连蕊茶花提取物及其提取方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品化工技术领域，涉及"连蕊茶"花的有效成分提取物及其提取方法 和用途。
【背景技术】
[0002] 连蕊茶(Camellia rosthorniana Hand.-Mazz)花为山茶属植物川萼连蕊茶的花。 该植物在我国南方地区自然分布，也有人工栽培。其花中含有丰富的黄酮类、多酚类和皂苷 类成分。实验表明，其花的提取物具有良好的抑菌效果，能够显著延长常温下鲜牛奶的保质 期。关于该种植物花的提取物的开发利用，还未见报道。
【发明内容】
[0003] 鉴于现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供"连蕊茶"花有效成分的提取 物及其提取方法。
[0004] 为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如下 技术方案：
[0005] -种"连蕊茶"花的提取物，其中："连蕊茶"为山茶属植物川萼连蕊茶Camellia rosthorniana Hand. -Mazz，所述的提取物是"连蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依次经石油 醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位。
[0006] 优选地，如上所述的"连蕊茶"花的提取物，其中提取所采用的乙醇水溶液的体积 浓度为65 %-95 %。
[0007] -种上述"连蕊茶"花提取物的提取方法，该提取方法包括如下步骤:取干燥"连蕊 茶"花，去除灰尘等杂质，粉碎，加入10-30倍量浓度为65%-95%的乙醇水溶液，回流提取1-5次，每次不少于2小时，提取液回收乙醇至无醇味，依次以1-2倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃 取，弃去石油醚萃取相和水相，将乙酸乙酯萃取相回收溶剂，得到"连蕊茶"花提取物。
[0008] 进一步优选地，如上所述"连蕊茶"花提取物的提取方法，其采取的乙醇水溶液的 体积浓度为70 %-82 %。
[0009] 进一步优选地，如上所述"连蕊茶"花提取物的提取方法，其得到的"连蕊茶"花提 取物冷冻干燥后，经测定其中的总黄酮含量为22%-25%，总多酚含量为4%-5%，总皂苷含 量为 19%-22%。
[0010] 另外，本发明人发现"连蕊茶"花提取物具有一定程度的抑菌活性，并通过如下方 法获得了多种提取物：
[0011] 方法1:取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，粉碎。加入10-30倍量65 %-95 %乙 醇，回流提取1次或以上，每次不少于2小时。提取液浓缩至四分之一以下，加2-5倍量水调节 醇水比例，静置24小时后过滤，滤液回收乙醇至无醇味，再用真空冷冻干燥机除去水分，获 得"连蕊茶"花提取物。
[0012] 方法2:取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，粉碎。加入10-30倍量水，煎煮1次或 以上，每次不少于2小时。提取液浓缩至四分之一以下，加等倍量乙醇调节醇水比例，静置24 小时后过滤，滤液回收乙醇至无醇味，再用真空冷冻干燥机除去水分，获得"连蕊茶"花提取 物。
[0013] 方法3:取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，粉碎。加入10-30倍量65 %-95 %乙 醇，回流提取1次或以上，每次不少于2小时。提取液回收乙醇至无醇味，采用石油醚、正丁 醇、氯仿、乙酸乙酯萃取，获得"连蕊茶"花提取物。
[0014] 虽然"连蕊茶"花的常规提取物具有一定程度的抑菌活性，但抑菌活性均不显著。 发明人在研究上述方法3的过程中意外发现，"连蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依次经石油 醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位，其抑菌活性大幅度提高。试验发现，方法1、2获得的提 取物的抑菌活性不高，只能延长牛奶保鲜期1天。方法3中采用正丁醇、氯仿与乙酸乙酯配合 萃取的提取物并未发现明显的抑菌活性，而依次经石油醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部 位，其抑菌活性大幅度提高，可以有效延长牛奶保鲜期5-7天。因此，利用该提取物有效部位 的抑菌活性和安全性，其可以被作为食品保鲜剂，尤其特别适合制备成延长牛奶保质期的 食品保鲜剂。因此，本发明的第二个目的在于提供一种工业新用途，即：上述的"连蕊茶"花 提取物在制备食品保鲜剂中的用途。
[0015] 与现有技术相比，本发明提供的"连蕊茶"花提取物具有抑菌活性显著，安全性高， 可用于延长牛奶的保鲜期5-7天。另外，本发明制备方法简单，无需复杂的工艺和设备，适合 工业化生产。
【附图说明】
[0016] 图1为"连蕊茶"花提取物对含有枯草芽孢杆菌的牛奶的抑菌曲线图，其中：系列1 为空白对照，系列2、3为1号和2号"连蕊茶"花提取物，系列4为3号"连蕊茶"花提取物。
[0017] 图2为"连蕊茶"花提取物对含有金黄色葡萄球菌的牛奶的抑菌曲线图，其中：系列 1为空白对照，系列2、3为1号和2号"连蕊茶"花提取物，系列4为3号"连蕊茶"花提取物。
[0018] 图3为"连蕊茶"花提取物对含有大肠杆菌的牛奶的抑菌曲线图，其中：系列1为空 白对照，系列2、3为1号和2号"连蕊茶"花提取物，系列4为3号"连蕊茶"花提取物。
【具体实施方式】
[0019] 以下实施例进一步描述本发明方法的实施过程和有益效果，实施例仅用于例证的 目的，不限制本发明的范围，同时本领域普通技术人员根据本发明所做的显而易见的改变 也包含在本发明范围之内。
[0020] 实施例1
[0021] (1)取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，用中草药粉碎机将干燥"连蕊茶"花粉 碎。
[0022] (2)将"连蕊茶"花干粉Ikg和76 %乙醇20L加入中药提取罐，回流提取2次，每次3小 时。
[0023] (3)过滤合并2次提取液，浓缩至5L，冷却后加入25L去离子水。6°C下静置24小时后 过滤，滤液回收乙醇至无醇味，再用真空冷冻干燥机除去水分，获得"连蕊茶"花提取物。 [0024] 实施例2
[0025] (I)取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，用中草药粉碎机将干燥"连蕊茶"花粉 碎。
[0026] (2)将"连蕊茶"花干粉Ikg和去离子水15L加入中药提取罐，加热煮沸提取2次，每 次2小时。
[0027] (3)过滤合并2次提取液，浓缩至2L，冷却后加入2L乙醇。6°C下静置24小时后过滤， 滤液回收乙醇至无醇味，再用真空冷冻干燥机除去水分，获得"连蕊茶"花提取物。
[0028] 实施例3
[0029] (1)取干燥"连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，用中草药粉碎机将干燥"连蕊茶"花粉 碎。
[0030] (2)将"连蕊茶"花干粉Ikg和76 %乙醇25L加入中药提取罐，加热回流提取2次，每 次3小时。
[0031] (3)过滤合并2次提取液，回收乙醇至无醇味。依次以等体积石油醚、乙酸乙酯萃 取，弃去石油醚和水萃取物，将乙酸乙酯萃取物回收溶剂获得"连蕊茶"花的有效提取物。
[0032] 实施例4
[0033] 将实施例1、2、3获得的连蕊茶的花提取物，分布标记为1号、2号和3号样，测试其抑 菌作用。
[0034]试验方法:将连蕊茶的花提取物称定后分别用5%DMS0溶解配制成8mg/ml溶液备 用，并且在每次取用前均用超声充分分散均匀。取IOOyL上述溶液采用2倍稀释法用无菌水 稀释成一系列浓度梯度。取Imll X 108CFU/ml各细菌菌悬液加入到9ml的LB液体培养基中混 匀得相应的培养基菌悬液，在每管中分别加入IOOyL培养基菌悬液，各管中提取物质量浓度 依次为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312511^/1111。以无菌水为空白对照，置于37°(：恒温 培养箱中培养24h后观察，以目视无菌生长的孔对应最低浓度为最小抑菌浓度。
[0035]实验结果见表1，"连蕊茶"花的1号和2号提取物对细菌枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄 球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.5mg/ml;对真菌黑曲霉的最小抑菌浓度(MIC)为 lmg/mld号提取物细菌枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC) 为0.2mg/ml;对真菌黑曲霉的最小抑菌浓度(MIC)为0.5mg/ml。
[0036]表Γ连蕊茶"花提取物对细菌、真菌的MIC(mg/ml)
[0038] 实施例5
[0039] 将实施例1、2、3获得的连蕊茶的花提取物，分布标记为1号、2号和3号样，测试其对 牛奶的保鲜作用
[0040] 实验方法:取5g"连蕊茶"花提取物的冻干粉末，溶解于IOml去离子水中，用0.45μπι 滤膜过滤。将滤液加入鲜牛奶中，调整提取物浓度到l〇〇mg/ml。加入枯草芽孢杆菌、金黄色 葡萄球菌或大肠杆菌，调整初始菌落计数在3-41ogCFU/ml，在25 °C下培养7天，每24h计算菌 落数，结果见附图1-3。
[0041]实验结果:在常温(25°C)下"连蕊茶"花的1号、2号和3号提取物均可以在一定程度 上延长牛奶的保鲜时间。接种枯草芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌的鲜牛奶，加入1号和2号提 取物后保鲜期延长1天，加入3号提取物后保鲜期延长5天;接种大肠杆菌的鲜牛奶，加入1号 和2号提取物后保鲜期延长1天，加入3号提取物后保鲜期延长7天。
【主权项】
1. 一种"连蕊茶"花的提取物，其特征在于，所述的"连蕊茶"为山茶属植物川萼连蕊茶 Came 11 ia rosthorniana Hand. -Mazz，所述的提取物是"连蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依 次经石油醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位。2. 根据权利要求1所述的"连蕊茶"花的提取物，其特征在于，所述的乙醇水溶液的体积 浓度为65 %-95 %。3. -种"连蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，该提取方法包括如下步骤:取干燥 "连蕊茶"花，去除灰尘等杂质，粉碎，加入10-30倍量浓度为65%-95%的乙醇水溶液，回流 提取1-5次，每次不少于2小时，提取液回收乙醇至无醇味，依次以1-2倍体积的石油醚、乙酸 乙酯萃取，弃去石油醚萃取相和水相，将乙酸乙酯萃取相回收溶剂，得到"连蕊茶"花提取 物。4. 根据权利要求3所述"连蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液 的体积浓度为70 %-82 %。5. 根据权利要求3所述"连蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，所述的"连蕊茶"花 提取物中总黄酮含量22%-25%，总多酚含量4%-5%，总皂苷含量19%-22%。6. 权利要求1或2所述的"连蕊茶"花提取物在制备食品保鲜剂中的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种“连蕊茶”花提取物及其提取方法和用途，该提取物以山茶属植物川萼连蕊茶Camellia rosthorniana Hand.?Mazz的花作为原料，先采用乙醇水溶液提取，提取液回收乙醇至无醇味，依次以1?2倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，弃去石油醚萃取相和水相，将乙酸乙酯萃取相回收溶剂，即得。本发明提供的“连蕊茶”花提取物具有抑菌活性显著，安全性高，可用于延长牛奶的保鲜期5?7天。另外，本发明制备方法简单，无需复杂的工艺和设备，适合工业化生产。
【IPC分类】A23C3/08
【公开号】CN105707230
【申请号】CN201610073454
【发明人】王湛昌, 许林, 李清源, 魏鸣, 谢焰锋
【申请人】武汉市农业科学技术研究院林业果树科学研究所