专利名称：非免疫抑制剂2－哌啶酸衍生物在诱导软骨形成分化中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及FKBP型亲免疫因子配体在诱导软骨形成分化中的新用途。
背景技术：
某些免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物对FKBP型亲免疫因子如FK506具有亲和力，可用于诱导软骨形成分化(WO00/74665)。
WO96/40140披露了某些对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物，具有刺激受损周围神经生长或促进神经元再生的活性。
下文中提及的化合物(1)，在(WO89/05304)中被公开。并还已知其具有神经保护作用(WO01/05385)和高水平的神经营养活性和低水平的免疫抑制活性(WO02/053159)。
然而，现有技术中还没有关于对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物能诱导软骨形成分化的记载。
发明公开本发明的发明者发现对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物具有诱导软骨形成分化的活性。
另外，本发明还提供了对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物在诱导软骨形成分化中的新用途。
进一步而言，本发明提供了一种用于诱导软骨形成分化的试剂，其中包括对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物。
更进一步而言，本发明提供了一种诱导软骨形成分化的方法，其中包括对哺乳动物给药所述对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物。
更进一步而言，本发明提供了一种预防或治疗软骨损伤的方法，其中包括对哺乳动物给药所述对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物。
本发明“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”中优选的“FKBP型亲免疫因子”是FKBP-12。它们的亲和力可通过已知的结合测定法来评估。例如，可用WO02/053159，实施例5中记载的“与FKBP12的结合测定”来举例说明。
“非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”的免疫抑制活性可通过已知的试验方法来评估。因此，例如，可用“三环化合物(I)对IL-2产生的抑制″(USP4,929,611的试验12)或“混合淋巴细胞反应(MLR)”(WO02/053159，实施例5)来举例说明。本发明中的“非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”是指那些基本上没有免疫抑制活性的“2-哌啶酸衍生物”。更具体而言，它们基本上不能抑制IL-2的产生。
作为“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”的优选实例，可用记载于WO96/40140中的化合物来举例说明，它们的公开可在此引入作为参考。
更优选的“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”是具有下式的化合物(1)。
化合物(1)可以成盐，其中包括常规的无毒和药学上可接受的盐，如其与无机或有机碱所成的盐，特别是，碱金属盐如钠盐和钾盐，碱土金属盐如钙盐和镁盐，铵盐和胺盐如三乙胺盐和N-苄基-N-甲胺盐。
关于本发明中所用的化合物(1)，可以知道由于有不对称碳原子(s)或双键(s)，因而还可能存在构象异构体和一个或多个立体异构体，所述构象异构体和立体异构体均包括在本发明化合物(1)的范围之内。进一步而言，化合物(1)可以成溶剂化物形式，其也包括在本发明的范围之内。该溶剂化物优选包括水合物和醇合物。
本发明中所用的“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”可以以纯化合物或化合物的混合物或优选在药学赋形剂或载体中给药。
本发明的药物组合物可以以药物制剂的形式，例如以固体、半固体或液体形式使用，其中含有本发明的大环内酯化合物作为活性成分，其与适于外部(局部)、肠内、静脉、肌内或胃肠外给药的有机或无机载体或赋形剂混合。活性成分可以是混合的，例如与通常无毒、药学上可接受的载体混合制成片剂、丸剂、胶囊剂、滴眼剂、栓剂、溶液剂(例如盐溶液)、乳剂、混悬剂(例如橄榄油)、软膏剂和其它适于使用的形式。可以使用的载体有水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、甘露醇、淀粉糊、三硅酸镁、滑石粉、玉米淀粉、角蛋白、胶体硅、土豆淀粉、尿素和其它适于在固体、半固体、液体制剂制备中使用的载体，另外还可添加助剂，可以使用稳定剂、增稠剂和着色剂和香料。药物组合物中包括的有效量活性目标化合物足以在疾病的过程或情况下产生预期效应。
可以使用本发明方法治疗的哺乳动物包括牲畜类哺乳动物如奶牛、马等等，家畜类动物如狗、猫、鼠等等以及人类。
然而，“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”的治疗有效剂量各不相同，其取决于每个需要治疗的个体病患的年龄和情况，通常治疗疾病给药的活性成分的日剂量为大约0.0001-1000mg，，优选0.001-500mg和更优选0.01-100mg，通常给药的平均单次剂量为大约0.001-0.01mg，0.2-0.5mg，1mg，5mg，10mg，50mg，100mg，250mg和500mg。人体长期给药的日剂量在大约0.1-0.3mg/kg/day的范围之内。
以下的实施例进一步更详细的说明了本发明，但这些实施例不能被理解为是对本发明范围的限制。
实施例1根据如下提及的方法评估化合物(1)在软骨形成分化上的诱导活性。
(1)由RIKEN细胞库(Tsukuba，Japan)提供的ATDC5细胞系在达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基和添加了10％热灭活胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)的Ham′s F12培养基(Nikken BiomedicalLaboratory，Kyoto，Japan)为1∶1的混合物中生长。在这些条件下，ATDC5细胞保留了类软骨祖细胞而且没有表达出软骨表型。
(2)将上述的ATDC5细胞接种到12-轮塑料培养基中，在培养基中的密度为1×105细胞/孔。4小时后，用含化合物(1)或环孢素A(CsA)的新鲜培养基代替培养基，并且培养持续24天，其中培养基每2或3天更换一次。在室温下，细胞用甲醇固定并用溶于0.1M盐酸中的0.1％阿辛蓝(Sigma Chemical Co.，St。Louis，MO)染色16小时。随后用蒸馏水洗涤细胞三次，在用6M胍-HCl(300μl/well)提取后，在620nm测定细胞结合的染料量。
结果用化合物(1)或CsA培养ATDC5细胞24田，测定粘蛋白量。
化合物(1)以浓度依赖方式(1-10000ng/ml)诱导软骨细胞的分化。换句话而言，CsA不能诱导分化。结果显示于附
图1中。
上述结果表明“对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物”，如化合物(1)，能有效的用于预防或治疗由外界伤害、炎性疾病、自身免疫疾病等等引起的软骨损伤(如透明软骨、纤维软骨、弹性软骨)。
更具体而言，本发明能有效的用于预防或治疗软骨细胞不足，如软骨营养障碍、关节炎(如类风湿性关节炎、骨关节炎等等)、骨质疏松等等。
进一步而言，本发明的大环内酯类还能有效的用于组织，如结缔组织(如软骨组织)和/或骨组织的再生，本文中所引用的专利、专利申请和公开出版物均引入作为参考。
附图简述附图1显示了化合物(1)在ATDC5细胞的软骨形成分化上的效果。
权利要求
1.一种诱导软骨形成分化的方法，其中包括对哺乳动物给药有效量的对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物以预防或治疗软骨损伤。
2.权利要求1的方法，其中对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物是具有下式的化合物(1)。
3.权利要求1的方法，其中软骨损伤是软骨细胞不足或骨质疏松。
4.权利要求1的方法，其中软骨损伤是透明软骨、纤维软骨、弹性软骨、软骨营养障碍、类风湿性关节炎、骨关节炎或骨质疏松。
5.对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物在用于制备预防或治疗软骨损伤的药物中的用途。
6.用于诱导软骨形成分化的药物组合物，其中含有对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物与载体或赋形剂的混合物。
7.一种商业化的包装盒，其中包括含对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物的药物组合物和与此相关的书面说明，其中书面说明陈述了所述对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2-哌啶酸衍生物能够或应该用于预防或治疗软骨损伤。
全文摘要
本发明提供的对FKBP型亲免疫因子具有亲和力的非免疫抑制剂2－哌啶酸衍生物能用于诱导软骨形成分化。并公开了含有所述化合物的组合物。
文档编号A61P19/10GK1756540SQ20048000593
公开日2006年4月5日 申请日期2004年3月1日 优先权日2003年3月4日
发明者西垣扶佐子, 宫田进 申请人:安斯泰来制药有限公司