专利名称：具有抗肿瘤活性的大环内酯类的制作方法
技术领域：
本发明领域本发明涉及从新的海生微生物有机体的肉汤培养物中分离的新的大环内酯化合物。本发明还涉及在控制的条件下通过需氧发酵产生该新化合物及其分离和纯化、也涉及衍生的化合物，并且涉及在抗肿瘤和其它活性的发现的基础上的其它方面。
本发明背景称作寡霉素和高寡霉素(homoligomycin)的大环内酯从J.Antibiotics 461334～1341，1993、J.Antibiotics 45171～179，1992和J.Antibiotics 491275～1277，1996中已知。
本发明目的由于大量的癌细胞系(包括那些显示MDR表型的癌细胞系)不能用任何药物有效治疗这一事实，所以人们仍然需要新的抗增生化合物来治疗几种人体肿瘤。
本发明的另一个目的是提供用于给予需要此治疗的患者所述活性化合物的药用组合物。
人们对微生物产物感兴趣，因为目前已很好地建立了工业生产。因此，本发明另一个目的涉及生产该活性化合物的方法、涉及从发酵肉汤培养物中分离和纯化所述活性化合物的方法、也涉及水解为糖苷配基化合物和衍生化成为相关的化合物的方法。本发明概述本发明提供了下式的称作IB-96212的具有大环内酯样结构的化合物
也提供了获得IB-96212的方法，并且所述优选的方法包括在控制的浸没需氧条件下，在具有可同化的碳源和氮源以及盐的水溶性营养培养基中培养能够产生IB-96212的微生物菌株。未纯化的或者部分纯化的并具有抗肿瘤活性的肉汤培养物自身也为本发明的一部分。可以从该肉汤培养物中回收化合物IB-96212并加以纯化。证明该化合物和发酵肉汤培养物具有令人感兴趣的抗几种人癌细胞的活性，在它们中间包括敏感的和多抗药性(MDR)的白血病细胞。另外，IB-96212对于一些革兰氏阳性菌显示抗菌活性。
通过水解可以从化合物IB-96212中脱除经鉴定为L-玫瑰糖(rhodinose)的三脱氧糖，得到活性糖苷配基化合物IB-96212B，该化合物具有母体IB-96212中心26-元大环内酯环体系。
因此，本发明还提供具有以下结构的化合物IB-96212B
IB-96212B与母体IB-96212具有相当的活性。
在化合物IB-96212中，我们鉴定为L-玫瑰糖的三脱氧糖其本身能被衍生化或者该糖能够被替代，无论哪一种情况均可以得到在所述糖的位置上具有非L-玫瑰糖基团的另外的IB-96212衍生物。因此，更广义地讲，本发明提供以下通式的化合物
其中R为氢或取代基基团。
举例说明，R为氢或选自糖基团、烃基基团、酰基基团、杂环基基团或某些其它适宜的取代基基团。该取代基基团的性质不是至关重要的。所述糖基团适宜为单-、双-或三糖，其可为脱氧糖。所述烃基可以为烷基、环烷基、芳基、芳烷基或烷基芳基，特别是C1-C6烷基、环-(C4-C8)-烷基、苯基、萘基或苄基。所述杂环基基团可以为具有1至4个杂原子的4至8元环，特别是具有1或2个选自氧、硫或氮的杂原子的5或6元环。所述烃基基团、酰基基团或杂环基基团本身可以被取代，例如被1、2或3个选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、羟基、氨基或其它基团的取代基取代。
得到IB-96212优选的培养物为称之为ES25-008的新菌株，其化学、生物化学和形态学的特征显示它属于小单孢菌属，在分类学上归类为小单孢菌属菌种(Micromonospora sp.)。
如上所述，已经发现化合物IB-96212和IB-96212B在抑制几种多抗药性(MDR)的人和鼠的白血病细胞以及敏感的细胞系以及抗其它的人体肿瘤的增生活性方面是有效的。所给出的通式的其它化合物将保留这样的活性。
简述
图1为纯化的IB-96212的HPLC色谱图；图2为纯化的IB-96212的紫外光谱(UV)；图3为纯化的IB-96212的红外光谱(IR)；图4为纯化的IB-96212的质子NMR(1H)光谱；图5为纯化的B-96212的碳-13NMR(13C)光谱；图6为纯化的IB-96212的质谱；图7为在丙酮-d6中的IB-96212的HMBC NMR光谱；图8为在丙酮-d6中的IB-96212的COSY NMR光谱；图9为在丙酮-d6中的IB-96212的HMQC 132Hz NMR光谱；图10显示了IB-96212B的NMR相关性；图11为IB-96212B的质谱；图12为在丙酮-d6中的IB-96212B的HMBC 60ms NMR光谱；图13为在丙酮-d6中的IB-96212B的HMBC 110ms NMR光谱；
图14为在丙酮-d6中的IB-96212B的COSY NMR光谱；和图15为在丙酮-d6中的IB-96212B的HMQC 145Hz NMR光谱。
本发明详细描述生产生物用于产生IB-96212和由此产生IB-96212B的微生物优选为小单孢菌属菌种的菌株ES25-008，它的培养物已经以保藏号CECT3333下保藏于Valencia大学的西班牙典型培养物保藏中心。在布达佩斯条约的条款下进行这种保藏，给出的保藏日期为1997年8月4日。该微生物是从未鉴定的海生多孔动物中分离出来的。在此描述的分类方法为那些在表1中报道的方法。所有培养物在27℃下孵育并且每周进行结果记录直到第21天。表11.用于菌落形态研究的培养基ISP培养基第2、3、5和6号Shirling&Gotlieb.(7).ATCC培养基第172号ATCC Catalog.Czapek Agar DifcoBennet琼脂，Waksman.(9)1.5％水琼脂，Luedemann(5)所有的培养基以50％ASW补充2.生理性状研究ISP培养基n°1，Shirling和Gotlieb.(7)NaCl抗性含有0、2、4、7和10％NaCl的ATCC 172碳利用率ISP-9，E.B.Shirling&D.Gotlieb.(7)3.化学组成研究脂肪酸分析，Van der Auwera等.(8)全细胞糖分析，Guerrant和Moss.(3)该生物的描述如下形态学在28℃下、21天后，于补充人造海水(ASW)的ISP2和172中观察到生长。在所研究的不同培养基上观察到几种橙色的覆盖物。无气生菌丝体形成。使基内菌丝体是分支的。在基内菌丝体上产生分离的终端芽孢。所述芽孢为球形的。并且在至少孵育14天后，在一些培养基中能够检测到一些过度生长的菌丝团。生理性状无论在固体培养基上还是在液体培养基上，菌株ES25-008均没有形成可扩散的色素。对NaCl的抗性超过4％。最适生长温度范围在25℃和35℃之间。在葡萄糖、蔗糖、木糖和甘露糖作为唯一碳源时该生物可以生长，然而，在为棉子糖、肌醇、半乳糖、果糖、蜜二糖、乙醇、甘油和鼠李糖时，生长为阴性，并且在为甘露醇时上的生长是有疑问的。细胞化学组成氨基酸内消旋-2，6-二氨基庚二酸存在于菌株ES25-008的全细胞水解产物中。脂肪酸FAME组成如下在表2中所示表2130i-140140 i-150 n-150 150 i-161 i-160 161 160＜1 ＜1＜1 8.21 1.00 1.09＜1 35.07 ＜11.12i-171 i-170n-170 171 170i-181 i-180 cis-181 180＜1 3.18 3.3929.49 7.88 1.44＜1 2.30 ＜1糖当通过气相色谱法分析时，全细胞糖图形(pattern)显示存在着木糖、核糖和葡萄糖。检测到痕量的阿拉伯糖。该图形将该菌株归为Lechevalier等(4)的D组。其它被检测到的糖为甘露糖、半乳糖、m-肌醇和甘露糖胺。所述多元醇阿糖醇和胞壁酸为其它的细胞内组分。未检测到马杜拉糖。
基于前述的特征，经鉴定所述培养物为小单孢菌属的菌种，其与任何国际保藏机构获得的该属的其它任何已知类型的菌株并不相似。通过脂肪酸层析法分析发现，其与最密切相似的青铜小单孢菌ATCC 31395的相似性仅有80％。
尽管很清楚地优选所述保藏的生物，但是本发明不限制或局限于该具体的菌株或生物。本发明者的意图就是在本发明范围内包括任何其它的产生IB-96212的生物、菌株或突变株。发酵当在控制的条件下、于适宜的介质中培养时，小单孢菌属菌种ES25-008产生抗生素IB-96212。该菌株在含水营养培养基中于需氧和嗜中温条件下生长，优选在24℃和35℃、在pH范围为6.0和8.0之间。能够将多种液体培养基用于培养所述生物，有用的培养基为那些培养基，即包括可同化的碳源如淀粉、糊精、糖浆、甘油、葡萄糖、蔗糖等等，可同化的氮源如蛋白、蛋白水解物、脱脂粉、玉米浆等等以及有用的无机阴离子和阳离子如钠、镁、钾、铵、硫酸根、氢氯酸根、磷酸根、碳酸根等等。也可加入微量元素。最好通过向该发酵培养基通气供氧。通过机械高速搅拌器提供搅拌。已经发现常规的发酵罐可很好地适宜于进行该生物的培养。在发酵的不同阶段期间可能需要加入营养物和控制pH以及消泡剂，以增加产量和避免起泡。
通过所述优选的生物来产生IB-96212的所需的必需步骤为
用冷冻的或冷冻干燥的菌丝体开始。在嗜中温的温度和需氧条件下，在摇瓶中用含有部分上述成分的培养基来得到培养初始细胞的菌丝团，如需要的话可将该步骤重复几次，并且将该收集物用作接种物，在一个或几个含有适当培养基的发酵罐中接种，如果需要的话，这些罐也可用作接种物，并且如果需要时可将该步骤重复几次，或者将它们用于生产阶段，这根据所需要的肉汤的体积而定。有时生产培养基可不同于用于接种的那些培养基。
在表3中，描述了能够用于接种物生长和IB-96212产生的培养基表3接种培养基生产培养基蔗糖 5g 蔗糖 5g淀粉 20g淀粉 20g牛肉膏3g 大豆粉15g酵母提取物5g 酵母提取物5g胰化蛋白胨5g 胰化蛋白胨2gCaCO34g CaCO34gNaCl 4g NaCl 4gNa2SO41g Na2SO41gKCl 0.5g KCl 0.5gMgCl22g MgCl22gK2HPO40.5g K2HPO40.5g自来水加至1,000ml自来水加至1,000mlIB-96212的产生能够通过抗细胞系鼠白血病P-388的全肉汤测定或者通过HPLC进行监测。IB-96212的分离通过用适宜的溶剂混合物如CHCl3∶CH3OH∶H2O的混合物从该菌丝体饼(cake)中提取来分离抗生素IB-96212。活性部分集中在下层。合并两次重复提取的提取液并真空蒸发至干。
通过采用常规层析技术的适当组合从该粗品活性提取液中分离并纯化IB-96212。
通过组分的抗肿瘤活性或者通过用在浓H2SO4中的香草醛显影的TLC或者用带有二极管阵列检测器的分析性HPLC指导分步分离。在室温下、使用甲醇∶水(92∶8)作为流动相、2mm/min流速下进行HPLC分析(Waters RCM 8×10，8C18 10柱)，并且在225nm下绘制图谱。如在图1中所示，在这些条件下IB-96212的保留时间为3.64min。
基于它们的各种波谱特性的详细解析，可鉴定该纯的化合物为IB-96212(参见图2至6中呈现的数据)。
如在图2中所报道的那样，该U.V.光谱在225nm处显示吸收。
在附图的图3中显示了在KBr中的红外吸收光谱。
在图4和图5中分别报道了其1H和13C N.M.R.光谱。
在图6中报道了其FAB-MS光谱在1021处显示有(M+Na)-峰。
将IB-96212的1H NMR数据列表如下位置 δH[int mult，J(Hz)] 位置 δH[int mult，J(Hz)]133 3.52(1H)2 5.80(1H，d，15.5) 34 1.35(1H，m)1.68(1H，m)3 6.74(1H，dd，10.5，15.5) 35 0.94(3H，t，7.5)4 2.37(1H，dt，6.5，10.0)36 1.13(3H，d，6.5)5 3.62(1H，d，9.0) 37 077(3H，d，7.0)6 1.73(1H，m)38 1.40(1H，m)1.64(1H，m)7 4.02(1H，d，9.0) 39 1.42(1H，m)1.54(1H，m)8 3.62(1H，d，9.0) 40 0.91(3H，t，7.0)9 3.54(1H) 41 0.96(3H，d，6.5)104.07(1H，dd，4.5，8.5) 42 1.25(1H，m)1.42(1H，m)113.46 (1H) 43 3.68(1H，m)12 44 1.08(3H，d，6.5)133.78(1H，dd，1.5，6.5) 45 0.75(3H，d，7.0)141.82(1H，m)46 0.92(3H，d，7.0)151.98(1H，m)47 0.78(3H，d，6.0)2.19(1H，m)165.42(1H，ddd，3.5，10.5，14.5) 48 0.82(3H，d，7.0)176.03(1H，dd，10.5，14.5) 5-OH 4.21(1H，s)186.01(1H，dd，10.5，14.5) 7-OH 4.90(1H，s)195.16(1H，dd，10.0，14.5) 9-OH 3.50(1H，s)202.26(1H，dt，10.0)10-OH4.50(1H，d，4.5)211.40(1H，m) 11-OH3.53(1H，s)1.64(1H，m)220.92(1H，m) 12-OH3.75(1H，s)1.58(1H，m)233.92(1H，d，10.5) 13-OH4.43(1H，d，6.5)241.95(1H，m) 33-OH3.38(1H，d，6.0)254.81(1H，dd，5.0，11.5) 43-OH3.39(1H，d，6.0)261.75(1H) 1＇ 4.54(1H，dd，1.5，7.7)27 2＇ 1.43(1H)2.09(1H，dt，2.0，8.5)281.40(1H，m) 3＇ 1.46(1H，m)1.75(1H，m)1.93(1H，m)291.49(1H，m) 4＇ 3.15(1H，sep，5.0)1.65(1H，m)301.49(1H，m) 5＇ 3.31(1H，dq，2.5，6.0)313.82(1H，d，10.5) 6＇ 1.24(3H，d，6.0)321.66(1H，m) 4＇-OH 4.04(1H，d，5.0)
将IB-96212B的1H NMR数据列表如下位置 δH[int mult，J(Hz)] 位置 δH[int mult，J(Hz)]1 333.55(1H，m)2 5.80(1H，d，15.5) 341.37(1H，m)1.70(1H，m)3 6.75(1H，dd，10.0，15.5) 350.95(3H，t，7.5)4 2.45(1H，dt，6.5，10.0)361.14(3H，d，6.5)5 3.65(1H) 370.85(3H，d，7.0)6 1.75(1H，m)381.45(1H，m)1.59(1H，m)7 3.94(1H，d，8.0) 391.35(1H，m)1.55(1H，m)8 3.62(1H) 400.88(3H，t，7.0)9 3.63(1H) 410.98(3H，d，6.5)10 4.14(1H，d，6.5) 421.25(1H，m)1.45(1H，m)11 3.50(1H) 433.80(1H，m)12 441.08(3H)13 3.78(1H，宽s) 450.78(3H，d，7.0)14 1.85(1H，m)460.93(3H，d，7.0)15 2.10(1H，m)470.80(3H，d，6.0)2.22(1H，m)16 5.45(1H，ddd，3.5，10.5，14.5) 480.83(3H，d，7.0)17 6.01(1H，dd，10.0，14.5) 5-OH18 6.08(1H，dd，10.0，14.5) 7-OH19 5.18(1H，dd，10.5，14.5) 9-OH20 2.35(1H，dt，10.0) 10-OH21 1.46(1H，m)11-OH1.65(1H，m)22 1.02(1H，m)12-OH1.60(1H，m)23 3.96(1H，d，10.5) 13-OH4.24(1H，宽s)24 1.93(1H，m)3340H3.40(1H，d，6.4)25 4.90(1H，dd，5.5，11.5)4340H3.43(1H，d)26 1.75(1H) 1＇27 2＇28 1.40(1H，m)3＇1.77(1H，m)29 1.50(1H，m)4＇1.65(1H，m)30 1.52(1H，m)5＇31 3.84(1H，d，10.5) 6＇32 1.68(1H，m)4＇-OH
将IB-96212和IB-96212B的13C NMR数据列表如下位置 IB-96212δCIB-96212BδC位置 IB-96212δCIB-96212BδC1165.2 165.328 33.1 32.82122.7 122.529 28.8 28.83150.7 150.730 31.7 31.7442.5 42.0 31 74.1 74.2580.8 80.6 32 39.9 39.9636.4 36.5 33 73.6 73.6777.5 78.6 34 28.8 28.8883.5 74.0 35 9.79.7971.6 73.0 36 18.4 18.210 69.1 71.0 37 4.54.911 70.9 72.1 38 38.0 38.412 76.7 77.5 39 17.2 17.213 68.0 70.6 40 15.2 15.214 34.0 34.3 41 15.0 15.115 39.2 39.2 42 46.9 46.716 131.6 131.543 65.3 65.417 133.1 133.244 24.8 24.818 132.1 132.345 6.76.519 137.5 137.546 12.4 12.320 41.8 41.2 47 18.2 18.121 33.1 33.1 48 9.822 32.2 31.7 1＇104.423 68.9 68.7 2＇31.024 36.7 37.0 3＇31.925 76.7 76.6 4＇71.426 38.7 38.8 5＇77.627 99.1 99.1 6＇ 18.7首先根据图1至6中的数据，我们指定在我们拥有优先权的GB专利文件中所示的结构，但是利用IB-96212和IB-96212B两者后面图的另外的数据，我们得到了IB-96212的结构如下
所述糖取代基能够通过水解除去，得到下式的化合物IB-96212B
在IB-96212的糖上以常规方式衍生化，或者以常规方式将IB-96212B衍生化从而用另一个取代基替代所述糖，由此得到下式的化合物
根据需要可以改变R。生物学活性化合物IB-96212对于藤黄微球菌(Micrococcus Luteus)显示出良好的抗菌活性，在较高剂量下对金黄葡萄球菌(Staphylcoccus aureus)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)也显示一定活性。在液体Meuller-Hinton培养基中、于35℃下，通过将选择的菌株与不同浓度的IB-96212一起孵育来研究化合物IB-96212的抗菌活性。
IB-96212和IB-96212B对于数种哺乳动物癌细胞系显示了良好的抗肿瘤活性。通过根据Bergeron等(2)和Schroeder等(6)描述的方法对肿瘤细胞进行体外培养来检测抗肿瘤活性。已经观察到对数种人肿瘤如白血病、结肠癌、NSC肺癌、黑素瘤等等具有活性。
某些肿瘤比其它的肿瘤更敏感。例如我们发现白血病细胞和MDR白血病细胞比结肠癌至少敏感100倍以上。
通过腹膜内注射QD1-5，用P-388在雌性小鼠组评价了体内活性，得到以下表4所示的结果。表4剂量 体重 体重死亡 存活mg/kg 变化天数 时间注射 总量 第0天第5天IB-96212 0.02.121.6±0.522.6±0.5 0.82，6，10，10，13 8.2±3.8IB-96212 0.01.05 20.6±1.021.7±0.7 1.19，11，13，13，14 12.0±1.8IB-96212 0.005 .025 22.0±1.222.9±0.6 0.810，10，11，11，1311.0±1.1Pos 21.0±1.221.4±1.1 0.58，8，8，8，8，9，9，98.4±0.5本发明也涉及药用制剂，该制剂含有作为活性成分的化合物IB-96212或IB-96212B或者所给出通式的另一种衍生物，本发明也涉及它们的制备方法。
药用组合物的实例包括任何用于口服、局部或非肠道给药的含有适当组成的固体(片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂等)或液体(溶液剂、混悬剂或乳剂)组合物，并且它们可含有纯的化合物，或者当非肠道给药时组合物可能需要灭菌。
根据具体的制剂、应用方法和所治疗的具体状况、宿主和肿瘤，IB-96212、IB-96212B或衍生物的药用组合物的正确剂量将随之变化。也应该考虑其它因素像年龄、体重、性别、饮食、给药时间、排泄率、宿主的病情、药物的联合、反应敏感性和疾病的严重性。在最大耐受剂量范围内可进行连续或定期给药。
本发明实施例参照以下帮助理解本发明的实施例，将对本发明作进一步阐明，但是这些实施例不解释为对本发明的限制。除非另外指明，否则所有在此报道的百分率均以重量比表示。所有的温度均以摄氏度表示。所有的孵育均在28℃下进行，并且在定轨摇床上振摇培养瓶。所有的培养基和容器均为灭菌的，并且所有的培养过程均为无菌的。实施例1贮存培养物小单孢菌属的菌种ES25-008的纯培养物的全肉汤在20％的甘油中冷冻保存。
接种把冷冻的培养物或者生长良好的斜面培养物(5％vo1.)接种于先前描述的在250cc摇瓶中包含100ml的种子培养基中。将该烧瓶在48小时期间孵育。在2L的锥形瓶中用10％的第一阶段接种物接种500ml的相同培养基。该烧瓶在48小时期间孵育。
发酵在17L发酵罐中用第二阶段的接种物2.5L接种前述的50L的生产培养基。在400rpm搅拌和0.5V/V.M.的空气流下，在96小时内进行发酵。通过全肉汤抗P-388测定或者通过HPLC监测次级代谢物的产生。实施例2分离过滤10L全收获的肉汤来分离生物质和其它固体。用CHCl3∶CH3OH∶H2O(2∶1∶1)的混合溶剂(2.4L)提取该菌丝体饼两次，该活性部分集中在下层。浓缩有机溶剂并真空蒸发至干，得到450mg的粗提取物。
使用己烷/乙酸乙酯的混合物作为洗脱溶剂，在硅胶上层析该提取物。以己烷/乙酸乙酯(30∶70)洗脱到44mg具有抗肿瘤活性的组分。在硅胶柱层析上进一步纯化，用氯仿/甲醇(92∶8)洗脱活性部分，得到19mg干燥物质。使用甲醇/水(90∶10)作为洗脱溶剂，经C18反相柱层析进行最后的纯化，得到12mg纯的IB-96212。实施例3水解为IB-96212B把31mg的IB-96212溶于3ml的CHCl3∶CH3OH(1∶1)中，并且加至10ml的15％H2SO4溶液中，保持回流3小时。该反应混合物以15ml水稀释，并用25ml氯仿提取两次，得到30mg反应产物，其通过硅胶层析分析，用CHCl3∶CH3OH(96∶4)洗脱。得到20mg的水解产物糖苷配基。实施例4生物学活性所使用抗肿瘤细胞为P-388(来自DBA/2小鼠淋巴瘤的悬浮培养物)、A-549(人巨红细胞肺癌的单层培养物)、HT-29(人结肠癌的单层培养物)、MEL-28(人黑素瘤的单层培养物)和其它所指定的细胞系。
将P-388细胞以每孔含有1×104个细胞的量接种到16mm孔中，每孔含有1ml等份的具有指定药物浓度的MEM 5FCS。接种另一组无药物的培养物作为生长对照组，以确保细胞在指数生长期。所有的测定均以复份进行。在具有98％湿度的10％的CO2气氛中、于37℃下孵育三天后，用0.1％结晶紫对这些孔进行染色。通过将含有药物的孔中的生长与不含有药物的对照组孔中的生长相比较来计算IC50。
表5中的活性代表以IC50(mcg/ml)表示的活性。表5化合物 P-388 P388MDR MIEL8226 A-549 HT-29 MEL-28 CV1IB-962120.0001 0.001 0.0005 1.001.00 1.00 0.0002IB-96212B 0.0011 1.210.001顺铂2.5 2.5 2.5 5 2.5adriamicin 0.0210.002 0.05 0.02紫杉醇 0.2 ＞2 0.002 0.002 0.002etopoxide 0.1 10 0.1 1 0.5在35℃下，在液体Mueller-Hinton培养基中使受试微生物与IB-96212共同孵育来研究化合物IB-96212的抗菌活性。通过与IB-96212孵育24小时后在孵育培养基中出现浊度来测定MIC。这些结果示于表6中。IB-96212对于抗革兰氏阳性菌显示出杀菌活性。表6微生物 MIC(μg/ml)大肠杆菌 ＞100肺炎免雷伯氏菌＞100绿脓假单孢菌 ＞100金黄葡萄球菌 100枯草芽胞杆菌 100藤黄微球菌0.4参考文献在此引用了下列参考文献，并且它们通过引用结合到本文中(1)American Type Culture Catalog第17版，1989.Rockville.Maryland.U.S.A.(2)Bergeron等.Biochem.Biophys.Res.Comm.，121848，1984(3)Guerrant G.O.和C.W.Moss，Anal.Chem.56633，1984(4)Lechevalier M.P.等.J.Bacteriol.105313，1971(5)Luedemann G.M.Personal Communication(6)Schroeder等.J.Med.Chem.，241078，1981(7)Shirling B.E.和D.Goblieb.Int.J.Syst.Bacteriol.16313，1966(8)Van der Auwera等.J.Microbiol.Methods 4265，1986(9)Waksman，S.A.The Actinomycetes第II卷331，1961已经详细描述了本发明，包括其优选的实施方案。然而，本领域技术人员可以理解基于本发明公开的内容可以进行修改和/或改进。
权利要求
1.以下通式的化合物
其中R为氢或取代基。
2.权利要求1的化合物，其中R为氢或选自糖基团、烃基基团、酰基基团或杂环基基团的基团。
3.权利要求1的化合物，为在此被称为IB-96212的具有以下结构的化合物
或者在此被称为IB-96212B的具有以下结构的化合物
4.在此被称为IB-96212的化合物，其中图1为纯化的IB-96212的HPLC色谱图；图2为纯化的IB-96212的紫外光谱(UV)；图3为纯化的IB-96212的红外光谱(IR)；图4为纯化的IB-96212的质子NMR(1H)光谱；图5为纯化的B-96212的碳-13NMR(13C)光谱；和图6为纯化的IB-96212的质谱。
5.产生权利要求3或4的化合物IB-96212的方法，该方法包括在控制的条件下、在含水营养培养基中培养能够产生化合物IB-96212的微生物菌株。
6.权利要求5的方法，其进一步包括从该肉汤培养物中分离和纯化化合物IB-96212。
7.权利要求5或6的方法，其中所述产生IB-96212的微生物为基本纯的培养菌株ES25-008，它能够以保藏号CECT3333号从西班牙典型培养物保藏中心获得。
8.产生权利要求3的化合物IB-96212B的方法，该方法包括将权利要求3的化合物IB-96212水解。
9.产生其中R不为氢的权利要求1的化合物的方法，该方法包括将其中R为氢的权利要求1的化合物衍生化。
10.权利要求1的化合物在治疗对于所述化合物敏感的哺乳动物癌症中的用途。
11.含有权利要求1的化合物的药用组合物。
12.抗肿瘤药用组合物，它含有有效量的抗一种或多种哺乳动物肿瘤的化合物IB-96212或IB-96212B的。
13.菌株小单孢菌属菌种ES25-008，可在保藏号CECT-3333下获得。
全文摘要
通过培养在保藏号CECT－3333下获得的菌株小单孢菌属菌种ES25—008,可以得到具有结构(Ⅰ)的在此称为IB－96212的化合物,并且可以将其水解得到具有结构(Ⅱ)的IB－96212B。为L－玫瑰糖的糖取代基本身能够衍生化或者该糖能够被替代,无论何种情况均可得到在所述糖位置上具有非L－玫瑰糖基团的IB－96212另外的衍生物。
文档编号C12N1/20GK1276791SQ98809559
公开日2000年12月13日 申请日期1998年8月4日 优先权日1997年8月4日
发明者L·M·卡内多, F·埃斯普列戈, R·I·费尔南德斯－奇梅诺, J·L·费尔南德斯－普恩特斯, J·佩雷兹－巴兹, F·罗梅罗 申请人:拜奥马研究所有限公司