用作生长激素促分泌剂的杂环芳族化合物的制作方法

专利名称：用作生长激素促分泌剂的杂环芳族化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及能够刺激生长激素内源性产生和/或释放的新型杂环芳族化合物，以及使用这些化合物治疗肥胖、改善骨密度(用于治疗骨质疏松症)和刺激肌肉质量与肌肉强度增加的方法。
背景技术：
垂体分泌生长激素，它刺激具有生长能力的机体组织生长，并且通过在细胞中增大蛋白质合成速率和降低碳水化合物的合成速率影响代谢过程。生长激素还能增强游离脂肪酸的活动和游离脂肪酸在提供能量方面的作用。
现有技术中已经有多篇专利/专利申请公开了可用作生长激素促分泌剂的化合物。
下列专利/专利申请公开了据称可用于促进生长激素释放的苯并稠合内酰胺化合物USP5,206,235；5,283,741；5,284,841；5,310,737；5,317,017；5,374,721；5,430,144；5,434,261；5,438,136；5,545,735；5,583,130；5,606,054；5,672,596和5,726,307；WO96-05195和WO95-16675。
下列专利/专利申请公开了可用于促进生长激素释放的不同化学型物质USP5,536716；5,578,593；5,622,973；5,652,235；5,663,171；WO94-19367；WO96-22997；WO97-24369和WO98-58948。
发明概述本发明提供了作为生长激素促分泌剂并且具有下式结构的新型杂环芳族化合物 包括其可药用盐、其前药酯以及其所有立体异构体，其中R1为烷基，芳基，链烯基，炔基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，杂芳基烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基(其中上述这些基团见下文定义)，并且这些基团可任选地被1、2或3个选自卤素、-OR8、-OC(O)R8、烷基、苯基、苯氧基、卤代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8a)C(O)(R8)、或-N(R8a)(R8a)的取代基取代；R1a为H，烷基，或环烷基；Xa为杂芳基，优选包括 A为氧，硫，-NH-，-N-R5，或-NC(O)-R2；B为-CR5b或-N-；Z为价键或-S-；G为氧或硫；U为氧，硫，-NH-，或-N-R5b；
R2为烷基，芳基，链烯基，炔基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，杂芳基，或杂芳基烷基(其中上述这些基团的定义见下文)，并且这些基团可任选地被1、2或3个选自卤素、-OR8b-OC(O)R8b、烷基、苯基、苯氧基、卤代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8c)C(O)(R8b)、或-N(R8c)(R8b)的取代基取代；R3为H，卤素，烷基，芳基，链烯基，炔基，烷芳基，烷氧基，芳氧基或J1，并且其中的烷基、芳基、链烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、或芳氧基可以任选地被1-3个J1取代；R4和R4a相同或不同，并且独立地为H，卤素，-CF3，烷基，或芳基；R5为H，烷基，芳基，链烯基，芳基链烯基，炔基，芳基烷基，芳基炔基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，-SO2T1，-SO2N(T1a)T1，或杂芳基烷基，并且其中的烷基、芳基、链烯基、芳基链烯基、炔基、芳基烷基、芳基炔基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、杂芳基、杂芳氧基烷基、环烷基烷氧基烷基、或杂芳基烷基可以任选地被1-3个J1独立取代；R5a和R5b相同或不同，并且独立地为H，烷基，芳基，链烯基，芳基链烯基，炔基，芳烷基，芳基炔基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，杂芳基烷基，或J1，并且其中的烷基、芳基、链烯基、芳基链烯基、炔基、芳烷基、芳基炔基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、杂芳基、杂芳氧基烷基、环烷基烷氧基烷基、或杂芳基烷基可以任选地被1-3个J1独立取代；Y为
其中x和y独立地为0-3，并且z为1-3；Xc为价键，-N-R6a或-O-；R7和R7a相同或不同，并且独立地为H，烷基，-CF3，苯基，芳基，芳烷基，和环烷基；或者R7和R7a中的一个或二者可独立地与(Xb中的)R9和R10基团中的一个或二者连接形成1-5个碳原子的亚烷基桥；或者R7与R7a一起连接形成3-7碳原子的环；R6，R6a，R6b，R6c，R8，R8a，R8b，R8c，R8d，R8e，R8f，R8g，R8h，R8i，R8k，R8l，和R8m相同或不同，并且独立地为H，烷基，环烷基，链烯基或芳基；R8j为H，烷基，芳基，羟基或-OC(O)R8k；Xb为 R9和R10相同或不同，并且独立选自H，烷基，和取代烷基，其中的取代基可以是1-3个羟基，1-3个C1-C10-烷酰氧基；1-3个C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基，C1-C6-烷氧基羰基；或者R9与R10可一起形成-(CH2)tXd(CH2)u-，其中Xd为C(R8h)(R8j)，-O-或-N(R6b)，t和u独立地为1-3；R11为H，C1-C6烷基，-CF3，芳基烷基，或芳基，并且所述烷基和芳基基团任选被1-3个羟基，1-3个C1-C10烷酰氧基，1-3个C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基或C1-C6烷氧基羰基取代；R12和R13独立地为H，C1-C6烷基，-CF3，芳基，或卤素，并且所述烷基和芳基基团任选被1-3个羟基，1-3个C1-C10烷酰氧基，1-3个C1-C6烷氧基，或C1-C6烷氧基羰基取代；
J1为硝基，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)C(O)OT1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2N(T1b)T1，-(CH2)vOT1，-(CH2)vSO2T1，-(CH2)vSO2N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)T1，-(CH2)vCH(OH)T1，杂环烷基，或如下定义的杂芳基，并且v为0-5；T1，T1a和T1b相同或不同，并且独立地为H，烷基，链烯基，炔基，低级烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环烷基，或环烷基，它们中的每一基团均可任选地被1、2或3个下列基团取代卤素、羟基、-NR8fC(O)NR8gR8i、-C(O)NR8fR8g、-NR8fC(O)R8g、-CN、-N(R8f)SO2R14、-OC(O)R8f、-SO2NR8fR8g、-SOR14、-SO2R14、烷氧基、-COOH、杂环烷基、或-C(O)OR14；或者T1与T1a或T1与T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe为-C(R8m)(R81)，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，-NC(O)OR14a，-NC(O)NR14aR14b，-NC(O)R14a或-N(R6c)，其中w和z各自独立地为1-3；条件是当T1与羰基或硫连接时，如在-C(O)T1或-SO2T1情形下，它不能为氢；R14，R14a，和R14b独立地为C1-C6烷基，杂芳基，或芳基，它们各自任选被-(CH2)sOH取代，其中s为0-5；条件是，当Xa为 时(1)如果R7和R7a中的一个或二者与R9和R10中的一个或二者形成亚烷基桥，那么当R5为-(CH2)C(O)N(T1a)T1时，则T1a和T1中至少一个≠H；或(2)如果R1为芳烷基，并且R1a为H和R5为-(CH2)C(O)N(T1a)T1，则T1a或T1不能为
(3)如果R1和R7各自为2-萘基-CH2-，则R5≠苯乙基。
如结构式I中的星号所示，本发明的所有化合物均含有至少一个不对称中心。而且依据分子上不同取代基的性质，分子中可能还存在有其它不对称中心。每一个这种不对称中心都将产生两个旋光异构体，因此所有这些旋光异构体如分离得到的纯净或部分纯化旋光异构体或它们的外消旋物都包括在本发明范围在内。对于式I中星号所示的不对称中心来讲，当R1a为H时，更具活性并且也因此更优选的构型是根据R/S规则确定的R构型。异构体可以用常规方法分离，例如色谱法或分级结晶。
本发明式I化合物的可药用盐包括碱金属盐如锂、钠或钾盐，碱土金属盐如钙或镁盐，以及锌或铝盐和其它阳离子(例如铵，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，叔丁胺，叔辛胺，脱氢枞胺)的盐，以及可药用阴离子的盐如磷酸盐，扁桃酸盐、氯化物，溴化物，碘化物，酒石酸盐，乙酸盐，甲磺酸盐，马来酸盐，琥珀酸盐，戊二酸盐，和天然存在的氨基酸如精氨酸、赖氨酸、丙氨酸等的盐，以及它们的前药酯。
另外，本发明提供了一种增高内源性生长激素水平或增加生长激素内源性产生或释放的方法，其中包括施用治疗有效量的上述式I化合物。
再者，本发明还提供了一种预防或治疗治疗骨质疏松(改善骨密度和/或强度)，或治疗肥胖，或增强肌肉质量和/或肌肉强度，或维持中老年人肌肉强度与机能，或逆转或预防中老年人体虚的方法，其中包括施用治疗有效量的上述式I化合物。
发明祥述除非在特定情形下另有限制，下列定义适用于本说明书全篇使用的术语。
除另有说明外，本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“低级烷基”、“烷基”或“烷-(alk)”包括正链中含有1-40个碳原子，优选1-20个碳原子，更优选1-6个碳原子的直链和支链烃，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基，它们的各种支链异构体等以及包括1-3个取代基的这种基团，所述取代基包括烷基、芳基、链烯基、炔基、羟基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基、芳基烷氧基、烷酰氧基、氨基、卤代芳基、CF3、OCF3、芳氧基、杂芳基、环烷基烷氧基烷基、或杂环烷基。
除非另外说明，本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“环烷基”包括饱和或部分饱和(含1或2条双键)的环状烃基，它们含有1-3个环(包括单环烷基，二环烷基和三环烷基)并总计含有3-20个成环碳原子，优选4-7个成环碳原子，并且可以与如芳基部分所述的1个芳环稠合，它们包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基、环己烯基、 这些基团中的任何一个都可任选地被1-3个上面烷基中所定义的取代基取代。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“芳基”是指环部分含有6-10个碳的单环和二环芳基(如苯基或萘基)，它可任选地包含1-3个与“芳基”稠合的其它环(如芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环)，并且还可以任选地被1、2或3个选自如下的基团通过碳原子取代氢、卤素、卤代烷基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、链烯基、三氟甲基、三氟甲氧基、炔基、环烷基烷基、芴基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、芳氧基、芳氧基烷基、芳基烷氧基、芳硫基、芳基偶氮、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基杂芳基、杂芳氧基、羟基、硝基、氧代、氰基、氨基、其中的氨基包含1或2个取代基(即为烷基、芳基或定义中所述的任何其它芳基化合物)的取代氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、芳硫基烷基、烷氧基芳硫基、烷基羰基、芳基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳基亚磺酰基、芳基亚磺酰基烷基、芳基磺酰基氨基或芳基磺酰氨基羰基，或者优选上文所述的任何芳基取代基。
优选芳基包括苯基、联苯基或萘基。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“芳烷基”、“芳基-烷基”或“芳基低级烷基”是指具有芳基取代基的上述烷基，如苄基或苯乙基，或萘丙基，或如上所述的芳基。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“低级烷氧基”、“烷氧基”、“芳氧基”或“芳烷氧基”包括与氧原子连接的上述烷基、芳烷基或芳基。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“氨基”可任选地被一个或两个诸如烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基和/或环烷基之类取代基取代。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“低级烷硫基”、“烷硫基”、“芳硫基”或“芳烷硫基”包括与硫原子连接的任何上述烷基、芳烷基或芳基基团。
本文中单独或作为基团一部分使用的术语“低级烷基氨基”、“烷基氨基”、“芳基氨基”或“芳烷基氨基”包括与氮原子连接的任何上述烷基、芳基或芳烷基基团。
本文中单独使用或作为本文所述的其它基团的一部分使用的术语“酰基”是指与羰基(C＝O)连接的有机基团；酰基的实例包括链烷酰基，烯酰基，芳酰基，芳烷酰基，杂芳酰基，环烷酰基等。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“链烷酰基”包括与羰基连接的烷基。
除非另有说明，本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“低级链烯基”或“链烯基”是指正链中含2-20个碳，优选3-12个碳，且更优选2-6个碳的直链或支链基团，其正链中包含1-6条双键，如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基、3-壬烯基、4-癸烯基、3-十一碳烯基、4-十二碳烯基、4，8，12-十四碳三烯基等，并且它们可任选地被1-4个取代基取代，这些取代基即卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基、环烷基、氨基、羟基、杂芳基、杂环烷基、链烷酰基氨基、烷基酰胺基、芳基羰基氨基、硝基、氰基、巯基、烷硫基或本文所述的烷基中的任何取代基。
除非另有说明，本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“低级炔基”或“炔基”是指正链中含有2-20个碳，优选2-12个碳，且更优选2-8个碳的直链或支链基团，其正链中包含一条三键，如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基、4-癸炔基、3-十一碳炔基、4-十二碳炔基等，并且它们可任选地被1-4个下述取代基取代，即卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基、环烷基、氨基、杂芳基、杂环烷基、羟基、链烷酰基氨基、烷基酰胺基、芳基羰基氨基、硝基、氰基、巯基、和/或烷硫基，或本文所述的烷基中的任何取代基。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“亚烷基”是指在两个不同碳原子上具有与其它基团连接单键的上述烷基，并且可以象上面“烷基”的定义一样任选被取代。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“亚链烯基”和“亚炔基”分别是指在两个不同碳原子上具有连接单键的上述定义链烯基和炔基。
(CH2)x、(CH2)y、(CH2)w、(CH2)v、(CH2)s、(CH2)t、(CH2)u或(CH2)z基团(它们可以包括本文所定义的亚烷基、亚链烯基或亚炔基基团，并且可任选包括1、2或3个取代基，而这些取代基可以是本文所述的任何烷基取代基)的实例如下-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CH2)4-， 或-(CH2)3-CF3.
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“卤素”或“卤代”是指氯、溴、氟和碘以及CF3，并且优选氯或氟。
术语“金属离子”是指碱金属离子(如钠、钾或锂)和碱土金属离子(如镁和钙)，以及锌和铝。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“杂环的”、“杂环-”或“杂环”是指“杂芳基”或“杂环烷基”基团。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“杂环烷基”是指包括1-2个杂原子如氮、氧和/或硫的4-、5-、6-或7-元饱和或部分饱和环，它们通过碳原子或杂原子[可能的话，任选经由连接基(CH2)p(定义如上)]进行连接。这类基团如 等等。上述基团可以包含1-4取代基，如烷基、卤素、氧代和/或本文所定义的任何芳基取代基。另外，任何上述环都可以与环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基环稠合。
本文中单独或作为其它基团一部分使用的术语“杂芳基”或“杂环状芳基”是指包括1、2、3或4个杂原子如氮、氧或硫的5-或6-元芳香环，以及与芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合的这些环(如苯并噻吩基、吲哚基)，并且包括可能的N-氧化物，如 等等。
杂芳基可任选包含1-4个取代基，如本文所定义的任何芳基取代基。此外，任何上述环都可以与环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基环稠合。
术语式I化合物的“前药酯”包括羟基化物和酚的酯，如本领域所知的乙酸酯、苯甲酸酯、新戊酸酯、硬脂酸酯、异丁酸酯等。一般合成流程本发明化合物可以按照下文的一般合成流程以及本领域技术人员使用的相关文献公开方法制备。用于这些反应的典型试剂与方法记载在下文及制备实施例中。除另有说明外，化合物的各种取代基的定义均同本发明式I化合物。
在下列反应中，成酰胺键(肽偶联)反应用本领域已知的标准肽偶联方法进行。反应最宜在溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中于0℃-室温下利用下列物质进行1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳二亚胺(EDAC)或(WSC)，1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)和碱，例如4-二甲氨基吡啶(DMAP)或Hunig碱。
非天然被护氨基酸可以从市场上购得或者按照本领域已知的标准方法制备。手性制备方法包括Meyers，A.G.等人方法[J.Am.Chem.Soc.，119，656-673(1997)]。O-烷基化丝氨酸衍生物可以按照Mal igres，P.E.等人方法[Tetrahedron，53，10983-10992(1997)]由丝氨酸制备。
流程1，1a，和1b中形成苯并咪唑类或苯并噁唑类的环化反应可以在本领域已知的标准条件下进行。合适的环化方法记载于Nestor，Jr.，J.J.，J.Med.Chem.，27，320-5(1984)，并且最好在酸性溶剂如乙酸中加热(60-90℃)进行。苯并噻唑类可以按照Spitulnik，M.J.所述[Synthesis，730(1976)]以及本领域已知的其它方法制备。
下述流程中的保护和脱保护反应可以按照本领域公知的方法完成。例如，参见T.W.Greene，《有机合成中的保护基》，第2版，1991。下列流程中的PG表示氮保护基，最优选BOC。BOC基团以在酸性条件下除去，最宜使用HCl或三氟乙酸。
流程1c和1d中硝基的还原可以按照本领域已知的方法进行。最优选还原反应在催化剂(钯或铂)存在下采用H2进行。
流程2中包含的芳基化反应可以在文献已知的Suzuki偶联条件，或本领域已知的使用金属锌或锡的其它条件下进行。如果Rx为氯，则偶联可按下列文献所述利用镍催化剂来进行Indolese，A.F.，Tet.Lett.，38，3513-3516(1997)或Shen，W.Tet.Lett.，38，5575-5578(1997)。
流程3中的四唑形成反应可以在本领域已知的标准条件下进行。合适的方法记载于Duncia等，J.Org.Chem.，56，2395(1991)。
流程4中的三唑形成反应可以在本领域已知的标准条件下进行。合适的方法记载于Sung，K等，Heterocyc.Chem.，29，1101(1992)，Shukla，J.S.等，Indian J Chem.，30B，332(1991)，和Wilson，M.W.等，Molecular Diversity，3，95(1998)。
其它杂环化物的制备可采用本领域技术人员已知的方法以及A.Karitzky，Comprehensive Heterocyclic Chemistry，Vol.1和Vol.2，Elseveir中记载的方法。噁唑化物可以按照Hamada，Y.等，Tet.Lett.，23，235-6(1982)中记载的方法制备。噁唑化物的制备还可以见Zhang，X.等，J.Heterocyclic Chem.，34，1061-4(1997)，以及其中所引用的文献。噻唑化物可以按照下列文献方法制备Bredenkamp，M.W.等，Synth.Commun.，2235-2249(1990)或Aguilar，E.，Tet.Lett.，2473-2476(1994)。噁二唑的制备可参见Borg，S.等，J.Org.Chem.，60，3112-3120(1995)。
醇69转化成叠氮基70以及75转化成76的反应(流程5和5a)可以按照本领域公知的方法进行。Thompson，A.S.等[J.Org.Chem.，58，886(1993)]描述的一釜法是最优选的转化方法。
如流程5和5a所示制备咪唑类化物的方法可按照下列文献中给出的方法进行Chadwick，D.J.等，J.Chem.Soc.Perkin Trans，I，481(1984)和Iddon，B.，Heterocyclies，23，117(1985)。
流程6所示的四唑形成反应可以在固相树脂上进行。
下文流程与实施例中的固体球用于表示固相树脂，例如 所述树脂可以是Merrifield型树脂。
中间体28和42可进一步如先前流程3所述进行转化。另一方面，可以用与树脂(如Merrifield或Rink树脂)键连的酸处理中间体28和42，产生树脂键合酰胺，后者可裂解形成化合物VI和IX。流程6中所示的氨基甲酸酯树脂连接基仅仅是一种可能的候选基团(Hernandez，A.等，J.Org.Chem.，62，3153(1997))。除了I6之外，在全部流程中的化合物在现有技术中的已知方法，如还原性胺化或烷基化，与端基-NH-R部分可转变为式 的化合物。
流程1 X＝O，SH，NH2Ya＝O，S，NHPG＝保护基流程1a
流程1b
流程1c Ya＝O，S，NHZ＝-CO，-SO2
流程1d
流程1e
流程2
流程3四唑
流程3a四唑
流程3b
流程3c
流程3d
流程3e 流程3f
流程3g 流程3h
流程4三唑化物 45可以是任何天然或非天然α-氨基酸
流程4a 流程4b
流程4c
流程4d
流程5咪唑化物 R5b1和R5b2独意为烷基或芳基流程5a
流程6 另一方法是，当R5为-CH2(CH2)nCO2Rx时 在本文所述的一般合成流程中，各步使用的条件都是常规条件，且能够进行各种变化。而且它们仅用于说明目的，不得认作是对本发明范围的限制。
最终得到的化合物易可以很容易地通过重结晶、硅胶色谱、或反相制备HPLC纯化。就使用反相制备HPLC进行的纯化而言，其中使用溶剂A(10％ MeOH/90％H2O/0.2％TFA)与溶剂B(90％MeOH/10％H2O/0.2％TFA)的混合物。
优选的本发明式I化合物包括下列其中Xa具有所示结构的化合物 优选这些具有结构I的本发明化合物，其中R1为芳基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，杂环烷基烷基，杂芳基烷基，例如 R1a为H或烷基；并且(1)Xa为 其中R5为烷基，链烯基或杂芳氧基烷基，它们各自被J1取代，并且J1为-(CH2)vOC(O)N(T1a)(T1)，-(CH2)vCN，或杂芳基；或者(2)Xa为 其中A为NH，R4和R4a都为H且R3为J1；或者(3)Xa为 其中B为-N-；Z为价键或-S-；R5a为H，或各自被1-3个J1取代的烷基或芳烷基；R5为任选被J1取代的烷基；R6为H；Y为 其中x和y都为0，Xc为价键，且R7和R7a独Xb为 R8j为羟基或-OC(O)R8k，其中R8k为烷基或芳基；R9和R10独立地为H和取代烷基，其中的取代基可以是1个或2个羟基；J1为-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，或杂芳基，且v为0-4；T1，T1a和T1b独立地为烷基，低级烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳烷基，杂芳基烷基，杂环烷基，或环烷基，它们各自任选被-OC(O)R8f、-C(O)NR8R8a、-(CH2)sOH(s为0-2)、-SO2NR8R8a、-SO2R14、或烷氧基取代；或者T1与T1a或T1与T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe为C(R8m)(R81)；R14为任选被-(CH2)vOH(其中v为0-2)取代的C1-C6烷基；
优选的本发明化合物包括下列化合物 更优选的本发明化合物包括下列化合物 释放生长激素的式I化合物可以给药于包括人在内的动物，以便在体内释放生长激素。例如，化合物可以给药于具有重要商业价值的动物如猪、牛、羊等，以促进和增加它们的生长速率与生长程度，和增加这些动物的奶产量。
本发明在其范围内还包括药物组合物，它包括作为活性成分的至少一种式I化合物以及可药用的载体或稀释剂。除了至少一种式I化合物外，药物组合物的活性成分还任选包括生长促进剂或表现出不同活性的其它组分，例如抗生素或其它药物活性物质。
生长促进剂包括但不限于TRH，己烯雌酚，茶碱，脑啡肽，E系列前列腺素，USP3,239,345中公开的化合物(如右环十四酮酚)，以及USP4,036,979中公开的化合物(例如氧苯噻脲)或USP4,411,890中公开的肽类。
本发明公开的式I化合物的再进一步用途是与其它生长激素促分泌剂如USP4,411,890中记载的GHRP-6，GHRP-1；以及WO89/07710和WO89/07111中的公开物和B-HT920，或生长激素释放因子及其类似物或生长激素及其类似物或包括IGF-1与IGF-2在内的生长肽激素结合使用。本发明公开的式I化合物的更进一步用途是与甲状旁腺激素或双膦酸酯如MK-217(alendronate)联合用于骨质疏松的治疗。
本发明公开的式I化合物的更进一步用途是与雌激素、睾酮、选择性雌激素受体调节剂(如三苯氧胺或雷洛昔芬)、或选择性雄激素受体调节剂[如下列文献中记载的这种调节剂Edwards，J.P.等，Bio Med.Chem.Let.，9，1003-1008(1999)和Hamann，L.G.等，J.Med.Chem.，42，210-212(1999)]联合用于治疗MetabolicSyndrome方面病症，维持中老年人的肌肉强度与肌肉功能，逆转或预防中老年人体虚，刺激并增强肌肉质量和肌肉强度，减弱重大手术或创伤后的蛋白质分解代谢应答；减少由于慢性病如癌症或艾滋病造成的恶病质和蛋白损失；改善肌移动性，并维持皮肤厚度。
正如本领域技术人员所知，生长激素的已知与潜在用途是多种多样的。因此，为了刺激内源性生长激素释放之目的，给药本发明化合物可以具有与给药生长激素本身相同的效果或用途。生长激素的这些不同用途可以概述如下刺激中老年人的生长激素释放；维持中老年人的肌肉强度与肌肉功能，逆转或预防中老年人体虚，预防糖皮质激素的分解代谢副作用，治疗骨质疏松，刺激并增加肌肉质量与肌肉强度，刺激免疫系统，促进创伤愈合，促进骨折恢复，治疗肾衰竭或导致生长迟缓的肾机能不全，治疗生理性身材矮小，包括生长激素缺乏的儿童，治疗与慢性病有关的身材矮小，治疗肥胖症和与肥胖症有关的生长迟缓，治疗与Prader-Willis综合症和Turner综合症有关的生长迟缓；促进烧伤患者恢复并缩短它们的住院治疗时间；治疗子宫内生长迟缓、骨骼发育不良、肾上腺皮质机能亢进和Cushings综合症；诱导搏动性生长激素释放；置换紧张状态病人(stressedpatients)体内生长激素；治疗骨软骨发育不良、Noonans综合症、精神分裂症、抑郁症、Alzheimer病、创伤愈合延期、和精神社会性剥夺；治疗肺机能不良和呼吸器依赖性；减弱重大手术或创伤后的蛋白质分解代谢应答；减少由于慢性病如癌症或艾滋病造成的恶病质和蛋白损失；治疗包括胰岛细胞增殖症在内的血胰岛素增多症，辅助治疗排卵性诱导；刺激胸腺发育和预防胸腺功能的年龄相关性衰退；治疗免疫抑制患者；改善肌肉移动性，维持皮肤厚度、代谢内环境稳定，体弱中老年患者的肾脏内环境稳定；刺激成骨细胞，骨再造型，和软骨生长；刺激配对动物的免疫系统和治疗配对动物的老化病症；促进牲畜生长；和刺激羊毛生长。
另外，如Johannsson J.Clin.Endocrinol，Meatb.，82，727-34(1997)中祥述的统称为“Syndrome X”或Metabolic Syndrome的症状、病症和疾病也可以使用本发明化合物治疗。
本发明化合物是生长激素促分泌剂，可以给药于需要这种治疗的各种哺乳动物，例如猴、狗、猫、鼠、人等。这些药剂可以全身性给药，例如口服或非肠道给药。
本发明化合物可以掺入到常规的全身性给药剂型中，例如片剂、胶囊剂、酏剂或注射剂。上述剂型还包括必需的生理上可接受的载体物质、赋形剂、润滑剂、缓冲剂、抗菌剂、填充剂(如甘露醇)，抗氧化剂(抗坏血酸或亚硫酸氢钠)等。优选口服剂型，但非肠道、鼻内给药剂型或气雾剂也相当令人满意。
给药剂量必须根据患者的年龄、体重和健康状况以及给药途径、剂型与给药方案以及所期望的结果小心调整。一般来讲，上述各种剂型的给药量为每千克体重约0.0001-约100mg，或者为每天约1-约1000mg，优选约5-约500mg，单剂量或以每天1-4次的分剂量形式给药。
下列实施例表示本发明的优选实施方案。除非另有说明，所有的温度均以℃为单位。实验概述术语HPLCa是指使用0-100％溶剂B[MeOH∶H2O∶0.2％H3PO4]4分钟梯度洗脱的Shimadzu高效液相色谱(HPLC)，保留1分钟，紫外线(UV)检测器设定在220nM，并使用填充有YMC C185微米树脂的柱(4.6×50mm)。术语HPLCb是指用0-100％溶剂B[MeOH∶H2O∶0.1％TFA]4分钟梯度洗脱的Shimadzu HPLC，保留1分钟，紫外线(UV)检测器设定在220 nM，并使用填充有YMC C185微米树脂的柱(4.6×50mm)。溶剂A(10％MeOH/90％H2O/O.2％TFA)与溶剂B(90％MeOH/10％H2O/0.2％TFA)的混合物用于自动化Shimadzu系统中的制备反相HPLC。制备柱用YMC ODS C185微米树脂填充。
实施例1 氮气氛下，向含羧酸 (5.0g，16.9 mmol，Sigma)、二苯胺 (2.3g，15mol，Aldrich)和1-羟基氮杂苯并三唑(HOAt)(2.5g，18mmol)的DMF(48mL)0℃溶液内顺序加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC或EDCI)(3.25g，17 mmol)和二异丙基乙胺(2.95ml，17mmol)。缓慢温热反应混合物至室温过夜。18小时后，加乙酸乙酯稀释反应物。有机层用碳酸氢钠稀水溶液、水、盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空浓缩，从而得到混有原料二苯胺的 系红色油状物(5.47g)(这里称作粗制化合物)。上述粗制化合物无需进一步纯化便直接用于后续反应。HPLCb rt＝3.19min.
取部分上述粗制化合物(1.25g，≤2.9mmol)溶于乙酸(45mL)，在69℃下加热4.5小时。室温搅拌过夜后，真空除去挥发物，得到红色油状形式标题化合物粗品，它无需进一步纯化而可以直接使用。或者，将此红色油状物溶于乙酸乙酯，用1N盐酸、水、盐水提取三遍有机层，并用硫酸钠干燥，然后真空浓缩，从而得到纯净标题化合物(0.92g)，系深色油状泡沫物。HPLCa rt＝3.99min. 用氯化氢/二噁烷溶液(6ml，4N)处理A部分化合物粗品(≤450mg，≤1.04mmol)，45分钟后有棕色固体物从溶液中析出。2小时后真空蒸发挥发物得到深色固体。将此残留物用热乙酸乙酯研制三遍，得到棕色固体不纯(粗制)化合物(338mg) 该粗制化合物无需进一步纯化直接用于下步反应。HPLCa rt＝2.93min.
氮气氛下，向含Boc-甲基丙氨酸羧酸(256mg，1.26mmol，Aldrich)和上述粗制化合物(338mg，≤0.97mmol)以及HOAt(207mg，1.52mmol)的DMF(5ml)0℃溶液内顺序加入EDAC(245mg，1.28mmol)和二异丙基乙胺(0.39ml，2.25mmol)。缓慢温热反应混合物至室温。18小时后加乙酸乙酯稀释反应物。有机层用碳酸氢钠稀水溶液、1N盐酸、水、盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空浓缩，从而得到深色油状物(564mg)。将该残留物粗品与另一相同反应得到的产物(0.10mmol)混合，通过快速色谱(SiO2，40g)纯化，以3.5％甲醇/二氯甲烷洗脱，由此得到橙色油状物(305mg).HPLCb rt＝4.20min；LC/MS(电雾化，+离子)m/z498(M+H). 将B部分化合物(100mg，0.2mmol)在含有10％钯-碳(15mg)的甲醇(2ml)中的溶液用氢气驱气，然后在氢气氛中(气囊)搅拌2小时。通过Nylon玻璃料过滤反应混合物，用甲醇充分洗涤，然后蒸发溶剂得到胺化合物 为橙色泡沫物(82mg，88％粗回收率)，～80％纯度[根据HPLCa rt＝3.0min]。该胺产物无需进一步纯化直接用于下步反应。LC/MS(电雾化，+离子)m/z 468(M+H).
氮气氛下，向上述胺粗品(82mg，0.18mmol)和三乙胺(35μl，0.25mmol)在二氯甲烷(18ml)中的溶液内加入甲磺酰氯(18μl，0.23mmol)。2小时后，加乙酸乙酯稀释反应物，并将有机层用水、盐水提取，硫酸钠干燥然后浓缩。残留物粗品进而通过快速色谱(SiO2，10g)纯化，以5.25％甲醇/二氯甲烷洗脱，从而得到橙色固体标题化合物(30.7mg).HPLCa rt＝3.37min. 向纯粹C部分化合物(31mg，56.8μmol)中加入氯化氢(0.8ml，4N二噁烷溶液)，搅拌所得混合物2.5小时。真空除去挥发物，并与二氯甲烷一起共蒸发两次，得到褐色固体。将此残留物粗品与另一相同反应得到的产物(39.8μmol)合并，通过溶于9％甲醇/二氯甲烷(含有氢氧化铵)进行中和。所得悬浮物进而通过快速色谱(SiO2，5g)纯化，以9％甲醇/二氯甲烷(含0.9％氢氧化铵)洗脱，得到玻璃状固体(35mg)。将此残留物溶于甲醇(2.5ml)，用三氟乙酸(4.5μ)处理。15分钟后，真空除去挥发物，得到褐色固体标题化合物(43mg)。HLPCbrt＝2.43min.MS(电雾化，+离子)m/z 446(M+H).
实施例2 在-18℃冷却下，向N-Boc-O-苄基丝氨酸(2.91g，9.84mmol，Sigma)的THF(14.0mL)溶液内加入N-甲基吗啉(1.08mL，9.83mmol)和氯甲酸异丁酯(1.27mL，9.80mmol)。混合物在-18℃下搅拌0.5小时后，加入3-氨基丙腈(0.73mL，9.89mmol)和N-甲基吗啉(1.08mL，9.83mmol)在THF(6.0mL)中的-14℃溶液，在5.25小时内温热所得混合物至-6℃。然后过滤混合物，蒸发溶液至近干。进而将残留物吸收于EtOAc(70mL)，用5％NaHCO3(2×60mL)、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机溶液，蒸发并层析纯化(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，获得标题化合物(3.33g，97％产率)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 348(M+H). 向预先在0℃下冷却的含A部分化合物(3.33g，9.60mmol)、三苯膦(2.52g，9.61mmol)和二异丙基乙胺(0.42mL，2.41mmol)的THF(30mL)溶液内加入偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL，9.59mmol)和叠氮三甲基硅烷(1.27mL，9.57mmol)。室温搅拌所得混合物过夜，然后在0℃下冷却。分别加入另一份三苯膦(2.52g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL)和叠氮三甲基硅烷(1.27mL)，在室温下继续搅拌28小时。0℃冷却反应混合物，然后同硝酸铈(IV)铵水溶液(2.63g/100mL)混合。将所得含水混合物用二氯甲烷(3×150mL)提取，并干燥(硫酸钠)合并的有机相，蒸发、层析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到四唑(3.5g，混杂有1，2-二乙氧基羰基肼)和A部分化合物(1.47g，混杂有氧化三苯膦)。将不纯四唑溶于氯仿，加入乙醚沉淀出无色固体标题化合物(2.08g)MS(电雾化，+离子)m/z 373(M+H). 向B部分化合物(354mg，0.95mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液内加入4M HCl/二噁烷溶液(3.0mL)，然后放置所得溶液1.25小时。减压除去溶剂，将残留物溶于异丙醇(1.5mL)。加入盐水(25.0mL)，然后通过加1M碳酸钾调节水溶液的pH至10。所得水溶液用二氯甲烷(3×40mL)提取，合并有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发，从而得到无色油状标题胺化合物(258mg)。该产物无需进一步纯化而直接用于后续反应。1H NMRδ(CDCl3ppm)7.31(m，5H)，4.80(m，2H)，4.54(m，3H)，3.88(m，2H)，2.99(m，2H)，1.82(宽单峰，2H). 在0℃下混合N-Boc-甲基丙氨酸 (285mg，1.40mmol，Sigma)、EDAC(272mg，1.42mmol)、HOAt(190mg，1.40mmol)、1，2-二氯乙烷(1，2-DCE)(1.6mL)与DMF(250μL)，搅拌15分钟。然后通过注射器将所得混浊溶液转移到C部分胺化合物粗品(258mg，0.95mmol)在1，2-DCE(1.4mL)中的0℃溶液内，并在室温下搅拌该混合物20小时。加入EtOAc(75mL)稀释反应混合物，尔后用饱和碳酸氢钠(2×40mL)、水(40mL)和盐水(40mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并层析纯化(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到无色油状标题化合物(338.5mg) 用15％TFA(4.0mL)处理D部分化合物(181mg，0.40mol)2.2小时，然后真空蒸发，残留的TFA再与二氯甲烷一起共蒸发(5×6mL)。进而将油状残留物粗品溶于二氯甲烷/甲醇(数滴)，加乙醚沉淀出白色固体标题化合物(157mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 358(M+H).
实施例3 在0℃预冷下，向实施例2部分A化合物 (3.33g，9.60mmol)、三苯膦(2.52g，9.61mmol)和二异丙基乙胺(0.42mL，2.41mmol)在THF(30mL)中的溶液内加入偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL，9.59mmol)和叠氮三甲基硅烷(1.27mL，9.57mmol)。室温搅拌所得混合物过夜，然后再于0℃下冷却。分别加入另一当量的三苯膦(2.52g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL)和叠氮三甲基硅烷(1.27mL)，并在室温下继续搅拌28小时。然后在0℃下冷却上述反应混合物，并与硝酸铈(IV)铵水溶液(2.63g/100mL)混合。用二氯甲烷(3×150mL)提取含水混合物，干燥(硫酸钠)合并的有机相，蒸发并层析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到实施例2部分B化合物粗品(3.5g)。将含实施例2部分B化合物的不纯残留物溶于氯仿，通过加乙醚沉淀出实施例2部分B化合物(2.08g)，并浓缩滤液。然后将所得的实施例2部分B化合物含量更高的残留物再溶于THF(12mL)，加入1M NaOH和一定量THF直至实施例2部分B化合物消失为止(根据TLC监测(1/1己烷/EtOAc))。加盐水(70 mL)稀释最后得到的反应混合物，并用乙醚(60mL)和氯仿(2×50mL)洗涤。尔后通过加1M磷酸调节水层的pH至3，并用乙酸乙酯(3×60mL)提取该溶液。合并的有机相用磷酸盐缓冲液(2×40mL，pH3)和盐水(40mL)洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发，从而得到标题化合物(571mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 320(M+H).
搅拌下，向A部分化合物(115mg，0.36mmol)和碳酸铯(258mg，0.79mmol)在乙腈(1.0mL)中的悬浮液内加入苄基溴(54L，0.45mmol)，并室温搅拌混合物18小时。然后将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，进而用水(8mL)洗涤。水相用二氯甲烷反提取两次，然后干燥(硫酸钠)合并的有机相，蒸发并层析(SiO2230-400目，3/1己烷/EtOAc)，从而得到标题化合物，系N-1/N-2四唑异构体混合物(122mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 410(M+H). 用15％TFA(3.0mL)处理B部分的异构体混合物(122.2mg，0.30mmol)2.0小时，然后蒸发。向残留物中加入异丙醇(2mL)和盐水(15.0mL)，并通过加1M碳酸钾调节水溶液的pH至10。水溶液再用二氯甲烷(3×25mL)提取，然后干燥(硫酸钠)合并的有机层，蒸发后得到标题胺(94mg)。该胺物质无需进一步纯化直接用于下步反应。LC/MS(电雾化，+离子)m/z 310(M+H).
0℃混合N-Boc-甲基丙氨酸(79mg，0.39mmol)、EDAC(75mg，0.39mmol)、HOAT(53mg，0.40mmol)、1，2-DCE(0.7 mL)和DMF(60μL)，并搅拌15分钟。然后将所形成的浑浊溶液经注射器转移到上述胺粗品(94mg，0.30mmol)在1，2-DCE(0.6mL)中的0℃溶液内，室温搅拌所得混合物24小时。反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，进而再用饱和碳酸氢钠(2×20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并层析纯化(SiO2230-400目，7/3氯仿/乙醚)，得到标题化合物(44.6mg).LC/MS(电雾化，+离子)m/z 495(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通过向8/1CH2Cl2/MeOH中加AcCl制得)处理C部分化合物(44.6mg，0.09mmol)2.3小时，尔后蒸发。残留物进一步在高真空下干燥，从而得到无色固体标题化合物(41.1mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 395(M+H).
实施例4 搅拌下，向实施例3部分A化合物 (115mg，0.36mmol)和碳酸铯(258mg，0.79mmol)在乙腈(1.0mL)中的悬浮液内加入苄基溴(54μL，0.45mmol)，室温搅拌所得混合物18小时。然后用二氯甲烷(20mL)稀释反应混合物，并用水(8mL)洗涤。水相用二氯甲烷反提取两次，干燥(硫酸钠)合并的有机相，蒸发并层析纯化(SiO2230-400目，3/1己烷/EtOAc)，得到标题化合物，系N-1/N-2四唑异构体混合物(122mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z410(M+H). 用15％TFA(3.0mL)处理A部分异构体混合物(122.2mg，0.30mmol)2.0小时，然后蒸发。向残留物中加入i-PrOH(2mL)和盐水(15.0mL)，并通过加1M碳酸钾调节水溶液的pH至10。水溶液用二氯甲烷(3×25mL)提取，干燥(硫酸钠)合并的有机层，蒸发得到下式胺(94mg) 该产物无需进一步纯化而直接用于下步反应。LC/MS(电雾化，+离子)m/z 310(M+H).
将N-Boc-甲基丙氨酸(79mg，0.39mmol)、EDAC(75mg，0.39mmol)、HOAT(53mg，0.40mmol)、1，2-DCE(0.7mL)和DMF(60μL)在0℃下混合搅拌15分钟。然后通过注射器将所得浑浊溶液转移到上述胺粗品(94mg，0.30mmol)在1，2-DCE(0.6 mL)中的0℃溶液内，室温搅拌该混合物24小时。加乙酸乙酯(30mL)稀释反应混合物，并用饱和碳酸氢钠(2×20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并层析纯化(SiO2230-400目，7/3 CHCl3/乙醚)，得到白色固体标题化合物(81.0mg)。LC/MS(电雾化，+离子)m/z 495(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通过向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)处理B部分化合物(81.0mg 0.09mmol)2.3小时，然后蒸发。残留物进一步在高真空下干燥，从而得到浅黄色固体标题化合物(72.4mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 395(M+H).
实施例5 向实施例2部分D化合物 (308mg，0.67mmol)在6/1 THF/二噁烷(3.5 mL)中的溶液内加入1MNaOH(0.67mL)和i-PrOH(0.50ml)，室温搅拌所得混合物13小时。然后用盐水(30mL)稀释反应混合物，并通过加入1M磷酸调节该水溶液的pH到3。水溶液随后再用二氯甲烷(3×50mL)提取，干燥(硫酸钠)合并的有机相，并蒸发得到标题化合物(234mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 405(M+H). 在0℃预冷却下，向(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg，0.34mmol，Aldrich)、A部分化合物(118.5mg，0.29mmol)和三苯膦(87mg，0.33mmol)在二氯甲烷(0.9mL)中的溶液内加入二异丙基乙胺(10μL，57μmol)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL，0.34mmol)。室温搅拌混合物34小时后，再加入一定量所用试剂三苯膦(99mg)，(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL)。混合物在室温下另外搅拌24小时，然后真空浓缩。层析所得残留物(SiO2230-400目，4/1CH2Cl2/乙醚)得到混杂有1，2-二乙氧基羰基酰肼且含有标题化合物的混合物(57.5mg)。进而通过色谱(SiO2230-400目，95/5 CHCl3/MeOH)纯化该混合物，得无色油状标题化合物(49.2mg，1/1非对映立体异构体混合物)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 553(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通过向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)处理B部分化合物(49.2mg，89μmol)2.3小时，然后蒸发。残留物进一步在高真空下干燥，从而得到白色固体标题化合物(42.7mg，1/1非对映立体异构体混合物)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 453(M+H).
实施例6 在0℃预冷却下，向(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg，0.34mmol，Aldrich)、实施例5部分A化合物 (118.5mg，0.29mmol)和三苯膦(87mg，0.33mmol)在二氯甲烷(0.9mL)中的溶液内加入二异丙基乙胺(10μL，57μmol)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL，0.34mmol)。室温搅拌混合物34小时后，再加入一定量所用试剂三苯膦(99mg)，(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL)。混合物在室温下另外搅拌24小时，然后真空浓缩。层析所得残留物(SiO2230-400目，4/1 CH2Cl2/乙醚)得到无色油状标题化合物(70.6mg，1/1非对映立体异构体混合物)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 553(M+H).
用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通过向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)处理A部分化合物(70.6mg，0.13mmol)2.5小时，然后蒸发。残留物进一步在高真空下干燥，从而得到白色固体标题化合物(61.9mg，1/1非对映立体异构体混合物)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 453(M+H).
实施例7 向在0℃下预冷却的160ml甲醇中缓慢加入乙酰氯(10g，128mmol)。0℃搅拌15分钟后，加入O-苄基-D-丝氨酸 (5g，25.6mmol)，加热回流所得溶液2天。然后除去溶剂，在高真空下干燥后得到白色固体标题化合物(6.29g，100％).HPLCa rt＝1.90min. 向A部分化合物(3.65g，14.9mmol)在100ml无水二氯甲烷中的溶液内依次加入二碳酸二叔丁酯(3.89g，17.8mmol)和三乙胺(2.25g，22.3mmol)。搅拌反应物过夜，然后加50ml水终止反应，并用(3×100ml)提取。合并有机层，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩后得到油状标题化合物粗品(5.01g)。HPLCb rt＝3.24min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 310(M+H). 向B部分化合物(0.98g，3.17mmol)在10ml无水甲醇中的溶液内加入肼(0.447g，13.9mmol)。室温搅拌反应3小时，继而再加热回流5小时。除去溶剂，将残留物在高真空下干燥，从而获得油状标题化合物(0.96g，98％)。HPLCb rt＝3.21min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 310(M+H). 向C部分化合物粗品(0.53g，1.72mmol)在10ml无水乙醇中的溶液内加入异氰酸苄酯(307mg，2.06mmol)。加热回流反应4小时。然后冷却反应物到室温，真空除去溶剂。残留物然后用1N NaOH处理，并加热所得混合物至109℃保持4小时。冷却至室温后，过滤分离产生的白色沉淀。水洗所得固体物，进而高真空干燥，从而获得白色固体标题化合物(0.36g，62％).HPLCb rt＝3.29min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 341(M+H). 室温、氮气氛下，向D部分化合物(153mg，0.45mmol)在4ml DMF中的溶液内加入Boc-甲基丙氨酸羧酸(96mg，0.47mmol，Sigma)、HOAt(64mg，0.47mmol)、EDAC(91mg，0.47mmol)和二异丙基乙胺(61mg，0.47mmmol)。室温搅拌反应混合物20小时，然后加水(10ml)终止反应。混合物用乙酸乙酯(3×20ml)提取，然后用硫酸钠干燥有机层，真空浓缩后得到黄色粗油。将残留物粗品通过快速色谱纯化，以己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，从而得到油状标题化合物(153mg，65％)。HPLCb rt＝4.13min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 526(M+H). 用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)处理E部分化合物(133mg，0.25mmol)1小时，然后除去溶剂，并将残留物通过制备HPLC纯化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，从而得到标题化合物(80mg，59％).HPLCb rt＝3.25min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z425(M+H).
实施例8 用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)处理实施例7部分E的化合物(133mg，0.25mmol)1小时，然后除去溶剂，并将残留物通过制备HPLC纯化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，从而得到标题化合物(42mg，28％).HPLCb rt＝3.80min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 481(M+H).
实施例9 向实施例7部分E化合物(78mg，0.15mmol)在7.5ml THF中的溶液内加入过氧化氢(0.33ml，30％w/w)。室温搅拌2天后，除去溶剂。残留物然后在室温下用3ml TFA/二氯甲烷(1∶3)处理1小时，除去溶剂，并将残留物通过制备HPLC纯化(Shimadzu，20-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，得到标题化合物(59mg，79％).HPLCb rt＝2.99min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 394(M+H).
实施例10 向咪唑(19.08g，0.28mol)在300ml无水苯中的悬浮液内加入二甲基氯磺酰胺(26ml，0.24mol)和三乙胺(36ml，0.26mol)。反应物在氮气氛中室温搅拌24小时，然后过滤混合物，并浓缩滤液。减压(0.03mmHg)蒸馏所得粗产物，得标题化合物(36.4g，86％).HPLCb rt＝0.64min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 176(M+H). -78℃及氮气氛下，向A部分化合物(1.88g，10.75mmol)在100ml无水THF中的悬浮液内逐滴加入n-BuLi(4.60ml，2.5M己烷溶液，11.51mmol)。-78℃搅拌反应物1小时，然后一次性加入4-苯基-丁醛 在20ml无水乙醚中的溶液。混合物在-78℃搅拌5分钟，然后升温至室温。室温反应3小时后，加饱和氯化铵溶液终止反应。混合物用乙酸乙酯(3×20ml)提取，并将有机层用硫酸钠干燥，然后真空浓缩，得到黄色粗油物。残留物粗品进而通过快速色谱纯化，以己烷/乙酸乙酯(1∶3)洗脱，从而得到油状标题化合物(3.24g，93％).HPLCbrt＝3.44min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 324(M+H)。 0℃、氮气氛下，向B部分化合物(3.2g，9.91mmol)和二苯基磷酰叠氮(3.27g，11.89mmol)在17ml无水甲苯中的混合液内加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1.81g，11.89 mmol)。0℃搅拌反应物2小时，然后在室温下继续搅拌20小时。加水骤冷所得两相混合物，并用乙酸乙酯(3×20ml)提取。有机层用盐水洗涤、硫酸钠干燥、真空浓缩并通过快速色谱纯化，使用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，从而得到油状标题化合物(1.64g，48％)。HPLCb rt＝4.15min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 349(M+H). 在1大气压氢气压下氢化C部分化合物(232mg，0.67mmol)和5％Pd/C(50mg)在3ml EtOH中的混合物。9小时后，滤除固体物，真空浓缩滤液获得油状D部分化合物(200mg，93％).HPLCb rt＝3.10min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 323(M+H).
向D部分化合物(172mg，0.53 mmol)和Boc-甲基丙氨酸羧酸(114mg，0.56mmol，Sigma)在3ml乙腈中的溶液内加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-双(二甲胺)磷鎓(BOP)(248mg，0.56mmol)。室温搅拌20分钟后，加入三乙胺(56.6mg，0.56mmol)，并在室温下继续搅拌反应物5小时。蒸发除去溶剂，残留物进而通过快速色谱纯化，以己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，从而得到油状E部分化合物(238mg，88％)。HPLCb rt＝4.13min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 508(M+H). 室温下，用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)处理E部分化合物(167mg，0.33mmol)1小时，然后除去溶剂，并将残留物通过制备HPLC纯化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，得到标题化合物(137mg).HPLCb rt＝3.33min.；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 408(M+H).
下列化合物采用上文以及制备实施例中描述的方法制备。
实施例11-45实施例序号 结构M+H正离子 实施例46 在-18℃冷却下，向N-Boc-O-苄基-D-丝氨酸(6.73g，22.8mmol，Sigma)的THF(35mL)溶液内加入N-甲基吗啉(2.5mL)和氯甲酸异丁酯(2.88mL，22.8mmol)。混合物在-18℃搅拌0.5小时后，加入含4-氨基丁酸甲酯盐酸盐 (3.53g，23mmol)和N-甲基吗啉(5ml)的THF(15mL)与DMF(25mL)溶液，加料期间保持反应混合物温度低于-10℃。在-10℃至-15℃下搅拌所得混合物5小时。然后过滤混合物，用乙酸乙酯洗涤，并减压蒸发溶液。残留物进而吸收到EtOAc(160mL)，用5％NaHCO3(2×40mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机溶液，蒸发并层析(SiO2230-400，4％甲醇/二氯甲烷)，得到无色浆状标题化合物(8.5g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 395(M+H). 向A部分化合物(8.5g，21.6mmol)、三苯膦(5.7g，21.6mmol)和二异丙基乙胺(1mL，5.4mmol)在THF(70mL)中的0℃溶液内加入偶氮二羧酸二乙酯(13.4mL，21.6mmol)和叠氮三甲基硅烷(2.87mL，21.6mmol)。室温搅拌所得混合物24小时，然后在0℃下冷却。分别加入另一份三苯膦(5.7g)、偶氮二羧酸二乙酯(13.4mL)和叠氮三甲基硅烷(2.87mL)，并继续在室温下另搅拌48小时。然后真空浓缩反应混合物至1/3初始体积，加乙酸乙酯(200mL)稀释，随后再冷却到0℃。加入硝酸铈(IV)铵水溶液(65g/250mL)，搅拌混合物15分钟。分出有机层，水性混合物再用乙酸乙酯(150mL)再提取，然后干燥(硫酸钠)合并的有机相。真空浓缩后，层析(SiO2230-400目，40％乙酸乙酯/己烷)残留物，获得固体标题化合物(5.5g，含有低极性杂质)，并回收到A部分化合物(5.5g，含有氧化三苯膦杂质)。所得不纯标题化合物可直接用于后续反应。或者，取部分不纯标题化合物(4.2g)进行层析纯化(SiO2230-400目，25％乙醚/二氯甲烷)，得到无色固体标题化合物(3.5g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 420(M+H).
向B部分化合物(3.5g，8.48mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液内加入4M HCl/二噁烷溶液(5mL)。3小时后，再加入4M HCl/二噁烷溶液(4mL)，然后反应5小时。真空除去挥发物得到浆状物。将此残留物溶于二氯甲烷(200mL)，用1N NaOH(75mL)、盐水(2×80mL)洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，从而得到浆状标题化合物(2.46g)。该产物无需进一步纯化直接用于后续反应LC/MS(电雾化，+离子)m/z320(M+H). 室温搅拌含有N-Boc-甲基丙氨酸 (1.88g，9.2mmol，Sigma)、C部分化合物(2.46g，7.7mmol)、HOAT(1.17g，8.5mmol)、和EDAC(1.62g，8.5mmol)的DMF(30mL)溶液20小时。然后真空浓缩反应混合物，并将残留物溶于二氯甲烷(200mL)。有机层用水(3×100mL)洗涤，硫酸镁干燥后真空浓缩。层析纯化残留物(SiO2230-400目)，以40％乙醚/二氯甲烷洗脱，从而得到无色油状标题化合物(3.14g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 505(M+H).
向D部分化合物(1.4g，2.78mmol)的THF(8mL)溶液内加入氢氧化锂水溶液(143mg，6mmol，溶在2mL水中)，并室温搅拌所得混合物20小时。然后用1N盐酸(5mL)调节反应混合物至pH 1-2，并用乙酸乙酯(200mL)提取水层。有机层用水(60mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)且真空浓缩，从而获得无色固体标题化合物(1.32g)。该产物无需进一步纯化便直接用于后续反应LC/MS(电雾化，+离子)m/z 491(M+H). 向色胺 (24mg，0.15mmol)中加入含E部分化合物(50mg，0.1mmol)、EDAC(28.8mg，0.15mmol)和二甲氨基吡啶(18.3mg，0.15mmol，DMAP)的二氯甲烷(1ml)与DMF(0.5mL)溶液。振摇反应混合物20小时，然后加甲醇(5mL)稀释。将所得溶液通过SCX树脂柱(1g)，以甲醇(15mL)洗脱。真空浓缩洗脱液得到中间体酰胺粗品 然后将所得残留物溶于二氯甲烷/甲醇化HCl溶液(1.5mL，通过将乙酰氯(10.2mL)溶于3/2二氯甲烷/甲醇(40mL)制备，3.5M)，在室温下搅拌4小时后减压除去挥发物。所得残留物进而通过制备HPLC纯化，得到深色泡沫状标题化合物(44mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z533(M+H).
按照制备实施例46化合物所述的类似方法，采用实施例46部分E的化合物(0.1 mmol)和相应的胺(0.15-0.2mmol)制备下表所列实施例47-91的化合物。实施例47-50在二氯甲烷(1mL)中用三氟乙酸(0.4mL)和茴香硫醚(0.05mL)处理(替代HCl处理)，生成最终产物。除实施例70外的所有实施例均通过制备HPLC纯化，使用含0.2％三氟乙酸的甲醇与水梯度体系洗脱。所有化合物均以三氟乙酸盐形式分离得到。
在下面的表列化合物中，符号X1是指所示的特定基团R与分子剩余部分的连接位置。
实施例47-91 实施例序号 X1-R M+H正离子 实施例92 在5℃冷却下，向树脂键合(叔烷氧基羰基)咪唑(8.68g，加载量0.72mmol/g) [注该步骤系Hernandez和Hodges的方法改进(J.Org.Chem.1997，62，3153]在无水1，2-DCE(60.0mL)的悬浮液内加入三氟甲磺酸甲酯(1.30mL，11.5mmol)。将所得混合物在此温度下搅拌20分钟，然后温热至室温再搅拌15分钟。加入DMAP(2.96g，24.2mmol)，继续搅拌10分钟。
向O-苄基-D-丝氨酸(3.54g，18.1mmol)的DMF(21mL)悬浮液内加入N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(4.48mL，18.1mmol)，室温搅拌该混合物30分钟。然后利用注射器将所得溶液转移到上述树脂搅拌悬浮液内。混合物在室温下振摇8小时，尔后过滤。将树脂键合O-苄基-D-丝氨酸用DMF(3次)、5％AcOH/DMF、MeOH(3次，共计100mL)、THF(3次)、以及二氯甲烷(3次)洗涤，进而干燥9.58g；IR 1717(宽峰)cm-1；元素分析实测值C，80.78；H，8.00；N，0.91.基于N含量的负载量为0.65mmol/g。
取部分树脂(27mg)，用10％TFA/CH2Cl2(1.0mL)处理4.5小时，尔后过滤。树脂用二氯甲烷(三次)和MeOH(两次)冲洗，然后蒸发滤液并干燥(真空，过夜)，又重新得到TFA盐形式的O-苄基-D-丝氨酸(4.4mg)LC-MS 100％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 196(M+H).根据裂解量，树脂结合O-苄基-D-丝氨酸的负载量0.53mmol/g。 向A部分的树脂结合O-苄基-D-丝氨酸(1.75g，1.14mmol)中加入含β-丙氨酸甲酯盐酸盐(315mg，2.27mmol)、二异丙基乙胺(0.39mL，2.24mmol)和HOAT(308mg，.226mmol)的DMF(3.0mL)溶液，然后再加入EDAC(433mg，2.26mmol)的DMF(5.5mL)溶液。室温摇动混合物24小时，然后过滤。加合物用DMF、THF和二氯甲烷各洗涤三次，得到树脂结合O-苄基-D-丝氨酸-2-甲氧基-羰基乙基酰胺。
向树脂结合酰胺中加入三苯膦(955mg，3.64mmol)的1，2-DCE(3.0mL)溶液，然后再加入在0℃下预冷却的含三甲基甲硅烷基叠氮(0.48mL，3.62mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)(0.57mL，3.62mmol)在1，2-DCE(3.0mL)中的溶液。室温摇动混合物24小时，然后过滤。树脂用DMF(三次)和二氯甲烷(六次)洗涤，并再置于上述Mitsunobu反应条件两次。聚合物最后用DMF(三次)、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗涤，得到树脂结合1-(2-甲氧基羰基乙基)-四唑。 向B部分树脂结合甲基酯树脂(307mg，＜0.20mmol)/正丁胺(2.0mL)中加入四正丁基氰化铵(40mg，0.15mmol)的甲醇(0.3mL)溶液，并50℃加热所得混合物3.6小时。过滤后，聚合物用DMF、甲醇、THF和二氯甲烷各自洗涤三遍，得到树脂结合酰胺。
用～3M HCl/CH2Cl2、MeOH、乙酸甲酯(4.0mL，通过向3/2CH2Cl2/MeOH溶液内加入乙酰氯(AcCl)制备)处理上述树脂4.5小时，然后过滤。树脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(两遍)冲洗，蒸发滤液得到胺盐酸盐中间体。将该产物溶于异丙醇(1.5mL)与饱和NaCL(20mL)。滴加1M碳酸钾调节水相的pH至10，并用二氯甲烷(3×30mL)提取所得溶液。干燥(硫酸钠)合并的有机相，浓缩得到含有氧化三苯膦杂质的游离胺(30.7mg)。
0℃混合N-Boc异丁酸(36mg，0.18mmol)、EDAC(34mg，0.18mmol)、HOAT(25mg，0.18mmol)、1，2-DCE(0.3mL)与DMF(30μL)15分钟。然后将所得溶液加到上述胺粗品(30.7mg，＜0.09mmol)的1，2-DCE(0.2mL)0℃溶液内。室温搅拌该混合物22小时，然后加EtOAc(25mL)稀释。溶液用饱和碳酸氢钠(2×20mL)、水(20mL)以及饱和NaCl(20mL)洗涤，干燥并蒸发，从而得到C部分化合物粗品(44.4mg)。制备HPLC(溶剂B起始30％，最终90％；梯度时间15分钟，流速20mL/min；波长220nM；柱YMC S5 ODS 20×100mm)纯化得C部分化合物(19.0mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 532(M+H). 用～3M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(2.0mL，通过向3/2CH2Cl2/MeOH溶液中加入AcCl制备)处理部分C化合物(19.0mg，0.036mmol)2.2小时，然后浓缩。进一步干燥残留物(真空，2小时)，得无色固体标题化合物(16.6mg)LC-MS 96％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 432(M+H).
实施例93 在10℃冷却下，向树脂结合(叔烷氧基羰基)咪唑(5.06g，负载量0.70mmol/g) 在无水1，2-DCE(30mL)中的悬浮液内加入三氟甲磺酸甲酯(Methyltriflate)(0.80mL，7.11mmol)。在此温度下搅拌所得混合物15分钟，然后温热至室温再搅拌10分钟。加入三乙胺(2.40mL，17.2mmol)后，继续搅拌10分钟。过滤含2-氨基异丁酸甲酯(1.14g，7.42mmol)和Et3N(0.98mL，7.04mmol)的DMF(13mL)悬浮液，并利用注射器将其转移到上述搅拌着的树脂悬浮液内。室温摇动混合物5.5小时，然后过滤。将与树脂结合的A部分化合物用THF(三次)、1/1THF/MeOH、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗涤，进而干燥IR 1728cm-1；元素分析实测值C，82.02；H，7.96；N，0.89.基于N含量的负载量为0.64mmol/g。 向部分A化合物(2.63g，负载量0..64mmol/g)中加入3/2二噁烷/0.25 M KOH溶液(40 mL)，75℃加热该悬浮液4.5小时。过滤后，将聚合物用DMF(三次)、5％AcOH/DMF(三次，总计50 mL)、MeOH(三次)、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗涤，干燥后得部分B化合物化合物(2.50g)。
取部分上述树脂(53mg)，用10％TFA/CH2Cl2(1.5mL)处理5小时后过滤。树脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(两遍)冲洗，然后蒸发滤液并加以干燥(真空，过夜)，得到TFA盐形式的纯净2-氨基丁酸(6.3mg)1H NMR δ(CD3OD，ppm)1.55(s，6H)。
基于裂解量，树脂结合2-氨基丁酸部分B化合物的负载量为0.53mmol/g。 向实施例92，部分B化合物在苯乙胺(1.4.0mL)中的悬浮液内加入四正丁基氰化铵(22mg，0.08mmol)的MeOH(0.3mL)溶液，并在60-65℃加热该混合物3小时。过滤后，将聚合物用DMF、1/1THF/MeOH、THF和二氯甲烷各自洗涤三次，得到树脂结合酰胺。
用～3M HCl/CH2Cl2、MeOH、MeOAc(3.0mL，通过向3/2CH2Cl2/MeOH溶液内加入AcCl制备)处理上述树脂5小时，然后过滤。树脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(两次)冲洗，蒸发滤液得到胺中间体(69.3mg) 将上述中间体(69.3mg，0.18mmol)、部分A化合物(400mg，负载量0.53mmol/g)与含EDAC(115mg，0.60mmol)、HOAT(82mg，0.60mmol)和二异丙基乙胺(0.10mL，0.60mmol)的DMF(3.0mL)溶液混合，并在室温下摇动所得混合物24小时。过滤后，将树脂用DMF(三次)和二噁烷(三次)冲洗。然后将树脂用3/2二噁烷/水溶胀，摇动过夜，过滤并用THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗涤。
用～3M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(4.0mL，通过向3/2CH2Cl2/MeOH溶液中加入AcCl制备)处理上述树脂6小时，然后过滤。将树脂用二氯甲烷(两遍)和甲醇冲洗，蒸发滤液得到标题化合物粗品。进而将该混合物粗品溶于乙腈/MeOH，通过阴离子交换柱(3.0g，CHQAX)，以乙腈(18mL)洗脱，得到胺(22.2mg)。进一步用1/1乙腈/MeOH(20mL)洗脱，另外得到一定量胺(29.8mg)。将上述胺合并，进一步通过制备HPLC纯化(溶剂B起始30％，最终80％；梯度时间20分钟，流速20mL/min；波长220 nM；柱YMC S5 ODS 20×100mm)，得标题化合物(20.7mg)HPLC100％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 480(M+H).
实施例94和95 向肉桂酰乙腈(1.0g，5.84mmol，Maybridge)在4/1 MeOH/H2O(30mL)中的0℃冷溶液内加入硼氢化钠(110mg，2.92mmol)，搅拌所得混合物1.5小时。温热到室温后，每隔45分钟加入少量硼氢化钠直至反应完全(另外反应90分钟)。真空蒸除大部分甲醇后，加入磷酸钾缓冲液(pH3，45mL)，搅拌所得混合物15分钟。然后加入5％NaHCO3(45mL)，用二氯甲烷提取含水混合物。合并有机相，干燥(Na2SO4)并浓缩。层析(SiO2230-400目，1/1 Hex/EtOAc)残留物得黄色液体A部分化合物(842.5mg)LC/MS 98％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 156(M-OH)。 向预冷到0℃的A部分醇(198mg，1.14momol)、实施例5部分A化合物 (360mg，0.89mmol)和Ph3P(303mg，1.15mmol)在二氯甲烷(2.6mL)中的溶液内加入二异丙基乙胺(31μL，0.18mol)和偶氮二羧酸二乙酯(0.18mL，1.14mmol)。室温搅拌此混合物24小时，然后蒸发。层析(SiO2230-400目，1/1 Hex/EtOAc)残留物得到B部分N-1取代的四唑(98.3mg，20％产率，2个非对映异构体)HPLC 98％非对映异构体合并面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 560(M-+H)。 用4M HCl/二噁烷溶液(1.5mL)处理B部分化合物(72mg，0.13mmol，2个非对映异构体)与苯硫基甲烷(45μL，0.38mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液1.2小时，尔后浓缩。制备HPLC(溶剂B起始40％，最终90％；梯度时间30min；流速20mL/min；波长220nm；柱YMC S5 DOS 20×100mm)纯化得到无色固体实施例94的标题化合物(23.8mg，32％产率，单一非对映异构体)LC/MS 100％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 460(M+H)，和无色固体实施例95的标题化合物(26.7mg，36％产率，另一非对映异构体)LC/MS 100％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 460(M+H)。
下列化合物采用实施例96-101中描述的方法制备。实施例序号M+H正离子结构 采用实施例102-117中所述方法以及制备实施例中详述的一般方法，制备下列化合物。实施例序号 结构 M+H正离子
实施例118 向粗品 (如实施例7部分C所述制得)(7.84g，25.37mmol)的150ml无水乙醇溶液内加入异硫氰酸甲酯(2.04g，27.91mmol)。加热回流反应物6小时。然后冷却反应物到室温，利用蒸发器除去溶剂。残留物然后用1N NaOH(70ml)处理，并加热回流(113℃油浴)所得混合物12小时。冷却反应至室温，真空除去溶剂。残留物进而用300ml二氯甲烷/甲醇(100∶7.5)处理。室温搅拌此混合物1小时后过滤，浓缩滤液并与甲苯一起共蒸发，得到标题化合物粗品(7.54g)。HPLCb保留时间(rt)＝2.37min.LC/MS(电雾化，+离子)m/z 265(M+H)。 室温、氮气氛下，向A部分化合物(7.54g，28.6mmol)与Boc-甲基丙氨酸羧酸(6.95g，34.3mmol，Sigma)在100ml DMF中的溶液内加入HOAt(5.05g，37.1mmol)和EDAC(8.21g，42.8mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。真空除去溶剂，残留物用水(100ml)稀释。混合物进而用1/1乙酸乙酯/乙醚(3×200ml)提取，用硫酸镁干燥有机层并过滤。将滤液在0℃下贮存，并通过过滤回收所产生的固体，从而得到B部分化合物(1.45g)。然后浓缩所得滤液，将残留物通过快速色谱纯化，以己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，进一步得到白色固体B部分化合物(6.92g)。HPLCb保留时间(rt)＝3.19min.LC/MS(电雾化，+离子)m/z 450(M+H) 室温下，向B部分化合物(67.4mg，0.15mmol)在1ml无水二噁烷中的溶液内加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和2-氰基苄基溴(58.8mg，0.3mmol)。摇动反应物过夜，然后真空除去溶剂，得到下式中间体 残留物然后在室温下用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)处理2小时。蒸发溶剂，将反应混合物按下所述通过SCX柱(2g)纯化柱先用甲醇(10mL)冲洗平衡，然后将溶在1mL甲醇中的反应混合物填装到柱上，接着加入甲醇(30mL)。产物然后用2N氨/甲醇溶液(7mL)洗脱。利用高速真空除去样品中的溶剂，得到油状标题化合物(53mg，76％)；HPLCb rt＝3.15 min.LC/MS(电雾化，+离子)m/z 465(M+H)。
实施例119 室温下，向实施例118部分B化合物(67.4mg，0.15mmol)在1mL无水二噁烷中的溶液内加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和4-(2-溴异戊酰基)-吗啉(75mg，0.3mmol)。振摇反应过夜，然后加入碳酸钾(103mg，0.75mmol)，继续振摇反应24小时。滤除固体物，收集滤液，并真空除去溶剂。残留物然后在室温下用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)处理2小时。蒸发溶剂，进而按下所述通过SCX柱(2g)纯化反应混合物柱先用甲醇(10mL)冲洗平衡，然后将溶在1mL甲醇中的反应混合物填装到柱上，接着加入甲醇(30mL)。产物随后用2N氨/甲醇溶液(7mL)洗脱。利用高速真空除去样品中的溶剂，得到油状标题化合物(41mg，53％)；HPLCb rt＝3.06min.LC/MS(电雾化，+离子)m/z519(M+H)。
实施例120 室温下，向实施例118部分B化合物(67.4mg，0.15mmol)在1mL无水二噁烷中的溶液内加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和2-溴丁内酯(49.5mg，0.3mmol)。摇动反应物过夜，然后加入碳酸钾(103mg，0.75mmol)，继续振摇反应24小时。滤除固体物，收集滤液，并真空除去溶剂。反应混合物然后按下所述通过短硅胶滤柱(2g)纯化柱先用乙酸乙酯(10mL)冲洗平衡，然后将溶在1mL乙酸乙酯中的反应混合物填装到柱上，接着加入乙酸乙酯(7mL)。收集溶液，利用高速真空除去样品中的溶剂。残留物然后用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)室温处理2小时。真空除去溶剂，得到标题化合物的TFA盐(47.1mg，57％)；HPLC rt＝2.56min.LC/MS(电雾化，+离子)m/z 434(M+H)。
按照与制备实施例118-120化合物所述类似的方法，用实施例118部分B的化合物(0.15mmol)与相应的溴化物(0.3mmol)制备下表所列实施例121-172的化合物。实施例159-172在用TFA脱保护之前需要进一步加工。少数实施例通过制备HPLC纯化，以含0.2％三氟乙酸的甲醇与水梯度体系洗脱。实施例121-172以三氟乙酸盐或游离碱形式分离得到。
实施例121-127 实施例序号 X1-R M+H正离子 按照与制备实施例118-172化合物所述类似的方式，制备下表所列实施例173-216的化合物。
实施例173-216 实施例序号 X1-RM+H正离子
实施例217 在-18℃冷却下，于氮气氛中向N-Boc-O-苄基-D-丝氨酸(5g，16.9mmol，ChemImpex)的THF(35mL)溶液内加入N-甲基吗啉(1.86mL，16.9mmol)和氯甲酸异丁酯(2.19mL，16.9mmol)。-18℃搅拌该混合物0.5小时后，加入N-Cbz-1-3-二甲氨基丁烷盐酸盐 (4.14g，16.9mmol)和N-甲基吗啉(1.86mL，16.9mmol)在DMF(10mL)中的溶液，4小时内温热所得混合物至-5℃。过滤混合物，蒸发溶液至近干。将残留物溶于EtOAc，用5％NaHCO3(3×50mL)、水和盐水洗涤。干燥(硫酸钠)有机溶液，蒸发得到A部分化合物(7.84g，97％产率)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 486(M+H). 氮气氛下，向预先在0℃下冷却的A部分化合物(7.92g，16.3mmol)与三苯膦(4.28g，16.3mmol)在THF(60mL)中的溶液内加入偶氮二羧酸二乙酯(2.57mL，16.3mmol)和叠氮三甲基硅烷(2.16mL，16.3mmol)。室温搅拌混合物过夜，然后在0℃下冷却。分别加入另一当量的三苯膦(4.28g)、偶氮二羧酸二乙酯(2.57mL)和叠氮三甲基硅烷(2.16mL)，在室温下继续搅拌24小时。在0℃下冷却反应混合物，加入硝酸铈(IV)铵水溶液(75mL)(2.63g/100mL)，搅拌1小时。含水混合物用二氯甲烷提取，然后干燥(硫酸钠)有机相，蒸发并进行层析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到不纯的B部分化合物。将污染的四唑溶于氯仿，加入乙醚沉淀出无色固体B部分化合物(2.6g)MS(电雾化，+离子)m/z 511(M+H). 向B部分化合物(2.5g，4.80mmol)的二氯甲烷溶液内加入4MHCl/二噁烷(14.7mL)，搅拌3小时。减压除去溶剂，残留物在二氯甲烷中浓缩，进而将所得残留物再溶于少量i-PrOH。加入盐水(150mL)，并通过加1M K2CO3调节水溶液的pH至10。水溶液用二氯甲烷提取，干燥(硫酸钠)并蒸发，从而得到胺中间体 该产物无需进一步纯化而直接用于后续反应。
在0℃下混合N-Boc-甲基丙氨酸(1.49g，7.35mmol，Sigma)、EDAC(1.14g，7.35mmol)、HOAt(1g，7.35mmol)、1，2-DCE和DMF(1.29mL)，并搅拌15分钟。将所得溶液转移到上面制备的胺中间体粗品在1，2-DCE的0℃溶液内，室温搅拌所得混合物过夜。加EtOAc稀释反应混合物，然后用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并进行层析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，从而得到无色油状C部分化合物(1.58g)MS(电雾化，+离子)m/z596(M+H) 在45psi氢气压下氢化包含C部分化合物(100mg，0.17mmol)和5％钯-碳(50mg)的甲醇(3mL)溶液1小时。通过Celite过滤反应混合物，浓缩得到中间体(68.1g) 将所得残留物通过自动制备HPLC纯化，得到纯净中间体(47.6mg)MS(电雾化，+离子)m/z 462(M+H).
室温、氮气氛下，向中间体(75mg，0.16mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液内加入包含乙内酰脲 (25.3mg，0.16mmol)、EDAC(31.3mg，0.16mmol)和二甲氨基吡啶(DMAP)(20.4mg，0.16mmol)的二氯甲烷(1mL)与DMF(0.5mL)溶液。室温搅拌反应混合物过夜，然后真空除去挥发物。将所得残留物溶于甲醇，通过SCX树脂柱得到D部分化合物(72mg)MS(电雾化，+离子)m/z 602(M+H) 用HCl溶液(3.0mL；10.2ml AcCl/40ml 3/2 CH2Cl2/MeOH)处理D部分化合物(64.3mg，0.107mmol)的二氯甲烷溶液，然后真空蒸发。残留物与二氯甲烷一起共蒸发四次，从而得到白色固体标题化合物(51.4mg)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 502(M+H).
实施例218 在-20℃冷却下，于氮气氛中向N-Boc-O-苄基-D-丝氨酸(6g，20.3mmol，ChemImpex)的THF(30mL)溶液内加入N-甲基吗啉(2.23mL，20.3mmol)和氯甲酸异丁酯(2.64mL，20.3mmol)。-20℃搅拌混合物45分钟后，加入乙醇胺(1.3g，21.4mmol)的THF(20mL)溶液，4小时内温热所得混合物至室温。搅拌过夜后，过滤混合物，并蒸发溶液至近干。将残留物通过快速柱色谱(硅胶)纯化，以己烷∶乙酸乙酯(1∶4)洗脱，从而得到A部分化合物(7.3g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 339(M+H). 室温、氮气氛下，向A部分化合物(3.60g，10.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液内加入吡啶(3.44mL，42.6mmol)和乙酐(1.1mL，11.7mmol)。14小时后，真空除去挥发物。所得残留物进而通过快速柱色谱(硅胶)纯化，以己烷∶乙酸乙酯(2∶1)洗脱，从而得到B部分化合物(3.85g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 381(M+H). 向B部分化合物(3.83g，10.1mmol)的THF(30mL)溶液内加入三苯膦(2.64g，10.1mmol)、偶氮二羧酸二乙酯(1.24mL，10.1mmol)和叠氮三甲基硅烷(1.34mL，10.1mmol)。室温搅拌混合物24小时，然后分别加入另一当量的三苯膦(2.64g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.24mL)和叠氮三甲基硅烷(1.34mL)，在室温下继续搅拌24小时。真空除去挥发物，进而将残留物通过快速色谱(SiO2230-400目，8/1己烷/EtOAc)纯化，得到含一定杂质的中间体(2.71g) 这种含杂质四唑的纯度足以适合后续反应。
向上述中间体(2.71g，≤6.69mmol)中加入4M HCl/二噁烷溶液(10mL)，搅拌1.5小时。减压除去溶剂，将残留物同甲苯与甲醇的混合物一起共蒸发两次，从而得到无色固体C部分化合物(2.28g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 381(M+H).
向C部分化合物(2.28g，6.7mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液内加入二异丙基乙胺(2.33mL，13.4mmol)、N-Boc-甲基丙氨酸(2.04g，10mmol，ChemImpex)、HOAt(1.36g，10mmol)和EDAC(1.92g，10mmol)，室温搅拌所得混合物过夜。加饱和氯化铵骤冷反应混合物，并将水层用二氯甲烷洗涤三次。合并的有机层用盐水洗涤、干燥(硫酸钠)并蒸发，从而得到其纯度足以适合进行后续反应的中间体 将上述中间体在THF/MeOH溶液(20mL，20/1)中用2N氢氧化锂(10mL)处理1小时。冷却到0℃后，中和反应混合物至pH 7，并用二氯甲烷提取水层(3次，每次100mL)。干燥(硫酸镁)合并的有机层，过滤并真空浓缩。残留物进而通过快速色谱(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)纯化，从而得到D部分化合物(1.69g)MS(电雾化，+离子)m/z 449(M+H). 0℃下，向D部分化合物(1.34g，3.0mmol)的THF(20mL)溶液内加入吡啶(0.53mL，6.6mmol)。3分钟后，加入对-硝基氯甲酸酯(1.33g，6.6mmol)的THF(10mL)溶液，0℃搅拌此混合物1小时，继而室温搅拌2小时。然后过滤反应混合物，并真空浓缩滤液。所得残留物进而通过快速色谱纯化(SiO2230-400目，以1/1己烷/EtOAc洗脱)，从而得到E部分化合物(1.52g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z614(M+H). 向E部分化合物(3.4g，5.55mmol)的THF(20mL)溶液中加入 (0.74g，8.32mmol)，室温反应3小时后，真空除去挥发物。将所得残留物通过快速色谱(SiO2230-400目)纯化，以1/2己烷/EtOAc(4/1-1/1)洗脱，从而得到纯净的F部分化合物(2.325g)以及一些低纯度物质(1.03g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 564(M+H). 用4N HCl/二噁烷溶液(15mL)处理F部分化合物(1.59g，2.82mmol)1.5小时。真空除去挥发物得到无色固体标题化合物(1.44g)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 464(M+H).
将上述中间体用4N HCl/二噁烷溶液处理3小时，尔后真空蒸发。残留物进而通过制备HPLC纯化，得到白色固体标题化合物(85mg)MS(电雾化，+离子)m/z 566(M+H).
实施例218的F部分中间体可以用实施例219所述的改进条件制备。
实施例219 冷却实施例218部分B化合物(47.0g，120mmol)的THF(250mL)溶液到1℃，加入三苯膦(32.6g，123mmol)和二异丙基乙胺(5.4mL，32mmol)。15分钟内逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(19.6mL，123mmol，DEAD)，加料期间保持温度低于5℃，然后加入叠氮三甲基硅烷(16.5mL，123mmol)。室温(rt)搅拌混合物24小时，然后如前所述分别加入另一当量的三苯膦(32.6g)、DEAD(19.6mL)和叠氮三甲基硅烷(16.5mL)，在室温下继续搅拌24小时。再如前所述分别加入另一当量的三苯膦(32.6g)、DEAD(19.6mL)和偶氮三甲基硅烷(16.5mL)，继续在室温下搅拌24小时。冷却反应物到1℃，45分钟内加硝酸铈(IV)铵(136g)的水(500ml)溶液终止反应。通过硅藻土过滤所得混合物，然后真空浓缩并用乙酸乙酯(250mL)提取两次。合并的有机提取液用盐水洗涤，硫酸镁干燥，真空浓缩后得到橙色油状物(236g)。将该油状物溶于甲基叔丁基醚(1L，MTBE)，用1N NaOH(500mL)洗涤两次，水(500mL)洗一次，最后再用盐水(500mL)洗涤一次。然后硫酸镁干燥并真空浓缩，得到一黄色固体物(166mg)。将该固体物通过硅胶垫(500g，230-400目)纯化，以15-40％乙酸乙酯/己烷洗脱，从而得到黄色油状乙酸酯中间体(20.6g，41％产率) 向上述中间体(106.6g，263mmol，合并众多这种反应的产物获得)的二氯甲烷(600mL)溶液内加入4M HCl/二噁烷溶液(325mL)，搅拌过夜。真空除去溶剂，将残留物与甲苯同甲醇的混合物一起共蒸发两次，得到棕色泡沫状所需化合物(89.3g，100％产率)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 381(M+H). 向A部分化合物(80.0g，262mmol)的二氯甲烷(1L)溶液内加入二异丙基乙胺(120mL，262mmol)、N-Boc-甲基丙氨酸(80.0g，393mmol)、HOAt(53.5g，393mmol)、和EDAC(75.3g，393mmol)，室温搅拌所得混合物1小时。然后将反应混合物用水(500mL)、0.5MHCl(500mL)和饱和NaHCO3(500mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，从而得到其纯度足以适合后续反应的黄色泡沫状中间体(146.8g)。 将上述中间体在THF/MeOH(1.25L，4/1)中的溶液置于水浴内，15分钟内加入2N氢氧化锂(65mL)，加料期间保持温度低于25℃。室温搅拌反应1小时。然后真空浓缩反应混合物得到油/固体混合物，进而将其溶于水(500mL)，用1N HCl(40mL)调节pH至5.5。加入二氯甲烷(500mL)，搅拌混合物30分钟。分出有机层，水层再用二氯甲烷(250mL)提取。合并的有机物然后用水(400mL)和盐水(400mL)洗涤、干燥(硫酸镁)、过滤并真空浓缩，得到亮黄色泡沫状D部分化合物(123.2g)MS(电雾化，+离子)m/z 449(M+H). 0℃下，向B部分化合物(123g，260mmol)的二氯甲烷(350mL)溶液内加入吡啶(32.0mL，391mmol)。10分钟后，在1小时内加入对-硝基氯甲酸酯(63.0g，313mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液，并室温搅拌该混合物1小时。然后将反应混合物用水(300mL)、1N HCl(300mL)和盐水(300mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩，得到一棕色油状物(187.3g)。进而将此粗产物通过硅胶垫(500g，230-400目)纯化，以30-50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到灰白色泡沫状E部分化合物(130.89g，81.9％产率)LC/MS(电雾化，+离子)m/z 614(M+H).
在水浴中，向C部分化合物(117.5g，190mmol)的THF(600mL)溶液中逐滴加入氨基丁醇 (19.4mL，210mmol)，历时30分钟，然后在室温下反应1小时，再加入部分4-氨基-1-丁醇(1.7mL，18mmol)。在室温下另搅拌30分钟后，真空除去挥发物。将所得残留物溶于EtOAc(600mL)，用1N HCl(200mL)、饱和碳酸氢钠(1×500mL和2×200mL，乳液)、以及盐水(3×200mL，缓慢分层)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，得到一油状物。进而将此油状物溶于MTBE(600mL)，用饱和碳酸氢钠(1×300mL)和盐水(2×500mL)洗涤，干燥(硫酸钠)并真空浓缩，得到黄色油状物(156.52g)。将该油状物再溶于MTBE(1L)，用1N NaOH(500mL)和水洗涤。有机层再用1N NaOH(500mL)洗涤，并用MTBE(400mL)提取合并的NaOH洗涤物。合并的MTBE层用水(500mL)和盐水(500mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，从而得到亮黄色油状D部分化合物(103.08g，95.5％产率)LC/MS(电雾化，+离子)m/z564(M+H).
按照与制备本发明上述化合物所述类似的方式以及本领域公知的方法制备实施例220-352。
实施例220-352 实施例序号X1-RM+H正离子 实施例序号 结构 M+H正离子 实施例353 向实施例218部分F化合物(929mg，1.65mmol)在无水二氯甲烷(8mL)中的溶液内加入吡啶(400μl，4.95mmol)和DMAP(40mg，0.33mmol)，接着再加入苯甲酰氯(287μl，2.48mmol)。室温搅拌5小时后，真空除去溶剂，残留物进而通过快速柱色谱纯化(SiO2，20％-50％EtOAc/己烷)，得到所需产物(1.09g，99％产率). 向A部分化合物(580mg)的二氯甲烷(3ml)溶液内加入4N HCl/二噁烷溶液(3ml)。室温搅拌反应混合物1.5小时。真空除去溶剂后得到所需产物(469mg，89％产率).LC/MS(电雾化，+离子)m/z 567(M+H).
实施例353另一种制法 向实施例219化合物(102.66g，182mmol)的无水二氯甲烷(650mL)溶液内加入吡啶(37.0mL，455mmol)和DMAP(2.23g，18.2mmol)。将烧瓶浸入水浴中，20分钟内逐滴加入苯甲酰氯(25mL，219mmol)。室温搅拌2小时后，再逐滴加入另一份苯甲酰氯(6.0mL，54mmol)，继续在室温下搅拌反应过夜。然后将反应混合物用1N HCl(300mL)、饱和NaHCO3(300mL)和盐水(300mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，进而将残留物通过硅胶垫过滤(SiO2，650g，10％-85％EtOAc/己烷)，得到无色泡沫状所需产物(116.34g，97％产率)。 30分钟内，向A部分化合物(116.0g，174mmol)的二氯甲烷(700ml)溶液内逐滴加入4N HCl/二噁烷溶液(218ml，870mg)。室温搅拌反应混合物4小时。真空除去溶剂。将残留物溶于水(500mL)，用MTBE(250mL)洗涤。水层与二氯甲烷(300mL)混合，并用1N NaOH(190mL)调节至pH11。分出二氯甲烷层，水层进一步用二氯甲烷(300mL)提取。合并的二氯甲烷层用盐水(2×300mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，从而获得黄色油状所需产物(92.8g，94％产率).LC/MS(电雾化，+离子)m/z 567(M+H).
实施例354 0℃下，向化合物219(100mg，0.18mmol)的1，2-二氯乙烷(250μl)溶液内加入由2-苯基丙酸(50μl，0.37mmol)、EDAC(69mg，0.36mmol)、和DMAP(44mg，0.36mmol)在1，2-二氯乙烷(250μl)中形成的溶液。室温搅拌反应混合物36小时。然后加EtAOc(50ml)稀释反应物，进而用饱和碳酸氢钠(2×25ml)、水(25ml)和盐水(25ml)洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到粗产物(128mg)。随后将该产物通过快速柱色谱纯化，以1∶1己烷∶EtOAc洗脱，从而得到所要产物(122.4mg，99％产率). 在10％TFA/二氯甲烷溶液(4.0ml)中搅拌A部分化合物(122mg，0.18mmol)2.5小时。真空除去溶剂。残留的TFA通过与二氯甲烷(4×3ml)和甲醇(2×3ml)共蒸发除去。将残留物溶于甲醇，60℃加热8小时。真空除去溶剂，残留物进而通过制备HPLC纯化(20％-100％B，12min.梯度，20ml/min，YMCS5 ODS 20×100mm)，得到所需产物(115.4mg，93％产率).LC/MS(电雾化，+离子)m/z 596(M+H).
按照与制备实施例353和354化合物类似的方式，使用实施例218的F部分化合物和相应的酸或酰氯制备下表所列实施例355-392的化合物。
实施例355-392 实施例序号 X1-R M+H正离子 按照与制备实施例353和354的化合物类似的方式制备下表所列实施例393-424的化合物。
实施例393-424 实施例序号 X1-R M+H正离子 实施例序号 X1-RM+H正离子 实施例425 向R-(+)-3-BOC-2，2-二甲基-4-噁唑烷羧酸甲酯 (2.05g，7.75mmol，Aldrich，98％)的THF(24.0mL)溶液内加入氯化钙(437mg，3.94mmol)的EtOH(16.5mL)轻微悬浮液，在0℃下冷却所得溶液。加入硼氢化钠，0℃搅拌混合物2小时，然后在室温下继续搅拌4小时。将上述最终混合物在0℃下冷却，并加入磷酸钾缓冲液(pH3，40mL)。室温搅拌所得含水混合物30分钟，然后用二氯甲烷(3×70mL)提取。干燥(硫酸钠)合并的有机相，蒸发得到粗产物，进而层析纯化(SiO2，230-400目，3/2-1/1己烷/EtAOc)，获得原料酯(409mg，20％回收率)和所需醇(1.46g，80％产率)1H NMRδ(CDCl3，ppm，旋转异构体)4.18-3.56(4m，6H)，1.55和1.50(2s，15H). 向A部分化合物(2.90g，12.5mmol)、2-羟基吡啶(1.54g，15.7mmol)和三苯膦(4.11g，15.7mmol)在THF(27mL)中的溶液内逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(2.47mL，15.7mmol)。室温搅拌所得溶液13.5小时，然后部分蒸发。将剩余溶液通过SiO2(230-400目)柱，以7/3己烷/EtOAc洗脱，从而获得固体形式所需化合物(1.88g，49％产率)1H NMR δ(CDCl3，ppm，旋转异构体)8.15(m，1H)，7.57(m，1H)，6.88(m，1H)，6.74(d，J＝8.2Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.25-3.95(数个m，4H)，1.61-1.45(数个s，15H). 35℃加热B部分化合物(434mg，1.41mmol)与对-甲苯磺酸一水合物(295mg，1.55mmol)在无水甲醇(14.1mL)中的溶液7小时，然后室温搅拌3.8小时。在0℃冷却后，加入1M碳酸钾溶液(0.8mL)，通过真空蒸发将混合物的体积减少到4mL。加入盐水(50mL)，然后通过加1M碳酸钾调节水溶液的pH到10。用二氯甲烷(4×50mL)提取，干燥(硫酸钠)，蒸发并层析粗品(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，获得原料B部分化合物(93mg，21％回收率)和无色固体所需醇(249mg，66％产率)LC-MS 99％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z269(M+H). 0℃冷却下，向C部分化合物(1.34g，5.00mmol)和三苯膦(1.58g，6.02mmol)在二氯甲烷(34.0mL)中的溶液内逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.95mL，6.03)，随后室温搅拌3.75小时。混合物通过真空蒸发减少到8mL体积，然后将此剩余溶液通过SiO2柱(230-400目)，以7/3己烷/EtOAc洗脱，从而得到黄色油状所需化合物(862mg，70％产率).
1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.13(m，1H)，7.57(m，1H)，6.88(m，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.45(dd，J＝11.6，4.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝11.6，5.5Hz，1H)，2.88(m，1H)，2.35(d，J＝6.0Hz，1H)，2.22(d，J＝3.9Hz，1H)，1.43(s，9H). 向D部分化合物(97mg，0.39mmol)和氰化钾(51mg，0.78mmol)在DMSO(2.6 mL)中的悬浮液内加入水(7μL)，在30-40℃下加热所得混合物11小时。然后在室温下继续搅拌9小时，并将混合物用9/1己烷/EtOAc(60mL)稀释。所得溶液用水(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发，得92mg粗品。层析纯化(SiO2230-400目，7/3己烷/EtOAc)获得原料氮丙啶(8.0mg，8％回收率)和无色固体所需化合物(75.6mg，72％产率)LC-MS 100％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 278(M+H)。 向含有E部分化合物(199mg，0.72mmol)和茴香硫醚(254μL，2.16mmol)的烧瓶内加入15％TFA溶液(6.0mL)，并在室温下放置所得溶液4小时。蒸发溶液，残留的TFA通过与二氯甲烷(2×5mL)和MeOH(3×5mL)共蒸发除去，接着高真空干燥1小时。所得胺盐粗品 无需进一步纯化直接用于后续反应。
将N-Boc-O-苄基-D-丝氨酸(298mg，1.00mmol)、EDAC(194mg，1.01mmol)、HOAT(137mg，1.01mmol)、1，2-DCE(0.47mL)和DMF(940μL)在0℃下混合，并搅拌15分钟。然后利用注射液将所得浑浊溶液转移到上述胺粗品在1，2-DCE(400μL)和DMF(470μL)中的0℃溶液内，并在0℃下搅拌该混合物10分钟。加入二异丙基乙胺，在室温下继续搅拌36小时。然后将反应混合物用EtOAc(80 mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠(2×40mL)、水(40mL)和盐水(40mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并加以层析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，从而获得无色油状所需化合物(311mg，95％产率)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.17(s，1H)，7.84(s，1H)，7.61(m，1H)，7.30(m，5H)，6.94(m，1H)，6.76(d，J＝7.9Hz，1H)，5.37(s，1H)，4.52(m，5H)，4.31(broad s，1H)，3.88(m，1H)，3.58(m，1H)，2.80(m，2H)，1.43(s，9H). 向F部分化合物(311mg，0.69mmol)和三苯膦(217mg，0.83mmol)在二氯甲烷(1.4mL)中的溶液内加入偶氮二羧酸二乙酯(131μL，0.83mmol，DEAD)和叠氮三甲基硅烷(110μL，0.83mmol)。室温搅拌混合物22小时，再加入等同量的三苯膦(217mg)、DEAD(131μL)和叠氮三甲基硅烷(110μL)。在室温下继续搅拌24小时，然后将最后得到的混合物通过SiO2柱(230-400目)，以3/2-1/1己烷/EtOAc洗脱，得到无色粘稠油状所需化合物(248mg，76％)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.11(m，1H)，7.55(m，1H)，7.33(m，3H)，7.20(m，2H)，6.92(t，J＝7.9Hz，1H)，6.76(d，J＝8.3Hz，1H)，5.45(d，J＝8.3Hz，1H)，5.44(m，2H)，4.73(dd，J＝11.6，4.9Hz，1H)，4.63(dd，J＝11.6，8.3Hz，1H)，4.50(d，J＝11.0Hz，1H)，4.44(d，J＝11.0Hz，1H)，4.00(dd，J＝8.3，5.5Hz，1H)，3.58(t，J＝8.8Hz，1H)，3.04(dd，J＝17.0，7.1Hz，1H)，2.86(dd，J＝17.0，7.1Hz，1H)，1.43(s，9H). 向含有G部分化合物(227mg，0.47mmol)和茴香硫醚(166μL，1.41mmol)的烧瓶内加入5％TFA溶液(6.2mL)，并在室温下放置所得溶液4小时。蒸发溶液，残留的TFA通过与二氯甲烷(2×8mL)和MeOH(3×8mL)共蒸发除去，接着高真空干燥1小时。将残留物于60℃下在甲醇(25mL)中加热，然后浓缩该溶液。所得胺盐粗品 无需进一步纯化直接用于后续反应。
将N-Boc-O-甲基丙氨酸 (125mg，0.62mmol)、EDAC(117mg，0.61mmol)、HOAT(84mg，0.62mmol)、1，2-DCE(350μL)和DMF(700μL)在0℃下混合，并搅拌15分钟。然后利用注射液将所得溶液转移到上述胺粗品在1，2-DCE(300μL)和DMF(400μL)中的0℃溶液内，并在0℃下搅拌该混合物15分钟。加入二异丙基乙胺(205μL，1.18mmol)，在室温下继续搅拌25小时。将最后得到的混合物用EtOAc(75mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠(2×30mL)、水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机层，蒸发并加以层析(SiO2230-400目，3/2-2/3己烷/EtOAc)，从而获得无色泡沫状所需化合物(175.4mg，66％产率)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.13(m，1H)，7.57(m，1H)，7.42(d，J＝8.8H，1H)，7.31(m，3H)，7.19(m，2H)，6.93(m，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.49(m，1H)，4.97(s，1H)，4.73(dd，J＝11.6，5.5Hz，1H)，4.66(dd，J＝11.6，7.7Hz，1H)，4.50(d，J＝11.6Hz，1H)，4.43(d，J＝11.5Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.52(t，J＝8.8Hz，1H)，3.02(dd，J＝17.1，6.6Hz，1H)，2.85(dd，J＝17.0，7.7Hz，1H)，1.50(s，3H)，1.44(s，3H)，1.36(s，9H). 用15％TFA(14.0mL)处理H部分化合物(492mg，0.87mmol)2.5小时，然后在真空下浓缩该溶液。残留的TFA与二氯甲烷(3×10mL)和MeOH(2×10mL)一起共蒸发，进而在高真空下干燥1小时。在甲醇(40mL)中60℃加热残留物10小时，浓缩此溶液得到所需化合物粗品。用甲醇/乙醚连续沉淀得到所需化合物(418mg)。蒸发母液，并将残留物通过制备HPLC纯化(Shimadzu，10-100％B[MeOH∶H2O∶0.1％TFA]，30min，梯度，20mL/min.流速，220nm，YMC S5 ODS20×100mm)，另外得到一定量标题化合物(67.6mg)合并产率，96％；LC-MS 99％面积；LC/MS(电雾化，+离子)m/z 465(M+H).
下列化合物采用上文以及制备实施例中描述的方法制备。
实施例426-477 实施例序号 X1-R M+H正离子 实施例478-498 实施例序号 X1-R M+H正离子
实施例499-530 实施例序号X1-R M+H正离子 实施例531-554 实施例序号 X1-R M+H正离子 实施例555-583 实施例序号 X1-RM+H正离子 实施例序号 X1-R M+H正离子
权利要求
1.包括其可药用盐、其前药酯以及其所有立体异构体在内的下式结构化合物 其中R1为烷基，芳基，链烯基，炔基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，杂芳基烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基，并且这些基团可任选地被1、2或3个选自卤素、-OR8、-OC(O)R8、烷基、苯基、苯氧基、卤代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8a)C(O)(R8)、或-N(R8a)(R8a)的取代基取代；R1a为H，烷基，或环烷基；Xa为下述杂芳基 A为氧，硫，-NH-，-N-R5，或-NC(O)-R2；B为-CR5b或-N-；Z为价键或-S-；G为氧或硫；U为氧，硫，-NH-，或-N-R5b；R2为烷基，芳基，链烯基，炔基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，杂芳基，或杂芳基烷基，并且这些基团可任选地被1、2或3个选自卤素、-OR8b、-OC(O)R8b、烷基、苯基、苯氧基、卤代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8c)C(O)(R8b)、或-N(R8c)(R8b)的取代基取代；R3为H，卤素，烷基，芳基，链烯基，炔基，烷芳基，烷氧基，芳氧基或J1，并且其中的烷基、芳基、链烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、或芳氧基可以任选地被1-3个J1取代；R4和R4a相同或不同，并且独立地选自H，卤素，-CF3，烷基，或芳基；R5为H，烷基，芳基，链烯基，芳基链烯基，炔基，芳基烷基，芳基炔基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，-SO2T1，-SO2N(T1a)T1，或杂芳基烷基，并且其中的烷基、芳基、链烯基、芳基链烯基、炔基、芳基烷基、芳基炔基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、杂芳基、杂芳氧基烷基、环烷基烷氧基烷基、或杂芳基烷基可以任选地被1-3个J1独立取代；R5a和R5b相同或不同，且独立地选自H，烷基，芳基，链烯基，芳基链烯基，炔基，芳烷基，芳基炔基，环烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，杂芳基，环烷基烷氧基烷基，杂芳基烷基，或J1，并且其中的烷基、芳基、链烯基、芳基链烯基、炔基、芳烷基、芳基炔基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、杂芳基、杂芳氧基烷基、环烷基烷氧基烷基、或杂芳基烷基可以任选地被1-3个J1独立取代；Y为 其中x和y独立地为0-3，并且z为1-3；XC为价键，-N-R6a或-O-；R7和R7a相同或不同，且独立地选自H，烷基，-CF3，苯基，芳基，芳烷基，和环烷基；或者R7和R7a中的一个或二者可独立地与(Xb中的)R9和R10基团中的一个或二者连接形成1-5个碳原子的亚烷基桥；或者R7与R7a一起连接形成3-7碳原子的环；R6，R6a，R6b，R6c，R8，R8a，R8b，R8c，R8d，R8e，R8f，R8g，R8h，R8i，R8k，R8l，和R8m相同或不同，并且独立地为H，烷基，环烷基，链烯基或芳基；R8j为H，烷基，芳基，羟基或-OC(O)R8k；Xb为 R9和R10相同或不同，并且独立选自H，烷基，和取代烷基，其中的取代基可以是1-3个羟基，1-3个C1-C10-烷酰氧基；1-3个C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基，C1-C6-烷氧基羰基；或者R9与R10可一起形成-(CH2)tXd(CH2)u-，其中Xd为C(R9h)(R8j)，-O-或-N(R6b)，t和u独立地为1-3；R11为H，C1-C6烷基，-CF3，芳基烷基，或芳基，并且所述烷基和芳基基团任选被1-3个羟基，1-3个C1-C10烷酰氧基，1-3个C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基或C1-C6烷氧基羰基取代；R12和R13独立地为H，C1-C6烷基，-CF3，芳基，或卤素，并且所述烷基和芳基基团任选被1-3个羟基，1-3个C1-C10烷酰氧基，1-3个C1-C6烷氧基，或C1-C6烷氧基羰基取代；J1为硝基，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)C(O)OT1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2N(T1b)T1，-(CH2)vOT1，-(CH2)vSO2T1，-(CH2)vSO2N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)T1，-(CH2)vCH(OH)T1，杂环烷基，或杂芳基，并且v为0-5；T1，T1a和T1b相同或不同，并且独立地为H，烷基，链烯基，炔基，低级烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环烷基，或环烷基，它们中的每一个基团都可任选地被1、2或3个选自如下的基团取代卤素、羟基、-NR8FC(O)NR8gR8i、-C(O)NR8fR8g、-NR8fC(O)R8g、-CN、-N(R8f)SO2R14、-OC(O)R8f、-SO2NR8fR8g、-SOR14、-SO2R14、烷氧基、-COOH、杂环烷基、或-C(O)OR14；或者T1与T1a或T1与T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe为-C(R8m)(R81)，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，-NC(O)OR14a，-NC(O)NR14aR14b，-NC(O)R14a或-N(R6c)，其中w和z各自独立地为1-3；条件是当T1与羰基或硫连接时，如在-C(O)T1或-SO2T1情形下，它不能为氢；R14，R14a，和R14b独立地为C1-C6烷基，杂芳基，或芳基，它们各自任选被-(CH2)sOH取代，其中s为0-5；条件是，当Xa为时 (1)如果R7和R7a中的一个或二者与R9和R10中的一个或二者形成亚烷基桥，那么当R5为-(CH2)C(O)N(T1a)T1时，则T1a和T1中至少一个≠H；或(2)如果R1为芳烷基，并且R1a为H和R5为-(CH2)C(O)N(T1a)T1，则T1a或T1不能为 (3)如果R1和R7各自为2-萘基-CH2-，则R5≠苯乙基。
2.权利要求1所述的化合物，其中Xa为
3.权利要求1所述的化合物，它具有下述结构
4.权利要求1所述的化合物，它具有下式结构
5.权利要求1所述的化合物，其中R1为芳烷基，芳基烷氧基烷基，杂环烷基烷基，芳氧基烷基或杂芳基烷基。
6.权利要求1所述的化合物，其中R1a为H或烷基。
7.权利要求1所述的化合物，其中R1为芳基烷氧基烷基且R1a为H。
8.权利要求1所述的化合物，其中R6为H。
9.权利要求7所述的化合物，其中(1)Xa为 其中R5为烷基或链烯基或杂芳氧基烷基，它们各自被J1取代，并且J1为-(CH2)vOC(O)N(T1a)(T1)，-(CH2)vCN，或杂芳基；或者(2)Xa为 其中A为NH，R4和R4a都为H且R3为J1；或者(3)Xa为 其中B为-N-或CR5b；Z为价键或-S-；R5为任选被J1取代的烷基；且R5a为H，或各自被1-3个J1取代的烷基或芳烷基；R6为H。
10.权利要求1所述的化合物，其中Y为 其中x和y都为O，Xc为价键，且R7和R7a独立地为烷基。
11.权利要求1所述的化合物，其中Xb为 R9和R10相同或不同，且独立地选自H和取代烷基，其中的取代基可以是1-2个羟基。
12.权利要求1所述的化合物，其中J1为-(CH2)vCN，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，或杂芳基，且v为0-4；T1，T1a和T1b相同或不同，并且独立地选自烷基，低级烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳烷基，杂芳基烷基或杂环烷基，它们各自可任选地被-OC(O)R8f、-C(O)NR8fR8g、-(CH2)sOH(s为0-2)、-SO2NR8fR8g、或-SO2R14取代；或者T1与T1a或T1与T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe为C(R8m)(R81)；R8f为烷基或芳基。
13.具有下述结构的权利要求1所述的化合物或其可药用盐
14.具有下述结构的权利要求1所述化合物或其可药用盐
15.具有下述结构的权利要求1所述的化合物或其可药用盐
16.具有下述结构的权利要求15所述的化合物或其可药用盐
17.具有下述结构的权利要求15所述的化合物或其可药用盐
18.一种药物组合物，它包括权利要求1所述的化合物和可药用载体。
19.一种提高内源性生长激素水平的方法，该方法包括对需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
20.一种治疗肥胖症、骨质疏松、肾病、心肌病、恶病质、HIV消耗综合症、长期危象疾病、肌肉减少，和/或刺激创伤愈合和/或免疫系统，或增加肌肉质量和/肌肉强度，或维持中老年人的肌肉强度与肌肉功能，或逆转或预防中老年人体虚的方法，该方法包括对需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
21.一种治疗Syndrome X的方法，该方法包括对需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
22.一种预防和/或治疗糖尿病和/或增加消瘦身体质量的方法，该方法包括对需要质量的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
23.一种预防或治疗骨质疏松症的方法，该方法包括对需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
24.一种治疗骨质疏松症的方法，该方法包括对需要治疗的患者联合给药治疗有效量的权利要求1所述化合物与甲状旁腺激素或双膦酸酯。
25.一种治疗Syndrome X、恶病质、HIV消耗综合症、长期危象疾病、或肌肉减少，或增加肌肉质量和/或肌肉强度，或维持中老年人的肌肉强度与肌肉功能，或逆转或预防中老年人体虚的方法，该方法包括对需要治疗的患者联合给药治疗有效量的权利要求1所述化合物与雌激素、睾酮、选择性雌激素受体调节剂、或选择性雄激素受体调节剂。
全文摘要
本发明提供了可用于刺激生长激素内源性产生或释放以及用于治疗肥胖、骨质疏松(改善骨密度)和改善肌肉质量与肌肉强度的杂环芳族化合物。包括其可药用盐和其所有立体异构体在内的这些杂环芳族化合物具有结构(I),其中X
文档编号A61K31/4245GK1344160SQ00804667
公开日2002年4月10日 申请日期2000年3月2日 优先权日1999年3月12日
发明者J·罗布, J·A·蒂诺, A·S·赫尔南德兹, J·J·李, 李钧, S·G·斯瓦茨 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司