一种水溶性链霉菌多糖及其应用的制作方法

专利名称：:一种水溶性链霉菌多糖及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于生物技术及应用领域，具体涉及一种水溶性链霉菌多糖及其应用，该水溶性链霉菌多糖具有广谱高效抗菌性能。
背景技术：
：食品行业已成为国民经济三大支柱产业之一，但食品在加工、保藏过程中很容易受到微生物侵染，从而导致食品腐败。因此，食品防腐剂作为食品保藏加工的辅助手段，发挥很重要的作用。通过防腐剂抑制或杀灭微生物，可阻止或延缓食品腐败变质，延长食品货架期，保障食品品质和安全。食品防腐剂根据其来源不同可分为天然防腐剂和化学合成防腐剂两大类。目前，国内广泛使用的三大类化学食品防腐剂为苯甲酸、山梨酸及其盐类、对羟基苯甲酸酯。由于苯甲酸和山梨酸只有在较低的pH下才有活性，且此时在水中的溶解度小，日本等发达国家已禁止使用苯甲酸钠，国内消费者对产品标签上带"苯"字的食品也越来越抵触；而对羟基苯甲酸酯类的溶解度也随着醇链的长度增加而急剧减小。长期以来，国内许多调味品生产企业在使用苯甲酸钠等化学防腐剂时，常常遇到抑菌效果和防腐剂添加量难以同时达标的问题，致使这些防腐剂的应用受到限制。此外，长期实践表明，化学合成防腐剂存在致癌性、致畸性和易引起食物中毒等问题，对人体健康和生态环境都产生极不利的影响。因此，市场急需天然生物防腐剂来替代现有产品。目前，国际、国内广泛认同的唯一的天然防腐剂是乳酸链球菌素(Nisin)，它能有效抑杀革兰氏阳性菌，尤其对产芽胞细菌有很好的抑制效果，但其对引起食物腐败的革兰氏阴性菌、酵母菌和霉菌都完全无效。随着人们对食品安全的要求日益强烈，我国民众的呼声尤为突出，积极探寻新型的广谱、高效、低毒、安全的天然食品生物防腐剂，解决日益突出的食品安全问题已迫在眉睫，成为食品科学和食品生物
技术领域：
的研究热点。为此，大力开发安全无毒、高效、功能性的食品防腐剂是食品添加剂工业今后的发展方向之一。近年来，人们陆续报道了微生物多糖的生物活性。在ChinJMicrobiolImmunol,13(6)442(2003)中报道了一种乳酸胞外多糖具有增强细胞免疫的作用。刘常宏等发明了利用枯草芽孢杆菌产生胞外多糖的制备及其在抗肿瘤方面的应用的专利(申请号200610041347.6，公开日2007.02.07，公开号CN1908182)，这种多糖可作为制备治疗肿瘤药物、免疫调节保健品或免疫调节药物。多糖类作为食品防腐剂研究目前还比较少，目前已有相关的文献报道和专利主要是针对壳聚糖，如No等检验了壳聚糖和壳聚寡糖对ll种细菌的抗菌活性；赵希荣、夏文水等研究了壳聚糖的抗菌活性及其在食品保藏中的应用；张忠泽发明了活性壳聚糖食品防腐剂及其制备方法的专利(申请号00123064.6，公开日2002.05.15，公开号CN1348722);夏文水等发明了一种天然食品防腐剂壳聚糖的制备方法及其应用的专利(申请号200510040933.4，公开日2005年12月21日，公开号CN1709166A);在日本，利用壳聚糖来延长食品防腐时间的工艺已申请专利；在欧洲，壳聚糖不是食品添加剂，但它已被批准用于化妆品和食品加工中；在加拿大，羧甲基壳聚糖已获准作为食品防腐剂用于鸡蛋和水果如梨和苹果的涂层保鲜。目前人们已达成共识，多糖由于其热稳定性强，水溶性好，无免疫原性，生物活性广泛等特点，在医药、食品、农业等领域逐渐显示出广阔的应用前景。在食品方面，由于它具有广谱抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌能力，以及活性效价高，无致畸变作用，无蓄积毒性，不易产生抗药性等优点，有望成为新一代的食品防腐剂，特别是当前人们对食品安全的关注日益加强，多糖极有可能成为新型天然抗菌防腐剂的最佳候选者之一。
发明内容本发明的一个目的是提供一种水溶性链霉菌多糖，该水溶性链霉菌多糖具有抗菌性强、热稳定性高以及对pH耐受范围宽的特点；另一个目的是提供该水溶性链霉菌多糖的应用。本发明提供的水溶性链霉菌多糖，其特征在于，该水溶性链霉菌多糖包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖，三者的摩尔比例为(1.8—2.2):(0.8—1.2):(0.8—1.2)，其平均分子质量为42，000_80，000之间，其制备方法为(1)将斜面保藏的保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌菌种活化后接种于摇瓶中，在摇床上培养后作为接种的种子；(2)将步骤(1)中摇瓶培养的种子以IO—15%的接种量接种于5—100L发酵罐中，在温度15—35°C、通气量0.5—3FKM、搅拌转速100—300rpm的条件下发酵120—168小时后，放罐后离心得到发酵液；(3)在55—6(TC下减压蒸馏，将发酵液浓缩至整个体积的l/3—2/3后，向浓縮液中添加固体硫酸铵，使硫酸铵达到整个发酵液80—100%饱和度，去除发酵液中的蛋白质杂质，再用膜过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液；将浓度为80—90%的乙醇加入滤液中，乙醇的添加量为滤液体积的2—5倍，静置后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖。上述水溶性链霉菌多糖可以作为一种食品防腐剂，尤其适合应用于腌卤制品、发酵制品以及果汁类的食品防腐保鲜。本发明提供的水溶性链霉菌多糖是采用维吉尼亚链霉菌，该维吉尼亚链霉菌的分类命名为维吉尼亚链霉菌H03，StreptomycesVirginiaH03，己经于2007年4月16日在中国典型培养物保藏中心(湖北省武汉市武汉大学)保藏，收到保藏登记号CCTCCM207049。在合适的培养基和培养条件下发酵制备而成的。这种水溶性链霉菌多糖抗菌性强、抗菌谱广，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、青霉、黑曲霉菌、假丝酵母、圆酵母、隐球酵母的最小抑菌浓度分别是0.015、0.015、0.015、0.0625、0.125、0.125、0.25、0.5、0.5(mg/ml)，其添加量与化学防腐剂相当时，杀菌效果优于化学防腐剂。该多糖产品热稳定性强，在10(TC加热10钟后，杀菌效果不受影响。对pH耐受范围宽，在pH4—10时不影响杀菌效果。毒理实验表明，该水溶性链霉菌多糖对受试小鼠没有任何毒副作用。所以，本发明为食品工业提供了新型天然食品防腐剂和保鲜剂，提高食品质量安全水平、促进食品工业发展，具有很高的社会效益和经济效益。图l为链霉菌菌丝体的显微图片(放大倍数为1000);图2为水溶性链霉菌多糖制备流程图；图3为水溶性链霉菌多糖红外光谱图；图4为标准单糖混合物的衍生物和水溶性链霉菌多糖样品水解物的衍生物气相色谱图。具体实施方式本发明生产水溶性链霉菌多糖具体步骤及工艺条件如下(1)发酵种子的制备将斜面保藏的保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌(如图l所示)菌种活化后接种于250ml的三角摇瓶中，在摇床上培养后作为一级种子，将一级种子接种于种子罐，经扩大培养后制成种子液。(2)维吉尼亚链霉菌的发酵培养将步骤(1)中制备好的种子液按发酵培养基量的10—15%接入种子液，在发酵温度为15—35'C，通气量0.5—3FKM，搅拌转速为100—300rpm的条件下，发酵120—168小时后放罐。(3)水溶性链霉菌多糖的提取发酵结束后，离心去掉菌体，收集发酵液。在55—6(TC下减压蒸馏，将发酵液浓縮至整个体积的l/3—2/3后，向浓縮液中添加固体硫酸铵，使硫酸铵达到整个发酵液80—100%饱和度，去除发酵液中的蛋白质杂质；再用膜过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液；将2—5倍体积的80—95%乙醇加入滤液中，静置10—20小时后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖，最后将该水溶性链霉菌粗多糖经SephdexG—150凝胶层析后冷冻干燥至恒重，得到纯度为95—98%的水溶性链霉菌多糖。上述方法制备得到的水溶性链霉菌多糖具有良好的水溶性，甘露糖、葡萄糖和半乳糖三种单糖的摩尔比例为(1.8—2.2):(0.8—1.2):(0.8—1.2)，平均相对分子质量在42，00080，OOO之间，抗菌范围广，对引起食物腐败的革兰氏阴性和阳性细菌以及霉菌、酵母菌等真菌都有较强抑制和杀灭作用，活性很高，使用量少，且适应pH范围广，对热稳定性高。可广泛应用于腌卤制品、发酵制品以及果汁类的食品防腐保鲜，根据不同食品需要，多糖防腐剂添加量为食品量的0.011.0%。以下结合实施例对本霉菌多糖的制备作进一步说明，实施例中所采用的发酵设备为德国B.Braun公司生产的5L、20L以及自制的50L、IOOL全自动发酵罐及配套设备。实例中种子的制备过程选用如下培养基葡萄糖2—4%，豆饼粉2—5%，酵母浸膏0.1—0.3°/。，KH2PO40.1—0.2%，MgS04'7H200.05—0.1%，NaCl0.05—0.1%，(NH4)2S040.2—0.4%,CaCO30.02%，上述百分数均指质量百分数，其余的用水补充，初始pH7.0—7.4。其中，上述培养基中2—4%葡萄糖可用2—4%蔗糖代替，2—5%豆饼粉可用2—5%淀粉代替，0.1—0.3°/。酵母浸膏可用0.1—0.3%蛋白胨代替。发酵罐进行培养时选用如下发酵培养基蔗糖0.5—2%，葡萄糖1一3%，豆饼粉2—5%，酵母浸膏0.1—0.3%，KH2PO40.1—0.2%，MgS04'7H200.05—0.1%，NaC10.05—0.1%，(NH4)2S040.2—0.4°/。，CaCO30.02%，上述百分数均指质量百分数，其余的用水补充，初始pH7.0—7.4。其中，上述培养基中2—5%豆饼粉可用2—5%淀粉代替，0.1—0.3°/。酵母浸膏可用0.1—0.3%蛋白胨代替。实施例l水溶性链霉菌多糖的制备1.种子的扩大培养(1)种子培养基配方葡萄糖2%，豆饼粉5%，酵母浸膏0.1%，KH2P040.2%，MgSO4.7H2O0.05%,NaC10.05%，(NH4)2S040.2%，CaCO30.02%，初始pH7.0。(2)种子培养条件培养温度为28'C，摇瓶转速为100rpm，培养3天。(3)种子扩大培养2L摇瓶装500ml种子培养基，灭菌后待用。将保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌菌种活化后，取直径为1.0cm的菌斑接入摇瓶中，并按(2)中的种子培养条件进行种子扩大培养，获得发酵生产用的种子培养物。2.发酵培养(l)发酵培养基蔗糖0.5%，葡萄糖3%，豆饼粉5%，酵母浸膏0.1%，KH2PO40.2%，MgSO4.7H2O0.1o/0，NaC10.10/0，(NH4)2S040.2%，CaC030.02%，初始pH7.0。(2)发酵培养条件发酵温度为28'C，发酵罐搅拌转速为100rpm，通气量为0.5FFM、，培养时间为120小时。(3)链霉菌的发酵培养用5L的发酵罐进行培养，发酵培养基的装液量为4.0L，然后将制配好的种子液按10%的接种量接入到发酵培养基中，再按上述步骤(2)中的发酵培养条件进行多糖的发酵培养。(4)水溶性链霉菌多糖的制备发酵结束后，抽滤，收集发酵液。在55'C下减压蒸馏，将发酵液浓縮至整个体积的l/3后，向发酵液添加硫酸铵，使其达到80Q^饱和度，以去除发酵液中的蛋白质杂质，再用截留相对分子质量为20，OOOD的膜，过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液。将5倍体积的80%乙醇加入滤液中，静置10小时后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖，最后将该水溶性链霉菌粗多糖经SephdexG—150凝胶层析后冷冻干燥至恒重得到链霉菌多糖。经检测得到的水溶性链霉菌多糖纯度为95%，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，三者的摩尔比例为1.8:1.0:1.1，相对分子质量大小为42，000。实施例2水溶性链霉菌多糖的制备1.种子扩大培养(1)种子培养基配方葡萄糖3%，豆饼粉3%,酵母浸膏0.2%，KH2P040.2o/0，MgS04'7H200.05%，NaC10.05%，(NH4)2S040.3%，CaC030.02%，初始pH7.2。(2)种子培养条件培养温度为3(TC，摇瓶转速为200rpm，培养3天。(3)种子扩大培养2L摇瓶中装500ml种子培养基，灭菌后待用。将保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌活化后，取直径l.Ocm的菌斑接入摇瓶中，并按步骤(2)中的种子培养条件进行种子扩大培养，获得多糖发酵生产用的种子培养物。2.发酵培养(1)发酵培养基蔗糖1%，葡萄糖2%，豆饼粉3%，酵母浸膏0.2%，KH2PO40.2%，MgSO4.7H2O0.1o/o，NaC10.1%，(NH4)2S040.4%，CaC030.02%，初始pH值为7.2。(2)发酵培养条件发酵温度为3(TC，搅拌转速为200rpm，通气量为2.0FFM，培养时间为144小时。(3)链霉菌的发酵培养用20L的发酵罐进行培养，发酵培养基的装液量为16L，然后将制配种子液按12%的接种量接入到发酵培养基中，再按上述步骤(2)中的发酵培养条件进行发酵培养。(4)水溶性链霉菌多糖的制备结束后，离心去菌体，收集发酵液。在6(TC下减压蒸馏，将发酵液浓縮至整个体积的2/3后，向发酵液添加硫酸铵，使其达到90%饱和度，以去除发酵液中的蛋白质杂质，再用截留相对分子质量为20，OOOD的膜，过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液。将2倍体积的90%乙醇加入滤液中，静置20小时后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖。最后将该水溶性链霉菌粗多糖经SephdexG—150凝胶层析后冷冻干燥至恒重得到链霉菌多糖。经检测多糖得到的水溶性链霉菌多糖纯度为96%，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，三者的摩尔比例为2.0:1.2:1.1，相对分子质量大小为68,OOOD。实施例3水溶性链霉菌多糖的制备-1.种子扩大培养(1)种子培养基配方葡萄糖4%，豆饼粉2%，酵母浸膏0.2%，KH2P040.2o/o，MgS04.7H200.05%，NaC10.05%，(NH4)2S040,3%，CaC030.02%,初始pH7.2。(2)种子培养条件培养温度为32"C，摇瓶转速为250rpm，培养3天。(3)种子扩大培养2L摇瓶中装500ml种子培养基，灭菌后待用。将保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌活化后，取直径1.0cm的菌斑接入摇瓶中，并按步骤(2)中的种子培养条件进行种子扩大培养，获得多糖发酵生产用的种子培养物。2.发酵培养(1)发酵培养基蔗糖2%，葡萄糖2%，豆饼粉3%，酵母浸膏0.2%，KH2PO40.2%，MgSO4,7H2O0.1%，NaC10.1%，(NH4)2S040.4%，CaC030.02%，初始pH7.2。(2)发酵培养条件发酵温度为32'C，搅拌转速为250rpm，通气量为2.5FKM，培养时间为144小时。(3)链霉菌的发酵培养用50L的发酵罐进行培养，发酵培养基的装液量为40L，然后将制配种子液按12%的接种量接入到发酵培养基中，再按上述步骤(2)中的发酵培养条件进行发酵培养。(4)水溶性链霉菌多糖的制备结束后，离心去菌体，收集发酵液。在6(TC下减压蒸馏，将发酵液浓縮至整个体积的2/3后，向发酵液添加硫酸铵，使其达到90%饱和度，以去除发酵液中的蛋白质杂质，再用截留相对分子质量为20，OOOD的膜，过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液。将3倍体积的90%乙醇加入滤液中，静置20小时后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖。最后将该水溶性链霉菌粗多糖经SephdexG—150凝胶层析后冷冻干燥至恒重得到链霉菌多糖。经检测得到的水溶性链霉菌多糖纯度为96%，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，三者的摩尔比例为2.0:1.1:1.1，相对分子质量大小为72，OOOD。实施例4水溶性链霉菌多糖的制备1.种子扩大培养(1)种子培养基配方葡萄糖4%，豆饼粉2%，酵母浸膏0.3%，KH2P040.2%，MgSO4'7H2O0.1o/o，NaC10.1%，(NH4)2S040.4%，CaCO30.02%，初始pH7.4。(2)种子培养条件培养温度为35'C，摇瓶转速为300rpm，培养3天。(3)种子扩大培养2L摇瓶中装500ml种子培养基，灭菌后待用。将保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌活化后，取直径l.Ocm的菌斑接入摇瓶中，并按(2)中的种子培养条件进行种子扩大培养，作为一级种子，将一级种子接种于10L发酵罐继续培养获得二级种子作为生产用的种子培养物。2.发酵培养(1)发酵培养基蔗糖2%，葡萄糖1%，豆饼粉2%，酵母浸膏0.3%，KH2P040.2%,MgS04.7H200.1%，NaCl0.1%，(NH4)2S040.4%，CaC030.02%，初始pH7.4。(2)发酵培养条件发酵温度为35X:，搅拌转速为300rpm，通气量为3.0VVM，培养时间为168小时。(3)链霉菌的发酵培养用100L的发酵罐进行培养，发酵培养基的装液量为80L，然后将制配种子液按15%的接种量接入到发酵培养基中，再按上述步骤(2)中的发酵培养条件进行发酵培养。(4)水溶性链霉菌多糖的制备发酵结束后，离心去菌体，收集发酵液。在60。C下减压蒸馏，将发酵液浓縮至整个体积的l/2后，向发酵液添加硫酸铵，使其达到100%饱和度，以去除发酵液中的蛋白质杂质，再用截留相对分子质量为20，OOOD的膜，过滤除去发酵液中其他杂质，得到滤液。将3倍体积的95%乙醇加入滤液中，静置16小时后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖，最后将该水溶性链霉菌粗多糖经SephdexG—150凝胶层析后冷冻干燥至恒重得到链霉菌多糖。经检测多糖得到的水溶性链霉菌多糖纯度为98%，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，三者的摩尔比例为2.2:1.2:1.0，相对分子质量大小为80，OOOD。实施例5水溶性链霉菌多糖对酱油中酵母数量的影响将制得的水溶性链霉菌多糖按酱油质量浓度的0.1%添加到酱油中，室温(25°C)、自然通风条件下敞开保存，每三天取样测试一次，用血球计数板测量酵母数量。以添加相同浓度的常用食品防腐剂(苯甲酸钠、Nisin)作比较，以不加任何防腐剂的酱油作为空白对照。结果如表l所示。表l水溶性链霉菌多糖对酱油中酵母数量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注多不可计是指数量巨大，远远超过了104这个数量级。实施例6水溶性链霉菌多糖对卤制豆腐干中细菌数量的影响在卤制豆腐干的卤汁中添加本法制得的水溶性链霉菌多糖，使多糖质量浓度达到豆腐干质量的0.5%，以添加相同浓度的常用食品防腐剂(苯甲酸钠、Nisin)作比较，以不加任何防腐剂的酱油作为空白对照。将豆腐干卤制后进行真空包装，在3CTC条件下保藏，每6天测试样品的细菌总数(CFU/g)其结果如表2所示。表2水溶性链霉菌多糖对卤制豆腐干中细菌数量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注多不可计是指数量巨大，远远超过了104这个数量级。实施例7水溶性链霉菌多糖对卤肉制品中细菌数量和挥发性盐基态氮含量的影响对市售猪肉进行卤煮，在卤汁中添加本法制得水溶性链霉菌多糖，使多糖质量浓度达到鲜肉质量的0.5%，卤煮后取出沥干真空包装，于25"C下保温检验，测定细菌总数和挥发性盐基态氮含量，以添加相同浓度的常用食品防腐剂(苯甲酸钠、Nisin)作比较，以不加任何防腐剂的酱油作为空白对照。结果如表3、表4所示。表3水溶性链霉菌多糖对卤肉制品中细菌数量(xl04CFU/kg)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注多不可计是指数量巨大，远远超过了104这个数量级。表4水溶性链霉菌多糖对卤肉制品中挥发性盐基态氮含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>挥发性盐基态氮(TVB-N)是衡量水产、肉类新鲜程度的一个指标，一般认为TVB-N在20mg/100g以下的产品是新鲜的，而超过30mg/100g则视为初期腐败。实施例8水溶性链霉菌多糖对苹果汁中细菌数量的影响在澄清纯苹果汁中添加本法制得的水溶性链霉菌多糖，使多糖质量浓度达到苹果汁质量的0.05%，以添加相同浓度的常用食品防腐剂(苯甲酸钠、Nisin)作比较。将三组苹果汁至于25。C恒温培养箱中保温，每天取样检测细菌总数，结果如表5。表5水溶性链霉菌多糖对苹果汁中细菌数量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注多不可计是指数量巨大，远远超过了104这个数量级。实施例9水溶性链霉菌多糖热稳定性试验表6水溶性链霉菌多糖抗菌活性的热稳定性检测结果u<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>60°C32.632.370°C32.432.280°C33.032.390。C32.532.7100°C33.833.1将实施例3中制备的水溶性链霉菌多糖样品在6(TC、70°C、80°C、90°C、10(TC下分别处理5min、10min后，与未处理的提取物(30°C)相比，其对金黄色葡萄球菌的抑菌活性几乎没有改变，说明该水溶性链霉菌多糖具有较好的热稳定性。实施例IO水溶性链霉菌多糖对pH耐受范围试验表7pH对水溶性链霉菌多糖抗菌活性影响抑菌圈直径平均值/mm大肠杆菌金黄色葡萄球菌1.018.217.43.019.418.94.029.829.65.030.429.86.032.130.97.033.432.88.033.132.59.032.832.610.029.128.912.028.726.9从表中可以看出，在pH处于4-10之间时，对实施例3中制备的水溶性链霉菌多糖样品的杀菌效果影响不大。将实施例4中制备的水溶性链霉菌多糖样品进行红外光谱检测，结果表明，水溶性链霉菌多糖4000cm"—700cm"主要特征吸收峰有3409、2932、1660、1402、1185、1113、879、814cm國1。其中，3400cm"的强吸收峰为糖分子中羟基的伸縮振动吸收峰，2930cm"附近的、吸收峰是C一H的伸縮振动峰，1660附近强吸收峰是C-O的伸縮振动，1185cm"附近的吸收峰证明其中的单糖以吡喃糖苷的形式存在。1113cm"附近的吸收峰是由糖环的C一O—C伸縮振动所产生。870cm"、810cm"附近有吸收峰，说明样品中可能有甘露糖。840处无吸收，说明不含a-糖苷键，而含卩一糖苷键。将实施例4中制备的水溶性链霉菌多糖样品充分水解后衍生化再进行气相色谱分析，对比标准单糖出峰时间及质谱信号，可以看出阿拉伯糖衍生物，木糖衍生物，甘露糖衍生物，葡萄糖衍生物，半乳糖衍生物的出峰时间分别是14.23、15.79、18.42、18.97和19.83分钟(图4a);样品衍生物气相色谱图中三个峰对应出峰时间分别是18.40、18.95和19.82分钟(图4b)，由此可以看出，水溶性链霉菌多糖样品水解物的三个峰对应的分别是甘露糖、葡萄糖和半乳糖。用积分的方法计算水溶性链霉菌多糖样品气相色谱图中各峰的面积所占的比例，可以得出甘露糖、葡萄糖和半乳糖这三种单糖的摩尔比例约为2.2:1.2:1.0。权利要求1、一种水溶性链霉菌多糖，其特征在于，该水溶性链霉菌多糖包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖，三者的摩尔比例为(1.8-2.2)∶(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)，其平均分子质量在42,000-80,000之间，其制备方法为(1)将斜面保藏的保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌菌种活化后接种于摇瓶中，在摇床上培养后作为接种的种子；(2)将步骤(1)中摇瓶培养的种子以10-15％的接种量接种于5-100L发酵罐中，在温度为15-35℃、通气量为0.5-3VVM、搅拌转速为100-300rpm的条件下发酵120-168小时后，放罐后离心得到发酵液；(3)在55℃下减压蒸馏，将发酵液浓缩至整个体积的1/3-2/3后，向发酵液添加固体硫酸铵，使其达到80-100％饱和度，以去除发酵液中的蛋白质杂质，再用膜过滤除去发酵液中的其他杂质，得到滤液；将浓度为80-90％的乙醇加入滤液中，乙醇的添加量为滤液体积的2-5倍，静置后离心得到沉淀即为水溶性链霉菌粗多糖。2、根据权利要求l所述的水溶性链霉菌多糖，其特征在于制备中所使用的接种培养基的组分和质量比为葡萄糖或蔗糖2—4%，豆饼粉或淀粉2—3%，酵母浸膏或蛋白胨0.1—0.2%,KH2P040.1—0.2%，MgS04'7H200.05—0.1%,NaCl0.05—0.1%，(NH4)2S040.2—0.4%,CaC030.02%，余量为水，其初始pH值为7.0—7.4。3、根据权利要求1或2所述的水溶性链霉菌多糖，其特征在于，制备中所使用的发酵培养基的的组分和质量比为蔗糖0.5—1%，葡萄糖2—3%，豆饼粉或淀粉3—4%，酵母浸膏或蛋白胨O.1_0.2%，KH2P040.l—0.2%，MgS047H200.05—0.1%，NaCl0.05—0.1%，(NH4)2S040.2—0.4%，CaC030.02%,余量为水，其初始pH值为7.0—7.4。4.权利要求1所述的水溶性链霉菌多糖的应用，其特征在于水溶性链霉菌多糖可作为一种食品防腐剂。5.根据权利要求4所述的水溶性链霉菌多糖的应用，其特征在于该水溶性链霉菌多糖可应用于腌卤制品、发酵制品以及果汁类的食品防腐保鲜。专利摘要一种水溶性链霉菌多糖，是采用保藏菌号为CCTCCM207049的维吉尼亚链霉菌在合适的培养基和培养条件下发酵制备而成。其平均相对分子质量为42,000-80,000，单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖，三者的摩尔比例为(1.8-2.2)∶(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)。其制备方法如下首先将斜面种子制备成摇瓶种子或种子罐种子，再进行分批发酵或分批补料发酵，最后从发酵液中提取多糖。实验证实，这种水溶性链霉菌多糖具有较强抗菌活性，抗菌范围广泛，能抑制和杀灭导致食品腐败的细菌中的大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌，霉菌中的青霉、黑曲霉菌，酵母菌中的假丝酵母、圆酵母、隐球酵母等，可作为天然食品防腐剂分别应用于腌卤制品、发酵制品以及果汁类的食品防腐保鲜。文档编号A23L3/3562GKCN101100686SQ200710052606公开日2008年1月9日申请日期2007年6月29日发明者峰何,余龙江,周蓬蓬,鲁明波申请人:华中科技大学导出引文BiBTeX,EndNote,RefMan