专利名称：一种含丹参提取物的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有丹参提取物的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。
背景技术：
复方丹参片和复方丹参滴丸是《中国药典》2000年版收载的药物中华人民共和国药典(一部)，2000年版，518-520，处方组成为丹参、三七、冰片，具有活血化瘀，理气止痛之功效，临床上用于胸中憋闷，心绞痛的治疗，其中复方丹参滴丸具有疗效高，作用迅速，副作用小的特点，现已被定为全国中医医院急诊必备中成药。原通常认为丹参中丹参酮IIA及主要水溶性有效成分丹参素具有抗心肌缺血和增加冠状动脉流量等药理作用孔翔云，丹参的化学成分。中国医药工业杂志，1989，20(6)279～285.，因此，在质量标准中分别将其定为复方丹参片和复方丹参滴丸的含量测定指标中华人民共和国药典(一部)，2000年版，518-520。
虽然复方丹参片和复方丹参滴丸的疗效已得到一定程度的认可。但复方丹参片由于制备工艺简单(药材粗提或磨成粉末入药)，使其有效成分不能得到完全的溶出，且无有效的质量控制指标，因而致其疗效不恒定；复方丹参滴丸虽在工艺上进行了改善，但对现在公认的丹参的脂溶性活性成分-丹参酮类和水溶性活性成分-丹参酚酸未进行控制，因此也影响了其治疗效应，且由于其口感差-味苦而涩，致其依从性受到影响。
丹参的脂溶性活性成分主要包括丹参酮IIA、丹参酮I和隐丹参酮。丹参的水溶性活性成分主要为丹参酚酸，主要包括丹参酚酸B、迷迭香酸、丹参素、原儿茶醛等。本发明人经过大量的实验研究，发现含有丹参脂溶性成分与水溶性成分的丹参提取物在心脑血管方面具有协同作用，进一步发现丹参提取物和三七总苷的组合物在制备治疗或预防心脑疾病方面也具有协同作用，丹参提取物、三七总苷和冰片的组合物具有更强的预防和治疗缺血所致的心脑疾病的作用。
发明内容
本发明提供了一种含有丹参脂溶性成分和水溶性成分的丹参提取物的药物组合物，其中丹参的脂溶性成分主要包括丹参酮IIA，丹参酮I和隐丹参酮，其含量在50％以上；水溶性成分主要包括丹参酚酸，其含量在50％以上，脂溶性成份与水溶性成份的比为1∶0.1-10。
本发明提供了一种含有丹参提取物与三七总苷的药物组合物，其中三七总苷中人参皂苷Rg1、Rb1、Re及R1的含量在50％以上，丹参提取物与三七皂苷比为1∶0.1-5，优选为1∶0.5～2。
本发明提供了一种含丹参提取物、三七总苷及冰片的药物组合物，其比为1∶0.1-5∶0.1-5，优选为1∶0.5～2∶0.5～2。
本发明提供了含有丹参提取物的药物组合物、含有丹参提取物和三七总苷的药物组合物及含有丹参提取物、三七总苷和冰片的药物组合物在制备治疗或预防心脑疾病的药物中的应用。
本发明提供了上述三种药物组合物在制备治疗或预防心肌缺血的药物的应用。
本发明提供了上述三种药物组合物在制备治疗或预防脑缺血的药物中的应用。
本发明提供的药物组合物可以与药学上可以接受的辅料组合，以普通片剂、口含片、口崩片、胶囊、软胶囊、滴丸或口服液的形式存在，优选为口含片、口崩片、滴丸或软胶囊。
本发明提供的丹参提取物的药物组合物在用于心脑血管疾病时，其使用剂量范围是每日100mg-1000mg，优选为每日200mg-400mg。
本发明提供的含丹参提取物、三七总苷及冰片的药物组合物在用于心脑血管疾病时，其使用剂量范围是每日75mg-750mg，优选为每日150mg-300mg。
本发明所述的丹参的脂溶性成分，可以CO2超临界萃取等方法提取，其中丹参酮IIA、丹参酮I及隐丹参酮的含量在50％以上。
本发明所述的丹参的水溶性成分，可以水提及聚酰胺柱层析等提取，其中丹参酚酸含量在50％以上。
本发明所述的丹参提取物所含的有效部位以丹参酚酸、丹参酮IIA、丹参酮I及隐丹参酮计在50％以上。
本发明所述的丹参水溶性提取物是指丹参提取的丹参酚酸，其主要成分为丹参酚酸B、迭香酸、丹参素、儿茶醛等。
本发明所述的三七总苷是从三七等植物药中提取分离获得，分离纯化参照文献欧来良等，强极性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究。中草药，2003；34905进行，并参照其方法进行含量检测。
本发明人进行了下列试验来证实本发明提供的丹参提取物在心脑血管方面的作用，并证实了含有丹参提取物、三七总苷及冰片的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的作用。
具体实施例方式制备实施例1丹参水溶性成分的制备取丹参干燥根，粉碎至可过三号筛，加15倍去离子水，室温下搅拌3小时，滤过；滤液加盐酸调pH至2，静置过夜，滤过；滤液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量(相当于生药量)与聚酰胺用量的比例为0.1∶1(w/v)，用水洗3个柱体积后以25％乙醇洗15个柱体积；上样流出液、水洗液及25％乙醇洗脱时的流出液均弃去。最后用60％乙醇洗脱6个柱体积，收集这部分洗脱液，60℃减压浓缩至适当体积；冻干，得丹参酚酸，测得丹参酚酸B含为量52％。
制备实施例2三七总苷的制备取三七粗粉(20～40目)1000g，加入10倍量70％乙醇浸泡24小时，继续加入10倍量70％乙醇渗漉，控制流速3L/小时，收集渗漉液，回收乙醇，滤过，得澄清水溶液，过ADS-2树脂柱，用6倍柱体积的纯水洗脱，弃去水洗液，继用50％乙醇洗脱，收集醇洗液，浓缩、干燥即得类白色三七总皂苷，经测定其总皂苷含量为60％。
制备实施例3丹参脂溶性成分的制备(超临界萃取)取粉碎后的丹参药材500g，投入萃取缸中，密闭后开启装置，调节萃取压力20Mpa，萃取温度45℃，分离温度35℃，CO2流量20～25kg/h，乙醇流量1L/h，萃取时间2小时，即得主要含脂溶性成分的丹参提取物，经测定其丹参酮含量为82％。
制备实施例4制备含有丹参提取物的滴丸(25mg/粒)取30g泊洛沙姆188与70gPEG6000加热熔融，加入25g丹参提取物溶解并搅拌均匀，将药液置于滴丸机中，控制药液温度90℃，以液体石蜡作为冷却剂，控制冷却温度8～15℃，滴速60滴/分钟，制成1000粒制备实施例5制备含有丹参提取物的软胶囊(75mg/粒)取215g大豆油加热至60℃，加入10g蜂蜡熔融并搅拌均匀，加入75g丹参提取物溶解并搅拌均匀，调节装量300mg/粒，压制成软胶，制成1000粒。
制备实施例6制备含有丹参提取物、三七总苷及冰片的滴丸(25mg/粒)取40g泊洛沙姆188与60g PEG6000加热熔融，加入10g丹参提取物、7g三七总皂苷、8g冰片溶解并搅拌均匀，将药液置于滴丸机中，控制药液温度90℃，以液体石蜡作为冷却剂，控制冷却温度8～15℃，滴速60滴/分钟，即得1000粒制备实施例7制备含有丹参提取物、三七总苷的片剂(100mg/片)取60g丹参提取物加入30g微粉硅胶充分混合均匀，将上述混合物与40g三七总皂苷、50g淀粉、115g微晶纤维素混合均匀并过100目筛，加水适量制软材，20目筛制粒，干燥，整粒，加入1.5g硬脂酸镁混合均匀，调节片重300mg，压片，即得。
制备实施例8制备含有丹参提取物、三七皂苷及冰片的口含片(75mg/片，无糖型)取30g丹参提取物、21g三七总皂苷、24g冰片、715g甘露醇混合均匀并过100目筛，加入3％PVPk30的水溶液适量制软材，20目筛制粒，干燥，整粒，加入5g硬脂酸镁混合均匀，调节片重800mg，压片，即得。
制备实施例9制备含有丹参提取物、三七皂苷及冰片的口含片(75mg/片)取30g丹参提取物、21g三七总皂苷、24g冰片、600g糖粉、200g甘露醇、115g乳糖混合均匀并过100目筛，加入3％PVPk30的水溶液适量制软材，20目筛制粒，干燥，整粒，加入5g硬脂酸镁混合均匀，调节片重1000mg，压片，即得。
试验例试验例1丹参脂溶性成分、丹参水溶性成分及两者组合物的药效学比较(1)材料丹参脂溶性提取物、丹参水溶性成分按制备例制备。
物健康杂种犬，体重8-12kg，♀♂兼用。恬尔心注射剂(盐酸地尔硫注射剂)，日本田边制药株式会社制造，上海延安制药厂包装，批号030102。Power Lab生理记录仪，澳大利亚ADInstruments产品；SC M5型麻醉呼吸机上海医疗仪器厂产品。
(2)方法和结果试验方法采用麻醉犬冠状动脉前降支结扎造成心肌梗死模型。动物称重后以3％戊巴比妥钠30mg/kg iv麻醉，分离气管并插入气管插管，接SC M5型麻醉呼吸机(上海医疗仪器厂)，待开胸后行机械通气，呼吸频率16-18次/min，潮气量350-550ml。沿胸骨左缘第4肋间开胸，暴露心脏，剪开心包并作心包吊床。在左冠状动脉前降支第二至第三分支间游离冠状动脉，并在其下穿二根丝线，备用于两步结扎。在心脏表面放置30点心外膜电极，经多导转换开关连至Power Lab生理记录仪(AD Instruments)，记录30点心外膜电图，心外膜电图定标为1mm/mv，记录速度1k/s。采用两步结扎法首次结扎前2min，从股静脉iv利多卡因5mg/kg，预防心律失常。在结扎时将一段直径1mm的钢丝插入第一松结内。记录完全结扎后10min的心外膜电图作为用药前对照值，而后从股静脉以1ml/kg体积注射阳性药物药物，注射时间为1min，阴性对照组注射同体积生理盐水，给药组分别舌下或十二指肠给药。分别在给药后10min，30min，60min，90min，120min，180min记录各组心外膜电图的变化。心外膜电图观察指标心外膜电图观察指标以ST段升高2mV以上的导联数(NST)和ST段升高值的总和(∑ST)为指标，观察给药前后心外膜电图的变化，并计算心肌缺血程度(∑ST)和范围(NST)。以用药后不同时间的实测值进行组间比较。
结果显示(表1)，阳性药物恬尔心可明显降低各测定点的∑ST和NST，单独应用Sal或Tan，无论舌下给药还是十二指肠给药，作用均不明显；而联合应用Sal和Tan，可表现出明显的治疗效应，表明应用丹参的脂溶性成分和水溶性成分对心肌缺血有明显的协同效应。
表1丹参脂溶性成分(Tan)、丹参水溶性成分(sal)及其组合物(Tan+sal)对心肌缺血(∑ST)的影响
与生理盐水组比较△，p＜0.05；▲，p＞0.05；与单用Sal比较，★，p＜0.05；与单用Tan比较，☆，p＜0.05表2丹参脂溶性成分(Tan)、丹参水溶性成分(sal)及其组合物(Tan+Sal)对心肌缺血范围(NST)的影响
与生理盐水组比较△，p＜0.05；▲，p＞0.05；与单用Sal比较，★，p＜0.05；与单用Tan比较，☆，p＜0.05
试验例2丹参提取物、三七总苷、冰片等及其组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响(1)材料按制备例方法制备丹参提取物、三七总苷、丹参提取物三七总苷组合物、丹参提取物三七总苷冰片组合物。
氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)，由军事医学科学院药材供应站提供。
实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果动物随机分为假手术组(生理盐水)、模型对照组(生理盐水)、硝苯地平组、丹参提取物组(3mg/kg)、三七总苷(10mg/kg)、冰片(3mg/kg)组、丹参提取物(9mg/kg)+三七总苷(30mg/kg)组、丹参提取物(3mg/kg)+三七总苷(10mg/kg)+冰片(3mg/kg)组、丹参提取物(9mg/kg)+三七总苷(30mg/kg)+冰片(3mg/kg)组、丹参提取物(27mg/kg)+三七总苷(90mg/kg)+冰片(3mg/kg)组。每组10只。禁食12小时后，ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，测肢体II导联心电图。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左缘1cm处，剪开胸壁肌肉及二条肋骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。麻醉前灌胃给予相应药物。记录给药前及给药后1.5h、3h心电图，测量心电图J点的升高值，6h后取出心脏，以冷生理盐水洗净后，-20℃冰箱冷冻过夜。次日，将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片，浸入新鲜配制的0.25％N-BT磷酸缓冲液(pH 7.4)中。37℃水浴振摇10～15min。用滤纸吸干切片表面的染色液，分离染色部分和未染色部分，称重，记算梗死面积。梗死面积(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。数据用X±s表示，以组间t检验进行统计学处理。
结果如表3所示，心肌缺血6小时后，模型组大鼠心肌出现明显的灶状缺血区，达到26％左右。单用丹参提取物组(3mg/kg)，三七总苷(10mg/kg)或冰片(3mg/kg)组对缺血所致大鼠心电变化无改善作用，也不能减少缺血所致心肌坏死面积；联合使用低剂量的丹参提取物、三七总苷和冰片即可显示的抗心肌缺血作用，且其作用比只联合使用高剂量的丹参提取物和三七总苷的作用更为明显。表明冰片与丹参提取物及三七总苷的组合物对心肌缺血性疾病具有更好的治疗作用。
表3丹参提取物、三七总苷和冰片及其组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响
与模型对照组比较，△，P＞0.05；*，P＜0.05。
与单用丹参提取物组、三七总苷组、冰片比较，▲，P＜0.05。
与不加冰片组比较，★，P＞0.05；☆，P＜0.05。
试验例3丹参提取物、三七总苷、冰片等及其组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响(1)材料丹参提取物、三七总苷、丹参提取物B、冰片及不同的组合物同试验例2，由山东省天然药物工程技术研究中心现代中药研究室提供。
红四氮唑美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。
实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号鲁动质字200106005号。
(2)方法与结果
动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，尼莫地平组(Nim，1.0mg/kg)，丹参提取物组(3mg/kg)、丹参提取物B组(3mg/kg)、三七总苷组(10mg/kg)、冰片组(3mg/kg)，丹参提取物(9mg/kg)+三七总苷(30mg/kg)组、丹参提取物(3mg/kg)+三七总苷(10mg/kg)+冰片(3mg/kg)组、丹参提取物(9mg/kg)+三七总苷(30mg/kg)+冰片(3mg/kg)组、丹参提取物(27mg/kg)+三七总苷(90mg/kg)+冰片(3mg/kg)组。每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成右侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。术后各组动物灌胃给予相应药物。24小时后按文献刘小光，徐理纳。一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30662所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分值越高，表示动物行为障碍越严重。
行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。数据用X±s表示，以组间t检验进行统计学处理。
结果如表4所示，缺血24小时后，模型组大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的24％左右。单用丹参提取物组，三七总苷组或冰片组未能改善大鼠行为障碍或减少缺血面积；联合使用低剂量的丹参提取物、三七总苷和冰片即可显示明显的改善行为障碍和减少缺血区面积的作用，且其作用比只联合使用高剂量的丹参提取物和三七总苷的作用更为明显。表明冰片与丹参提取物及三七总苷的组合物对脑缺血性疾病具有更好的治疗作用。
表4丹参提取物、三七总苷或冰片及其组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响
与模型对照组比较，△，P＞0.05；*，P＜0.05。
与单用丹参提取物组、三七总苷组、冰片或丹参提取物B比较，▲，P＜0.05。
与不加冰片组比较，★，P＞0.05；☆，P＜0.05。
权利要求
1.一种含有丹参提取物的药物组合物，特征在于丹参提取物由脂溶性成分和水溶性成分组成，其比例为1∶0.1-10。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，脂溶性成分主要包括丹参酮IIA，丹参酮I和隐丹参酮，100％＞含量≥50％，水溶性成分主要包括丹参酚酸，100％＞含量≥50％。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其还可以含有三七总苷，丹参提取物与三七总苷的比例为1∶0.1-5。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其优选比为1∶0.5～2。
5.根据权利要求3或4所述的药物组合物，三七总苷中含有Rg1、Rb1、Re及R150％以上。
6.根据权利要求3所述的药物组合物，其还可以含有冰片，丹参提取物、三七总苷、冰片的比为1∶0.1-5∶0.1-5。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其优选比为1∶0.5～2∶0.5～2。
8.权利要求1-7任一所述的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病中的药物中的应用，其使用剂量范围是100mg-1000mg/日。
9.根据权利要求8所述的应用，其在制备治疗或预防心肌缺血性疾病的药物中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用，其在制备治疗或预防脑缺血损伤疾病的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种含有丹参脂溶性成分和水溶性成分的丹参提取物的药物组合物，提供了含有丹参提取物与三七总苷的药物组合物，提供了含丹参提取物、三七总苷及冰片的药物组合物。还提供了含有丹参提取物的药物组合物、含有丹参提取物和三七总苷的药物组合物及含有丹参提取物、三七总苷和冰片的药物组合物在制备治疗或预防心脑疾病的药物中的应用。
文档编号A61P9/10GK1733066SQ200410035549
公开日2006年2月15日 申请日期2004年8月12日 优先权日2004年8月12日
发明者傅风华, 徐本明, 郑胜国, 田京伟 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司