专利名称：艾塞那肽冻干制剂制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域。
技术背景生物大分子药物包括多肽、蛋白质、抗体等，目前主要用于治疗肿瘤、艾滋 病、心脑血管病、糖尿病等重大疾病，是21世纪药物研究开发中最有前景的领域之一。Exendin-4是由美国西南部的希拉毒蜥唾液腺中分泌的一种多肽，能激活处 于休眠状态的消化系统，刺激胰腺分泌胰岛素，使食物得到消化吸收。它还能抑 制能够使血糖升高的胰高糖素的释放，从而达到降糖效果。艾塞那肽(Exenatide) 是含39个氨基酸的多肽，是Exendin-4的人工合成品。艾塞那肽与人的胰高血糖 素(glucagon)有48%的同源性，与人的GLP-1(胰高血糖素样肽一1)有53X的同 源性。GLP-1是一种由肠胃分泌的肠促胰高血糖素激素，当人们摄取食物之后， 胃肠道就会分泌出GLP-l进而刺激胰岛p细胞分泌胰岛素。艾塞那肽可以和胰岛卩 细胞上的GLP-1受体作用，并且其结合力是GLP-l的2.5倍(Kdi.l36nM)。有文献 报道其在降低血糖作用效应方面是GLP-1的5530倍，而且其降糖作用的持续时间 也要比GLP-1更长。美国Amylin公司和礼来公司共同开发的糖尿病药物艾塞那肽 (商品名Byetta，化学名Exenatide)于2005年4月28日获得美国食品和药品管理局 批准上市。生物大分子药物对反应物的选择性及药效作用具有其他药物无法比拟的高 效性，但生物大分子药物结构复杂，容易发生结构变化，造成活性降低、免疫原 性增强。并且，生物大分子药物存在多晶型、多构象、多尺度和聚集态复杂性等问题，限制了其生物活性稳定性及其使用效率。有资料显示，艾塞那肽存在分子间相互作用，动态光谱数据证实艾塞那肽存 在单体和聚集体之间的平衡。蛋白质或多肽的聚集，特别是高聚体的产生将导致 分子量增大，易出现沉淀，而活性单体形式相应减少。pH值及温度的变化、溶 剂的更换，均会导致聚集体的产生及数量的变化。分子排阻色谱法(Sizs-Exclusion chromatogrphy， SEC)研究结果表明，艾塞那肽水溶液中含有5%-25%的四聚体， 另外其Byetta液体制剂有在制备、储藏和使用过程中水解的现象，运输不方便、 放置和贮藏稳定性不好。发明内容本发明目的在于提供一种艾塞那肽冻干制剂制备方法，以解决艾塞那肽高聚 体的产生导致分子量增大、易出现沉淀、而使活性单体形式相应减少，和在制备、 储藏和使用过程中的水解、放置和贮藏稳定性不好的问题。本发明采取的技术方案是用注射用水将处方量的艾塞那肽和辅料溶解，除菌除热源处理，将该溶液加热至25-55。C，保持10-60分钟，自然冷却至室温后按照冻干工艺进行冷冻干燥。 本发明一种实施方案是，冻干前的加热步骤中，加热温度为40-45°C，加热 时间为25-30分钟。本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂中的艾塞那肽90%以上为单体形 式，无高聚体(n》4)形式。本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂中的艾塞那肽98%以上为单体形 式，无高聚体(n》4)形式。本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂包含主药艾塞那肽及辅料，辅料 包括冻干支撑剂、渗透压调节剂、pH调节剂和抑菌剂等。本发明一种实施方案是，冻干支撑剂包括1.0%-10%的甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和多元醇及其组合物。 本发明一种实施方案是，冻干支撑剂为1.0%-5%的甘露醇和蔗糖。 本发明的优点在于处方中加入适宜的冻干保护剂，冻干前先将艾塞那肽及辅料水溶液进行加热处理，冻干后能够保留艾塞那肽的原有生物活性，且活性单体形式可达98%以上，无四聚体及更大的聚集体。其冻干粉剂白色细腻、疏松不塌陷粘连，稳定性好，易水化。与液体制剂相比，运输方便安全，放置和贮藏稳定性更好，能够有效降低多肽药物的水解。
图1是实施例中冻干前艾塞那肽溶液中聚集体情况； 图2是实施例中艾塞那肽冻干制剂中聚集体情况。 色谱条件① 仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪(四元泵、自动进样器、紫外检测 器)，② 色谱柱ShodexPROTEINKW-802.5 (8x300mm， 5pm)，③ 流动相水(用三氟乙酸调pH至3.0)-乙腈(95:5)为流动相，④ 流速0.8ml/min，⑤ 柱温25°C，⑥ 检测波长220nm。
具体实施方式
实施例h准确称取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1MH3PO4调pH值为4.5，活性炭吸附法除热源。称量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，过无菌滤膜， 调整艾塞那肽浓度为50pg/ml。取该溶液适量，分子排阻色谱法对溶液中艾塞那 肽聚集体情况进行测定，见图l;将溶液于40'C水浴加热30 min，冷却至室温后分装于无菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照冻干工艺条件，在10 Pa-15 Pa真空压力下，-30匸下进行冷冻干燥， 控制水分含量《3%，充氮，压塞，轧盖，得艾塞那肽冻干制剂。取艾塞那肽冻干 制剂1瓶，用0.5 ml注射用水溶解，分子排阻色谱法对冻干制剂中艾塞那肽聚集 体情况进行测定，见图2。按上述方法制备的艾塞那肽冻干制剂为白色饼状或粉末状、质地细腻、疏松 不塌陷粘连，稳定性好，易水化。分子排阻色谱测定结果表明冻干前艾塞那肽溶 液中单体形式占约74% (保留时间16.181 min)，四聚体占21% (保留时间9.728 min);本方法制备的艾塞那肽冻干制剂中活性单体形式可保持在98%以上(保 留时间16.064min),无四聚体。实施例2:准确称取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1MH3PO4调pH值为 4.5，活性炭吸附法除热源。称量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，过无菌滤膜， 调整艾塞那肽浓度为50 pg/ml;将溶液于25'C水浴加热60min，冷却至室温后分装于无菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照冻干工艺条件，在10Pa-15Pa真空压力下，-45°0下进行冷冻干燥， 控制水分含量《3%,充氮，压塞，轧盖，得艾塞那肽冻干制剂。实施例3:准确称取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04调pH值为 4.5，活性炭吸附法除热源。称量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，过无菌滤膜， 调整艾塞那肽浓度为50 pg/ml;将溶液于42r:水浴加热27min，冷却至室温后分装于无菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照冻干工艺条件，在10Pa-15Pa真空压力下，-3(TC下进行冷冻干燥， 控制水分含量《3%，充氮，压塞，轧盖，得艾塞那肽冻千制剂。实施例4:准确称取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04调pH值为 4.5，活性炭吸附法除热源。称量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，过无菌滤膜， 调整艾塞那肽浓度为50 pg/ml;将溶液于45。C水浴加热30min，冷却至室温后分装于无菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照冻干工艺条件，在10Pa-15Pa真空压力下，-25卩下进行冷冻干燥， 控制水分含量《3%，充氮，压塞，轧盖，得艾塞那肽冻干制剂。实施例5:准确称取5g甘露醇，溶于500ml注射用水中，用0.1 MH3P04调pH值为 4.5，活性炭吸附法除热源。称量艾塞那肽粉末溶于上述溶液中，过无菌滤膜， 调整艾塞那肽浓度为50 pg/ml;将溶液于55'C水浴加热10min，冷却至室温后分装于无菌西林瓶中，0.5 m1/ 瓶。按照冻千工艺条件，在10Pa-15Pa真空压力下，-35'C下进行冷冻干燥， 控制水分含量《3%，充氮，压塞，轧盖，得艾塞那肽冻干制剂。
权利要求
1. 一种艾塞那肽冻干制剂制备方法，用注射用水将处方量的艾塞那肽和辅料溶解，除菌除热源处理，其特征是将该溶液加热至25-55℃，保持10-60分钟，自然冷却至室温后按照冻干工艺进行冷冻干燥。
2、 根据权利要求1所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是冻干前 的加热步骤中，加热温度为40-45"C，加热时间为25-30分钟。
3、 根据权利要求1所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是艾塞那 肽冻干制剂中的艾塞那肽90%以上为单体形式，无高聚体(n》4)形式。
4 、根据权利要求3所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是艾塞那 肽冻干制剂中的艾塞那肽98%以上为单体形式，无高聚体(n^4)形式。
5 、根据权利要求l所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是艾塞那 肽冻干制剂包含主药艾塞那肽及辅料，辅料包括冻干支撑剂、渗透压调节剂、pH 调节剂和抑菌剂等。
6、 根据权利要求5所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是冻干支 撑剂包括1.0%-10%的甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇和多元醇及其组合物。
7、 根据权利要求6所述的艾塞那肽冻干制剂制备方法，其特征是冻干支 撑剂为1.0%-5%的甘露醇和蔗糖。
全文摘要
本发明涉及一种艾塞那肽冻干制剂及其制备方法，属于医药技术领域。主要解决艾塞那肽原料及现有制剂中除单体外还含有一定比例多聚体的问题。其方案是用注射用水将处方量的艾塞那肽和辅料溶解，除菌除热源处理，将溶液加热至40-45℃，保持25-30分钟，自然冷却至室温后按照冻干工艺进行冷冻干燥，制成艾塞那肽冻干制剂。本发明能使制剂中98％艾塞那肽以单体形式存在，从而增加了药物的稳定性和有效性。另外，本发明为冻干制剂，与液体制剂相比运输方便安全、放置和贮藏稳定性更好，能够有效降低多肽药物的水解。
文档编号A61K47/10GK101264319SQ20071005540
公开日2008年9月17日 申请日期2007年3月14日 优先权日2007年3月14日
发明者于佳一, 慧 曹, 王丽凤, 董庆光, 妍 陈 申请人:长春百克生物科技有限公司