专利名称：一种治疗缺血性中风的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物，特别涉及治疗缺血性中风的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量控制方法。
在近年报道的有关中成药治疗中风后遗症临床文献中，可用于治疗中风后遗症的中药注射液有复方丹参注射液、复方川芎注射液，脉络宁注射液、复方活血注射液、刺五加注射液、灯盏花注射液、三七注射液、通脉舒络液等，其成份多以活血化瘀药物为主，临床总有效率87.5-98.3％不等，痊愈率可达66.3-74.3％；口服制剂有康宝口服液、水蛭口服液、中风回春丸、通脉丸、抗栓片等，临床总有效率也达87-98％。上述研究从不同角度反映了近年国内应用中医药治疗中风后遗症所取得的进展，显示了中医药在这一领域的独特优势，同时，对上述研究的客观分析表明，补气活血法治疗中风后遗症具有更为显著的疗效优势。
临床用于治疗中风后遗症偏瘫的中药制剂虽不少，由于组方原则、剂型及临床疗效方面的诸多局限，疗效显著、安全性好、使用方便的中药制剂仍为临床所需要。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种新的治疗缺血性中风中药组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗缺血性中风中药组合物的方法；本发明目的还在于公开一种新的中药组合物的质量控制方法。本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)黄芪430-520重量份 丹参290-340重量份 水蛭80-120重量份大黄90-120重量份 木香70-120重量份 僵蚕80-120重量份鸡血藤70-120重量份所述水蛭优选烫水蛭，大黄优选酒制大黄，僵蚕优选炒僵蚕。
本药物组合物的制备方法以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用5-7倍量85-95％乙醇回流提取1-3小时，滤过，滤液在20-70℃，-0.05Mpa--0.09MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加8-12倍量的水煎煮1-3小时，第二次加7-9倍量的水煎煮1-2小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.25-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，60-75℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压干燥，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂、注射剂等。本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种a.取本组合物制剂，置显微镜下观察肌纤维无色或淡棕黄色，多单根离散，偶有数根成束，弯曲或局部扭曲，有时局部膨大或不均匀增厚；木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形；壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解；b.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以12-18∶4-6∶1-2石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；c.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，取乙醚提取后的水液，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2-4次，每次15-25ml，弃去氨水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以70-85∶18-25甲醇-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备，精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1ml中含丹参酮IIA 4ug；供试品溶液的制备，取本组合物制剂0.15g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；本组合物制剂每单位量含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.30-0.45mg。上述单位量是指含相当1.322g原药材的成品药剂量。
本发明组合物具有很好的益气活血、化瘀通络功能，可以改善缺血性中风气虚血瘀证患者的语言表达、面瘫、眼征、上肢瘫、下肢瘫、指瘫、趾瘫、综合功能，无毒副作用。
下面实验例用于进一步说明本发明。
药效学研究证明，本组合物制剂具有减轻脑缺血大鼠脑水肿、毛细血管通透性及脑组织病理改变，增加狗脑血流量和降低脑血管阻力，抑制大鼠体内、体外血栓形成及体内血小板聚集，延长凝血时间等方面作用，改善正常大鼠及血瘀证家兔血液流变学、降低高脂血症大鼠脂质含量。急性毒性试验表明实验动物最大耐受量为46g/kg；长期毒性试验表明实验动物经3个月用药未见明显毒副作用。实验例1本组合物制剂(芪参藤胶囊)药效学试验一、实验性大鼠脑缺血的影响实验材料动物SD种雄性大鼠，体重160±30g，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)。含生药1.15g/mL，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。维脑路通注射液，太原第二制药厂出品，批号901258方法和结果(一)、参藤胶囊对急性不完全性脑缺血大鼠脑含水量和脑指数的影响。
取SD种雄性大鼠60只，体重160±30g，随机分为6组，每组10只。①假手术对照组(蒸馏水10ml/kg)；②脑缺血模型组(蒸馏水10mL/kg)；③阳性药维脑路通对照组(100ml/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑥芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g，第7天给药后1h，3％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉，手术暴露颈总动脉，除假手术组外，各组大鼠结扎两侧颈总动脉，3h后快速断头取脑称重，计算脑指数(脑指数＝100·脑湿重/体重)。然后在110℃烤箱中烤至恒重，计算脑含水量(脑含水量＝100％·(湿重—干重)/湿重)。结果见表1。表1 芪参藤胶囊对急性不完全性脑缺血大鼠脑含水量和脑指数的影响(X±S)组 别剂量 动物数 脑含水量脑指数(g/kg)(％)假手术对照组10ml10 77.79±0.70 1.10±0.06脑缺血模型组10ml10 78.68±0.63 1.26±0.07维脑路通组 0.1 10 77.84*±0.75* 1.17±0.07*芪参藤胶囊小剂量组1.0 10 77.79±0.89*1.19±0.08芪参藤胶囊中剂量组3.0 10 78.11±0.48*1.18±0.05*芪参藤胶囊大剂量组6.0 10 77.84±0.69*1.15±0.05**与脑缺血模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，与脑缺血模型组比较，维脑路通组和芪参藤胶囊各剂量组均可显著降低脑缺血大鼠脑含水量，芪参藤胶囊大、中剂量组及维脑路通组还可使脑缺血大鼠脑指数明显减小。说明芪参藤胶囊具有减轻脑缺血大鼠脑水肿作用。
(二)、芪参藤胶囊对急性不完全性脑缺血大鼠脑血管通透性的影响取SD种雄性大鼠60只，体重160±30g，随机分为6组，每组10只。①假手术对照组(蒸馏水10mL/kg)；②脑缺血模型组(蒸馏水10mL/kg)；③维脑路通对照组(100mL/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1.0g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3.0g/kg)；⑥芪参藤胶囊大剂量组(6.0g/kg)。每天灌胃给药一次，连续7天，容量1L/100g，第7天给药后1h，3％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉，手术暴露颈总动脉，舌下静脉注射伊文思蓝50mg/kg。除假手术外，各组大鼠注射伊文思蓝后5min，结扎两侧颈总动脉，3h后快速断头取脑称重，随后将脑浸泡于甲酰胺溶液中，45℃恒温，72h后待脑组织中色素全部浸出，取色素液用721型分光光度计，620mm波长比色，并根据标准曲线计算脑内伊文思蓝含量，用μg/g脑湿重表示，结果见表2。表2 芪丹瘫胶囊对急性不完全性脑缺血大鼠脑血管通透性的影响(X±S)组别 剂量 动物数 脑组织伊文思蓝含量(g/kg) (ug/g)假手术对照组 10ml108.07±1.12脑缺血模型组 10ml109.54±1.10维脑路通组0.1 108.34±1.02*芪参藤胶囊小剂量组 1.0 108.75±1.07芪参藤胶囊中剂量组 3.0 108.39±0.86*芪参藤胶囊大剂量组 6.0 108.52±0.785*与脑缺血模型组比较，*P＜0.05结果表明，与脑缺血模型比较，芪参藤胶囊大、中剂量组和维脑路通组均可明显降低脑缺血大鼠脑内伊文思蓝含量，芪参藤胶囊小剂量组大鼠脑内伊文思蓝含量降低不明显(P＞0.05)。说明，芪参藤胶囊具有减轻脑缺血大鼠脑血管通透性作用。
(三)、芪参藤胶囊对急性不完全性脑缺血大鼠脑组织形态学的影响取SD种雄性大鼠60只，体重160±30g，，随机分为6组，每组10只。①假手术对照组(蒸馏水10mL/kg)；②脑缺血模型组(蒸馏水10mL/kg)；③维脑路通对照组(100mL/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑥芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g。第7天给药后1h，3％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉，手术暴露颈总动脉，除假手术外，其余各组大鼠结扎两侧颈总动脉，3h后快速断头取脑，10％甲醛固定，冠状切取大脑，常规脱水，石蜡包埋制片，HE染色，光镜下进行组织形态学检查。
结果表明，假手术对照组大鼠脑神经组织正常，核膜核仁清楚，胞浆透亮或淡染，神经细胞、毛细血管和小血管周围都有产生一道空隙。脑缺血的模型组大鼠脑神经胶质细胞肿胀。神经细胞胞体变小，胞浆和胞核模糊、染色深，神经细胞、毛细血管和小血管周围空隙增大，间质疏松。芪参藤胶囊各剂量组和维脑路通组均可不同程度减轻脑缺血大鼠脑组织神经胶质细胞肿胀和间质疏松，使脑组织神经细胞染色减淡，细胞浓缩减轻。说明芪参藤胶囊可使缺血性大鼠脑组织病理改变减轻。
二、芪参藤胶囊对狗脑血流量、脑血管阻力、血压和心率的影响实验材料动物健康成年杂种狗，雌雄兼用，体重10～16kg，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以生理盐水为溶剂配制成所需浓度。盐酸罂粟碱注射液，青海制药厂出品，批号930521。
方法和结果取成年杂种狗24只，雌雄兼用，体重10-16kg，实验分4组，①生理盐水对照组(5ml/kg)；②阳性药罂粟碱对照组(0.005g/kg)；③芪参藤胶囊小剂量组(2g/kg)；④芪参藤胶囊大剂量组(4g/kg)。3％戊巴比妥钠30mg/kg静脉注射麻醉后，分离左侧颈总动脉，结扎颈外动脉分支，颈总动脉套上适宜的卡式探头并连接于MFV-1200型电磁流量计测量脑血流量。右侧股动脉插管接压力换能器测量血压，针型电极刺入四肢皮下，测II导联心电图。上述各项指标均同步记录于RM-6000型多导生理记录仪。手术后30min，待各项指标稳定后，十二指肠给受试药，记录给药前及给药后15，30，45，60min脑血流量，收缩压(SAP)，舒张压(DAP)，平均动脉压(MAP)及心率等指标变化。实验时，每次先给生理盐水，测量对照组各项指标，随后再给罂粟碱或芪参藤胶囊。实验结束后，取出全脑称重，除以2，计算每分钟每100g脑重的脑血流量及脑血管阻力。结果见表3-表5。
表3 芪参藤胶囊对狗脑血流量的影响(x±s)
与给药前比较，*P＜0.05
表4 芪参藤胶囊对狗脑血管阻力的影响(x±s)组别 剂量动物 每分钟100脑重的脑血流量[1KPa(100g脑重·ml/min)](g/kg)数 给药前15min 30min45min 60min生理盐水 5ml 24 0.153±0.019 0.152±0.0190.152±0.019 0.153±0.0190.153±0.019对照组罂粟碱组 0.00580.153±0.019 0.125±0.012** 0.131±0.013*0.138±0.012* 0.146±0.017芪参藤胶囊 280.149±0.017 0.129±0.016* 0.133±0.016*0.137±0.0120.143±0.014小剂量组芪参藤胶囊 480.147±0.016 0.128±0.015* 0.125±0.017** 0.131±0.014* 0.130±0.015大剂量组与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01表5 芪参藤胶囊对狗收缩压(SAP)，舒张压(DAP)，平均动脉压(MAP)及心率的影响(x±s)生理盐水对照组(5ml/kg) 罂栗碱组 芪参藤胶囊小剂量组芪参藤胶囊大剂量组(n＝24)(0.005g/kg)(n＝8) (2g/kg)(n＝8) (4g/kg)(n＝8)DAP MAPSAPDAPMAP HR SAP (KPS (KPSHR SAP DAP MAPHRSAP DAPMAPHR(KPS) (KPS) (KPS) (b/min) (KPS) ))(b/min) (KPS) (KKPS) (KPS) (b/min)(KPS) (KPS) (KPS) (b/min)175±16± 19± 163±给药前22±3 15±2 18±2 23±324±5 17±3 18±3 193±2823±3 16±2 17±3 187±2121 22 18168±181±15min 23±3 15±2 17±2 22±3 15±218±2 24±4 17±3 18±4 183±2425±4 17±3 18±4 185±2427 24*164±183±30min 23±3 16±2 17±2 21±4 15±317±3 23±3 18±4 19±4 190±3424±5 16±3 18±4 193±2628 24*169±45min 22±2 15±2 18±2 21±315±318±3176±28 24±3 18±3 18±4 187±3124±4 17±4 17±3 198±2924166±60min 22±3 15±2 18±2 22±315±418±3170±26 24±3 18±3 17±4 197±3823±4 16±3 17±3 203±3226结果表明，与给药前比较，生理盐水对照组对狗脑血流量、脑血管阻力、血压及心率等各项指标均明显影响。芪参藤胶囊大、小剂量组及盐酸罂粟碱组可明显增加狗脑血流量，减小脑血管阻力，芪参藤胶囊明显作用时间可维持约30min，但对心率及血压无明显影响。说明芪参藤胶囊具有改善脑供血作用。
三、芪参藤胶囊对大鼠血栓形成的影响实验材料动物SD种大鼠，雌雄各半，体重200-400g，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。肝素钠，上海浦江应用生物化学研究所生产，批号930407。
方法和结果(一)、参藤胶囊对大鼠体内栓形成的影响取SD种大鼠40只，雌雄各半，体重350±50g，随机分为5组，每组8只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②阳性药肝素钠组(4000u/kg)；③芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；④芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑤芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。空白对照组和芪参藤胶囊大、中、小剂量组每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g，第7天阳性药肝素钠组肌肉注射给药肝素钠4000u/kg，各组大鼠分别给药后1h，3％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉，分离右颈总动脉及左颈外静脉。取一特制的聚乙烯管内置6cm长丝线一条，以肝素生理盐水(50u/ml)充满聚乙烯管，将聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，由聚乙烯管注入肝素50u/kg抗凝，然后再将聚乙烯管的另一端插入右颈总动脉。血液经聚乙烯管循环15min，取出丝线称重，减去丝线干重即为血栓温重。结果见表6。
表6 芪参藤胶囊对大鼠体内血栓形成的影响(x±s)组 别剂量 动物数 血栓湿重(g/kg) (mg)空白对照组10ml814.0±0.9肝素钠组 4000u 811.3±0.9**芪参藤胶囊小剂量组1.0 813.0±0.8*芪参藤胶囊中剂量组3.0 812.5±0.8**芪参藤胶囊大剂量组6.0 812.3±1.0**与空白对照比较，*P＜0.05， **P＜0.01结果表明，与空白对照组比较，芪参藤胶囊大、中、小剂量组和肝素钠组可不同程度明显减轻大鼠体内血栓湿重。说明芪参藤胶囊具有防止血栓形成作用。
(二)芪参藤胶囊对大鼠体外血栓形成的影响取SD种大鼠50只，雌雄各半，体重245±35g，随机分为5组，每组10只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②阳性药肝素钠组(4000u/kg)；③芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；④芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑤芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。空白对照组和芪丹愈胶囊各剂量组每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g，阳性药肝素钠组于第7天肌肉注射给药肝素钠4000u/kg。第7天各组大鼠分别给药后1h，3％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉，颈总动脉插管取血1.8ml，迅速注入塑料环内，立刻将塑料环套在ANCOM9103-B型血栓形成仪(北京科建传感技术公司产品)转盘上，以17±1转/min，线速度4377mm/min旋转15min后取下(旋转塑料环与地面夹角为74°)，用滤纸吸去余血，分别测血栓长度与湿重，结果见表7。
表7 芪参藤胶囊对大鼠体外血栓形成的影响(x±s)组别 剂量 动物 血栓长度 血栓湿重(g/kg)数 (mm) (mg)空白对照组10ml 8 41.4±10.5101.6±7.7肝素钠组 4000u 8 0.9±1.5**2.1±3.5**芪参藤胶囊小剂1.0 8 26.6±5.7** 76.4±11.5**量组芪参藤胶囊中剂3.0 8 24.9±4.3** 71.7±7.7**量组芪参藤胶囊大剂6.0 8 20.6±5.8** 55.7±11.6**量组与空白对照比较，**P＜0.01结果表明，与空白对照组比较，芪参藤胶囊各剂量组和肝素钠组均可明显减小大鼠体外血栓长度和血栓湿重。说明芪参藤胶囊具有防止体内血栓形成和扩大作用。
四、芪参藤胶囊对肾上腺素致聚作用下大鼠体内循环血小板聚集比率的影响实验材料动物SD种大鼠，雌雄各半，体重250±30g，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。复方丹参注射液，含丹参、降香各2g/ml上海第一制药厂出品，批号929030。盐酸肾上腺素，山东新华制药厂出品，批号920522。
方法和结果取SD种大鼠60只，雌雄各半，体重250±30g，随机分为6组，每组10只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②肾上腺素致聚模型组(蒸馏水10ml/kg)；③阳性药复方丹参组(0.4g/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑥芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g，第7天给药后1h断头取血1.8ml，200u/ml肝素钠0.2ml抗凝，随后加入肾上腺素，诱导血小板聚集，肾上腺素终浓度为20umol/l。混匀后分别取0.5ml加入2mlEDTA缓冲液和2ml含的福尔马林的EDTA缓冲液，离心(1000g/min，10min)得两个多血小板血浆溶液，分别置于显微镜下进行血小板计数，并根据公式求血小板聚集比率(PAR)结果见表8。 EDTA缓冲液配方0.077MEDTA3ml加0.1M×10倍浓磷酸盐缓冲液5ml，再加蒸馏水12ml。福尔马林-EDTA缓冲液配方0.077MEDTA3ml加4％福尔马林5ml，加0.1M×10倍浓磷酸盐缓冲液2ml，再加蒸馏水10ml。上述两种缓冲液PH均为7.4。表8 芪参藤胶囊对肾上腺素致聚作用下大鼠体内循环血小板聚集比率的影响(x±s)组别 剂量 动物数 血小板聚集比率(g/kg)空白对照组 10ml10 0.93±0.17肾上腺素致聚模型组 10ml10 0.25±0.07复方丹参组 0.4 10 0.57±0.14**芪参藤胶囊小剂量组 1.0 10 0.72±0.29**芪参藤胶囊中剂量组 3.0 10 0.79±0.15**芪参藤胶囊大剂量组 6.0 10 0.85±0.12**
与肾上腺素致聚模型组比较，**P＜0.01结果表明，与肾上腺素致聚模型组比较，芪参藤胶囊各剂量组及复方丹参组均可明显提高血小板聚集比率。说明芪参藤胶囊具有抑制血小板聚集作用。
五、芪参藤胶囊对小鼠凝血时间的影响实验材料动物ICR种大鼠，体重20±2g，雌雄各半，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。肝素钠，上海浦江应用生物化学研究所生产，批号930407。
方法和结果取ICR种小鼠50只，雌雄各半，体重20±2g，随机分为5组，每组10只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②阳性药肝素钠组(4000u/kg)；③芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；④芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑤芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。空白对照组和芪参藤胶囊大、中、小剂量组每天灌胃给药一次，连续7天，容量0.1ml/10g，第7天，阳性药肝素钠组肌肉注射给药肝素钠4000u/kg，各组小鼠分别给药后1h，眼眶取血，玻片法测凝血时间，结果见表9。
表9 芪参藤胶囊对小鼠凝血时间的影响(x±s)组别 剂量 动物数 凝血时间(g/kg) (min)空白对照组10ml 10 1.8±0.9肝素钠组 10ml 10 5.7±1.5**芪参藤胶囊小剂量组1.0 10 2.8±0.9*芪参藤胶囊中剂量组3.0 10 2.7±0.8*芪参藤胶囊大剂量组6.0 10 3.2±1.1**与空白对照比较，**P＜0.05；**P＜0.01结果表明，与空白对照组比较，芪参藤胶囊大、中、小剂量组和肝素钠组均可不同程度明显延长小鼠凝血时间。说明芪参藤胶囊具有抗凝血作用。
六、芪参藤胶囊对血液流变学的影响实验材料动物SD种大鼠，雌雄各半，体重225±35g。家兔，雌雄各半，体重2.3±0.2kg。由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。复方丹参注射液，含丹参、降香各2g/ml，上海第一制药厂出品，批号929030。右旋糖酐(平均分子量MW为35-40万)，天津市生化制品厂出品。
方法和结果(一)、芪参藤胶囊对正常大鼠血液流变学的影响取SD种大鼠50只，雌雄各半，体重225±35g，随机分为5组，每组10只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②阳性药复方丹参组(0.4g/kg)；③芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；④芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑤芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，连续7天，容量1ml/100g，第7天给药后1h，尾静脉采血，微量压积管测定法测红细胞压积，温氏管测红细胞沉降率。随后断头取血，用LG-III型粘度计测血浆粘度、全血粘度，并根据公式求全血还原粘度〔还原粘度＝(全血粘度-1)/红细胞压积〕。结果见表10。表10 芪参藤胶囊对正常大鼠全血栓粘度、血浆粘度、全血还原粘度、红细胞压积和红细胞沉降率的影响(x±s)全面粘度组别 剂量动物 高切 低切 血浆粘度 还原粘度 压积(g/kg)数 (200.S)-1(40.S)-1(mpa.s) (mpa.s) (％) 血沉(mm/b)空白对照组 10ml 10 4.66±0.81 10.89±3.14 3.44±0.54 8.83±2.08 41.86±4.11 4.36±3.77复方丹参组 0.4 10 3.74±0.56** 7.01±1.23** 2.66±0.63** 7.02±1.63* 37.75±3.46* 1.26±1.04*芪参藤胶囊小 1.0 10 4.15±0.71** 8.82±1.69* 3.01±0.42* 7.39±1.42 41.42±1.39 2.08±1.67*剂量组芪参藤胶囊中 3.0 10 3.85±0.68* 7.75±1.05** 2.86±0.39* 6.87±1.88* 41.95±3.21 1.65±0.89*剂量组芪参藤胶囊大 6.0 10 3.61±0.29** 7.07±0.48** 2.74±0.19** 7.21±1.24* 40.60±1.90 0.79±0.89**剂量组与空白对照比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，与空白对照组比较，芪参藤胶囊大剂量组全血粘度，血浆粘度，还原粘度和血沉明显降低。芪参藤胶囊各剂量组对红细胞压积均无明显影响。说明芪参藤胶囊具有抑制血细胞聚集，降低血液粘度作用，但对红细胞大小及数量可能无明显影响。
(二)、芪参藤胶囊对高分子右旋糖酐致家兔血瘀证的血液流变学影响。
取家兔36只，雌雄各半，体重2.3±0.2kg，随机分为6组，每组6只。①空白对照组(蒸馏水20ml/kg)；②血瘀证模型组(蒸馏水20ml/kg)；③阳性药复方丹参组(0.4g/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；⑥芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)每天灌胃给药一次，连续6天，容量20ml/kg，第6天下午，除空白对照组外，其余各组家兔沿耳缘静脉注射10％高分子右旋糖酐(MW35-40万)4ml/kg。16h后再灌胃给受试药一次，并于给药后1h，心脏抽血，测血浆粘度，全血粘度，红细胞压积和红细胞沉降率，并根据公式求全血还原粘度。结果见表11。表11 芪参藤胶囊对高分子右旋糖酐(MW35～40万)致家兔血瘀证的全血粘度、血浆粘度、还原粘度、红细胞压积及沉降率的影响(x±s)全面粘度组别剂量 动物 高切 低切 血浆粘度 还原粘度 压积 血沉(g/kg) 数(200.S)-1(40.S)-1(mpa.s) (mpa.s) (％) (mm/b)空白对照组 20ml 64.78±1.08 13.23±2.09 4.28±0.58 9.19±3.1142.13±6.34 2.13±0.97血瘀证模型 20ml 67.85±1.24 16.89±1.64 6.87±0.77 15.62±2.10 36.67±4.79 3.83±1.04组复方丹参组 0.4 65.17±1.78* 14.01±1.74* 5.14±1.06**12.60±1.88* 38.18±5.28* 2.53±0.87*芪参藤胶囊 1.0 66.28±0.78** 14.85±1.38* 5.48±1.18* 13.87±2.38 35.85±4.89 2.62±1.12*小剂量组芪参藤胶囊 3.0 65.98±1.06* 15.02±1.06* 5.28±1.12* 18.31±1.25* 35.19±5.74 2.24±0.69*中剂量组芪参藤胶囊 6.0 6 5.54±1.51* 14.47±1.85* 4.98±0.87**12.89±1.83* 38.47±6.7 2.35±0.85*大剂量组与血瘀证模型比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，与血瘀证模型组比较，芪参藤胶囊大、中剂量组和复方丹参组均可明显降低全血粘度、血浆粘度、还原粘度及血沉，芪参藤胶囊小剂量组可显著降低全血粘度和血浆粘度，但对红细胞压积均无明显影响。说明芪参藤胶囊具有降低血液粘度，改善血瘀证血液流变学作用。
七、芪参藤胶囊对高分子右旋糖酐致急性微循环障碍家兔眼结膜微循环的影响实验材料动物健康家兔，雌雄兼用，体重1.9±0.3kg，由西安医科大学动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以生理盐水为溶剂配制成所需浓度。复方丹参注射液，含丹参、降香各2g/ml，上海第一制药厂出品，批号929030。右旋糖酐(MW35-40万)，天津市生化制品厂出品。
方法和结果取家兔30只，雌雄兼用，体重1.9±0.3kg，随机分为5组，每组6只。①生理盐水对照组(5ml/kg，十二指肠给药；0.1ml，表面滴注)；②阳性药复方丹参对照组(0.4g/kg，十二指肠给药；0.15g/0.1ml，表面滴注)；③芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg，十二指肠给药；0.029g/0.1ml，表面滴注)；④芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg，十二指肠给药；0.058g/0.1ml，表面滴注)；⑤芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg，十二指肠给药；0.115g/0.1ml，表面滴注)。实验时将家兔用3％戊巴比妥钠30mg/kg静脉注射麻醉，侧卧固定，用开睑器张开眼睑，在落射光源下放大30-60倍显微镜观察。随即自耳绷静脉注射10％右旋糖酐(MW35-40万)生理盐水溶液4ml/kg，15min后记录微循环障碍兔眼结膜微血管流速、流态、管径和固定区域毛细血管交点数。流态分级0级，为直线(线粒)状；1级，为虚(粒)线状；II级，为粒(絮)状；III级，为淤滞状，以及血管中无红细胞流过。先观察左眼结膜微循环，随后滴注0.1ml受试药于眼球结膜表面，5min后记录左眼微循环各项指标变化(表12)。冲洗左眼，再观察右眼结膜微循环，开腹，十二指肠给受试药，30min后记录右眼微循环各项指标变化(表13)。实验采用给药前后身自对照。表12 芪参藤胶囊表面滴注对兔眼结膜微血管流速、管径和固定区域毛细血管交点数的影响(x±s)流 速 管 径 交点计数组 别剂量动物 (μm/s) (μm) (条)(g/0.1ml) 数 给药前 给药后 给药前 给药后 给药前 给药后生理盐水对0.1ml6 75±10 72±9 37.4±6.5 38.8±7.14.8±0.5 4.0±0.7照组复方丹参组0.15 6 81±13 134±14** 42.9±7.3 51.3±8.8* 5.7±0.7 6.6±0.7*芪参藤胶囊0.0296 87±18 143±19** 36.8±7.1 46.8±7.4* 5.8±0.6 6.8±0.8*小剂量组芪参藤胶囊0.0586 72±16 124±14** 46.1±7.6 57.2±7.9* 6.2±0.7 7.3±0.8*中剂量组芪参藤胶囊0.1156 76±15 133±17** 33.5±8.1 47.3±8.4* 5.4±0.8 6.5±0.9*大剂量组与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01表13 芪参藤胶囊十二指肠给花对兔眼结膜微血管流速、管径及固定区域毛细血管交点数的影响(x±s)流 速 管 径 交点计数组 别 剂量 动物数 (μm/s) (μm)(条)(g/kg) 给药前 给药后 给药前 给药后 给药前给药后生理盐水对照组 5ml669.3±8.7 63.8±10.3 51.4±10.6 52.6±12.74.5±0.4 4.3±0.6复方丹参组0.4654.8±8.2 68.6±12.3* 48.4±9.065.6±13.0* 5.2±0.8 6.3±0.9*芪参藤胶囊 1.0664.6±7.2 74.5±8.4* 42.9±11.9 53.9±13.64.8±0.6 5.4±0.9小剂量组芪参藤胶囊 3.0672.9±8.5 86.4±14.7* 56.3±13.2 76.1±14.6* 5.6±0.7 6.6±0.8*中剂量组芪参藤胶囊 6.0658.9±8.6 72.1±11.8* 44.5±10.1 60.8±11.8* 6.7±0.9 8.0±1.1*大剂量组与给药前比较，*P＜0.05结果表明，与给药前比较，表面滴注及十二指肠给药生理盐水对兔眼结膜微循环均无明显影响。兔眼结膜表面滴注给药，芪参藤胶囊各剂量组和复方丹参组微血管流速明显加快，管径变粗，毛细血管交点数增多，各组6例动物均可见流态由III级变为II级或I级，血细胞聚集程度减轻。十二指肠给药，芪参藤胶囊大、中剂量组和丹参组微血管流速明显加快，管径变粗，毛细血管交点数增多，血液流态各有5例由III级变为II级或I级。以上结果说明芪参藤胶囊具有改善微循环障碍作用。
八、芪参藤胶囊对大鼠高脂血症脂质含量的影响实验材料动物SD种大鼠，雄性，体重180±25g，由西安医科大学实验动物中心提供。
药物芪参藤胶囊内容物浸膏(药物名称芪参藤胶囊)，含生药1.15g/ml，由陕西省西安国药厂研究所提供，实验时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。绞股蓝总甙片，陕西安康中药厂出品，批号930212。
方法和结果取SD种雄性大鼠60只，体重180±25g，随机分为6组，每组10只。①空白对照组(蒸馏水10ml/kg)；②高脂血证模型组(蒸馏水10ml/kg)；③阳性药绞股蓝总甙组(0.05g/kg)；④芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)；⑤芪参藤胶囊中剂量组(3g/kg)；(6)芪参藤胶囊大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，连续14天，容量1ml/100g。同时除空白对照组外，其余各组动物均喂给高脂饲料(4％胆固醇、10％猪油、0.5％胆汁酸和85.5％基础饲料)。第14天，给药后1h，断头取血，酶法测定血清总胆固醇及甘油三酯含量，结果见表14。表14 芪参藤胶囊对实验性高脂血症大鼠血清总胆固醇及甘油三酯含量的影响(x±s)组 别 剂量动物数 总胆固醇甘油三酯(g/kg) (mmol/L)(mmol/L)空白对照组 10ml 10 1.627±0.1640.466±0.147高脂血症模型组 10ml 10 2.460±0.3920.970±0.312绞股蓝总甙组0.05 10 1.658±0.263** 0.476±0.158**芪参藤胶囊小剂量组1.0 10 1.777±0.476** 0.428±0.118**芪参藤胶囊中剂量组3.0 10 1.803±0.349** 0.417±0.120**芪参藤胶囊大剂量组6.0 10 1.741±0.352** 0.415±0.119**与高脂血症模型组比较，**P＜0.01结果表明，与高脂血症模型组比较，芪参藤胶囊各剂量组及绞股蓝总甙组均可明显降低大血清总胆固醇及甘油三酯含量。说明芪参藤胶囊具有降低高脂血症大鼠血脂作用。
九、芪参藤胶囊对小鼠脑缺血后能量代谢及代谢产物的影响实验材料动物ICR种小鼠，雌雄各半，体重202g，由西安医科大学实验动物中心提供。药物芪参藤胶囊浸膏，含生药1.15/ml，由陕西省西安国药研究所提供。尼莫地平片，哈尔滨制药三厂出品批号940901，各药临用时用蒸馏水配成所需浓度。
方法和结果取ICR种小鼠60只，雌雄各半，体重20±2g随机分成6组，每组10只。(1)假手术对照组(蒸馏水10ml/kg)；(2)脑缺血模型组(10ml/kg)；(3)阳性药尼莫地平组(5ml/kg)；(4)芪参藤胶囊小剂量组(1.5g/kg)；(5)芪参藤胶囊中剂量组(3.0g/kg)；(6)芪参藤胶囊大剂量组(6.0/kg)。各组动物每天灌胃给药一次，容量0.1ml/10g，连续6天。第6天，灌胃给药后1h，各组动物腹腔注射1％盐酸氯胺酮50ml/kg浅麻醉，手术暴露双侧颈总动脉及迷走神经。除假手术对照组外，零号手术线结扎其余各组小鼠双侧颈总动脉及迷走神经。在结扎左侧时，先在颈总动脉及其伴行的迷走神经下置一直径为0.17mm细钢丝，结扎后抽出钢丝，形成左颈总动脉部分狭窄。手术后6h，各组动物断头初四，并迅速将头置液氮中，10min厚剥离全脑并除去脑桥以下组织，其余组织称重，随后置1ml Tris-HCL缓冲液(0℃，Ph7.4)中均匀浆30秒(700转/分)，总溶液再加至3ml，于冷冻离心机内(4℃)3000转/分离心30分，取上清液，酚学法测乳酸(LA)、ATP，、磷酸肌酸(pcr)、葡萄糖(Glu)、次黄嘌呤(Hx)等含量，一次提取比色法测游离脂肪酸(FFA)含量，反应比色法测脂质过氧化产物丙二醛(MDA)量，邻苯三酚自氧化法测超氧化物歧化酶(SOD)活性，并求出每克脑组织中各指标含量或活性，结果见表15。表15 芪参藤胶囊对小鼠脑缺血后能量代谢及代谢产物的影响(X±S)剂量动物数 LA ATPPCr GLu Hx FFA MDASOD组 别 (g/kg) (只) (umol/g) (umol/g) (umol/g) (umol/g) (umol/g) (nmol/g)(nmol/g) (u/g)假手术对照组 10ml10 2.90±0.332.10±0.26 2.43±0.25 1.71±0.67 0.99±0.42 175.1±34.1 113.7±78.91643.6±164.2脑缺血模型组 10ml10 8.16±1.071.28±0.28 0.84±0.18 1.38±0.54 2.71±0.72 491.6±62.3 259.7±83.21581.6±164.6尼莫地平组 0.005 10 5.21±1.24** 1.63±0.33* 1.08±0.26* 1.29±0.82 2.10±0.53* 318.1±125.7** 194±137.31591.5±154.7芪参藤小剂量组 1.5 10 6.67±1.23** 1.59±0.30* 0.97±0.20 1.40±0.73 2.04±0.67* 413.5±87.9*166.9±98.9*1641.3±147.8芪参藤中剂量组 3.0 10 6.22±0.89** 1.62±0.35* 1.03±0.21* 1.22±0.47 2.13±0.43* 398.6±71.6** 167.6±87.8*1610.4±157.7芪参藤大剂量组 6.0 10 4.09±0.90** 1.70±0.44* 1.15±0.30* 1.35±0.94 1.96±0.46* 378.4±110.8* 159.4±82.8*1585.0±116.2与缺血模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，与脑缺血模型组比较，芪参藤胶囊各剂量组脑组织乳酸含量、次黄嘌呤含量、游离脂肪酸含量及脂质过氧化产物丙二醛含量均不同程度明显减少，而ATP含量，磷酸肌酸含量则均不同程度明显增高，但葡萄糖含量和超氧化物歧化酶活性变化不显著。说明芪参藤胶囊具有改善缺血后脑组织能量代谢及脑组织缺氧状况，降低缺氧组织过氧化物含量等作用。
十、芪参藤胶囊对大鼠自身血凝块致脑梗塞的影响实验材料动物SD种大鼠，雌雄各半，体重280±30g，由西安医科大学实验动物中心提供。药物芪参藤胶囊浸膏；含原生药1.15g/ml，由陕西西安国药研究所提供。尼莫地平片，哈尔滨制药三厂出品，批号940901，各药临用时以蒸馏水为溶剂配制成所需浓度。
方法和结果取SD大鼠60只，雌雄各半，体重280±30g，随机分成6组，每组10只。(1)假手术对照组(蒸馏水10ml/kg)(2)脑梗塞模型组(蒸馏水10ml/kg)；(3)阳性尼莫地平组(5mg/kg)；(4)芪参藤胶囊小剂量组(1g/kg)(5)芪参藤胶囊小中剂量组(3g/kg)；(6)芪参藤胶囊小大剂量组(6g/kg)。每天灌胃给药一次，容量1ml/100g，连续5天。第3天除假手术组外，各组动物每鼠心脏取血0.2ml，分别置试管中，室温下放置48h后形成血凝块，分离血清并加入0.8ml生理盐水，注射器装上4号针头抽取数次，制成血凝块生理盐水混悬液备用。第5天，各组动物灌胃给药后，腹腔注射5％盐酸氯胺酮100/kg麻醉，仰卧固定，皮肤剪毛消毒，切开颈部，分离右侧颈总，颈内和颈外动脉，颈总动脉远心端下穿线，用动脉夹分别夹闭颈外动脉和颈总动脉近心端，抽取0.2ml动物自身血凝块生理盐水混悬液(假手术对照组抽取0.2ml生理盐水)，注入颈总动脉，随后提拉线绳阻断颈总动脉远心端血流，用血管栓塞剂TH胶(中外合资深圳南光医用胶有限公司出品)粘合针孔，1min后，依次恢复颈总动脉远心端，近心端和颈外动脉血流，缝合肌肉及皮肤，术后再继续灌胃给药4天，并分别与术后3天和第4天采用辐射式电路箱进行学习记忆训练、测试，以动物受电击后能从起步区直接进入安全区为正确反映，记录各组动物每鼠10次受试中的正确反映次数，求出正确反映率。结果见表1。电迷路箱三壁长、宽、高分别为30、15、12cm、箱顶上盖玻璃，箱底辅间距为1cm宽的铜栅，有CJS1132以路生理刺激仪(实地科技产品研制所)通以电压100V，波宽40ms，频率64Hz的电脉冲。末次测试完后，立即断头处死大鼠，取脑置于中性福尔马林液中固定，以视交叉为标准向前、后各作2mm厚的冠状切面二块，常规脱水包埋，HE染色，显微镜下检查梗塞范围及其周围的脑组织变化。
表16 芪参藤胶囊对自身血凝块致脑梗塞大鼠学习记忆的影响(X±S)组别 剂量动物数 正确反映率(％)(g/kg)(只) 训 练 测 试假手术对照组10ml 10 0.58±0.10 0.65±0.11脑梗塞模型组10ml 10 0.28±0.15 0.33±0.11尼莫地平组0.00510 0.46±0.13* 0.58±0.15**芪参藤胶囊小剂量组110 0.44±0.11* 0.49±0.14*芪参藤胶囊中剂量组310 0.52±0.12**0.61±0.13**芪参藤腔囊大剂量组610 0.54±0.11**0.66±0.14**与脑梗塞模型比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，与脑梗塞模型组比较，芪丹瘫愈胶囊各剂量组和尼莫地平组大鼠电迷路训练、测试正确反应率明显提高。组织学检查表明，假手术对照组动物组织未见梗死病灶，神经元、神经胶质、神经纤维等均未见异常病变；脑梗塞模型组有7例动物脑组织内可见不同程度的灶状梗死区，其内神经元、神经纤维变性、坏死、消失，周围可见泡沫细胞和胶质细胞增生，部分坏死灶泡沫细胞聚集较多；小剂量组有3例动物脑组织出现梗死灶，中、大剂量组和尼莫地平组各有一例出现梗死灶，但梗死范围均较模型组为小，且周围泡沫细胞及胶质细胞增生均较少。
说明芪丹瘫愈胶囊可改善自身血凝块脑梗塞大鼠脑功能，减少脑梗死范围和脑组织损伤程度，对缺血性脑梗塞有一定防治作用。实验例2本发明组合物制剂(芪参藤胶囊)II、III期临床试验一、临床研究方案临床研究入选病例采取随机、双盲、对照法，其性别、年龄、病程、病情、症候积分等指标与对照组相比均无统计学意义(P＞0.05)，两组具有可比性。中医诊断标准参照国家中医药管理局脑病急症科研协作组起草制订的《中风诊断疗效评定标准(试行)》，西医诊断标准参照1995年全国第四届脑血管病会议《脑血管疾病诊断要点》的动脉粥样硬化性血栓性脑梗死，并依据纳入和排队病例标准对入选病例进行严格筛选。
观测性指标分为安全性观测和疗效性观察两部分。前者包括一般体检项目，血、尿、便常规化验，心电图、肝功能(AST、ALT)、肾功能(BUN、CRE)；后者包括语言及运动功能，神经系统症状、体征，中医症状、舌、脉变化，头颅CT扫描，血液流变学检查，血脂检查，经颅多普勒(TCD)检查。
疗效判定标准以中风病计分和气虚血瘀证症状计分，分别评定语言、运动功能的恢复程度和症状改善情况。
二、观察结果II期临床观察按照随机、双盲、多中心平行对照的方法，III期临床观察按照随机对照单盲的方法，对符合诊断标准和纳入标准，经排除标准筛选的入选病例，作为受试对象。设对照组和治疗组，以脑安胶囊为阳性对照药，按1∶1的比例分别给予脑安胶囊每次2粒，每日2次/芪参藤胶囊每次3粒，每日3次，饭后温开水送服，观察四周。结果如下
II期临床共观察了符合入选标准缺血性中风病人200例(对照组、治疗组各100例)，经统计(计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验，等级资料采用Ridit分析，相关分析采用相关性检验)，治疗组总有效率为87.00％，基本恢复率及显著进步率为41.00％，对照组总有效率为77.00％，基本恢复率及显著进步率为21.00％，治疗组疗效明显优于对照组，两组相比差异有非常显著性意义。在治疗中医证候疗效方面，治疗组总有效率86.00％，愈显率49.00％，对照组总有效率67.00％，愈显率23.00％，两组比较，总有效率、愈显率及中医证候积分均有非常显著性意义，治疗组疗效明显优于对照组。对各单项指标的分析显示，在改善上肢瘫、下肢瘫、指瘫、趾瘫方面，治疗组疗效明显优于对照组在改善半身不遂、偏身麻木、口舌歪斜、面色 白、气短乏力、汗自出、心悸、舌质舌体舌苔、脉象方面治疗组疗效优于对照组；在改善下肢瘫、舌强语謇、舌质舌体、舌苔方面，治疗组起效时间快于对照组。通过与疗效相关因素的分析，发现病人病情与疗效呈负相关性。对治疗前后血液流变学的分析结果显示，治疗组的红细胞变形能力、全血粘度中切、血浆粘度较对照组均有显著改善，而血脂无显著性改变。临床试验过程中治疗组除有两例病人发生轻度恶心外，未见明显副作用。安全性检查证明，本药临床应用安全性好。
III期共观察了符合入选标准缺血性中风病人400例(治疗组300例，对照组100例)，经统计(计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验，等级资料采用Ridit分析，相关分析采用相关性检验)，治疗组总有效率为87.67％，基本恢复率及显著进步率为41.67％，对照组总有效率为73.00％，基本恢复率及显著进步率为24.00％，两组相比差异有非常显著性意义，治疗组疗效明显优于对照组。在中医证候疗效方面，治疗组的总有效率88.67％，愈显率40.33％，对照组总有效率74.00％，愈显率17.00％，两组比较总有效率、愈显率和中医证候积分均有显著性意义，治疗组疗效明显优于对照组。对各单项指标的分析显示，在改善面瘫、上肢瘫、下肢瘫、综合功能方面，治疗组疗效明显优于对照组在改善半身不遂、口舌歪斜、面色 白、心悸、舌质舌体舌苔、脉象方面治疗组疗效明显优于对照组在改善便溏方面，治疗组起效时间快于对照组。通过与疗效相关因素的分析，发现病人病情、病程与疗效呈负相关性。治疗前后血液流变学，治疗组的全血粘度低切与对照组比较有显著性差异；血脂则无明显变化。临床试验过程中除治疗组有两例病人发生轻微恶心外，未见其它明显副反应。经安全性检查证明本药临床应用安全性好。
二、研究结论芪参藤胶囊具有益气活血、化瘀通络功能，用量每次3粒，每日3次，4周为一疗程，可以改善缺血性中风气虚血瘀证患者的语言表达、面瘫、眼征、上肢瘫、下肢瘫、指瘫、趾瘫、综合功能、降低中风病积分及中医证候积分，其中在改善面瘫、上肢瘫、下肢瘫、、指瘫、趾瘫、综合功能方面，治疗组疗效明显优于对照组。在治疗中医证候方面疗效明显优于脑安胶囊，其中在改善半身不遂、偏身麻木、口舌歪斜、面色 白、气短乏力、汗自出、心悸、舌质舌体舌苔、脉象方面治疗组疗效明显优于对照组。在改善便溏、下肢瘫、舌强语謇、舌质舌体、舌苔方面，治疗组起效时间明显快于对照组。除个别患者有恶心外未见明显副反应。经安全性检验证明本药安全可靠。以上研究表明芪参藤胶囊能改善缺血性中风气虚血瘀证病人神经功能缺损的作用，促进功能恢复，其疗效优于对照药物脑安胶囊，证明该药可以在临床实验例3本发明组合物制剂(芪参藤胶囊)长期毒性实验实验进行了二种性别SD种大鼠三个月灌胃给药芪参藤胶囊24g/kg、12g/kg、6g/kg(按体表面积折算，大约分别为人用量的60，30，15倍)三个剂量组的长期毒性实验。给药后逐日动物一般状况，每二周称体重一次。末次给药24h后各组空腹处死14只动物，进行血常规5项，血液生化学10项，脏体比11项检查，并参15个脏器进行病理学检查。结果表明，与空白对照组比较，除大剂量组血红蛋白，谷丙转氨酶，中剂量组谷草转氨酶经统计处理有明显差异外(但数值均在正常范围内)，其余各项指标均无异常。各组剩余的6只动物停药二周后，再进行上述各项指标检查，结果均无异常。说明大鼠三个月长期灌胃给药芪参藤胶囊未发现明显毒性反应。下述实施例均能实现上述实验例的效果。实施例1胶囊剂黄芪475g丹参317g水蛭(烫)106g大黄(酒制)106g 木香106g僵蚕(炒)106g鸡血藤106g以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用6倍量95％乙醇回流提取2小时，滤过，滤液在40-50℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.30-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，70℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压干燥，粉碎，细粉用85％乙醇制颗粒，干燥，整粒，用淀粉补至330g，装胶囊，共制成胶囊1000粒，即得。
功能与主治益气活血、化瘀通络。用于缺血性中风中经络气虚血瘀证之半身不遂、口舌歪斜、言语不利、肢体麻木等症。
用法与用量口服，一次3粒，一日3次。实施例2颗粒剂黄芪500g 丹参330g 水蛭(烫)115g大黄(酒制)95g 木香80g僵蚕(炒)100g鸡血藤90g以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用6倍量95％乙醇回流提取2小时，滤过，滤液在40-60℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.30-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，70℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压干燥，粉碎，细粉用85％7醇制颗粒，干燥，加入糊精及甜蜜素适量，经常规工序制成颗粒剂。实施例3片剂黄芪460g丹参300g水蛭(烫)90g大黄(酒制)110g 木香100g僵蚕(炒)100g鸡血藤100g以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用6倍量95％乙醇回流提取2小时，滤过，滤液在40-60℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.30-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，70℃，-0.06Mpa--0.08MPa减压干燥，粉碎，细粉用85％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，包薄膜衣，即得。实施例4胶囊剂的质量控制方法鉴别a.取本品，置显微镜下观察肌纤维无色或淡棕黄色，多单根离散，偶有数根成束，弯曲或局部扭曲，有时局部膨大或不均匀增厚；木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形；壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解；b.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以15∶5∶1石油醚(30-60)-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；
c.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，取乙醚提取后的水液，用水饱和的正丁醇提取三次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤三次，每次20ml，弃去氨水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以65∶35∶10氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以77∶23甲醇-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备，精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1ml中含丹参酮IIA 4ug；供试品溶液的制备，取本品10粒的内容物，研细，称取0.15g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，功率250W，频率40KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.37mg。
权利要求
1.一种治疗治疗缺血性中风的中药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪430-520重量份 丹参290-340重量份 水蛭80-120重量份大黄90-120重量份 木香70-120重量份 僵蚕80-120重量份鸡血藤70-120重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的黄芪475重量份 丹参317重量份 水蛭106重量份大黄106重量份 木香106重量份 僵蚕106重量份鸡血藤106重量份。
3.如权利要求1、2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物中水蛭优选烫水蛭，大黄优选酒制大黄，僵蚕优选炒僵蚕。
4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用5-7倍量85-95％乙醇回流提取1-3小时，滤过，滤液在20-70℃，-0.05Mpa--0.09MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加8-12倍量的水煎煮1-3小时，第二次加7-9倍量的水煎煮1-2小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.25-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，60-75℃，-0.06MPa--0.08MPa减压干燥，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂、注射剂。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于胶囊剂的制备方法为以上七味，取丹参的一半量与水蛭粉碎成细粉，备用；木香与丹参剩余部分用6倍量95％乙醇回流提取2小时，滤过，滤液在40-60℃，-0.06MPa-0.08MPa减压回收乙醇，浓缩液备用；丹参和木香的药渣与黄芪、僵蚕、鸡血藤、大黄用水煎煮两次，第一次加10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩50-60℃至相对密度1.30-1.35，合并上述浓缩液，并与药材细粉混匀，70℃，-0.06MPa--0.08MPa减压干燥，粉碎，细粉用85％乙醇制颗粒，干燥，整粒，用淀粉补至330g，装胶囊，即得。
6.如权利要求3所述的药物组合物制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本组合物制剂，置显微镜下观察肌纤维无色或淡棕黄色，多单根离散，偶有数根成束，弯曲或局部扭曲，有时局部膨大或不均匀增厚；木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形；壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解；b.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以12-18∶4-6∶1-2石油醚30-60℃-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；c.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，取乙醚提取后的水液，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2-4次，每次15-25ml，弃去氨水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.如权利要求6所述的药物组合物制剂的质量控制方法，其特征在于胶囊剂的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本品，置显微镜下观察肌纤维无色或淡棕黄色，多单根离散，偶有数根成束，弯曲或局部扭曲，有时局部膨大或不均匀增厚；木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形；壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解；b.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以15∶5∶1石油醚30-60℃-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；c.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，取乙醚提取后的水液，用水饱和的正丁醇提取三次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤三次，每次20ml，弃去氨水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以65∶35∶10氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.如权利要求3所述的药物组合物制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定方法为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以70-85∶18-25甲醇-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备，精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1ml中含丹参酮IIA 4ug；供试品溶液的制备，取本组合物制剂0.15g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；本组合物制剂每单位量含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.30-0.45mg。
9.如权利要求8所述的药物制剂的质量控制方法，其特征在于胶囊剂的含量测定方法为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以77∶23甲醇-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备，精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1ml中含丹参酮IIA 4ug；供试品溶液的制备，取本品10粒的内容物，研细，称取0.15g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，功率250W，频率40KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.37mg。
10.如权利要求3所述的药物组合物制剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括以下步骤鉴别a.取本组合物制剂，置显微镜下观察肌纤维无色或淡棕黄色，多单根离散，偶有数根成束，弯曲或局部扭曲，有时局部膨大或不均匀增厚；木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形；壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解；b.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以12-18∶4-6∶1-2石油醚30-60℃-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；c.取本组合物制剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚提取2-4次，每次15-25ml，合并乙醚液，取乙醚提取后的水液，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2-4次，每次15-25ml，弃去氨水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以60-70∶30-40∶8-12氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以70-85∶18-25甲醇-水为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备，精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1ml中含丹参酮IIA 4ug；供试品溶液的制备，取本组合物制剂0.15g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；本组合物制剂每单位量含丹参以丹参酮II A计，不得少于0.30-0.45mg。
11.如权利要求3所述的中药组合物在制备治疗缺血性中风气虚血瘀证药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗缺血性中风的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。该组合物由黄芪、丹参、水蛭、大黄、木香、僵蚕、鸡血藤组成。该中药组合物制备时采用煎煮、乙醇提取方法，达到使有效药物的充分发挥，同时本发明还提供了对该组合物进行成分鉴别、含量测定的质量控制方法。本发明组合物有很好的益气活血、化瘀通络作用，对治疗缺血性中风效果明显。
文档编号A61P9/00GK1457853SQ0313114
公开日2003年11月26日 申请日期2003年5月14日 优先权日2003年5月14日
发明者居小平, 李西秦 申请人:居小平