专利名称：用作类胰蛋白酶抑制剂的肽基杂环酮类化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为肽基杂环酮炎性细胞丝氨酸蛋白酶抑制剂的一系列化合物，和它们的组合物，以及预防和治疗各种免疫介导的炎性疾病、皮肤色素沉着过度、和胰蛋白酶介导的疾病的方法。更具体来说，本发明化合物是强效和选择性的类胰蛋白酶抑制剂，并因此能有效地预防和治疗与呼吸道有关的炎性疾病例如哮喘和变应性鼻炎，以及其它免疫介导的炎性疾病例如类风湿性关节炎、结膜炎、牛皮癣、炎性肠病、各种血管和皮肤病症。
背景技术：
肥大细胞是炎性反应的关键细胞组分，并且当激活时，会分泌多种促炎介质，包括组胺、花生四烯酸衍生物、和一些丝氨酸蛋白酶。其中肥大细胞丝氨酸蛋白酶是独特的羧肽酶、胃促胰酶以及类胰蛋白酶(Walls等人.Eur.J.Pharmacol.1997，328，89-97)。活性类胰蛋白酶是在结构上类似于独特的胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶，其以四聚物形式存在，其中所述四聚物被该酶贮存和分泌的肝素蛋白聚糖所稳定(Bode等人Nature 1998，392，306-311)。除了嗜中性白细胞乳铁蛋白和可能的分泌性白细胞蛋白酶抑制剂以外，类胰蛋白酶一般不受内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂例如α2-巨球蛋白、α2-蛋白酶抑制剂、抑肽酶和抗凝血酶的影响。有人提出这样的假说体内类胰蛋白酶活性可能是通过活性类胰蛋白酶四聚物离解成无活性的单体(通过除去肝素)而调控的。
类胰蛋白酶仅由肥大细胞分泌，并且占肥大细胞总蛋白的最高达25％(Schwartz等人，J.Clin.Invest.1989，84，1188-1195)。所以在组织损伤位点会分泌出高浓度的源自肥大细胞的类胰蛋白酶。在动脉粥样硬化/再狭窄斑块中的激活肥大细胞参与斑块破裂和再狭窄，并且还出现在胃肠道发炎组织中。已经在支气管肺泡灌洗液(哮喘)、眼泪(结膜炎)、水疱液(皮炎)、血液(过敏症)、脑脊髓液(多发性硬化)、滑液(类风湿性关节炎)中检测到类胰蛋白酶水平增高(Rice等人.Curr.Pharm.Design.1998，4，381-396)。还发现相对于正常动脉，病变动脉(动脉粥样硬化、再狭窄)中类胰蛋白酶水平增高了。与非吸烟者相比，一些吸烟者的支气管肺泡灌洗液中类胰蛋白酶水平增高了，这支持了肥大细胞蛋白酶可能参与导致吸烟者肺气肿中的肺破坏这一假说(Kalenderian等人.Chest 1998，94，119-123)。
强效支气管扩张神经肽、作用于血管的肠肽(VIP)和肽组氨酸蛋氨酸(PHM)在体外易于被类胰蛋白酶裂解，而P物质—一种强效支气管收缩肽则不然(Drazen等人.J.Clin.Invest.1993，91，235-243)。据证实类胰蛋白酶能够生成已知在哮喘中会引起支气管收缩的缓激肽(Zhang等人.Mediators of Inflammation.1997，6，311-317)。类胰蛋白酶在体外和体内刺激炎性嗜酸性细胞和嗜中性白细胞趋化性的能力是众所周知的(Watls等人.J.Immunol.1997，159，6216-6225)。据表明在绵羊中吸入的类胰蛋白酶会通过释放组胺而引起支气管收缩(Abraham等人.Amer.J.of Respir.and Crit.Care Med.1996，154，649-654)。其在体外和动物模型中直接刺激肥大细胞脱粒的能力表明可能存在着类胰蛋白酶介导的变态炎性反应的放大机制(Walls等人.Eur.J.Pharmacol.1997，328，89-97)。
目前已知只有胰蛋白酶和类胰蛋白酶激活蛋白酶激活受体2(PAR-2)—一种细胞表面G蛋白偶联受体。PAR-2的激活主要是引起致有丝分裂反应，这意味着类胰蛋白酶可能在组织增生、包括在慢性哮喘中发现的导气管增生所致的病症中起作用(Stone等人.FEBSLetters 1997，417，267-269)。类胰蛋白酶还对成纤维细胞有很多作用，并且有体外证据表明类胰蛋白酶可能涉及早期纤维变性疾病，例如纤维变性肺病、硬化病、动脉粥样硬化、和心肌疾病(Marone等人.Circulation 1998，97，971-978)。因此，类胰蛋白酶抑制剂可给各种炎性疾病的预防和治疗提供新的治疗途径，所述炎性疾病有例如血管损伤(动脉粥样硬化、再狭窄)、关节炎、炎性肠病、节段性回肠炎、皮炎、荨麻疹、大疱类天疱疮、牛皮癣、硬化病(schleroderma)、纤维变性、结膜炎、变应性鼻炎、以及特别是哮喘。
在发达国家，哮喘是最常见的慢性疾病。哮喘是复杂疾病，它涉及很多生化介质，有急性和慢性表现。哮喘的常见特征是气管和支气管对免疫特异性变应原和一般化学或物理刺激的过度反应的进行性发展。有人假定，哮喘支气管组织的过度反应性是由于慢性炎症反应刺激和损害上皮衬里导气管壁并促进下面组织的病理性增厚所致。支气管活组织检查研究已显示，即使是轻度哮喘患者在导气管壁中也有炎性特征。很久以前人们就认识到，肥大细胞参与哮喘发病机理，特别是暴露于变应原后立刻发生的急性反应(Zhang等人.Mediators ofInflammation 1997，6，311-317)。
采用类胰蛋白酶抑制剂来治疗人体哮喘的治疗策略最近由于选择性类胰蛋白酶抑制剂APC-366的出现而得到了证实(Tanaka等人.Am.J.Respir.Crit.Care Med.1995，152，2076-2083)。最近，对16名轻度哮喘患者进行了IIa期试验，其中是给这些患者施用无效对照剂或通过喷雾给药法施用APC-366干粉制剂(Rice等人.Curr.Pharm.Design.1998，4，381-396)。对于后期导气管过度反应，与无效对照剂相比，同一受试者在下述两个方面有统计学显著的改善即后期导气管反应(33％；ρ＝0.012)，和在一秒钟内用力呼气体积的平均最大下降(21％；ρ＝0.007)。这些正性结果证实了抑制类胰蛋白酶是治疗人体哮喘的有希望的途径。 目前，慢性哮喘的最有效治疗包括用糖皮质激素进行治疗(Barnes New Engl.J.Med.1995，332，868-875)。然而，施用糖皮质激素也会产生连续的局部和系统副作用。由于糖皮质激素的局限性，医学上需要改善哮喘治疗。与引起多种作用的药物例如甾体化合物相反，类胰蛋白酶抑制剂可能由于选择性地抑制仅属于肥大细胞的特殊炎性介体(类胰蛋白酶)而引起较少副作用。因此，在哮喘的治疗中，类胰蛋白酶抑制剂可产生类似于糖皮质激素的效力，同时没有糖皮质激素所具有的不利系统副作用。
很多年以来人们就已经开始关注皮肤着色问题。特别是，希望有统一肤色的个体一般非常关心除去色素沉着过度，例如在老年斑、雀斑或衰老皮肤中的色素沉着过度的能力。还有希望治疗的色素沉着过度疾病。我们已经证明式(I)化合物能有效地引起皮肤脱色素。式(I)化合物已得到证实能有效地引起皮肤脱色素，因此可用于治疗和/或预防皮肤色素沉着过度。
本发明化合物的另一应用是用作胰蛋白酶抑制剂。在临床上胰蛋白酶抑制剂已用于治疗一些疾病例如胰腺炎。本发明化合物的IC50值与胰腺治疗剂甲磺酸卡莫司他和萘莫司他(二者的IC50分别为1×10-8和1.3×10-8)相差很小。式(I)化合物可以与这些治疗剂以同样方式使用。
式(I)化合物还起凝血酶和Xa因子的抑制剂作用。因此，它们可用于治疗凝血酶和/或Xa因子介导的疾病例如血栓形成。
发明概述本发明涉及式(I)新化合物、和其可药用盐以及前药 其中A选自取代的C3-8环烷基羰基(其中C3-8环烷基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烷羰基(其中降冰片烷基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烯羰基(其中降冰片烯基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的金刚烷羰基(其中金刚烷基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的芳基羰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、杂芳基羰基、取代的杂芳基羰基(其中杂芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、吡啶基羰基、取代的吡啶基羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、吡咯并羰基、取代的吡咯并羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、酰氨基C1-5烷基羰基、 在其羧基末端偶联到式(I)中氮上的D或L氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、2-氮杂环丁烷羧酸、甘氨酸、吡咯-2-羧酸、脱氢脯氨酸、脯氨酸、取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、2-哌啶酸、取代的2-哌啶酸(其中2-哌啶酸基团的哌啶上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、缬氨酸、正亮氨酸、亮氨酸、叔亮氨酸、异亮氨酸、肌氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、苯基丙氨酸、1-萘丙氨酸(Lnaphthalanine)、2-萘丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1，2，3，4]-四氢异喹啉-1-羧酸和[1，2，3，4]-四氢异喹啉-2-羧酸，其中所述氨基酸的氨基末端连接在选自下述的单元上[1，2，3，4]-四氢异喹啉-1-羰基、[1，2，3，4]-四氢异喹啉-3-羰基、甲酰基、C1-4烷氧基羰基、C1-8烷基羰基、全氟C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰基、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、亚磺酰氨基、芳基磺酰基、取代的芳基磺酰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、樟脑磺酰基、C1-4烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、取代的芳基亚磺酰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、和芳基羰基；或包含两个氨基酸的多肽，其中第一个氨基酸是通过其羧基末端结合到式(I)中氮上的D或L氨基酸，并选自脯氨酸和取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、芳烷氧基、芳基或C1-4烷氧基羰基)，第二个D或L氨基酸结合在所述第一个氨基酸的氨基末端，并选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、丝氨酸、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代；R、R1和R8分别独立地选自氢和C1-5烷基；R2选自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基C2-5烷基、苯基、取代的苯基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、苄基、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中三嗪上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基、羟基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、N-脒基哌啶基C1-4烷基和4-氨基环己基C0-2烷基；R3和R4独立地选自氢、C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、C1-4烷基羰基氨基、芳基、取代的芳基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、C1-4烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-4烷基氨基磺酰基、C1-4烷基磺酰基氨基和N，N-二-C1-4烷基氨基磺酰基；R5选自氢、C1-4烷基和C1-4烷基羰基；R7选自氢、C1-4烷基、C1-4烷基羰基和芳基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)；E是选自下述基团的未取代或取代的杂环咪唑啉-2-基、咪唑-2-基、噁唑啉-2-基、噁唑-2-基、噻唑啉-2-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、1，3，4-噻二唑-2-基、1，2，4-噻二唑-3-基、1，2，4-噻二唑-5-基、异噻唑-3-基、1，2，3-三唑-4-基、1，2，3-三唑-5-基、1，2，4-三嗪-3-基、1，3，5-三嗪-2-基、四唑-5-基、异噁唑-3-基、1，2，3，4-噁三唑-5-基、1，2，3-噁二唑-4-基、1，3，4-噁二唑-2-基、1，2，4-噁二唑-3-基、1，3，4-噁二唑-2-基、2-吡唑啉-3-基、吡唑-3-基、吡嗪-2-基、哒嗪-3-基、嘧啶-2-基、1H-吲唑-3-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、4，5，6，7-四氢苯并噻唑-2-基、噌啉-3-基、酞嗪(phthalazin)-1-基、萘并[2，1-d]噻唑-2-基、萘并[1，2-d]噻唑-2-基、喹喔啉-2-基、4-氧代喹唑啉-2-基、喹唑啉-2-基、喹唑啉-4-基、嘌呤-2-基、嘌呤-8-基、蝶啶-2-基、蝶啶-6-基、噁唑并[4，5-b]吡啶-2-基、噁唑并[5，4-b]吡啶-2-基、噻唑并[4，5-b]吡啶-2-基、噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基和噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基，其中杂环上的取代基独立地选自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷氧基羰基、苯基C1-4烷基氨基羰基、芳基、或取代的芳基，其中所述芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基；条件是当A是多肽，其中第一个氨基酸是未取代的脯氨酸，且第二个氨基酸选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代时；则R2选自取代的苯基(其中取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中三嗪上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、和N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基。
本发明一个实施方案是定义如下的式(I)化合物、和其可药用盐以及前药 其中A、R、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和E如上所定义；条件是当A是包含2个氨基酸的多肽时，则R2选自取代的苯基(其中取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中三嗪上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、和N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基。
一类本发明化合物是定义如下的式(I)化合物、和其可药用盐以及前药，其中A是单取代的脯氨酸，其中取代基选自羟基、卤素或氧代；R和R1都是氢；R2是胍基C2-5烷基；且E是苯并噻唑-2-基。
本发明提供了包含可药用载体和任意上述化合物的药物组合物。本发明提供了通过将任意上述化合物与可药用载体混合而制得的药物组合物。本发明提供了制备药物组合物的方法，包含将任意上述化合物与可药用载体混合。
本发明的一个实例是治疗需要的个体中炎性疾病(优选免疫介导的炎性疾病、最优选肥大细胞介导的炎性疾病)的方法，包含给所述个体施用治疗有效量的任意上述化合物或药物组合物。
本发明的一个实例是治疗需要的个体中胰蛋白酶介导的疾病(例如胰腺炎)的方法，包含给所述个体施用治疗有效量的任意上述化合物或药物组合物。
本发明还包括任意上述化合物在制备用于治疗需要的个体中选自下述疾病的病症的药物中的应用哮喘、变应性鼻炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎、一般关节炎病症(即关节炎)、消化性溃疡、眼和春季结膜炎、炎性肠病、节段性回肠炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、荨麻疹、大疱性类天疱疮、硬化病(schleroderma)、纤维变性、皮炎、牛皮癣、血管性水肿、湿疹性皮炎、过敏症、过度增殖性皮肤病、炎性皮肤病、肝硬化、肾小球性肾炎、肾炎、血管炎症、动脉粥样硬化或再狭窄。
发明详述1.合成方法本发明化合物可依据在下述专利中详细描述的方法和参考文献所举例的方法制得US5523308、US5164371、WO 9619491和WO9748687。其它方法和参考文献描述在下述引用文献中Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 1997，Vol.7 pp.1359-1364；Joumalof Medicinal Chemistry 1996，Vol.39，pp.3039-3043；ibid.1995，Vol.38，pp.76-85；ibid.1994，Vol.37，pp.3492-3502。优选的本发明类胰蛋白酶抑制剂化合物可按照在本文中详细描述的虽然本发明所要求保护的化合物都可用作类胰蛋白酶抑制剂，但是优选的式(I)化合物包括 特别优选的″A″是C3-8环烷基羰基(其中C3-8环烷基上的取代基独立地为1-2个选自酰氨基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基的取代基)、取代的芳基羰基(其中芳基上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基的取代基)、吡啶基羰基、取代的吡啶基羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、吡咯并羰基、取代的吡咯并羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、 或者在其羧基末端偶联到式(I)中氮上的D或L氨基酸，所述氨基酸选自吡咯-2-羧酸、脱氢脯氨酸、脯氨酸、取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、苯基烷氧基、或C1-4烷氧基的取代基)、2-哌啶酸，其中所述氨基酸的氨基末端连接在选自下述的单元上C1-4烷氧基羰基、C1-8烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、亚磺酰氨基、芳基羰基、芳基磺酰基、和取代的芳基磺酰基(其中芳基上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、或全氟C1-4烷基的取代基)。
A最优选为取代的脯氨酸，其中脯氨酸上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、苯基烷氧基、或C1-4烷氧基的取代基。
特别优选的″R1″是氢和甲基；最优选为氢。
特别优选的″R2″选自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基或C1-5二烷基氨基C2-5烷基。
特别优选的″E″是选自下述未取代或取代基团的杂环咪唑-2-基、噁唑啉-2-基、噁唑-2-基、噻唑-2-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、4，5，6，7-四氢苯并噻唑-2-基、4-氧代喹唑啉-2-基、或喹唑啉-2-基，其中所述杂环上的取代基独立地为1或2个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基。2.生物学方法通过体外酶测试法测定本发明化合物抑制类胰蛋白酶和胃促胰酶介导的水解的能力。类胰蛋白酶IC50法在37℃使用微板读数器，测定在和不在抑制剂(I)存在下由于合成的产色肽底物([S]500μM N-对甲苯磺酰基-GLY-PRO-LYS-pNA；Sigma T-6140)水解所致的在405nM吸收度增加的速度。通过加入酶([E]1.0nM人肺类胰蛋白酶；Cortex BiochemCP3033)来开始酶反应。在30分钟期间内收集数据，计算最初的底物水解速度(Vo(mOD/分钟))。通过与不含抑制剂(载体)的孔比较来计算抑制作用，并使用四参数拟合后勤学模型确定IC50。胰蛋白酶IC50法使用与类胰蛋白酶法相同的方法测定对胰蛋白酶催化的水解速度的抑制。用牛1型胰蛋白酶(Sigma)和SpectrozymeTRY(Cbo-Gly-D-Ala-Arg-pNA·AcOH，American Diagnostics)以3.2U/ml胰蛋白酶和1.0mM SpectrozymeTRY浓度代替其类胰蛋白酶同等物。
表A
此外，通过使用Abraham等人.Amer.J.of Respir.and Crit.Care Med.1996，154，649-654；和Clark等人.Amer.J.of Respir.and Cfit.Care Med.1995，152，2076-2083中描述的体内绵羊模型，本领域技术人员可很容易确定出式(I)化合物作为类胰蛋白酶抑制剂治疗哮喘的用途。
在描述本发明时所用的术语是常用术语，并且是本领域技术人员已知的。然而我们定义可能具有其它含义的术语。″CBZ″是指苄氧基羰基。″BOC″是指叔丁氧基羰基，″Ts″是指甲苯磺酰基。″DCC″是指1，3-二环己基碳化二亚胺，″DMAP″是指4-N’N-二甲基氨基吡啶，″HOBT″是指1-羟基苯并三唑水合物。″丹磺酰″是指5-二甲基氨基-1-萘磺酰胺，″Fmoc″是指N-(9-芴基甲氧基羰基)。CAS#″是指化学文摘服务登记号。MS(ES)是指阳离子电子喷雾质谱，m/z是指质荷比。
式I化合物一般是直接或作为其可药用盐和前药的形式分离并使用。可药用盐的实例包括氢溴酸盐、氢碘酸盐、盐酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸氢盐、苯磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、2-萘磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己烷氨基磺酸盐、和糖酸盐。可药用前药的实例包括但不限于氨基甲酸酯、N-酰基脒、N-酰基胍、酮缩醇、和烯醇醚。
本文所用术语″个体″是指作为治疗、观察或实验对象的动物，优选哺乳动物，最优选人。
本文所用术语″治疗有效量″是指活性化合物或药物活性剂的这样的量该量能在组织系统、动物或人中引起可被研究人员、兽医师、医生或其它临床医师检查到的生物或医疗反应，包括减轻所治疗疾病或病症的症状。
除非另有说明，否则本文所用术语烷基和烷氧基无论是单独使用还是作为取代基的一部分，都包括具有1-8个碳原子、或在该范围内的任意数目碳原子的直链或支链。例如，烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基和2-甲基戊基。烷氧基是由上述直链或支链烷基形成的氧醚。环烷基包含3-8个环碳原子、优选5-7个环碳原子。类似地，链烯基和链炔基包括具有1-8个碳原子、或在该范围内的任意数目碳原子的直链或支链烯烃或炔烃。
本文所用术语″芳基″是指芳族基团例如苯基和萘基。
本文所用术语″杂芳基″代表稳定的未取代或取代的5元或6元单环芳香环系或9元或10元苯并稠合杂芳环系，它们由碳原子和1-6个(优选1-4个)选自N、O或S的杂原子构成。杂芳基可在能产生稳定结构的任意杂原子或碳原子上连接。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异噁唑基、苯并噁唑基、苯并吡唑基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、或喹啉基。
当特定基团(例如芳基、杂芳基)被取代时，该基团可具有一个或多个独立地选自所列取代基的取代基(优选1-5个、更优选1-3个、最优选1或2个取代基)。
术语″芳烷基″(例如芳C1-4烷基)是指被芳基取代的烷基(例如苄基、苯基乙基)。类似地，术语″芳烷氧基″是指被芳基取代的烷氧基(例如苄氧基)。术语″氨基烷基″是指被氨基取代的烷基(即-烷基-NH2)。术语″烷基氨基″是指被烷基取代的氨基(即-NH-烷基)。术语″二烷基氨基″是指被烷基二取代的氨基，其中烷基可相同或不同(即-N-[烷基]2)。
术语″酰氨基″是指-C(O)-NH2。N-烷基酰氨基和N，N-二烷基酰氨基分别是指-C(O)-NH-烷基和-C(O)-N(烷基)2。类似地，磺酰氨基(sulfoxamido)是指-SO2-NH2。
本文所用术语″氨基腙基″是指-C(＝NH)NH-NH2或-C(NH2)＝N-NH2，优选为-C(＝NH)NH-NH2。
本文所用术语″酰基″是指通过除去羟基而从有机酸衍生来的具有2-6个碳原子(支链或直链)的有机基团。
术语″卤素″是指卤素，并包括碘、溴、氯和氟。
术语″氧代″是指＝O。
当术语″烷基″或″芳基″或其前缀在取代基(例如芳烷基、二烷基氨基)的名称中出现时，应当理解其包括上文中给出的关于″烷基″和″芳基″的限制。碳原子的指定符号(例如C1-C6)应当独立地指烷基或环烷基部分中，或者其中出现烷基作为其前缀的较大取代基的烷基部分中的碳原子数目。
在分子中，在特定位置的任意取代基或变量的定义独立于该分子其它位置的定义。应当理解，本领域技术人员可选择本发明化合物的取代基和取代方式，以获得化学稳定并且可通过本领域已知的技术和本文所述方法方便地合成的化合物。
本文所用术语″组合物″包括含有特定量的具体组分的产品，以及由特定量的具体组分的组合直接或间接获得的任何产品。
式(I)化合物可用于治疗炎性疾病(优选免疫介导的炎性疾病、最优选肥大细胞介导的炎性疾病)。可用本发明化合物治疗的免疫介导的炎性疾病的实例包括但不限于哮喘、变应性鼻炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎、一般关节炎病症(即关节炎)、消化性溃疡、眼和春季结膜炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病(″COPD″；参见Grashoff，W.F.等人.，American Joumal ofPathology，151(6)1785-90，Dec.1997)、节段性回肠炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、硬化病、纤维变性、皮炎、牛皮癣、血管性水肿、湿疹性皮炎、过敏症、过度增殖性皮肤病、炎性皮肤病、肝硬化、肾小球性肾炎、肾炎、血管炎症、动脉粥样硬化或再狭窄。
式(I)化合物已得到证实能有效地引起皮肤脱色素，因此可用于治疗和/或预防皮肤色素沉着过度。
式(I)化合物还起凝血酶和Xa因子的抑制剂作用。因此，它们可用于治疗凝血酶和/或Xa因子介导的疾病例如血栓形成。
本发明化合物可通过任意常规途径给药，包括但不限于口服、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内、局部、吸入、栓剂、和皮肤贴剂，其中优选的途径是吸入给药。剂量可以为约0.001-约2000mg/kg/天(优选约0.001-约200mg/kg/天)与合适药物载体混合的抑制剂。剂量可以以快速浓注的方式施用，或者以约0.001-2000mg/kg/天的速度在从数分钟-几天的一段时间内施用。
有利起见，本发明化合物可以以单一日剂量的形式施用，或者总的日剂量可以分成均分剂量每天分2、3或4次给药。此外，本发明化合物可以通过局部使用合适的鼻内载体、通过吸入或通过本领域普通技术人员众所周知的经皮贴剂鼻内施用。为了以经皮递送系统形式给药，剂量给药当然应当连续进行，而不是在整个给药方案中间歇进行。
为了治疗或预防免疫介导的炎性疾病，给药式(I)化合物的最佳剂量可由本领域技术人员方便地确定，并且可能随所用的特定化合物、给药方式、制剂浓度、给药方式、和病症的进展程度而变。此外，与治疗的特定患者有关的因素，包括患者年龄、体重、饮食和给药时间会导致需要调节剂量。
可用于与式(I)化合物联合给药的治疗剂包括β-肾上腺素能激动剂(例如沙丁胺醇、特布他林、福莫特罗、非诺特罗、prenaline等)、甲基黄嘌呤(例如咖啡因、茶碱、氨茶碱、可可碱等)和皮质类固醇(例如倍氯米松、去炎松、氟尼缩松、地塞米松、氢化可的松、强的松等)。本领域普通技术人员根据其个人知识和本申请的公开内容一般能够确定出为治疗特定免疫介导的炎性疾病所应当给个体施用的各种这些治疗剂和式(I)化合物的量。当涉及联合使用的两种或更多种治疗剂时，″治疗有效量″是指能有效地产生所需生物或医疗反应的各联合治疗剂的量。例如，包含化合物1和沙丁胺醇的组合物的治疗有效量是指当一起施用时具有联合治疗有效作用的化合物1与沙丁胺醇的量。依据本发明治疗方法，药物组合的各成分可在治疗期间的不同时间分隔给药，或者以分开或单一的组合形式并行给药。因此，本发明应当理解为包括所有这样的同时或交替给药的方案，同时术语″给药″也应当这样理解。
因此，本发明治疗免疫介导的炎性疾病的方法也可以使用包含任意式(I)化合物和可药用载体的药物组合物来进行。治疗炎性细胞介导的炎性疾病的组合物包括口服、吸入、鼻内、静脉内、栓剂、缓释制剂、和局部给药制剂以及施用这样的制剂的装置。载体包括必需且惰性药物赋形剂，包括但不限于粘合剂、悬浮剂、润滑剂、矫味剂、甜料、防腐剂、染料、和包衣剂。适于口服给药的组合物包括固体剂型，例如丸剂、片剂、小胶囊、胶囊(分别包括即释、定时释放、和缓释制剂)、粒剂、和粉剂，和液体剂型，例如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂、和悬浮剂。用于局部给药的组合物包括液体剂型、乳剂、悬浮剂、凝胶剂、霜剂、软膏剂和喷雾剂。适于吸入给药的组合物包括气雾化溶液、乳液、悬浮液和干粉。用于非胃肠道给药的组合物包括无菌溶液、溶液和悬浮液。
药物组合物可用常规药物赋形剂和混合技术制得。为了制备本发明药物组合物，可依据常规药物混合技术将作为活性组分的一种或多种本发明式(I)化合物或其盐与药物载体成分紧密混合，其中根据给药例如口服或非胃肠道给药如肌内给药所需的剂型，载体可呈多种形式。口服剂型可以是酏剂、糖浆剂、胶囊、小胶囊、丸剂、片剂等。其中典型固体载体是惰性物质例如乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、甘露醇等；典型液体口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。可依据制备剂型领域技术人员已知的常规技术按照需要将所有赋形剂与崩解剂、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂等混合。非胃肠道给药剂型可用水或另一无菌载体制得。
虽然上述说明书部分描述了本发明的原理，并且为了举例说明提供了一些实例，但是应当理解，本发明的实施包括在下述及其同等形式范围内的所有通常变化、适应性改变和/或改进。
实施例1(2S，4R)-1-乙酰基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺步骤a
在5℃、氩气氛下，将苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP试剂；113.5g，0.256mol)一次性加到N-α-t-Boc-NG-(对甲苯磺酰基)-L-精氨酸(Boc-Arg(Ts)-OH；100g，0.233mol)、N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(34.2g，0.350mol)、三乙胺(97mL，0.696mol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(2.5L)内的搅拌溶液中。用1小时将该反应混合物缓慢地温热至室温，经由硅藻土过滤，并在60℃真空浓缩。将该残余物溶于二氯甲烷(1L)中，依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液(2×)、1N HCl(2×)、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了浓稠的糖浆状物。在室温用16小时将该糖浆状物从乙酸乙酯(300mL)中重结晶。通过过滤分离出所得白色固体，依次用冷的乙酸乙酯和乙醚洗涤，并真空干燥，获得了1a(DiMaio等人.Joumal of Medicinal Chemistry 1992，35，3331)。
步骤b 在78℃、氩气氛下，以保持反应混合物的温度低于-64℃的速度将2.5M正丁基锂的己烷溶液(135mL，338mmol)滴加到苯并噻唑(56.8g，420mmol)在无水四氢呋喃(600mL)内的搅拌溶液中。加入完成后，将该反应混合物在-70℃搅拌30分钟，然后以保持反应混合物的温度低于-70℃的速度加入1a(20.0g，42.4mmol)在无水四氢呋喃(500mL)中的溶液。用2小时将所得混合物缓慢地温热至室温，然后用饱和氯化铵水溶液(250mL)使反应中止。分离出所得有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。用己烷将残余物研制3次，通过硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷(3∶2)洗脱，获得了1b，为琥珀色固体。
步骤c 在-30℃、氩气氛下，将NaBH4(3.7g，0.097mol)分批加到1b(17.8g，0.033mmol)在无水甲醇(165mL)内的搅拌溶液中。3小时后，用丙酮(30mL)处理该反应混合物，并真空浓缩。将残余物溶于二氯甲烷中，依次用10％柠檬酸水溶液、水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了1c，为黄色固体。
步骤d 用三氟乙酸/二氯甲烷(1∶1 v/v；50mL)处理中间体1c(1.0g，1.8mmol)，并在室温搅拌2小时。将该反应混合物真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，并用盐水和10％碳酸钠水溶液的1∶1混合物(v/v)萃取。再用盐水萃取一次有机层，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了1d，为黄色固体。
步骤e 将中间体1d(12.12g，0.027mol)、反式-1-乙酰基-4-苄氧基-L-脯氨酸(7.13g，0.027mol；Bioorganic and MedicinalChemistry Letters 1996，Vol.6，pp.2225-2230)和1-羟基苯并三唑水合物(HOBT；9.16g，0.068mol)合并，并溶于N，N-二甲基甲酰胺(270mL)中。向该溶液中加入1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC；13.99g，0.068mol)，将该反应在氩气氛下于室温搅拌18小时。过滤该反应混合物，用水(约800mL)稀释滤液，用乙酸乙酯(3×)萃取，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化该残余物，用二氯甲烷/甲醇(19∶1)洗脱，获得了1d，为白色固体。
步骤f 在室温、氩气氛下，将Dess-Martin periodinane(18.7g，0.044mol)加到1d(14.9g，0.022mol)在二氯甲烷(220mL)内的溶液中，并搅拌1小时。用在饱和碳酸氢钠水溶液中含有20％Na2S2O3(w/w)的溶液处理该反应混合物，并将该混合物在室温搅拌2小时。分离出有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了1e，为白色固体。
步骤g 化合物1在塔夫纶反应器中，将中间体1e溶于无水茴香醚(约12mL)，置于HF装置上放置并冷却至-78℃。将无水HF(约38mL)凝结到该反应容器中，并将该反应温热至0℃。将该反应在0℃搅拌6小时，真空浓缩，并用乙醚(3×)研制，获得了白色固体。在Bondapak C-18柱(40×300mm；15-20μ)上通过反相HPLC纯化该固体，用水/乙腈/三氟乙酸(90∶10∶0.2-70∶30∶0.2)以40mL/分钟的速度梯度洗脱60分钟。合并含有后来洗脱下来的非对映异构体的级分，并冷冻干燥，获得了1，为三氟乙酸盐；MS(ES)m/z 447(MH+)。
实施例2(2S，4R)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺 化合物2化合物2是按照与实施例1相同的方法制得的，不同之处在于，在反相HPLC纯化期间收集L-和D-精氨酸差向异构体，以获得1.1∶1的差向异构体混合物。将2的三氟乙酸盐溶于0.1N盐酸水溶液中并真空浓缩3次来转化成其盐酸盐。将所得玻璃状物溶于水中，并冷冻干燥，获得了2的盐酸盐，为浅黄色固体；MS(ES)m/z 447(MH+)。
实施例3顺式-2-乙酰基氨基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-环戊烷甲酰胺步骤a 在0℃、氩气氛下，将苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP试剂；25.0g，56mmol)一次性加到N-α-t-Boc-NG-(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰基)-L-精氨酸(Boc-Arg(Mtr)-OH；24.96g，51.3mmol)、N，O二甲基羟基胺盐酸盐(7.6g，56mmol)、三乙胺(22mL，154mmol)在无水N，N二甲基甲酰胺(100mL)内的搅拌溶液中。用2小时将该反应混合物缓慢地升至室温，经由硅藻土过滤，并真空浓缩。将所得残余物溶于乙酸乙酯中，用水(3×)、1M KHSO4水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化该残余物，用乙酸乙酯/二氯甲烷(3∶1)洗脱，获得了3a，为白色固体(参见WO 9630396，实施例2)。
步骤b
在-78℃、氩气氛下，以保持反应混合物的温度低于-64℃的速度将2.5M正丁基锂的己烷溶液(164mL，410mmol)滴加到苯并噻唑(69.2g，512mmol)在无水四氢呋喃(1000mL)内的搅拌溶液中。加入完成后，将该反应混合物在-70℃搅拌30分钟，然后以保持反应混合物的温度低于-70℃的速度加入3a(27.11g，51.2mmol)在无水四氢呋喃(200mL)中的溶液。将该反应搅拌15分钟，用饱和氯化铵水溶液(500mL)处理，并在室温搅拌16小时。分离出所得有机层，用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。用己烷(3×)研制该浓稠的糖浆状残余物，通过硅胶色谱纯化，用二氯甲烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脱，获得了3b，为浅黄色固体。
步骤c 在0℃、氩气氛下，将NaBH4(4.9g，129mmol)分批加到3b(15.0g，27.4mmol)在无水甲醇(200mL)内的搅拌溶液中。用1小时将该反应混合物缓慢地温热至室温，用丙酮(30mL)处理，并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯中，用水(2×)、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了3c，为黄色固体。
步骤d
在室温将对甲苯磺酸一水合物(TsOH·H2O)加到3c(1.0g，1.8mmol)在二氯甲烷内的溶液中直至该溶液饱和。将该反应在室温搅拌6小时，用乙酸乙酯稀释，用盐水和10％碳酸钠水溶液的1∶1混合物(v/v)萃取两次，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了3d，为黄色固体。
步骤e 在5℃、氩气氛以及搅拌下，向(±)-顺式-2-氨基-1-环己烷甲酸(2.11g，12.1mmol)在无水甲醇(25mL)和2，2-二甲氧基丙烷(6.1mL，49.6mmol)内的浆液中加入4M HCl在1，4-二氧杂环己烷中的溶液(6.1mL，24.2mmol)。加入完成后，将所得溶液温热至室温，搅拌18小时，真空浓缩，用乙醚研制，获得了3e，为白色固体。
步骤f 将化合物3e(850mg，4.7mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冷却至5℃，并用三乙胺(1.4mL，10mmol)处理。在5℃用5分钟滴加在二氯甲烷(10mL)中的乙酰氯(370μL，5.2mmol)。2小时后，将该反应混合物真空浓缩，将残余物部分溶于乙酸乙酯中，并经由硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，把残余物溶于四氢呋喃(25mL)中，并用LiOH(294mg，7mmol)的水(25mL)溶液稀释。将该反应混合物在室温搅拌3小时，用1N盐酸水溶液酸化至pH 2-3，用盐水(50mL)稀释，并分离各层。用四氢呋喃萃取水层(2×)，合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，获得了3f，为白色固体。
步骤g 在室温、氩气氛以及搅拌下，将3d(910mg，1.8mmol)、3f(308mg，1.8mmol)、和1-羟基苯并三唑水合物(HOBt·H2O；243mg，1.8mmol)在乙腈(50mL)中的溶液用1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC；825mg，4mmol)处理。16小时后，用水(50mL)中止该反应，搅拌1小时，经由硅藻土过滤，并真空浓缩。用乙酸乙酯(50mL)将残余物提取2次，依次用1M KHSO4水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用CH2Cl2/MeOH(39∶1)-CH2Cl2/MeOH(19∶1)进行梯度洗脱，获得了3g，为白色泡沫状物。
步骤h 在室温、氩气氛下，将Dess-Martin periodinane(630mg，1.43mmol)加到3g(630mg，0.96mmol)在二氯甲烷(20mL)内的溶液中，并搅拌60分钟。用在饱和碳酸氢钠水溶液中含有20％Na2S2O3(w/w)的溶液处理该反应混合物，并将该混合物在室温搅拌2小时。分离出有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用CH2Cl2/MeOH(39∶1)洗脱，获得了3h，为白色固体。
步骤i 化合物3将3h(480mg，0.73mmol)在三氟乙酸(10mL)中的溶液于室温6小时。将该反应混合物真空浓缩，并用乙醚(3×)研制，获得了白色固体。在Bondapak C-18柱(40×300mm；15-20μ)上通过反相HPLC纯化该固体，用水/乙腈/三氟乙酸(90∶10∶0.2-70∶30∶0.2)以40mL/分钟的速度梯度洗脱60分钟。合并含有两种精氨酸差向异构体的级分，冷冻干燥，获得了3，为三氟乙酸盐；MS(ES)m/z 445(MH+)。
实施例4(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-氧代-2-吡咯烷甲酰胺步骤a 在0℃、氩气氛以及搅拌下，将乙酰氯(3.3mL，46mmol)滴加到反式-4-苄氧基-L-脯氨酸盐酸盐(H-Hyp(OBzl)-OMe·HCl；12.5g，46mmol)、三乙胺(6.4mL，46mmol)在吡啶(150mL)内的溶液中。将该反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后用16小时缓慢地温热至室温。将该混合物真空浓缩，用二氯甲烷稀释，用1N盐酸(3×)、10％碳酸钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用乙酸乙酯/己烷(3∶2)洗脱，获得了Ac-Hyp(OBzl)-OMe，为油状物。
将该油状物溶于四氢呋喃(458mL)中，冷却至0℃，向其中滴加0.2M LiOH水溶液(458mL，92mmol)进行处理，并搅拌30分钟。将该反应混合物真空浓缩，用1N盐酸水溶液酸化，并用乙酸乙酯(3×)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了Ac-Hyp(OBzl)-OH，为白色固体。
将Ac-Hyp(OBzl)-OH(720mg，2.7mmol)在MeOH(27mL)中的溶液与10％Pd/C(72mg)合并，并在Parr氢化装置上于50psig H2压力下放置16小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，并真空浓缩，获得了4a，为固体。
步骤b 将4a(230mg，1.32mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBT；180mg，1.32mmol)、N，N-二甲基甲酰胺(50mL)的溶液用1，3二环己基碳化二亚胺(DCC；620mg，3.0mmol)处理，并将该反应混合物在氩气氛下搅拌16小时。用水(150mL)稀释该反应，搅拌1小时，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并有机层，依次用水(3×)、1M KHSO4水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用CH2Cl2/MeOH(19∶1)洗脱，获得了4b，为白色固体。
步骤c 在室温、氩气氛以及搅拌下，将Dess-Martin periodinane(373mg，0.88mmol)加到4b(280mg，0.42mmol)在二氯甲烷(20mL)内的溶液中。30分钟后，用在饱和碳酸氢钠水溶液中含有20％Na2S2O3(w/w)的溶液处理该反应混合物，并将该混合物在室温搅拌2小时。分离出有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用CH2Cl2/MeOH(39∶1)洗脱，获得了4c，为白色固体。 化合物4按照制备化合物3的步骤i中所述的方法将化合物4c脱保护，并通过反相HPLC纯化，获得了化合物4；MS(ES)m/z 445(MH+)。
实施例5(2S，4R)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-1-甲磺酰基-2-吡咯烷甲酰胺步骤a 在0℃、氩气氛以及搅拌下，将甲磺酰氯(584μL，7.54mmo1)滴加到3e(2.05g，7.54mmol)、三乙胺(4.0mL，29mmol)在二氯甲烷(50mL)内的溶液中。将该反应在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌16小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，依次用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并真空浓缩，获得了油状物。加入四氢呋喃(50mL)，然后加入LiOH(474mg，11.3mmol)的水(50mL)溶液。将该反应搅拌60分钟，真空浓缩，用1N盐酸水溶液酸化，并用二氯甲烷(3×)萃取。将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)，并真空浓缩，获得了5a，为白色固体。
步骤b 将5a(539mg，1.8mmol)、1d(806mg，1.8mmol)、HOBt(240mg，1.8mmol)在乙腈(50mL)中的混合物用1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC；900mg，3.6mmol)处理，将该反应在室温搅拌16小时。用水中止该反应，搅拌1小时，并用乙酸乙酯(3×)萃取。将合并的有机萃取液用水(3×)、1M KHSO4水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水提取，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用CH2Cl2/MeOH(19∶1)洗脱，获得了5b，为白色固体。 化合物5按照类似于实施例1所述的方法，将化合物5b转化成化合物5，不同之处在于，收集两种精氨酸差向异构体并合并，获得了化合物5；MS(ES)m/z 483(MH+)。
实施例6(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-甲磺酰基-2-吡咯烷甲酰胺步骤a 在0℃、氩气氛以及搅拌下，将甲磺酰氯(953μL，12.3mmol)滴加到L-脯氨酸叔丁酯(2.11g，12.3mmol)、三乙胺(3.4mL，24.6mmol)在二氯甲烷(50mL)内的溶液中。将该反应在0℃搅拌30分钟，经由硅藻土过滤，依次用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并真空浓缩。将残余物溶于三氟乙酸/CH2Cl2(1∶1)溶液中，在室温搅拌30分钟，并真空浓缩。用己烷(3×)研制残余物，真空浓缩，获得了6a。
步骤b 化合物6按照类似于实施例1所述的方法由6a制得了化合物6；MS(ES)m/z 467(MH+)。
实施例7(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-2-吡咯烷甲酰胺 化合物7按照类似于实施例3所述的方法，由N-甲苯磺酰基-L-脯氨酸制得了化合物7；MS(ES)m/z 543(MH+)。
实施例8(2S)-反式-3-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3-氮杂二环(3.1.0)己烷-2-甲酰胺 化合物8按照类似于实施例3所述的方法，由反式-3-氮杂二环(3.1.0)己烷-2-甲酸制得了化合物8；MS(ES)m/z 443(MH+)。
实施例9(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2，3-二氢-1H-吲哚-2-甲酰胺 化合物9按照类似于实施例1所述的方法，不同之处在于，在反相HPLC纯化期间收集L-和D-精氨酸差向异构体，由八氢吲哚-2-甲酸制得了化合物9；MS(ES)m/z 485(MH+)。
实施例10(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-(2-甲基-1-氧代丙基)-2-吡咯烷甲酰胺 化合物10按照类似于实施例3所述的方法，由L-脯氨酸甲酯和氯甲酸异丙酯制得了化合物10；MS(ES)m/z 433(MH+)。
实施例11(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-吡咯烷二甲酰胺，1-甲酯在公开时丢失实施例14(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-哌啶甲酰胺 化合物14按照类似于实施例1所述的方法，由N-乙酰基-L-高脯氨酸制备化合物14，不同之处在于，收集两种精氨酸差向异构体，并合并，获得了化合物14；MS(ES)m/z 445(MH+)。
实施例15(3S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3-哌啶甲酰胺 化合物15按照类似于实施例3所述的方法，由(R)-3-哌啶甲酸乙酯(CAS#25137-01-3)制得了化合物15；MS(ES)m/z 445(MH+)。
实施例16N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-环己烷二甲酰胺 化合物16按照类似于实施例3所述的方法，由2-(氨基羰基)环己烷甲酸制得了化合物16；MS(ES)m/z 445(MH+)。
实施例174-乙酰氨基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]环己烷甲酰胺
化合物17按照类似于实施例3所述的方法，由4-氨基环己烷甲酸(CAS#1776-53-0)制得了化合物17；MS(ES)m/z 459(MH+)。
实施例18(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-吡咯烷甲酰胺 化合物18按照类似于实施例3所述的方法，由N-乙酰基-L-脯氨酸制得了化合物18；MS(ES)m/z 431(MH+)。
实施例19(S)-3-乙酰氨基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-氧代-1-哌啶乙酰胺 化合物19按照类似于实施例3所述的方法，由(S)-3-氨基-2-氧代-1-哌啶乙酸(CAS#7441 1-98-6；参见US 4192875)制得了化合物19；MS(ES)m/z 488(MH+)。
实施例201-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-哌啶乙酰胺 化合物20按照类似于实施例3所述的方法，由4-哌啶乙酸(CAS# 51052-78-9)制得了化合物20；MS(ES)m/z 459(MH+)。
实施例212-(乙酰基甲基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺 化合物21按照类似于实施例3所述的方法，由N-乙酰基肌氨酸制得了化合物21；MS(ES)m/z 405(MH+)。
实施例222-(乙酰基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺
化合物22按照类似于实施例3所述的方法，由N-乙酰基甘氨酸制得了化合物22；MS(ES)m/z 391(MH+)。
实施例23N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]丁二酰胺 化合物23按照类似于实施例3所述的方法，由琥珀酰胺酸制得了化合物23；MS(ES)m/z 391(MH+)。
实施例24(2S，4R)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺 化合物24按照类似于实施例1所述的方法，由反式-1-乙酰基-4-苄氧基-L-脯氨酸制备化合物24，不同之处在于，使用噻唑来代替苯并噻唑，并在反相HPLC纯化期间收集L-和D-精氨酸差向异构体；MS(ES)m/z397(MH+)。
实施例25(2S，4R)-1-乙酰基-N-[1-(2-苯并噻唑基羰基)-5-(甲基氨基)戊基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺 化合物25按照类似于实施例1所述的方法，由反式-1-乙酰基-4-苄氧基-L-脯氨酸制备化合物24，不同之处在于，使用N-α-t-Boc-N-ε-(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰基)-L-赖氨酸(Boc-Lys(Mtr)-OH)来代替N-α-t-Boc-NG-(对甲苯磺酰基)-L-精氨酸(Boc-Arg(Ts)-OH)，并在反相HPLc纯化期间收集L-和D-精氨酸差向异构体；MS(ES)m/z397(MH+)。
实施例26N-(1-氧代-2-丙基戊基)-L-α-天冬氨酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺，甲酯 化合物26按照类似于实施例1所述的方法，由4-甲基-N-(1-氧代-2-丙基戊基)-L-α-天冬氨酰基-L-脯氨酸(CAS#151275-35-3；参见WO9315756)制得了化合物26；MS(ES)m/z 644(MH+)。
实施例27N-(羧基甲基)-3-环己基-D-丙氨酰基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)
氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺 化合物27通过用于制备相应L-差向异构体，N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-L-苯基丙氨酸的方法(CAS#166108-57-2；参见Biomed.Pept.，Proteins Nucleic Acids 1994，Vol.1(1)，pp.51-56)制备N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-D-苯基丙氨酸。按照类似于实施例1的方法将N-[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-D-苯基丙氨酸转化成化合物27；MS(ES)m/z 600(MH+)。
实施例28(3S)-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]六氢-2-氧代-3-[[(苯基甲基)磺酰基]氨基]-1H-氮杂-1-乙酰胺 化合物28按照类似于实施例1所述的方法，由(3S)-六氢-2-氧代-3-[[(苯基甲基)磺酰基]氨基]-1H-氮杂-1-乙酸，(9CI)(CAS# 174960-90-8；参见WO 9535311)制得了化合物28；MS(ES)m/z 614(MH+)。
实施例29
步骤a 化合物29a将O-叔丁基-L-丝氨酸(2.0g，11.7mmol)、三乙胺(5.2mL，37.3mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液冷却至0℃，同时在氩气氛下搅拌。加入1-萘磺酰氯(4.0g，17.6mmol)，用18小时将该反应缓慢地温热至室温，用1N盐酸水溶液(3×)、盐水提取，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化该残余物，用乙酸乙酯/己烷/乙酸(60∶40∶1)洗脱，获得了29a。
步骤b 化合物29b在室温、氩气氛以及搅拌下，将29a(3.93g，11.1mmol)、L-脯氨酸苄酯盐酸盐(4.02g，16.6mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBT；2.24g，16.6mmol)和三乙胺(5.0mL，35.9mmol)在乙腈(50mL)中的混合物用1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC；4.60g，22.2mmol)处理。18小时后，将该反应混合物经由硅藻土过滤，并真空浓缩。将残余物在水与乙酸乙酯之间分配。用乙酸乙酯(3×)萃取水层。合并有机萃取液，用饱和碳酸氢钠水溶液(3×)、盐水提取，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化残余物，用己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脱，获得了29b。
步骤cN-(1-萘基磺酰基)-L丝氨酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-
(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺 化合物29按照类似于实施例1所述的方法，由29b制得了化合物29；MS(ES)m/z 666(MH+)。
实施例30N-甲基-D-苯基丙氨酰基-N-[(2S)-[1-(氨基亚氨基甲基)-3-哌啶基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)乙基]-L-脯氨酰胺 化合物30a按照用于制备(S)-[1-[[1-[亚氨基[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺酰基]氨基]甲基]-4-哌啶基]甲基]-2-(甲氧基甲基氨基)-2-氧代乙基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯的方法(CAS#201007-52-5；参见WO 9748687，实施例7)，用甲苯磺酰氯代替Mtr氯，制得了化合物30a。
化合物30按照类似于US 523308实施例7所述的方法，由化合物30a制得了化合物30；MS(ES)m/z 590(MH+)。
实施例31(S)-N-甲基-D-苯基丙氨酰基-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-L-脯氨酰胺 化合物31按照类似于US 523308实施例57所述的方法，由N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-[亚氨基[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺酰基]氨基]甲基]苯基丙氨酸(CAS#174894-05-4；参见WO 9535312)制得了化合物31；MS(ES)m/z 583(MH+)。
实施例32(S)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-α-(乙酰基氨基)环己烷丙酰胺 化合物32按照类似于实施例3所述的方法，由N-乙酰基-L-环己基丙氨酸制得了化合物32；MS(ES)m/z 487(MH+)。
实施例33(S)-2-(乙酰基氨基)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-3-甲基丁酰胺 化合物33按照类似于实施例3所述的方法制备化合物33，由N-乙酰基-L-缬氨酸制得了化合物33；MS(ES)m/z 433(MH+)。
实施例34(2S)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-1-苯甲酰基-2-吡咯烷甲酰胺 化合物34按照类似于实施例3所述的方法制得了化合物34；MS(ES)m/z493(MH+)。
实施例35N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-2-吡啶甲酰胺步骤a 将3b(5.00g，8.28mmol)在最小量二氯甲烷中的溶液用对甲苯磺酸一水合物(TsOH·H2O；3.93g，20.7mmol)处理。再加入二氯甲烷直至形成完全溶液。将所得溶液在氮气氛下于室温搅拌16小时。将该反应浓缩至约5mL，并立即用于步骤b。
步骤b 化合物35b在室温、氮气氛以及搅拌下，将2-吡啶甲酸(2.04g，16.6mmol)与1-羟基苯并三唑(HOBT；4.48g，33.1mmol)在无水乙腈(20mL)中的溶液用1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC；10.25g，49.7mmol)处理。15分钟后，加入35a的二氯甲烷溶液，并将所得混合物搅拌18小时。用水(300mL)中止该反应，搅拌1小时，经由硅藻土过滤，并真空浓缩。用乙酸乙酯(2×)萃取所得水层。合并有机萃取液，用1M KHSO4提取，与饱和碳酸氢钠水溶液合并，并在室温搅拌2小时。分离各层，将有机萃取层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，获得了35b。
步骤c 化合物35按照实施例3所述的方法将35b脱保护和纯化，制得了化合物35；MS(ES)m/z 494(MH+)。
实施例36(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-吡咯烷二甲酰胺，1-N，N-二甲基酰胺 化合物36按照类似于实施例3所述的方法，由L-脯氨酸甲酯和二甲基酰氨氯制得了化合物36。
实施例37(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3，4-去氢-2-吡咯烷甲酰胺 化合物37按照类似于实施例3所述的方法，由3，4-去氢-L-脯氨酸甲酯制得了化合物37；MS(ES)m/z 429(MH+)。
实施例382-(乙酰基环己基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺 化合物38按照类似于实施例3所述的方法，由环己基甘氨酸(CAS#58695-41-3；参见EP 187130)制得了化合物38；MS(ES)m/z 473(MH+)。
虽然上述说明书部分描述了本发明的原理，并且为了举例说明提供了一些实施例，但是应当理解，本发明的实施包括在下述书及其同等形式范围内的所有通常变化、适应性改变和/或修饰。
权利要求
1.式(I)化合物、和其可药用盐以及前药 其中A选自取代的C3-8环烷基羰基(其中C3-8环烷基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烷羰基(其中降冰片烷基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烯羰基(其中降冰片烯基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的金刚烷羰基(其中金刚烷基团上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的芳基羰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、杂芳基羰基、取代的杂芳基羰基(其中杂芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、酰氨基C1-5烷基羰基、 在其羧基末端偶联到式(I)中氮上的D或L氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、2-氮杂环丁烷羧酸、甘氨酸、吡咯-2-羧酸、脱氢脯氨酸、脯氨酸、取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、2-哌啶酸、取代的2-哌啶酸(其中2-哌啶酸基团的哌啶上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、缬氨酸、正亮氨酸、亮氨酸、叔亮氨酸、异亮氨酸、肌氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、苯基丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1，2，3，4]-四氢异喹啉-1-羧酸和[1，2，3，4]-四氢异喹啉-2-羧酸，其中所述氨基酸的氨基末端连接在选自下述的单元上[1，2，3，4]-四氢异喹啉-1-羰基、[1，2，3，4]-四氢异喹啉-3-羰基、甲酰基、C1-4烷氧基羰基、C1-8烷基羰基、全氟C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰基、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、亚磺酰氨基、芳基磺酰基、取代的芳基磺酰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、樟脑磺酰基、C1-4烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、取代的芳基亚磺酰基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、和芳基羰基；或包含两个氨基酸的多肽，其中第一个氨基酸是通过其羧基末端结合到式(I)中氮上的D或L氨基酸，并选自脯氨酸和取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、芳烷氧基、芳基或C1-4烷氧基羰基)，第二个D或L氨基酸结合在所述第一个氨基酸的氨基末端，并选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、丝氨酸、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代；R、R1和R8分别独立地选自氢和C1-5烷基；R2选自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基C2-5烷基、苯基、取代的苯基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、苄基、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中三嗪上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基、羟基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、N-脒基哌啶基C1-4烷基和4-氨基环己基C0-2烷基；R3和R4独立地选自氢、C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、C1-4烷基羰基氨基、芳基、取代的芳基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、C1-4烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-4烷基氨基磺酰基、C1-4烷基磺酰基氨基和N，N-二-C1-4烷基氨基磺酰基；R5选自氢、C1-4烷基和C1-4烷基羰基；R7选自氢、C1-4烷基、C1-4烷基羰基和芳基(其中芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)；E是选自下述基团的未取代或取代的杂环咪唑啉-2-基、咪唑-2-基、噁唑啉-2-基、噁唑-2-基、噻唑啉-2-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、1，3，4-噻二唑-2-基、1，2，4-噻二唑-3-基、1，2，4-噻二唑-5-基、异噻唑-3-基、1，2，3-三唑-4-基、1，2，3-三唑-5-基、1，2，4-三嗪-3-基、1，3，5-三嗪-2-基、四唑-5-基、异噁唑-3-基、1，2，3，4-噁三唑-5-基、1，2，3-噁二唑-4-基、1，3，4-噁二唑-2-基、1，2，4-噁二唑-3-基、1，3，4-噁二唑-2-基、2-吡唑啉-3-基、吡唑-3-基、吡嗪-2-基、哒嗪-3-基、嘧啶-2-基、1H-吲唑-3-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、4，5，6，7-四氢苯并噻唑-2-基、噌啉-3-基、酞嗪-1-基、萘并[2，1-d]噻唑-2-基、萘并[1，2-d]噻唑-2-基、喹喔啉-2-基、4-氧代喹唑啉-2-基、喹唑啉-2-基、喹唑啉-4-基、嘌呤-2-基、嘌呤-8-基、蝶啶-2-基、蝶啶-6-基、噁唑并[4，5-b]吡啶-2-基、噁唑并[5，4-b]吡啶-2-基、噻唑并[4，5-b]吡啶-2-基、噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基和噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基，其中杂环上的取代基独立地选自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷氧基羰基、苯基C1-4烷基氨基羰基、芳基、或取代的芳基，其中所述芳基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基；条件是当A是多肽，其中第一个氨基酸是未取代的脯氨酸，且第二个氨基酸选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基上的取代基独立地选自一个或多个C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代时；则R2选自取代的苯基(其中取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个脒基、肼基、氨基腙基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中三嗪上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、和N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基。
2.权利要求1的化合物、和其可药用盐以及前药其中A选自取代的C3-8环烷基羰基(其中C3-8环烷基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烷羰基(其中降冰片烷基团上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的降冰片烯羰基(其中降冰片烯基团上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的金刚烷羰基(其中金刚烷基团上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、取代的芳基羰基(其中芳基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、酰氨基C1-5烷基羰基、吡啶基羰基、取代的吡啶基羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、吡咯并羰基、取代的吡咯并羰基(其中吡啶环上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基)、 在其羧基末端偶联到式(I)中氮上的D或L氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、2-氮杂环丁烷羧酸、甘氨酸、吡咯-2-羧酸、脱氢脯氨酸、脯氨酸、取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、2-哌啶酸、取代的2-哌啶酸(其中2-哌啶酸基团的哌啶上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)、缬氨酸、正亮氨酸、亮氨酸、叔亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1，2，3，4]-四氢异喹啉-1-羧酸和[1，2，3，4]-四氢异喹啉-2-羧酸，其中所述氨基酸的氨基末端连接在选自下述的单元上甲酰基、C1-4烷氧基羰基、C1-8烷基羰基、全氟C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰基、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、亚磺酰氨基、芳基磺酰基、取代的芳基磺酰基(其中芳基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、或C1-4烷氧基羰基)、和芳基羰基；或包含两个氨基酸的多肽，其中第一个氨基酸是通过其羧基末端结合到式(I)中氮上的D或L氨基酸，并选自脯氨酸和取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷基羰基氧基、苯基烷氧基、苯基或C1-4烷氧基羰基)，第二个D或L氨基酸结合在所述第一个氨基酸的氨基末端，并选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、丝氨酸、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代；R是氢；且R2选自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基C2-5烷基、苯基、取代的苯基(其中取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、苄基、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基、羟基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、N-脒基哌啶基C1-4烷基和4-氨基环己基C0-2烷基；条件是当A是多肽，其中第一个氨基酸是未取代的脯氨酸，且第二个氨基酸选自天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷基酯、苯基丙氨酸、取代的苯基丙氨酸(其中苯基上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基)、环己基甘氨酸、和环己基丙氨酸，其中所述第二个氨基酸的氨基末端被选自C1-6烷基、羧基C1-8烷基、和C1-10烷基羰基的单元单取代时；则R2选自取代的苯基(其中取代基独立地为1-3个选自脒基、肼基、氨基腙基的取代基)、取代的苄基(其中苄基上的取代基独立地为1-3个选自脒基、肼基、氨基腙基的取代基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中吡啶上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中嘧啶上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑并C1-4烷基、取代的咪唑并C1-4烷基(其中咪唑上的取代基独立地为1-3个选自下述基团的取代基氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、咪唑啉基C1-4烷基、和N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基。
3.权利要求2的化合物、和其可药用盐以及前药，其中A选自取代的C3-8环烷基羰基(其中C3-8环烷基上的取代基独立地为1-2个选自酰氨基、C1-4烷基羰基氨基或C1-4烷氧基羰基的取代基)、取代的芳基羰基(其中芳基上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基的取代基)、 或者在其羧基末端偶联到式(I)中氮上的D或L氨基酸，所述氨基酸选自吡咯-2-羧酸、脱氢脯氨酸、脯氨酸、取代的脯氨酸(其中脯氨酸上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、羟基、氧代、卤素、酰氨基、苯基烷氧基、或C1-4烷氧基的取代基)、2-哌啶酸，其中所述氨基酸的氨基末端连接在选自下述的单元上C1-4烷氧基羰基、C1-8烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、亚磺酰氨基、芳基羰基、芳基磺酰基、和取代的芳基磺酰基(其中芳基上的取代基独立地为1-2个选自C1-4烷基、或全氟C1-4烷基的取代基)；R1选自氢和甲基；R2选自氨基C2-5烷基或胍基C2-5烷基；R8是氢；且E是选自下述未取代或取代的杂环咪唑-2-基、噁唑啉-2-基、噁唑-2-基、噻唑-2-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、4，5，6，7-四氢苯并噻唑-2-基、4-氧代喹唑啉-2-基、或喹唑啉-2-基，其中所述杂环上的取代基独立地为1或2个选自下述基团的取代基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰氨基、N-C1-4烷基酰氨基、N，N-C1-4二烷基酰氨基、羧基或C1-4烷氧基羰基。
4.权利要求3的化合物、和其可药用盐以及前药，其中A选自脯氨酸和取代的脯氨酸(其中取代基是1或2个独立地选自羟基、卤素或氧代的取代基)；R2选自氨基C2-5烷基、和胍基C2-5烷基；且E是选自下述基团的未取代杂环咪唑-2-基、噁唑-2-基、噻唑-2-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基或苯并噻唑-2-基。
5.权利要求4的化合物、和其可药用盐以及前药，其中A是单取代的脯氨酸，其中取代基选自羟基、卤素或氧代；R1是氢；R2是胍基C2-5烷基；且E是苯并噻唑-2-基。
6.选自下述的化合物(2S，4R)-1-乙酰基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺；(2S，4R)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺；顺式-2-乙酰基氨基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-环戊烷甲酰胺；(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-氧代-2-吡咯烷甲酰胺；(2S，4R)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-1-甲磺酰基-2-吡咯烷甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-甲磺酰基-2-吡咯烷甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-2-吡咯烷甲酰胺；(2S)-反式-3-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3-氮杂二环(3.1.0)己烷-2-甲酰胺；(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2，3-二氢-1H-吲哚-2-甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1-(2-甲基-1-氧代丙基)-2-吡咯烷甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-吡咯烷二甲酰胺，1-甲酯；(3S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3-吡咯烷甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-氮杂环丁烷甲酰胺；(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-哌啶甲酰胺；(3S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3-哌啶甲酰胺；N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-环己烷二甲酰胺；4-乙酰氨基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]环己烷甲酰胺；(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-吡咯烷甲酰胺；(S)-3-乙酰氨基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-2-氧代-1-哌啶乙酰胺；1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-4-哌啶乙酰胺；2-(乙酰基甲基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺；2-(乙酰基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺；N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]丁二酰胺；(2S，4R)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-噻唑基羰基)丁基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺；(2S，4R)-1-乙酰基-N-[1-(2-苯并噻唑基羰基)-5-(甲基氨基)戊基]-4-羟基-2-吡咯烷甲酰胺；N-(1-氧代-2-丙基戊基)-L-α-天冬氨酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺，甲酯；N-(羧基甲基)-3-环己基-D-丙氨酰基-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺；(3S)-N-[(1S)-4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]六氢-2-氧代-3-[[(苯基甲基)磺酰基]氨基]-1H-氮杂-1-乙酰胺；N-(1-萘基磺酰基)-L-丝氨酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺；N-甲基-D-苯基丙氨酰基-N-[(2S)-[1-(氨基亚氨基甲基)-3-哌啶基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)乙基]-L-脯氨酰胺；(S)-N-甲基-D-苯基丙氨酰基-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-L-脯氨酰胺；(S)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-α-(乙酰基氨基)环己烷丙酰胺；(S)-2-(乙酰基氨基)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-3-甲基丁酰胺；(2S)-N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-1-苯甲酰基-2-吡咯烷甲酰胺；N-[1-[[3-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-2-(2-苯并噻唑基)-2-氧代乙基]-2-吡啶甲酰胺；(2S)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-1，2-吡咯烷二甲酰胺，1-N，N-二甲基酰胺；(2S)-1-乙酰基-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-3，4-去氢-2-吡咯烷甲酰胺；或2-(乙酰基环己基氨基)-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]乙酰胺；和它们和可药用盐以及前药。
7.一种药物组合物，它包含权利要求1的化合物和可药用载体。
8.一种药物组合物，它通过将权利要求1的化合物与可药用载体混合而制得。
9.制备药物组合物的方法，该方法包含将权利要求1的化合物与可药用载体混合。
10.一种治疗需要的个体中炎性疾病的方法，该方法包含给所述个体施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
11.权利要求10的方法，其中所述炎性疾病是免疫介导的炎性疾病。
12.权利要求11的方法，其中所述免疫介导的炎性疾病选自哮喘、变应性鼻炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎、一般关节炎病症、消化性溃疡、眼和春季结膜炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病、节段性回肠炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、硬化病、纤维变性、皮炎、牛皮癣、血管性水肿、湿疹性皮炎、过敏症、过度增殖性皮肤病、炎性皮肤病、肝硬化、肾小球性肾炎、肾炎、血管炎症、动脉粥样硬化或再狭窄。
13.权利要求11的方法，其中所述免疫介导的炎性疾病是肥大细胞介导的炎性疾病。
14.权利要求13的方法，其中所述肥大细胞介导的炎性疾病选自哮喘和变应性鼻炎。
15.权利要求14的方法，其中所述肥大细胞介导的炎性疾病是哮喘。
16.权利要求12的方法，其中所述化合物的治疗有效量是约0.001-约2000mg/kg/天。
17.权利要求16的方法，其中所述化合物的治疗有效量是约0.001-约200mg/kg/天。
18.权利要求15的方法，其中化合物是作为气雾剂施用的。
19.权利要求15的方法，其中所述化合物与β-肾上腺素能激动剂、甲基黄嘌呤、色甘酸盐或皮质类固醇联合给药。
20.权利要求19的方法，其中所述β-肾上腺素能激动剂选自沙丁胺醇、特布他林、福莫特罗、非诺特罗或prenaline，甲基黄嘌呤选自咖啡因、茶碱、氨茶碱或可可碱，色甘酸盐选自色甘酸钠或萘多罗米，皮质类固醇选自倍氯米松、去炎松、氟尼缩松、地塞米松、氢化可的松、或强的松。
21.权利要求10的方法，其中所述化合物是作为药物组合物给药的。
22.权利要求21的方法，其中所述药物组合物包含在适于局部、口服、栓剂、鼻内、吸入或非胃肠道给药的可药用载体中的式I化合物。
23.治疗需要的个体中由胰蛋白酶介导的疾病的方法，该方法包含给所述个体施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
24.权利要求23的方法，其中所述疾病是胰腺炎。
全文摘要
本发明涉及作为炎性细胞丝氨酸蛋白酶抑制剂的一系列肽基杂环酮,和它们的组合物,以及预防和治疗各种免疫介导的炎性疾病的方法。更具体来说,本发明化合物是强效和选择性的类胰蛋白酶抑制剂,并因此能有效地预防和治疗与呼吸道有关的炎性疾病例如哮喘和变应性鼻炎。
文档编号A61P11/00GK1353701SQ00805510
公开日2002年6月12日 申请日期2000年1月13日 优先权日1999年1月27日
发明者M·J·科斯坦佐, B·E·马亚诺夫, S·C·雅布特 申请人:奥索-麦克尼尔药品公司