专利名称：一种牛膝糖肽制剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及中药提取物制剂及制备方法，具体涉及一种牛膝糖肽制剂及制备方法。
中药牛膝作为“补肝肾，逐瘀通经，引血下行”的传统中药已载入药典。近年研究发现，糖肽(肽多糖)是牛膝中含量较高的一类物质，它是糖复合物中的一种，是多肽与聚糖(多糖或寡糖)形成的共价结合物。《药学学报》199025(7)《牛膝多糖的化学研究》一文首次揭示牛膝中存在一种具有免疫活性的肽多糖(糖肽)，分子量2.3×104其糖链是由葡萄糖酸、半乳糖酸、阿拉伯糖、鼠李糖组成的聚糖。糖肽用于口服时易于为人体吸收，小分子糖肽较大分子糖肽更易为人体吸收。但目前从牛膝中提取平均分子量小于5000的糖肽并制成医学上可接受的制剂尚未见报道。因此研究从牛膝中提取小分子糖肽是必要的。另外，由于提取糖复合物时，通常采用易燃且有毒性的有机溶剂，去除脂质及糖肽的分离纯化，使生产的安全性降低，污染严重。又由于担心在高温下干燥会破坏其活性，通常采用效率低下且干燥不彻底的冷冻干燥，使糖复合物的提取成本大增加。
本发明的目的是要克服上述现有技术缺点，提供一种安全、疗效确切、价廉的从牛膝中提取的小分子糖肽制成的口服制剂。
本发明的牛膝糖肽口服制剂是由0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％药用辅料组成的医学上可接受的口服制剂。其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95％，分子量为2000～3000；牛膝糖肽中糖肽=8.8～9.5∶1.2～0.5。
本发明另一目的是要提供上述牛膝糖肽口服制剂的制备方法。
本发明公开的牛膝糖肽口服制剂是通过下述方法制得的1、牛膝糖肽提取物的制备取1份中药牛膝切碎与0.003～0.2份碱式盐拌和予处理，用3～14份1～32℃水搅拌浸泡1～4次，每次浸泡3～36小时，合并浸泡液，过滤，滤液离心、干燥后即得含牛膝糖肽65～95％的牛膝糖肽提取物。
2、牛膝糖肽口服制剂的制备取处方量0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％药用辅料相混合，按常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂和口服液。
本发明牛膝糖肽提取物制备中所用的碱式盐是指不溶于水或微溶于水的碱性盐，如碳酸盐、硅酸盐和磷酸盐等。
本发明牛膝糖肽口服制剂的制备中所用的药用辅料为常用的药用增量剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。
本发明为了制得高纯度的小分子牛膝糖肽，在糖肽提取过程中采用了碱式盐拌和予处理的方法，所用的碱式盐最好是粉末状的，这样可和切碎的牛膝充分混合，有利于去除生药中的杂质，并防止浸泡过程中糖肽的分解。碱式盐的用量最好是浸泡牛膝水量的0.1～1.3％。为了提高浸出率，本发明采用多次浸泡的方法，浸泡的水温最好在1～32℃，这样可获得平均分子量在2000～3000左右的小分子糖肽。为保证牛膝糖肽在干燥过程中不被破坏，最好采用喷雾干燥、减压浓缩干燥或冷冻干燥。
在牛膝浸泡提取液中，含有许多小分子杂质及少量单糖、双糖和其他大分子杂质，为了获得更高纯度的产品，也可将浸泡液进行透析和超滤后再干燥。
用本发明方法提取牛膝糖肽，提取率可达牛膝重量的10～25％。
用本发明方法获得的牛膝糖肽提取物，其外观为白色至类白色。使用美国HP公司的HP3DCE仪，用50μm直径、有效柱长40cm的泡状毛细管柱，在操作电压25kv，缓冲溶液为浓度20mM的硼酸溶液(pH8.5)，以及检测器为二级管陈列检测(DAD)条件下，其高效毛细管电泳(HPCE)图谱如(
图1)。图1表明用本发明方法获得的提取物所含有的牛膝糖肽是不同分子量的糖肽混合物，而不是单糖混合物或多糖混合物或蛋白质混合物。
采用高效液相色谱(HPLC)，固定相为右旋糖酐凝胶柱，示差析光器检测，流动相为0.02mol/LNaAC溶液，流速为0.02ml/min，测得平均分子量在2500范围(图2)。
通过HPCE电化学检测器检测，药物中所含牛膝糖肽的糖链，是由葡萄糖、甘露糖和果糖等单糖组成的聚糖，约占糖肽重量的8.8～9.5，多肽由天门冬氨酸、谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸等氨基酸组成，约占糖肽重量的1.2～0.5。
用本发明方法获得的药物，经药效学动物试验，证明能有效地拮抗化学药品而引起的白细胞下降作用(见表1)。能明显防护和促恢复因辐射引起的造血功能的损伤(见表2)。用本发明方法获得的牛膝糖肽，经毒性试验，小鼠注射本药物的MTD大于20克/公斤，给杂种犬以每日4克/kg剂量连续服用90天，均未见明显的药物性毒性反应。
经临床试验，证明本品可明显保护化疗和放疗后外周血白细胞的下降(见表3)；对中性及淋巴细胞也有明显的改善(见表4)；对肝功能有保护作用(见表5)。经对于处于辐射条件下的161人试验表明，本品可改善受试人员的生活质量，使其体力充沛、发病率降低、疲劳降低、食欲和睡眠得到改善。因此本发明的牛膝糖肽制剂不仅可作白细胞下降症和肝病的治疗药、抗肿瘤的辅助药物，也可开发成保健品，用于改善生活质量，提高体能，降低疲劳，改善食欲和睡眠。
表1 牛膝糖肽对化疗模型小鼠的升白作用(X‾±S)]]>组别 剂量 WBC 粒细胞 淋巴细胞(g／g) (109/L)大剂量组 2 4.7±1.6*0.327±0.0500.673±0.050中剂量组 1 4.4±1.0** 0.288±0.0260.712±0.026小剂量组 0.53.6±1.0 0.341±0.0510.659±0.051阳性对照组0.625 3.5±1.1 0.354±0.0560.646±0.054模型对照组 - 3.1±1.0 0.352±0.1060.684±0.106空白对照组 - 15.6±7.0** 0.235±0.050** 0.765±0.050*与模型对照组比*P＜0.05**P＜0.01表2 牛膝糖肽对幅射小鼠白细胞计数的影响(X‾±S)]]>组别 剂量 白细胞(109/L)(g/Kg)D4 D8大剂量组0.832.97±0.882.59±0.76中剂量组0.423.02±1.352.48±0.83小剂量组0.212.69±1.092.47±0.86阳性对照组 0.252.77±0.702.58±0.97模型对照组 - 2.22±1.032.54±0.64空白对照组 - 12.06±2.80** 13.67±3.59**与模型对照组相比 **P＜0.01表3 化疗前后白细胞总数的变化牛膝糖肽(n=187) 安慰剂(n=81)绝对值 相对于 绝对值 相对于化疗前％+ 化疗前％+化疗前6.123±2.440 100％ 6.481±2.108100％化疗后1周 5.311±2.760 90.1±41.7 5.616±2.512 92.8±43.12 4.421±3.010 78.5±56.9 4.159±1.760 69.1±31.73 4.466±2.641 79.3±52.7*4.075±1.831 66.9±34.5
4 5.181±2.675 89.3±43.3** 4.671±1.863 74.6±27.45 5.554±2.531 101.7±44.65.835±2.856 93.1±37.5+以化疗前为100％计算的相对值，+与对照组比较*P＜0.05**P＜0.01表4 化疗前后中性粒细胞数的变化牛膝糖肽(n=187) 安慰剂(n=81)化疗前100％100％化疗后1周 92.56±55.25 94.97±53.13278.95±67.82 69.77±37.93378.44±62.83*65.45±39.01487.97±50.04** 73.32±33.095104.32±48.5396.46±45.56与安慰剂组比较*P＜0.05 **P＜0.01表5化 疗前后淋巴细胞数的变化牛膝糖肽(n=187) 安慰剂(n=81)化疗前100％100％化疗后1周 95.65±84.55 89.47±35.23285.74±39.69 79.80±35.82395.78±52.59 86.52±31.274111.14±70.94** 88.67±39.855114.81±72.0699.01±57.22与安慰剂组比较 **P＜0.01本发明公开的牛膝糖肽口服制剂安全、升白作用显著，服用方便；所公开的制备方法因不采用任何易燃有毒的有机溶剂而使操作简便、安全、无污染，适宜于大规模生产；并由于改变了传统的糖肽冷冻干燥方法，成功使用喷雾干燥而使成本大大降低。
实施例1、牛膝糖肽提取物制备切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用硅酸钙7公斤拌和，第一次加水250公斤，水温30℃，搅拌浸泡9小时后，出浸泡液。第二次加水150公斤，水温25℃，搅拌浸泡5小时后，出浸泡液。第三次加水150公斤，水温25℃，搅拌浸泡3小时后，出浸泡液。三次浸泡液合并后过滤去除残渣、离心去除不溶物，减压浓缩干燥得干粉12.5公斤，含牛膝糖肽66％。
实施例2、牛膝糖肽提取物制备切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用碳酸钙2.5公斤拌和，加水700公斤，水温3℃，搅拌浸泡36小时，过滤、离心，离心液用流动水透析15小时后，进行超滤，对超滤液进行喷雾干燥，得含牛膝糖肽粉末5公斤，纯度95％。
实施例3、牛膝糖肽提取物制备切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用磷酸钙2公斤拌和，第一次加水350公斤，水温10℃，搅拌浸泡9小时，出浸泡液。第二次加水250公斤，水温10℃，搅拌浸泡8小时后，出浸泡液。二次浸泡液合并后，过滤去残渣、离心去不溶物，离心液用流动水透析，透析后超滤，对超滤液进行喷雾干燥，得干粉10公斤，纯度约95％。
实施例4、牛膝糖肽胶囊剂制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g直接灌装于胶囊中，即得制得牛膝糖肽胶囊剂。
实施例5、牛膝糖肽颗粒剂制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，淀粉20g，乳糖15g，硬脂酸镁2g，过筛，混匀，制粒干燥，按所需剂量分装，即制得牛膝糖肽颗粒剂。
实施例6、牛膝糖肽片剂制备将实施例5制得的颗粒压片，即制得牛膝糖肽片剂。
实施例7、牛膝糖肽口服液制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，糖粉30g，蜂蜜10g，加蒸馏水至1000ml，溶解，过滤，灭菌，灌装，即制得口服液。第三次加水150公斤，水温25℃，搅拌浸泡3小时后，出浸泡液。三次浸泡液合并后过滤去除残渣、离心去除不溶物，减压浓缩干燥得干粉12.5公斤，含牛膝糖肽66％。
实施例2、牛膝糖肽提取物制备切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用碳酸钙2.5公斤拌和，加水700公斤，水温3℃，搅拌浸泡36小时，过滤、离心，离心液用流动水透析15小时后，进行超滤，对超滤液进行喷雾干燥，得含牛膝糖肽粉末5公斤，纯度95％。
实施例3、牛膝糖肽提取物制备切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用磷酸钙2公斤拌和，第一次加水350公斤，水温10℃，搅拌浸泡9小时，出浸泡液。第二次加水250公斤，水温10℃，搅拌浸泡8小时后，出浸泡液。二次浸泡液合并后，过滤去残渣、离心去不溶物，离心液用流动水透析，透析后超滤，对超滤液进行喷雾干燥，得干粉10公斤，纯度约95％。
实施例4、牛膝糖肽胶囊剂制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g直接灌装于胶囊中，即得制得牛膝糖肽胶囊剂。
实施例5、牛膝糖肽颗粒剂制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，淀粉20g，乳糖15g，硬脂酸镁2g，过筛，混匀，制粒干燥，按所需剂量分装，即制得牛膝糖肽颗粒剂。
实施例6、牛膝糖肽片剂制备将实施例5制得的颗粒压片，即制得牛膝糖肽片剂。
实施例7、牛膝糖肽口服液制备取实施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，糖粉30g，蜂蜜10g，加蒸馏水至1000ml，溶解，过滤，灭菌，灌装，即制得口服液。
权利要求
1.一种牛膝糖肽制剂，其特征在于该制剂是由0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％药用辅料组成的医学上可接受的口服制剂；其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95％，分子量为2000～3000；牛膝糖肽中糖∶肽=8.8～9.5∶1.2～0.5。
2.一种如权利要求1所述的牛膝糖肽制剂，其特征在于其中所述的牛膝糖肽中的糖链是由葡萄糖、甘露糖和果糖等单糖组成的聚糖。
3.一种如权利要求1所述的牛膝糖肽制剂，其特征在于其中所述的牛膝糖肽中的肽链是由天门冬氨酸、谷氨酸、缬氨酸和异亮氨酸组成的。
4.一种如权利要求1所述的牛膝糖肽制剂的制备方法，其特征在于该制剂是通过下列步骤制得(1)牛膝糖肽提取物的制备取1份中药牛膝切碎与0.003～0.2份碱式盐拌和予处理，用3～14份1～32℃水搅拌浸泡1～4次，每次浸泡3～36小时，合并浸泡液，过滤，滤液离心、干燥后即得含牛膝糖肽65～95％的牛膝糖肽提取物；(2)牛膝糖肽口服制剂的制备取处方量0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％药用辅料相混合，分别按常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂和口服液。
5.一种如权利要求1所述的牛膝糖肽制剂的制备方法，其特征在于其中所述的碱式盐为不溶于水或微溶于水的碱性盐。
全文摘要
本发明涉及一种牛膝糖肽制剂及制备方法,该制剂是由0.1～100%牛膝糖肽提取物和0～99.9%药用辅料组成的医学上可接受的口服制剂。其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95%,分子量为2000～3000;牛膝糖肽中糖:肽=8.8～9.5:1.2～0.5。该制剂可用于白细胞下降症的治疗和抗肿瘤的辅助治疗。本发明还公开了牛膝糖肽口服制剂的制备方法,该方法不采用任何易燃有毒的有机溶剂而使操作简便、安全、无污染,大大降低了成本,适宜于大规模生产。
文档编号A61P1/16GK1287008SQ00119518
公开日2001年3月14日 申请日期2000年7月27日 优先权日2000年7月27日
发明者高佐群, 陶艳艳 申请人:上海隆海科技实业公司