专利名称：含吡唑啉酮衍生物的稳定的高浓度注射剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种注射剂，主要含有高浓度的具有式(I)结构的吡唑啉酮衍生物、或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物 其中R1为氢原子、芳基、含1至5个碳原子的烷基或总共含3至6个碳原子的烷氧基羰基烷基；R2为氢原子、芳氧基、芳基巯基、含1至5个碳原子的烷基或含1至3个碳原子的羟基烷基，或者，R1和R2一起形成含3至5个碳原子的亚烷基；R3为氢原子、含1至5个碳原子的烷基、含5至7个碳原子的环烷基、含1至3个碳原子的羟基烷基、苄基、萘基或苯基，或被1至3个取代基取代的苯基，该取代基可相同或不同，选自下列基团含1至5个碳原子的烷氧基、含1至3个碳原子的羟基烷基、总共含2至5个碳原子的烷氧基羰基、含1至3个碳原子的烷基巯基、含1至4个碳原子的烷基氨基、总共含2至8个碳原子的二烷基氨基、卤原子、三氟甲基、羧基、氰基、羟基、硝基、氨基和乙酰氨基。更具体地，本发明涉及一种长期稳定的高浓度注射剂，含有上述吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物作为有效成分。
背景技术：
3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮(非专利名“Edaravone”，商品名“Radicut”；由Mitsubishi Pharma Corporation生产销售。下文中称为Edaravone)是上述吡唑啉酮衍生物的其中一种，也被称为3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮。该化合物有效用于各种脑血管疾病的动物模型实验，并且极具潜力能在临床上用于治疗脑血管疾病，如脑中风、脑瘤、头部外伤急性期常见的脑缺血、脑水肿等，这些疾病目前还没有有效药物能治疗(brain function normalizing effect(JP特公平5-31523)，lipid peroxidation inhibiting effect(JP特公平5-35128)。含Edaravone作为有效成分的注射剂已经被开发出来。其中一个例子为Edaravone水溶液的注射液，含有至少一种选自亚硫酸盐、亚硫酸氢盐和焦亚硫酸盐的化合物，以及半胱氨酸，其pH值为2.5～6.0(JP特公平7-121861)。
如今，Edaravone在临床上用作脑保护剂(输液)，每天需给药2安瓿。如果将来Edaravone用于治疗其他疾病，可能需要施用更多安瓿。因此，按照现行的处方，每天需要准备至少2安瓿或小瓶。但是，在医疗现场不能出现任何意外，必须尽可能减少药品的配制步骤，提高制剂的实用性。而且，使用多个安瓿或小瓶的药品需要更大的空间来存放。这种状况无论对药品生产者还是实施治疗的医护人员来说都是不利的。
因此需要研制一种含有高浓度Edaravone的小容量制剂，即，高浓度小容量的注射剂。但是，Edaravone难溶于水(在25℃为2mg/mL)，其化学稳定性随在水溶液中的浓度升高而降低，并且，相对于粉末形式，其在水溶液中更易于被氧化而分解。由于上述特性，很难将Edaravone作为一种药品长期稳定保存，并且，制备一种含Edaravone的浓度超过其在水中的饱和浓度的注射剂是很难的，事实上，在此之前，从未得到这样的剂型。
发明详述本发明人致力研究一种高浓度小容量的注射剂，含有吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物作为有效成分。结果发现，在各种用于注射剂的可药用添加剂中，乙醇具有优良的助溶效果，大幅提高吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物在水中的溶解度。还发现乙醇是一种优良的助溶剂，其作为注射剂的添加剂具有很高的安全性，并且很难与吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物发生反应(试验例1)。在研究吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物的高浓度溶液的化学稳定性时，却发现溶液出现变色，表明溶液中发生了某些反应。本发明人继续进行研究，结果发现，通过加入稳定剂，吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物的稳定性显著提高(试验例2)，从而完成了本发明。
本发明的要点如下1、一种注射剂，其相对于注射剂总量含有3～60mg/mL的式(I)吡唑啉酮衍生物、或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物， 其中R1为氢原子、芳基、含1至5个碳原子的烷基或总共含3至6个碳原子的烷氧基羰基烷基；R2为氢原子、芳氧基、芳基巯基、含1至5个碳原子的烷基或含1至3个碳原子的羟基烷基，或者，R1和R2一起形成含3至5个碳原子的亚烷基；R3为氢原子、含1至5个碳原子的烷基、含5至7个碳原子的环烷基、含1至3个碳原子的羟基烷基、苄基、萘基或苯基，或被1至3个取代基取代的苯基，该取代基可相同或不同，选自下列基团含1至5个碳原子的烷氧基、含1至3个碳原子的羟基烷基、总共含2至5个碳原子的烷氧基羰基、含1至3个碳原子的烷基巯基、含1至4个碳原子的烷基氨基、总共含2至8个碳原子的二烷基氨基、卤原子、三氟甲基、羧基、氰基、羟基、硝基、氨基和乙酰氨基。
2、所述注射剂，其中吡唑啉酮衍生物为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮。
3、所述注射剂，其还含有乙醇。
4、所述注射剂，含有基于所述注射剂总量的10～70v/v％的乙醇。
5、所述注射剂，其pH为2.0～6.5。
6、所述注射剂，其pH为3.0～4.5。
7、所述注射剂，其还含有可药用稳定剂。
8、所述注射剂，其中可药用稳定剂相对于注射剂总量的含量为0.01～1mg/mL。
9、所述注射剂，其中可药用稳定剂为螯合剂。
10、所述注射剂，其中螯合剂为选自乙二胺、乙二胺四乙酸钙二钠和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
以下详述制备上述注射剂的过程。首先，将吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物溶解于乙醇。另外，将稳定剂加入到pH为2.0～6.5的缓冲液中使其溶解，制备成另一种溶液。将两种溶液搅拌混匀。如果pH值在搅拌后发生很大变化，用适合的酸或碱将其调回到2.0～6.5。然后将溶液灭菌，装入合适的容器(安瓿、小瓶等)密封，从而得到本发明的注射剂。
通过调节作为助溶剂加入的乙醇的量，本发明的吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物可以调制到3mg～60mg/mL的浓度范围。因此，作为助溶剂加入的乙醇的浓度可以根据需要溶解的吡唑啉酮衍生物或生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物的浓度进行调节。但如果乙醇浓度过低，其对于吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物的助溶效果下降。相反，过高的浓度给注射液的制备带来困难，例如，液体的量很难调整，因为挥发度增大。因此，乙醇的浓度为注射剂总量的10～70v/v％，优选为15～55v/v％，更优选为20～40v/v％。可以加入任何可药用稳定剂，但优选使用螯合剂。任何可药用螯合剂可都以用作本发明的螯合剂，但优选乙二胺、乙二胺四乙酸钙二钠或乙二胺四乙酸二钠，更优选乙二胺四乙酸二钠。稳定剂的浓度优选为0.01～1mg/mL，特别优选为0.05～0.5mg/mL。如果稳定剂的量低于上述范围，对吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物不能产生足够的稳定效果。如果稳定剂的量超过上述范围，其稳定效果已经到极限，并且从安全性方面考虑是不可取的。本发明注射剂的pH值通过用于注射剂的可药用缓冲剂如柠檬酸或其盐、磷酸或其盐、醋酸或其盐等调节，考虑到吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物的稳定性，pH值优选调至2.0～6.5，特别优选3.0～4.5。制备本发明注射剂时还可根据需要加入可药用等渗剂、防腐剂等。
最佳实施方式以下将进一步详细说明本发明。需要注意的是，只要不偏离本发明主旨，本发明不限于下列实施方式。
<实施例1>
将Edaravone(1g)溶于60mL乙醇。另外，分别将20mg乙二胺四乙酸二钠，420mg柠檬酸一水合物和294mg柠檬酸三钠溶于140mL注射用水中。将两种溶液搅拌混匀，用1mol/L的盐酸将混合溶液的pH调至3.6。然后加入注射用水至总体积为200mL，通过膜过滤器进行无菌过滤。将所得溶液装入10mL的小瓶中。用氮气将小瓶内顶部空间的空气吹出后，用橡皮塞和铝帽将小瓶密封，得到一种注射剂(Edaravone的浓度5mg/mL)。
<实施例2>
除了用196mg磷酸代替柠檬酸一水合物和柠檬酸三钠，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂。
<对比实施例1>
将Edaravone(1g)溶于100mL乙醇，然后加入注射用水至总体积为200mL，然后通过膜过滤器进行无菌过滤。将所得溶液装入10mL的小瓶中。用氮气将小瓶内顶部空间的空气吹出后，用橡皮塞和铝帽将小瓶密封，得到一种注射剂。
<对比实施例2>
将Edaravone(1g)溶于200mL乙醇，将得到的溶液通过膜过滤器进行无菌过滤。将所得溶液装入10mL的小瓶中。用氮气将小瓶内顶部空间的空气吹出后，用橡皮塞和铝帽将小瓶密封，得到一种注射剂。
<对比实施例3>
除了用丙二醇代替乙醇，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂，。
<对比实施例4>
除了用N，N-二甲基乙酰胺代替乙醇，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂，。
<对比实施例5>
除了不使用乙二胺四乙酸二钠，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂。
<对比实施例6>
除了用50mg硫甘油(thioglycerol)代替乙二胺四乙酸二钠，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂。
<对比实施例7>
除了用70mg的L-半胱氨酸盐酸盐一水合物和140mg的亚硫酸氢钠代替乙二胺四乙酸二钠，以及用196mg的磷酸代替柠檬酸一水合物和柠檬酸三钠，其它与实施例1的方法相同，得到一种注射剂。
<试验例1>
“确定Edaravone在各种助溶剂中的溶解度和助溶剂与Edaravone反应性”往通常用作静脉注射剂助溶剂的乙醇、丙二醇、聚乙二醇400和N，N-二甲基乙酰胺各5mL中加入注射用水(5mL)，然后搅拌。向所得助溶剂水溶液中加入Edaravone，用搅拌器在4℃的恒温槽中以恒定且不起泡的速度搅拌该混合物一天一夜。搅拌完毕后，目测观察到有未溶解的Edaravone，从而确认得到的每份溶液都是Edaravone饱和水溶液。然后，用在4℃下保存的膜过滤器(孔径0.45μm)迅速将溶液过滤，用下文所述的HPLC法检测滤液中的Edaravone含量。另外，还给出了用作静脉给可药用注射剂时，每种助溶剂每天的最大用量(Iyakuhin-tenkabutu-jiten 2000(Yakuji-nippou-sha出版)，第127页、264页和229～230页。乙醇的最大用量是基于NIMOTOP IV(注册商标，Bayer Co.)中的用量进行计算的)，其对Edaravone的助溶效果用数值来进行计算。结果如表1所示。
HPLC检测方法及条件通过用对氨基苯甲酸乙酯作为内标物质的液相色谱(LC)检测，得到Edaravone与内标物质的峰面积比，根据该比值，确定了Edaravone的浓度。
检测器紫外分光光度计(检测波长240nm)色谱柱不锈钢管，内径约4mm，长度约15cm，装有5μm的十八烷基硅烷化硅胶，温度为约50℃的固定温度。
流动相10mM醋酸水溶液和甲醇(3∶1)的混合溶液，用氨水调至pH＝5.5。
流速调节使Edaravone的保留时间为约8分钟。
(表1)
另外，将通过对比实施例1～4得到的注射剂保存在60℃恒温槽中，观察溶液随时间的变色程度(表2)。
(表2)
上述结果表明乙醇是一种优良的助溶剂，同时还是一种极佳的添加剂，因为它不引起溶液变色，并且难与Edaravone发生反应。
<试验例2>
“证实Edaravone稳定剂的优越性”从实施例1至2以及对比实施例5至7得到的注射剂保存在40℃或60℃的恒温槽中，通过下文的HPLC方法检测分解产物量的经时变化。保存一段预定的时间后分解产物的总量如表3所示。
HPLC检测方法及条件分解产物的总量用各类似分解产物的总面积相对于Edaravone的峰面积(按照两种条件测定)的百分比表示，各自都用液相色谱(LC)确定。
检测器紫外分光光度计(检测波长240nm)色谱柱不锈钢管，内径约4mm，长度约15cm，装有5μm的十八烷基硅烷化硅胶，温度为约40℃的固定温度。
流动相(1)水、甲醇和冰醋酸(100∶100∶1)混合液(2)10mM醋酸水溶液和甲醇(3∶1)混合溶液，用氨水调至pH＝5.5。
流速(1)调节使Edaravone的保留时间为约4分钟。
(2)调节使Edaravone的保留时间为约11分钟。
(表3)
证实了可以通过加入稳定剂制备可以长期保持稳定的注射剂。
工业实用性如上所述，本发明注射剂是一种高浓度小容量的溶液型注射剂，含有吡唑啉酮衍生物或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物作为有效成分。其具有长期稳定性，利于产品保存，并有良好的实用性。
本发明要求日本专利申请No.2001-141683为优先权。
权利要求
1.一种注射剂，其相对于注射剂总量含有3～60mg/mL的式(I)吡唑啉酮衍生物、或其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物， 其中R1为氢原子、芳基、含1至5个碳原子的烷基或总共含3至6个碳原子的烷氧基羰基烷基；R2为氢原子、芳氧基、芳基巯基、含1至5个碳原子的烷基或含1至3个碳原子的羟基烷基，或者，R1和R2一起形成含3至5个碳原子的亚烷基；R3为氢原子、含1至5个碳原子的烷基、含5至7个碳原子的环烷基、含1至3个碳原子的羟基烷基、苄基、萘基或苯基，或被1至3个取代基取代的苯基，该取代基可相同或不同，选自下列基团含1至5个碳原子的烷氧基、含1至3个碳原子的羟基烷基、总共含2至5个碳原子的烷氧基羰基、含1至3个碳原子的烷基巯基、含1至4个碳原子的烷基氨基、总共含2至8个碳原子的二烷基氨基、卤原子、三氟甲基、羧基、氰基、羟基、硝基、氨基和乙酰氨基。
2.根据权利要求1的注射剂，其中吡唑啉酮衍生物为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮。
3.根据权利要求1或2的注射剂，其还含有乙醇。
4.根据权利要求1至3任意一项的注射剂，其中乙醇含量为注射剂总量的10～70％体积。
5.根据权利要求1至4任意一项的注射剂，其pH为2.0～6.5。
6.根据权利要求1至5任意一项的注射剂，其pH为3.0～4.5。
7.根据权利要求1至6任意一项的注射剂，其还含有可药用稳定剂。
8.根据权利要求7的注射剂，其中可药用稳定剂相对于注射剂总量的含量为0.01～1mg/mL。
9.根据权利要求7或8的注射剂，其中可药用稳定剂为螯合剂。
10.根据权利要求9的注射剂，其中螯合剂为选自乙二胺、乙二胺四乙酸钙二钠和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
全文摘要
一种注射剂，含有3～60mg/mL的吡唑啉酮衍生物，典型为Edaravone、其生理可接受盐、或这些物质的水合物或溶剂化物作为有效成分。其具有长期稳定性，利于产品保存，并有很好的实用性。
文档编号A61P9/10GK1525856SQ0280972
公开日2004年9月1日 申请日期2002年5月9日 优先权日2001年5月11日
发明者吉田博, 松尾直树, 千叶雅俊, 俊, 树 申请人:三菱制药株式会社