一种CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】一种CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，盒体具有容置腔，还包括固定座和海绵垫，固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的孔腔内分别容置有CRHR1-R引物试剂管、CRHR1-C引物试剂管、CRHR1-F1引物试剂管、CRHR1-F2引物试剂管、CRHR1-Taqman管和阳性对照质粒管；容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶；6个容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部分别铺设有所述的海绵垫；所述盒盖的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位槽，所述盒盖的下端面对应容置槽处设有能固定PCR缓冲液试剂瓶位置的第二限位槽；所述盒盖与盒盖磁性连接。本检测试剂盒结构简单、合理，而且具有良好的密封性和安全性。
【专利说明】-种CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本实用新型设及一种检测试剂盒，尤其设及一种用于CRHR1基因分型的 ARMS-qPCR检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 产后抑郁症是女性精神障碍中最为常见的类型，是女性生产之后，由于性激素、社 会角色及屯、理变化所带来的身体、情绪、屯、理等一系列变化。典型的产后抑郁症是产后6周 内发生，可持续整个产媽期，有的甚至持续至幼儿上学前。产后抑郁症的发病率在15%? 30%。产后抑郁症通常在6周内发病，可在3?6个月自行恢复，但严重的也可持续1?2 年，再次妊娠则有20%?30%的复发率。造成产后抑郁症的原因很多，比如怀孕期间有过 严重的情绪波动、内分泌失调等。越来越多的研究表明，遗传因素在肥胖症发病过程中扮演 着重要的角色，例如有精神病家族史，特别是有家族抑郁症病史的产妇，产后抑郁的发病率 高，说明家族遗传可能影响到某一妇女对抑郁症的易感性和她的个性。
[0003] 最近，有研究发现CRHRlrs242939基因型与产后抑郁症紧密关联，rsl0918859不 同的基因型是一个极好的产后抑郁症风险预测指标，对于产后抑郁症的预防W及其后期的 治疗具有重要的指导意义。
[0004] 可用于CRHRlrs242939分型的技术很多，包括如DNA直接测序法、杂交巧片法、焦 磯酸测序法W及变性高效液相色谱法等。其中，DNA测序法为基因分型的金标准，该方法存 在如下缺点；检测的灵敏度不高，只有大于15%的突变才能检测到；费时，操作复杂，对操 作人员要求高；非闭管操作，设及PCR扩增后的操作，因此易被污染，造成结果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24个，很难大规模开展。 实用新型内容
[0005] 本实用新型所要解决的技术问题是提供一种结构简单、密封性强的CRHR1基因分 型的ARMS-qPCR检测试剂盒。
[0006] 本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案为；一种CRHR1基因分型的 ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，所述盒体具有容置腔，还包括固 定座和海绵垫，所述固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6 个所述容置孔的孔腔内分别容置有CRHR1-R引物试剂管、CRHR1-C引物试剂管、CRHR1-F1引 物试剂管、CRHR1-巧引物试剂管、0?皿1-化9111311管和阳性对照质粒管；所述容置槽的槽腔 内容置有PCR缓冲液试剂瓶；6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分别 铺设有所述的海绵垫；
[0007] 所述盒盖的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位 槽，所述盒盖的下端面对应容置槽处设有能固定PCR缓冲液试剂瓶位置的第二限位槽；
[000引所述盒盖的一侧与盒体的开口处转动连接，另一侧向下弯折形成连接部，所述连 接部朝向盒体的侧壁设有金属部件，相应的，所述盒体的侧壁对应金属部件处设有磁性部 件。
[0009] CRHRl基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒还包括备用容置槽，所述备用容置槽的 槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶，所述备用容置槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所述备 用容置槽与容置槽并列排布在固定座上，所述盒盖的下端面对应备用容置槽处设有能固定 PCR缓冲液备用试剂瓶位置的第S限位槽。
[0010] 其中，6个所述容置孔在固定座上分两排平行排列，对应的，6个所述第一限位槽 在盒盖上分两排平行排列。
[0011] 其中，6个所述容置孔分别为能容纳1. 5m化P管的孔洞，相应的，所述CRHR1-R引物 试剂管、CRHR1-C引物试剂管、CRHR1-F1引物试剂管、CRHR1-F2引物试剂管、0?皿1-化9111311 管和阳性对照质粒管分别采用1. 5m化P管。
[0012] 其中，所述金属部件为铁片，所述磁性部件为磁铁块。
[0013] 作为改进，所述磁性部件外凸地设置在盒盖的侧壁，所述连接部设置金属部件处 开设有凹槽，所述金属部件设置在该凹槽的槽底，在所述金属部件与磁性部件吸附在一起 的状态下，所述磁性部件完全容置在该凹槽的容置空间内。
[0014] 作为改进，所述盒盖与盒体之间设有密封条，所述密封条紧固设置在盒盖与盒体 开口端相接触的端面并与盒体的容置腔的上端面相匹配。
[0015] 与现有技术相比，本实用新型的优点在于；本ARMS-qPCR检测试剂盒在盒盖的下 端面开设了能分别限定试剂管、试剂瓶的限位槽，使得在搬运本检测试剂盒时，盒体内的 容器会稳固地容置在各自的空间内，从而避免了碰撞从而破损；同时，本ARMS-qPCR检测 试剂盒在盒盖和盒体的连接处设置了磁性锁合机构（即金属部件和磁性部件），可W保证 在盒盖与盒体闭合时，保持密封状态，方便移动和运输；另外，本ARMS-qPCR检测试剂盒在 CRHRlrsl0918859位基因分型时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点；此外，容置孔的 孔槽与容置槽的槽腔底部都铺设有海绵垫，可W避免试剂管与试剂瓶的底部磕碰破损，保 证了各个容器的安全。
[0016] 本ARMS-qPCR检测试剂盒适用于CRHR1基因分型，其结构简单、设计合理、使用方 便、容易制造，且检测过程不易受污染其即保证了试剂盒密封性、安全性，又方便运输，可W 在给CRHR1基因分型时方便实验人员操作，提高了工作效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1为本实用新型实施例ARMS-qPCR检测试剂盒的结构示意图。
【具体实施方式】
[0018] W下结合附图实施例对本实用新型作进一步详细描述。
[0019] 本实施例的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，如图1所示，包括盒体1和 位于盒体1上方的盒盖2,盒体1为上端开口的中空的立方体盒体1，其具有容置腔。盒盖 2的一侧边与盒体1的开口端的一侧壁的顶端转动连接，例如较接或者通过一层膜连接，而 盒盖2的相对的一侧通过磁性锁合机构与盒体1连接。盒体1与盒盖2的具体连接方式为： 盒盖2的一侧与盒体1的开口处转动连接，另一侧向下弯折形成连接部11，连接部11朝向 盒体1的侧壁设有金属部件12-一铁片，相应的，盒体1的侧壁对应金属部件12处设有磁 性部件13-一磁铁块。磁铁块的位置应使盒盖2盖合在盒体1上，且盒盖2的连接部11贴 合在盒体1的侧壁上，该磁铁块正好与连接部11上的铁片相对应并吸合。
[0020] 本实施例的盒盖2与盒体1的连接方式可W保证在盒盖2与盒体1闭合时，保持 密封状态，W方便移动和运输。
[0021] 为了进一步增强本试剂盒的密封性，磁性部件13外凸地设置在盒盖2的侧壁，同 时，连接部11上设置金属部件12的内壁处开设有凹槽，而金属部件12固定在该凹槽的槽 底，当金属部件12与磁性部件13吸附在一起时，磁性部件13完全容置在该凹槽的容置空 间内。此时，因磁性部件13完成容置在了凹槽内，使得盒盖2和盒体1盖合时，盒盖2与盒 体1间无缝隙，增强了密封性。
[0022] 本实施例的盒盖2与盒体1的连接方式可W保证在盒盖2与盒体1闭合时，保持 密封状态。为了更进一步增强本实施例检测试剂盒的密封性，盒盖2与盒体1之间设有密 封条14,密封条14紧固设置在盒盖2与盒体1开口端相接触的端面并与盒体1的容置腔的 上端面相匹配，即密封条14固定（例如粘贴）在盒盖2的下端面，当盒盖2与盒体1闭合 时，密封条14恰好位于盒体1容置腔的上端面上，密封条14的形状为与容置腔相匹配的四 边形。
[002引本实施例的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒还包括固定座18和海绵垫， 固定座18容置在盒体1容置腔内并纵向开设有6个容置孔、1个容置槽和1个备用容置槽， 6个容置孔的孔腔内分别容置有CRHR1-R引物试剂管4、CRHR1-C引物试剂管3、CRHR1-F1 引物试剂管5、CRHR1-F2引物试剂管6、CRHR1-化qman管8和阳性对照质粒管7 ;容置槽的 槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶10，备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶9。 [0024] 为了使得本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒结构更加整齐，6个容置孔在固定座 18上分两排平行排列，而备用容置槽与容置槽并列排布在固定座18上并位于容置孔的右 侦U，其中容置槽位于上方。位于上排的3个容置孔内从左至右分别放置CRHR1-C引物试剂 管3XRHR1-F2引物试剂管6和阳性对照质粒管7,位于下排的3个容置孔内从左至右分别 放置CRHR1-R引物试剂管4、CRHR1-F1引物试剂管5和CRHR1-化qman管8。该种排布格 局是根据使用本检测试剂盒来进行CRHR1基因分型时的操作步骤来设计的，可W使得检测 时，操作人员能有条理、有规律地选择相应的试剂。
[00巧]6个容置孔分别为能容纳1. 5m化P管（即离屯、管）的孔洞，相应的，CRHR1-R引 物试剂管4、CRHR1-C引物试剂管3、CRHR1-F1引物试剂管5、CRHR1-F2引物试剂管6、 CRHR1-化qman管8和阳性对照质粒管7分别采用1. 5m化P管。
[0026] 为了能进一步固定住6个试剂管、2个试剂瓶的位置，盒盖2的下端面分别对应6 个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位槽15,盒盖2的下端面对应容置槽处设 有能固定PCR缓冲液试剂瓶10位置的第二限位槽17,同时，盒盖2的下端面对应备用容置 槽处设有能固定PCR缓冲液备用试剂瓶9位置的第S限位槽16。当然，6个第一限位槽15 也在盒盖2上分两排平行排列，同时，第二限位槽17和第=限位槽16并列排布在第一限位 槽15的右侧。
[0027] 为了防止在运输过程中，试剂管、试剂瓶与盒体1或固定座18碰撞而破损，6个 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及备用容置槽的槽腔的底部分别铺设有海绵 垫。在本实施例中，容置孔、容置槽和备用容置槽都是具有底部的空腔式结构，每个孔腔、槽 腔底部分别铺设有海绵垫，该样可w防止发生碰撞，对试剂管、试剂瓶能起到更好的保护和 缓冲作用，W保证各个容器的安全。
[002引当然，容置孔、容置槽和备用容置槽可W设计成没底的穿孔式结构，此时海绵垫可 W为一整块，其具体铺设在盒体1内固定座18下方的容置腔内。
[0029] 6个容置孔中放置的EP管中分别装有浓度为10 ymol/L的如下引物；
[0030] CRHR1-R ;5, -CCTCGTGTCTGGGCCTACCT-3，
[003U CRHR1-C ;5> -GGGTGGCCAGGGCTGGCTGC-3'
[0032] CRHR1-F1 ;5' -CGGAGGCCACACAAGAGTATG-3'
[0033] CRHR1-F2 ;5' -CGGAGGCCACACAAGAGATA-3，
[0034] 另外，PCR缓冲液试剂瓶10、PCR缓冲液备用试剂瓶9中盛装的PCR反应缓冲 酶液混合物包括浓度为 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg"，2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best hg。0?皿1-化9111311 管 8 中装有通用 hginan 探针，序列为；0?皿1-化9]\&111; 5' -FAM-TGAAACCTGAGGCTGGGCGG-3'，阳性对照质粒管7中装有阳性对照质粒。
[0035] 使用本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒进行CRHR1基因分型的操作方法如下；
[0036] 1)取模板 DNA
[0037] 取病人全血1血，常规提取DNA，取1 y LDNA作为模板。
[00測。反应体系
[0039] 将各反应物质按照如下反应体系进行配比；
[0040] 反应体系为20 y 1，包括qPCR混合液10 y 1，参照引物或者ARMS引物各0. 5 y 1 (终 浓度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (10化g)，其余用(1化0补齐。
[0041]
【权利要求】
1. 一种CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体（1)和覆盖在盒体（1)上 的盒盖（2)，所述盒体（1)具有容置腔，其特征在于：还包括固定座（18)和海绵垫，所述固 定座（18)容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的 孔腔内分别容置有CRHR1-R引物试剂管（4)、CRHR1-C引物试剂管（3)、CRHR1-F1引物试剂 管（5)、CRHR1-F2引物试剂管（6)、CRHR1-Taqman管⑶和阳性对照质粒管（7);所述容置 槽的槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶（10) ;6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽 腔的底部分别铺设有所述的海绵垫； 所述盒盖（2)的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位 槽（15)，所述盒盖（2)的下端面对应容置槽处设有能固定PCR缓冲液试剂瓶（10)位置的第 二限位槽（17); 所述盒盖（2)的一侧与盒体（1)的开口处转动连接，另一侧向下弯折形成连接部（11)， 所述连接部（11)朝向盒体（1)的侧壁设有金属部件（12)，相应的，所述盒体（1)的侧壁对 应金属部件（12)处设有磁性部件（13)。
2. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：还 包括备用容置槽，所述备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶（9)，所述备用容 置槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所述备用容置槽与容置槽并列排布在固定座（18)上，所述 盒盖（2)的下端面对应备用容置槽处设有能固定PCR缓冲液备用试剂瓶（9)位置的第三限 位槽（16)。
3. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：6 个所述容置孔在固定座（18)上分两排平行排列，对应的，6个所述第一限位槽（15)在盒盖 (2)上分两排平行排列。
4. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在 于：6个所述容置孔分别为能容纳1. 5mlEP管的孔洞，相应的，所述CRHR1-R引物试剂 管（4)、CRHR1-C引物试剂管（3)、CRHR1-F1引物试剂管（5)、CRHR1-F2引物试剂管（6)、 CRHRl-Taqman管（8)和阳性对照质粒管（7)分别采用1.5mlEP管。
5. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所 述金属部件（12)为铁片，所述磁性部件（13)为磁铁块。
6. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所 述磁性部件（13)外凸地设置在盒盖（2)的侧壁，所述连接部（11)设置金属部件（12)处开 设有凹槽，所述金属部件（12)设置在该凹槽的槽底，在所述金属部件（12)与磁性部件（13) 吸附在一起的状态下，所述磁性部件（13)完全容置在该凹槽的容置空间内。
7. 根据权利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所 述盒盖（2)与盒体（1)之间设有密封条（14)，所述密封条（14)紧固设置在盒盖（2)与盒体 (1)开口端相接触的端面并与盒体（1)的容置腔的上端面相匹配。
【文档编号】C12Q1/68GK204185475SQ201420642729
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】张道允, 张恒, 巩子英, 罗坚诚, 贾宁 申请人:江苏所罗门兄弟医学科技有限公司