴胺和阿片肽）通过调节特定的靶神经元群的活动，从而作为一系列行为 如学习、记忆、睡眠、摄食、饮水、性行为、攻击等行为和情绪变化的物质基础。同样在小鼠上 已经发现了 Kappa阿片受体基因的多态性。
[0006] 动物行为是一个复杂的生物现象，其行为性状是长期的自然选择和人工选择的产 物，本发明选择0PRK1作为影响绵羊行为性状的候选基因，采用SNP方法分析该基因部分外 显子序列单核苷酸位点突变和行为性状的关系，结果表明，通过0PRK1基因引物对检测到 基因多态性，且不同基因型对绵羊的修饰、卧息、观望行为产生显著影响，因此，初步认为本 研究结果与动物行为规癖有相关，运用该位点基因多态性，结合行为分析，可以对绵羊的行 为规癖进行尽早尽快识别。
【发明内容】
[0007] 本发明一方面提供一种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为的 方法，其特征在于，通过提取受试绵羊基因组DNA，测定0PRK1基因 T118A和G90A的单核苷 酸多态性，确定绵羊是否患有行为规癖。
[0008] 本发明另一方面提供一种确定绵羊是否患有行为规癖的0PRK1基因单核苷酸多 态性位点，其特征在于，所述单核苷酸多态性位点分别位于如SEQ ID N0 :1-2,以及SEQ ID NO :3-4的寡核苷酸引物对扩增片段的T118A和G90A。
[0009] 本发明另一方面提供一种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为 的寡核苷酸引物对，其特征在于，所述0PRK1基因的单核苷酸多态性为T118A和G90A。
[0010] 优选地，所述引物对序列如下所示：
【权利要求】
1. 一种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为的方法，其特征在于，通 过提取受试绵羊基因组DNA，测定0PRK1基因 T118A和G90A的单核苷酸多态性，确定绵羊是 否患有行为规癖。
2. -种确定绵羊是否患有行为规癖的0PRK1基因单核苷酸多态性位点，其特征在于， 所述单核苷酸多态性位点分别位于如SEQ ID NO: 1-2,以及SEQ ID NO :3-4的寡核苷酸引 物对扩增片段的T118A和G90A。
3. -种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为的寡核苷酸引物对，其特 征在于，所述0PRK1基因的单核苷酸多态性为T118A和G90A。
4. 根据权利要求3的寡核苷酸引物对，其特征在于，所述寡核苷酸引物对的序列分别 如 SEQ ID NO :1-2,以及 SEQ ID NO :3-4 所示。
5. -种利用0PRK1基因的单核苷酸多态性检测绵羊规癖行为的试剂盒，其特征在于， 包含以下试剂：Taq酶，dNTPs，10Xbuffer (含Mg2+)，以及寡核苷酸引物对。
6. 根据权利要求5的试剂盒，其特征在于，所述0PRK1基因的单核苷酸多态性为T118A 和 G90A。
7. 根据权利要求5或6的试剂盒，其特征在于，所述寡核苷酸引物对的序列分别如SEQ ID NO : 1-2,以及 SEQ ID NO :3-4 所示。
8. -种检测0PRK1基因的单核苷酸多态性的引物对在制备用于检测绵羊规癖行为的 试剂盒的用途，其特征在于，所述引物对序列分别如SEQ ID N0:l-2,以及SEQ ID N0:3-4 所示，所述0PRK1基因的单核苷酸多态性为所述引物对扩增片段的T118A和G90A。
【文档编号】C12Q1/68GK104120175SQ201410245163
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年6月5日 优先权日:2014年6月5日
【发明者】吕慎金 申请人:临沂大学