一种FTO基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】一种FTO基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，所述盒体具有容置腔，还包括固定座和海绵垫，所述固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的孔腔内分别容置有FTO-R引物试剂管、FTO-C引物试剂管、FTO-F1引物试剂管、FTO-F2引物试剂管、FTO-Taqman管和阳性对照质粒管；所述容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶；6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分别铺设有所述的海绵垫；所述盒盖与盒体之间设有密封条，所述密封条紧固设置在盒盖与盒体开口端相接触的端面并与盒体的容置腔的上端面相匹配。本ARMS-qPCR检测试剂盒结构简单、设计合理，且具有优良的密封性。
【专利说明】-种FTO基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒
【技术领域】
[OOOU 本实用新型设及一种检测试剂盒，尤其设及一种用于FTO基因分型的ARMS-qPCR 检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 肥胖症是一种慢性病，据世界卫生组织估计，是人类目前面临最容易被忽视，但发 病率却在急剧上升的一种疾病。肥胖症能导致多种生理和屯、理疾病，比如糖尿病、癌症、屯、 血管疾病W及社交障碍等。造成肥胖症的原因很多，比如过量的能量摄入和静止型的生活 方式等。越来越多的研究表明，遗传因素在肥胖症发病过程中扮演着重要的角色（化ayling et al. 2007, Gerken et al. 2007, Dina et al. 2007, Qiu et al. 2008)。
[000引 FTO基因位于人第16号染色体，编码3'mT的去甲基化酶（Jia et al. 2011)。有 研究表明，FTO的不同基因型与肥胖症的发病率紧密相关（化ayling et al. 2007，）。FTO rs9939609AT和AA基因型的人比rs9939609TT基因型的人具有显著地肥胖症发病风险 (Speakman et al.2008)。更有趣的是，FT0基因不同基因型与肥胖症之间显著地相关性具 有性别差异，男性rs9939609AT和AA基因型肥胖症发病风险显著地高于rs9939609TT基因 型的人，而在女性中却没有差异。因此rs9939609不同的基因型是一个极好的男性肥胖症 风险预测指标，对于肥胖症的预防W及其后的治疗具有重要的指导意义。
[0004] 可用于FT0 rs9939609分型的技术很多，包括如DNA直接测序法、杂交巧片法、焦 磯酸测序法W及变性高效液相色谱法等。其中，DNA测序法为基因分型的金标准，该方法存 在如下缺点；检测的灵敏度不高，只有大于15%的突变才能检测到；费时，操作复杂，对操 作人员要求高；非闭管操作，设及PCR扩增后的操作，因此易被污染，造成结果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24个，很难大规模开展。 实用新型内容
[0005] 本实用新型所要解决的技术问题是提供一种结构简单、密封性好的FT0基因分型 的ARMS-qPCR检测试剂盒。
[0006] 本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案为；一种FT0基因分型的 ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，所述盒体具有容置腔，还包括固 定座和海绵垫，所述固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6 个所述容置孔的孔腔内分别容置有FT0-R引物试剂管、FT0-C引物试剂管、FT0-F1引物试 剂管、FT0-F2引物试剂管、FTCKTaqman管和阳性对照质粒管；所述容置槽的槽腔内容置有 PCR缓冲液试剂瓶；6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分别铺设有所 述的海绵垫；所述盒盖与盒体之间设有密封条，所述密封条紧固设置在盒盖与盒体开口端 相接触的端面并与盒体的容置腔的上端面相匹配。
[0007] 其中，FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，还包括备用容置槽，所述备用容置 槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶，所述备用容置槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所 述备用容置槽与容置槽并列排布在固定座上。
[000引其中，6个所述容置孔在固定座上分两排平行排列。
[0009] 其中，6个所述容置孔分别为能容纳1. 5m化P管的孔洞，相应的，所述FTO-R引物试 剂管、FTO-C引物试剂管、FTO-F1引物试剂管、FTO-巧引物试剂管、FTO-Taqman管和阳性对 照质粒管分别采用1. 5m化P管。
[0010] 其中，所述盒盖的一侧与盒体的开口处转动连接，另一侧通过卡锁机构与盒体连 接，所述卡锁机构包括卡合部和卡槽，所述卡合部设置于盒体的侧壁，所述盒盖对应于上述 卡合部设置有所述的卡槽，所述卡合部能卡合于该卡槽内。
[0011] 与现有技术相比，本实用新型的优点在于；本ARMS-qPCR检测试剂盒适用于FT0 基因分型，其结构简单、设计合理、使用方便、容易制造，且检测过程不易受污染；另外，本 ARMS-qPCR检测试剂盒在FT0 rs9939609基因分型时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优 点；此外，容置孔的孔槽与容置槽的槽腔底部都铺设有海绵垫，可W避免试剂管与试剂瓶的 底部磕碰破损；盒盖与盒体之间设置了密封条，其可W保证在盒盖与盒体闭合时，保持密封 状态，方面移动和运输。本ARMS-qPCR检测盒即保证了试剂盒密封性、安全性，又方便运输。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1为本实用新型实施例ARMS-qPCR检测试剂盒的结构示意图。
【具体实施方式】
[0013] W下结合附图实施例对本实用新型作进一步详细描述。
[0014] 本实施例的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，如图1所示，包括盒体1和 位于盒体1上方的盒盖2,盒体1为上端开口的中空的立方体盒体1，其具有容置腔。盒盖 2的一侧边与盒体1的开口端的一侧壁的顶端转动连接，例如较接或者通过一层膜连接，而 盒盖2的相对的一侧通过卡锁机构与盒体1连接，卡锁机构包括卡合部13和卡槽11，卡合 部13设置于盒体1的与盒盖2转动连接处相对的侧壁上，而盒盖2对应于卡合部13设置 有卡槽11，卡合部13能卡合于该卡槽11内。本实施例的卡锁机构为现有技术，故其结构并 没有在图中标示。
[0015] 本实施例的盒盖2与盒体1的连接方式可W保证在盒盖2与盒体1闭合时，保持 密封状态。为了进一步增强本实施例检测试剂盒的密封性，盒盖2与盒体1之间设有密封 条12,密封条12紧固设置在盒盖2与盒体1开口端相接触的端面并与盒体1的容置腔的上 端面相匹配，即密封条12固定（例如粘贴）在盒盖2的下端面，当盒盖2与盒体1闭合时， 密封条12恰好位于盒体1容置腔的上端面上，密封条12的形状为与容置腔相匹配的四边 形。
[0016] 本实施例的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒还包括固定座14和海绵垫，固 定座14容置在盒体1容置腔内并纵向开设有6个容置孔、1个容置槽和1个备用容置槽，6 个容置孔的孔腔内分别容置有FT0-R引物试剂管4、FT0-C引物试剂管3、FT0-F1引物试剂 管5、FT0-F2引物试剂管6、FTCKTaqman管8和阳性对照质粒管7 ;容置槽的槽腔内容置有 PCR缓冲液试剂瓶10,备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶9。
[0017] 为了防止在运输过程中，试剂管、试剂瓶与盒体1或固定座14碰撞而破损，6个 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部w及备用容置槽的槽腔的底部分别铺设有海绵 垫。在本实施例中，容置孔、容置槽和备用容置槽都是具有底部的空腔式结构，每个孔腔、槽 腔底部分别铺设有海绵垫，该样可W防止发生碰撞，对试剂管、试剂瓶能起到更好的保护和 缓冲作用，W保证各个容器的安全。
[0018] 当然，容置孔、容置槽和备用容置槽可W设计成没底的穿孔式结构，此时海绵垫可 W为一整块，其具体铺设在盒体1内固定座14下方的容置腔内。
[0019] 为了使得本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒结构更加整齐，6个容置孔在固定座 14上分两排平行排列，而备用容置槽与容置槽并列排布在固定座14上并位于容置孔的右 侦U，其中容置槽位于上方。位于上排的3个容置孔内从左至右分别放置FTO-C引物试剂管 3、FTO-F2引物试剂管6和阳性对照质粒管7,位于下排的3个容置孔内从左至右分别放置 FTO-R引物试剂管4、FTO-F1引物试剂管5和FTCKTaqman管8。该种排布格局是根据使用 本检测试剂盒来进行FTO基因分型时的操作步骤来设计的，可W使得检测时，操作人员能 有条理、有规律地选择相应的试剂。
[0020] 6个容置孔分别为能容纳1. 5m化P管（即离屯、管）的孔洞，相应的，FTO-R引物试 剂管4、FTO-C引物试剂管3、FTO-F1引物试剂管5、FTO-巧引物试剂管6、FTCKTaqman管8 和阳性对照质粒管7分别采用1. Sm化P管。
[0021] 6个容置孔中放置的EP管中分别装有浓度为10 ymol/L的如下引物；
[0022] FT0-R ;5, -ATCTTATGTCCAAACAGTAG-3'
[0023] FT0-C ;5, -AGTTATGCATTTAGAATGTC-3'
[0024] FT0-F1 ;5' -TTGCGACTGCTGTGAATGCT-3'
[00巧]FT0-F2 ;5' -TTGCGACTGCTGTGAATGCA-3'
[0026] 另外，PCR缓冲液试剂瓶10、PCR缓冲液备用试剂瓶9中盛装的PCR反应缓冲 酶液混合物包括浓度为 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg"2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best "Tag。FTCKTaqiiian 管 8 中装有通用"Tagman 探针，序列为；FTO-Taqman 5' -FAM-TAGGTAACAGTCAGAAATGG-3'，阳性对照质粒管7中装有阳性对照质粒。
[0027] 使用本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒进行FT0基因分型的操作方法如下；
[00測 1)取模板DNA
[0029] 取病人全血1血，常规提取DNA，取1 y LDNA作为模板。
[0030] 。反应体系
[0031] 将各反应物质按照如下反应体系进行配比；
[003引反应体系为20 y 1，包括qPCR混合液10 y 1，参照引物或者ARMS引物各0. 5 y 1 (终 浓度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (10化g)，其余用(1化0补齐。
[0033]
【权利要求】
1. 一种FTO基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体（1)和覆盖在盒体（1)上的 盒盖（2)，所述盒体（1)具有容置腔，其特征在于：还包括固定座（14)和海绵垫，所述固定 座（14)容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的孔 腔内分别容置有FT0-R引物试剂管（4)、FT0-C引物试剂管（3)、FT0-F1引物试剂管（5)、 FT0-F2引物试剂管（6)、FT0_Taqman管（8)和阳性对照质粒管（7);所述容置槽的槽腔内 容置有PCR缓冲液试剂瓶（10) ;6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分 别铺设有所述的海绵垫；所述盒盖（2)与盒体（1)之间设有密封条（12)，所述密封条（12) 紧固设置在盒盖（2)与盒体（1)开口端相接触的端面并与盒体（1)的容置腔的上端面相匹 配。
2. 根据权利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：还包 括备用容置槽，所述备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶（9)，所述备用容置 槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所述备用容置槽与容置槽并列排布在固定座（14)上。
3. 根据权利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：6个所 述容置孔在固定座（14)上分两排平行排列。
4. 根据权利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：6个所 述容置孔分别为能容纳1. 5mlEP管的孔洞，相应的，所述FT0-R引物试剂管（4)、FT〇-C引物 试剂管（3)、FT0-F1引物试剂管（5)、FT0-F2引物试剂管（6)、FT0-Taqman管（8)和阳性对 照质粒管（7)分别采用1. 5mlEP管。
5. 根据权利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所述 盒盖（2)的一侧与盒体（1)的开口处转动连接，另一侧通过卡锁机构与盒体（1)连接，所述 卡锁机构包括卡合部（13)和卡槽（11)，所述卡合部（13)设置于盒体（1)的侧壁，所述盒 盖（2)对应于上述卡合部（13)设置有所述的卡槽（11)，所述卡合部（13)能卡合于该卡槽 (11)内。
【文档编号】C12M1/00GK204185474SQ201420642728
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】张道允, 张恒, 巩子英, 罗坚诚, 贾宁 申请人:江苏所罗门兄弟医学科技有限公司