一种MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】一种MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，所述盒体具有容置腔，还包括固定座和海绵垫，所述固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的孔腔内分别容置有MMP2-R引物试剂管、MMP2-C引物试剂管、MMP2-F1引物试剂管、MMP2-F2引物试剂管、MMP2-Taqman管和阳性对照质粒管；所述容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶；6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分别铺设有所述的海绵垫；所述盒盖的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位槽，所述盒盖的下端面对应容置槽处设有能固定PCR缓冲液试剂瓶位置的第二限位槽。本ARMS-qPCR检测试剂盒结构简单、合理，而且具有良好的密封性和安全性。
【专利说明】-种圓P2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR 检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 服胖症是一种慢性病，据世界卫生组织估计，是人类目前面临最容易被忽视，但发 病率却在急剧上升的一种疾病。服胖症能导致多种生理和也理疾病，比如糖尿病、癌症、也 血管疾病W及社交障碍等。造成服胖症的原因很多，比如过量的能量摄入和静止型的生活 方式等。越来越多的研究表明，遗传因素在服胖症发病过程中扮演着重要的角色（化ayling et al. 2007, Gerken et al. 2007, Dina et al. 2007, Qiu et al. 2008)。
[0003] MMP2基因位于第16号染色体，编码一个基质金属蛋白酶，主要功能为剪切细胞外 基质。最近，有研究发现MMP化S1132896基因型与女性服胖症紧密关联炬ouwan和Boer 2013)。rsll32896CC型相对于rsll32896CT型及TT型具有很高的服胖症发生概率。因此 rsl 132896不同的基因型是一个极好的女性服胖症风险预测指标，对于服胖症的预防W及 其后期的治疗具有重要的指导意义。
[0004] 可用于MMP化si 132896分型的技术很多，包括如DNA直接测序法、杂交芯片法、焦 磯酸测序法W及变性高效液相色谱法等。其中，DNA测序法为基因分型的金标准，该方法存 在如下缺点；检测的灵敏度不高，只有大于15%的突变才能检测到；费时，操作复杂，对操 作人员要求高；非闭管操作，涉及PCR扩增后的操作，因此易被污染，造成结果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24个，很难大规模开展。 实用新型内容
[0005] 本实用新型所要解决的技术问题是提供一种结构简单且能运输牢固、安全的MMP2 基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒。
[0006] 本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案为；一种MMP2基因分型的 ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体和覆盖在盒体上的盒盖，所述盒体具有容置腔，还包括固 定座和海绵垫，所述固定座容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6 个所述容置孔的孔腔内分别容置有MMP2-R引物试剂管、MMP2-C引物试剂管、MMP2-F1引物 试剂管、MMP2-巧引物试剂管、匪?2-化9111311管和阳性对照质粒管；所述容置槽的槽腔内容 置有PCR缓冲液试剂瓶；6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分别铺设 有所述的海绵垫；所述盒盖的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的 第一限位槽，所述盒盖的下端面对应容置槽处设有能固定PCR缓冲液试剂瓶位置的第二限 位槽。
[0007] MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒还包括备用容置槽，所述备用容置槽的 槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶，所述备用容置槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所述备 用容置槽与容置槽并列排布在固定座上，所述盒盖的下端面对应备用容置槽处设有能固定 PCR缓冲液备用试剂瓶位置的第H限位槽。
[0008] 其中，6个所述容置孔在固定座上分两排平行排列，对应的，6个所述第一限位槽 在盒盖上分两排平行排列。
[0009] 其中，6个所述容置孔分别为能容纳1. 5m化P管的孔洞，相应的，所述MMP2-R引物 试剂管、MMP2-C引物试剂管、MMP2-F1引物试剂管、MMP2-巧引物试剂管、匪?2-化9111311管和 阳性对照质粒管分别采用1. 5m化P管。
[0010] 其中，所述盒盖的一侧与盒体的开口处转动连接，另一侧通过卡锁机构与盒体连 接，所述卡锁机构包括卡合部和卡槽，所述卡合部设置于盒体的侧壁，所述盒盖对应于上述 卡合部设置有所述的卡槽，所述卡合部能卡合于该卡槽内。
[0011] 作为改进，所述盒盖与盒体之间设有密封条，所述密封条紧固设置在盒盖与盒体 开口端相接触的端面并与盒体的容置腔的上端面相匹配。
[001引与现有技术相比，本实用新型的优点在于；本ARMS-qPCR检测试剂盒在盒盖的下 端面开设了能分别限定试剂管、试剂瓶的限位槽，使得在搬运本检测试剂盒时，盒体内的容 器会稳固地容置在各自的空间内，从而避免了碰撞从而破损；另外，本ARMS-qPCR检测试剂 盒在MMP化S1132896位基因分型时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点；此外，容置孔 的孔槽与容置槽的槽腔底部都铺设有海绵垫，可W避免试剂管与试剂瓶的底部磕碰破损； 而且，盒盖与盒体之间设置了密封条，其可W保证在盒盖与盒体闭合时，保持密封状态，方 便移动和运输。
[0013] 本ARMS-qPCR检测试剂盒适用于MMP2基因分型，其结构简单、设计合理、使用方 便、容易制造，且检测过程不易受污染其即保证了试剂盒密封性、安全性，又方便运输，可W 在给MMP2基因分型时方便实验人员操作，提高了工作效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1为本实用新型实施例ARMS-qPCR检巧IJ试剂盒的结构示意图。
【具体实施方式】
[0015] W下结合附图实施例对本实用新型作进一步详细描述。
[0016] 本实施例的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，如图1所示，包括盒体1和 位于盒体1上方的盒盖2,盒体1为上端开口的中空的立方体盒体1，其具有容置腔。盒盖 2的一侧边与盒体1的开口端的一侧壁的顶端转动连接，例如较接或者通过一层膜连接，而 盒盖2的相对的一侧通过卡锁机构与盒体1连接，卡锁机构包括卡合部13和卡槽11，卡合 部13设置于盒体1的与盒盖2转动连接处相对的侧壁上，而盒盖2对应于卡合部13设置 有卡槽11，卡合部13能卡合于该卡槽11内。本实施例的卡锁机构为现有技术，故其结构并 没有在图中标示。
[0017] 本实施例的盒盖2与盒体1的连接方式可W保证在盒盖2与盒体1闭合时，保持 密封状态。为了进一步增强本实施例检测试剂盒的密封性，盒盖2与盒体1之间设有密封 条14,密封条14紧固设置在盒盖2与盒体1开口端相接触的端面并与盒体1的容置腔的上 端面相匹配，即密封条14固定（例如粘贴）在盒盖2的下端面，当盒盖2与盒体1闭合时， 密封条14恰好位于盒体1容置腔的上端面上，密封条14的形状为与容置腔相匹配的四边 形。
[001引本实施例的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒还包括固定座12和海绵垫， 固定座12容置在盒体1容置腔内并纵向开设有6个容置孔、1个容置槽和1个备用容置槽， 6个容置孔的孔腔内分别容置有MMP2-R引物试剂管4、MMP2-C引物试剂管3、MMP2-F1引物 试剂管5、MMP2-巧引物试剂管6、MMP2-化qman管8和阳性对照质粒管7 ;容置槽的槽腔内 容置有PCR缓冲液试剂瓶10,备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶9。
[0019] 为了使得本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒结构更加整齐，6个容置孔在固定座 12上分两排平行排列，而备用容置槽与容置槽并列排布在固定座12上并位于容置孔的右 侦U，其中容置槽位于上方。位于上排的3个容置孔内从左至右分别放置MMP2-C引物试剂管 3、MMP2-巧引物试剂管6和阳性对照质粒管7,位于下排的3个容置孔内从左至右分别放置 MMP2-R引物试剂管4、MMP2-F1引物试剂管5和匪口2-化9111311管8。该种排布格局是根据使 用本检测试剂盒来进行MMP2基因分型时的操作步骤来设计的，可W使得检测时，操作人员 能有条理、有规律地选择相应的试剂。
[0020] 6个容置孔分别为能容纳1. 5m化P管（即离也管）的孔洞，相应的，MMP2-R引物试 剂管4、MMP2-C引物试剂管3、MMP2-F1引物试剂管5、MMP2-F2引物试剂管6、匪?2-化9111311 管8和阳性对照质粒管7分别采用1. 5m化P管。
[0021] 为了能进一步固定住6个试剂管、2个试剂瓶的位置，盒盖2的下端面分别对应6 个容置孔处设有6个能固定试剂管位置的第一限位槽15,盒盖2的下端面对应容置槽处设 有能固定PCR缓冲液试剂瓶10位置的第二限位槽17,同时，盒盖2的下端面对应备用容置 槽处设有能固定PCR缓冲液备用试剂瓶9位置的第H限位槽16。当然，6个第一限位槽15 也在盒盖2上分两排平行排列，同时，第二限位槽17和第H限位槽16并列排布在第一限位 槽15的右侧。
[0022] 为了防止在运输过程中，试剂管、试剂瓶与盒体1或固定座12碰撞而破损，6个 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及备用容置槽的槽腔的底部分别铺设有海绵 垫。在本实施例中，容置孔、容置槽和备用容置槽都是具有底部的空腔式结构，每个孔腔、槽 腔底部分别铺设有海绵垫，该样可W防止发生碰撞，对试剂管、试剂瓶能起到更好的保护和 缓冲作用，W保证各个容器的安全。
[0023] 当然，容置孔、容置槽和备用容置槽可W设计成没底的穿孔式结构，此时海绵垫可 W为一整块，其具体铺设在盒体1内固定座12下方的容置腔内。
[0024] 6个容置孔中放置的EP管中分别装有浓度为10 y mol/L的如下引物：
[00巧]MMP2-R ;5, -TCTTGGGGACTAGAGTGGAT-3，
[0026] MMP2-C ;5, -TCCAACCTCCCCCTTCCATG-3'
[0027] MMP2-F1 ;5' -TGGTCCGTGTGAAGTATCAC-3'
[0028] MMP2-F2 ;5, -TGGTCCGTGTGAAGTATCAG-3'
[0029] 另外，PCR缓冲液试剂瓶10、PCR缓冲液备用试剂瓶9中盛装的PCR反应缓冲 酶液混合物包括浓度为 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg", 2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best "Tag。匪?2-化911脚1管8中装有通用"Tagman探针，序列为；匪?2-化91\13]1 : 5' -TGCACTGATACCGGCCGCAG-3'，阳性对照质粒管7中装有阳性对照质粒。
[0030] 使用本实施例的ARMS-qPCR检测试剂盒进行MMP2基因分型的操作方法如下：
[00引]1)取模板DM
[0032] 取病人全血1血，常规提取DM,取1 y LDNA作为模板。
[0033] 2)反应体系
[0034] 将各反应物质按照如下反应体系进行配比；
[003引反应体系为20y 1，包括qPCR混合液lOy 1，参照引物或者ARMS引物各0. 5y 1(终 浓度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (lOOng)，其余用d地20补齐。
[0036]
【权利要求】
1. 一种MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，包括盒体（1)和覆盖在盒体（1)上 的盒盖（2)，所述盒体（1)具有容置腔，其特征在于：还包括固定座（12)和海绵垫，所述固 定座（12)容置在上述容置腔内并纵向开设有6个容置孔和1个容置槽，6个所述容置孔的 孔腔内分别容置有MMP2-R引物试剂管（4)、MMP2-C引物试剂管（3)、MMP2-F1引物试剂管 (5)、MMP2-F2引物试剂管（6)、MMP2-Taqman管（8)和阳性对照质粒管（7);所述容置槽的 槽腔内容置有PCR缓冲液试剂瓶（10) ;6个所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的 底部分别铺设有所述的海绵垫；所述盒盖（2)的下端面分别对应6个容置孔处设有6个能 固定试剂管位置的第一限位槽（15)，所述盒盖（2)的下端面对应容置槽处设有能固定PCR 缓冲液试剂瓶（10)位置的第二限位槽（17)。
2. 根据权利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：还包 括备用容置槽，所述备用容置槽的槽腔内容置有PCR缓冲液备用试剂瓶（9)，所述备用容置 槽的槽腔底部铺设有海绵垫，所述备用容置槽与容置槽并列排布在固定座（12)上，所述盒 盖（2)的下端面对应备用容置槽处设有能固定PCR缓冲液备用试剂瓶（9)位置的第三限位 槽（16)。
3. 根据权利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：6个所 述容置孔在固定座（12)上分两排平行排列，对应的，6个所述第一限位槽（15)在盒盖（2) 上分两排平行排列。
4. 根据权利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：6个 所述容置孔分别为能容纳1. 5mlEP管的孔洞，相应的，所述MMP2-R引物试剂管（4)、MMP2-C 引物试剂管（3)、MMP2-F1引物试剂管（5)、MMP2-F2引物试剂管（6)、MMP2-Taqman管（8)和 阳性对照质粒管（7)分别采用1. 5mlEP管。
5. 根据权利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所述 盒盖（2)的一侧与盒体（1)的开口处转动连接，另一侧通过卡锁机构与盒体（1)连接，所述 卡锁机构包括卡合部（13)和卡槽（11)，所述卡合部（13)设置于盒体（1)的侧壁，所述盒 盖（2)对应于上述卡合部（13)设置有所述的卡槽（11)，所述卡合部（13)能卡合于该卡槽 (11)内。
6. 根据权利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，其特征在于：所述 盒盖（2)与盒体（1)之间设有密封条（14)，所述密封条（14)紧固设置在盒盖（2)与盒体 (1)开口端相接触的端面并与盒体（1)的容置腔的上端面相匹配。
【文档编号】C12Q1/68GK204185491SQ201420642730
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】张道允, 巩子英, 张恒, 罗坚诚, 贾宁 申请人:江苏所罗门兄弟医学科技有限公司